恶性疟原虫抗独特型抗体的初步研究

用抗恶性疟原虫单克隆抗体１３Ａ２，制备兔抗血清，经ＢＡＬＢ／ｃ－ＩｇＧ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ和１３Ａ２ＭｃＡｂ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱提纯，得到抗独特型抗体（Ａｂ２）。免疫双扩散试验和ＥＬＩＳＡ试验表明：抗独特型抗体仅与１３Ａ２ＭｃＡｂ反应。４ｉ试验显示：当恶性疟原虫抗原浓度为８０μｇ／ｍｌ，对１３Ａ２Ｉｄ－Ａｎｔｉｌ３Ａ２Ｉｄ系统产生８１％的抗体结合抑制率，而伯氏疟原虫和诺氏疟原虫抗原检测，抗体结合抑制率分别为２７％和２．５％。兔抗血清中抗Ａｂ２抗体（Ａｂ３）滴度为１：６４０，提示此抗独特型抗体可替代原始抗原诱生抗恶性疟抗体。     

恶性疟的两种重组复合抗原的纯化与鉴定

用我们构建的高效表达恶性疟原虫复合抗原融合蛋白的工程菌ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｐＷＲ－Ｃ／ＪＭ１０９和ｐＷＲ－ＣＡＣ／ＪＭ１０９进行发酵培养，收集菌体经超声波破菌、硫酸铵分级沉淀、分子筛层析、离子交换层析等步骤纯化后，纯度可达８２．０％。纯化后的融合蛋白保持β－半乳糖苷酶的活性。用等电聚焦技术测定纯化蛋白等电点分别为８．４０和８．２５．用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法测定纯化蛋白的免疫原性，证实纯化的重组蛋白可与小鼠抗恶性疟原虫抗体及疟区病人血清发生特异性免疫反应。重组蛋白加弗氏佐剂免疫家兔制备的抗血清可与４种工程菌表达产物发生特异免疫反应，并可识别恶性疟原虫海南株和云南株红内期抗原。说明纯化的重组融合蛋白为具有恶性疟原虫抗原活性的重组复会抗原。     

恶性疟口服活菌苗的免疫原性及安全性的初步研究

在减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１中表达了人工合成的恶性疟杂合４５肽抗原基因，并在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠及家兔中诱发出一定水平的特异性体液免疫及细胞免疫。在减毒菌中表达的融合抗原ＧＺ－Ａ可特异地识别兔抗ＧＺ－Ａ血清、鼠抗Ｐｆ血清及恶性疟患者血清，滴度分别为１：６４００、１：１０２４０及１：４。小鼠口服（ｐｏ）重组疫苗图ＳＬ３２６１（ｎＷＲＡ）后，细菌在肠道至少可寄生１月以上，且在体外仍然可以表达目的抗原。静脉注射（ｉｖ）活菌后首日可见菌血症。１０￣８ｃｆｕ量全身免疫（ｉｐ、ｉｖ）后可致小鼠死亡。ｉｐ、ｉｖ组脾脏肿大１～２倍，肝脏轻度肿大，而ｐｏ组则未见明显改变。清理切片显示肝脏轻度充血，汇管区有淋巴细胞聚集，枯否氏细胞轻度增生等；脾小体增生扩大，巨细胞明显增生等，上述改变以ｉｐ及ｉｖ组较为明显。结果说明，ＳＬ３２６１（ｐＷＲＡ）所表达的恶性疟原虫杂合抗原可特异地被抗Ｐｆ抗体所识别，活菌苗口服后可在肠道较长久地寄生，且不引起明显的毒副作用。     

恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶的表达及免疫活性鉴定

目的：在大肠杆菌中表达恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶（GDH）与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白，测定重组蛋白的免疫活性。方法：采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫（海南株）GDH基因，双酶切后克隆入pGEX-4T-1载体中进行诱导表达，重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清，并用琼脂双向扩散法检测效价，ELISA、Westernblotting检测重组抗原的免疫活性。结果：获到了重组表达的抗原蛋白，表达产物能与鼠抗恶性疟原虫血清发生特异反应，并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答，免疫琼脂扩散法检测抗体滴度为1：16。结论：恶性疟原虫GDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。     

