CD147 RNA干扰对前列腺癌LNCaP-AI细胞体外侵袭力的影响

目的:探讨CD147对前列腺癌LNCaP-AI细胞体外侵袭力的影响,阐明CD147对LNCaP-AI细胞侵袭作用的机制,为研究前列腺癌的侵袭过程提供依据。方法:利用脂质体2000分别转染靶向CD147基因的shRNA质粒和阴性对照质粒至LNCaP-AI细胞中,经G418筛选获得稳定表达株,分别命名为AI/shCD147(CD147沉默组)和AI/Scramble(阴性对照组)。Western blotting法检测2组细胞中CD147蛋白表达。Transwell实验检测2组LNCaP-AI细胞的体外侵袭力。Western blotting法检测2组细胞中基质金属蛋白酶2 (MMP-2) 蛋白表达水平。结果:Western blotting法,与AI/Scramble组比较,AI/shCD147组LNCaP-AI细胞中CD147蛋白表达水平明显降低。Transwell实验,AI/shCD147组吸光度(A)值(1.43±0.2)明显低于AI/Scramble组(2.08±0.3),差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting法,AI/shCD147组细胞中MMP-2蛋白表达水平(0.46±0.08)明显低于AI/Scramble组(0.85±0.02),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CD147可通过诱导MMP-2分泌促进前列腺癌LNCaP-AI细胞的体外侵袭力,其可能成为前列腺癌基因治疗的新策略。     

CD147通过Beclin-1抑制前列腺癌PC-3细胞自噬

目的: 通过建立饥饿诱导的自噬模型,探讨CD147对前列腺癌PC-3细胞自噬作用的影响,并阐明其作用机制。 方法: 通过饥饿诱导方式建立自噬细胞模型。实验分为阴性对照组和RNAi干扰CD147组(PC-3/shCD147组)。GFP-LC3质粒转染观察细胞自噬斑点形成情况,免疫印迹技术检测自噬蛋白LC3和Beclin-1表达,台盼蓝排斥实验检测细胞死亡率。 结果: 与阴性对照组比较,PC-3/shCD147组GFP-LC3斑点细胞数增加(P<0.01),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ(P<0.01)和Beclin-1(P<0.05)表达水平升高;与阴性对照组(22.3%±3.5%)比较,PC-3/shCD147组细胞死亡率(38.4%±3.1%)明显升高(P<0.05)。 结论: 在前列腺癌PC-3细胞中,CD147通过Beclin-1抑制饥饿诱导的自噬过程,减少细胞自噬的发生。     

当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢致PC12细胞氧化损伤的影响

目的观察当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢(H2O2)致PC12细胞氧化损伤的影响。方法 H2O2诱导PC12细胞构建氧化应激损伤模型;不同剂量当归红芪超滤膜提取物(0.38、0.75、1.5 g/L)干预;MTT法测定