恶性疟原虫多价重组疫苗的研制及其免疫活性的初步鉴定

为了探讨含Ｔ、Ｂ淋巴细胞双重激活表位的重组复合症疾抗原的免疫原性和保护作用，作者设计合成了编码恶性疟原虫红内期３个保护性抗原位点和２个外源性Ｔ细胞激活位点的复合基因ＨＧＦＣ，并构建了多连体复合基因ＨＧＦＣＡＣ。两种复合基因分别与表达载体ｐＷＲ４５０－１重组，并在大肠杆菌中表达出含外源蛋白和β－半乳糖苷酶部分氨基酸的融合蛋白（分子量分别为６５０００和７７０００），表达量为３５％。表达产物可与小鼠及兔抗恶性疟原虫抗体发生特异性免疫反应。用纯化的融合蛋白免疫家兔制备的免疫血清可特异地识别恶性疟原虫抗原，并对疟原虫体外生长有显著抑制作用。抑制程度与免疫血清浓度及作用时间呈正相关，在２０％浓度下作用７２小时，抑制率可达８２％，并引起疟原虫发育不良和死亡。研究结果说明，制备的恶性疟原虫重组复合抗原具有免疫原性和一定的免疫保护作用，可作为恶性疟疫苗候选物。     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建？…

目的 建立能稳定分泌抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５重组蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法 用重组ＨＣＶ ＮＳ５区蛋白为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行融合,经有限稀释克隆３次后制备分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,并用酶免疫（ＥＩＡ）法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果 融合后的阳性克隆中筛选出６株能稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,命名为２Ｃ８,２     

一种恶性疟原虫保护性抗原重组复合基因表达产物的细胞免疫特性研究(I)

目的：检测一种恶性疟原虫保护性抗原重组复合基因表达产物（ＨＲＡ）诱导小鼠细胞免疫的反应．方法：免疫小鼠的脾淋巴细胞，体外分别经ＣｏｎＡ、ＨＲＡ和可溶性裂殖子抗原（ＳＭＡ）的刺激，３Ｈ－ＴｄＲ参入法检测淋巴细胞的增殖水平．结果：含佐剂的ＨＲＡ免疫ＢＡＬＢ／ｃ和Ｃ５７ＢＬ／６小鼠后，其脾细胞经ＨＲＡ刺激后，增殖明显，可溶性裂殖子抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞经ＨＲＡ刺激发生明显的增殖．结论：ＨＲＡ上的Ｔ细胞位点发挥了效应．具有一定的突破ＭＨＣ限制的能力．     

恶性疟原虫融合抗原PfCP-2.9在不同品系小鼠中的免疫特性

目的:探讨恶性疟原虫融合抗原PfCP-2.9在不同品系小鼠(BALB/ca、C57BL/6J、C3H/He、DBA/2J及昆明种)中的免疫原性和免疫反应特性.方法:以ISA720为佐剂,PfCP-2.9抗原皮下免疫5种品系小鼠3次,间隔3周.以ELISA检测免疫血清中特异性抗体的动态变化、IgG抗体亚型及对融合抗原各组分的抗体水平,以间接荧光抗体实验分析免疫血清对恶性疟原虫天然抗原的识别情况.结果:5种品系小鼠均能产生针对PfCP-2.9的免疫应答,3次免疫后血清中特异性抗体滴度达105以上.PfCP-2.9所诱生的免疫血清不但能识别MSP1-19和AMA-1(Ⅲ)两个主要片段,而且能识别恶性疟原虫天然抗原.所诱导的4种IgG抗体亚型中,IgG1和IgG2a是免疫血清中主要的抗体类型.但特异性抗体水平及抗体亚型分布因遗传背景不同而异.结论:融合蛋白PfCP-2.9在5种不同品系小鼠中具有强的免疫原性,其抗体能识别疟原虫天然蛋白.     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

目的建立能稳定分泌抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５重组蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法用重组ＨＣＶＮＳ５区蛋白为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行融合,经有限稀释克隆３次后制备分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,并用酶免疫（ＥＩＡ）法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果融合后的阳性克隆中筛选出６株能稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,命名为２Ｃ８,２Ｄ２,１Ｄ６,２Ｇ２,１Ｆ５和１Ｆ１０。这６株ＭｃＡｂ与ＮＳ５重组抗原均有良好的反应性,杂交瘤培养上清的ＥＩＡ抗体滴度为１∶４００～１∶１６００,其中１株诱生的同系小鼠腹水滴度为１∶８００００。这６株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１亚型。结论该ＭｃＡｂ的制备,可为ＨＣＶ感染者血清和肝组织中抗原检测方法的建立和生物工程药物的研制创造条件。     

疟原虫抗原B表位NKNDD和NANP串联重复片段与脊灰病毒全…

人工合成含有恶性疟原虫抗原Ｂ表位ＮＫＮＤ的单拷贝抗原基因片段ＮＫＮＤＤ和恶性疟原虫环子孢子蛋白ＣＳＰ的重复性抗原Ｂ表位ＮＡＮＰ的２拷贝基因片段，将ＮＫＮＤＤ和（ＮＡＮＰ）２分别进行自串联后克隆到中介载体ｐＳＫＭＭ，得到一系列不同拷贝数的串联多拷贝克隆，从（ＮＫＮＤＤ）ｎ／ｐＳＫＭＭ和（ＮＡＮＰ）ｎ／ｐＳＫＭＭ的各拷贝类克隆中挑选３，４，５，８拷贝的（ＮＫＮＤＤ）ｎ／ｐＳＫＭＭ和４，６拷贝的（ＮＡＮ     

妇产科和生殖生物学杂志

接受宫内DES治疗后宫颈发育不全患者在孕早期行预防性宫颈环扎术（法）；76例感染性肠道疾病和妊娠病例报道及文献回顾（法）；阑尾炎与妊娠21例报道（法）；使用依托孕烯皮下埋植剂（Implanon）避孕发生宫外孕的首例报道（法）；母乳喂养与素食饮食（法）；Galen动脉瘤的产前诊断和处理：通过1个病例报道进行综合描述（法）     

儿童、青少年医学文献

规律的体育锻炼对1型糖尿病患儿高血糖的控制效果;美国城市学龄前儿童肥胖与种族、民族和社会经济地位的关系;有症状的遗传性出血性毛细血管扩张症患儿的临床和遗传学特征：来自儿科中心的经验;887例无神经病变的Gaucher患儿确诊时的临床和人口统计学特点;针对哮喘教育不足的患儿使用喷雾器的效果     

美国医学会杂志

2002—2004年间与接种天花疫苗相关的神经系统不良事件；动脉粥样硬化血栓形成门诊患者心血管危险因素的国际患病率、认识和治疗。     

美国心脏病学会杂志

接受经皮冠状动脉介入和依替巴肽治疗的中高危患者中出血事件的相关因素：来自PROTECT—TIMI-30试验的观察；左房消融与双心房消融治疗持续性和永久性房颤的前瞻性、随机对比研究；心力衰竭住院患者中β受体阻断剂的应用与临床结局;植入埋藏式心脏复律除颤器的医疗保险受益者中严重并发症的发生率和治疗费用增加；房颤导管消融后膈神经损伤的特征及结局：一项多中心研究。     

儿童和青少年医学文献

儿童医疗支出的经济负担方面的差异,在押青少年中丙肝病毒感染的发病率和危险因素,2003年印第安那州猴痘病毒在接触获感牧羊犬人群中的传播,绒膜羊膜炎对早产儿神经系统发育的影响.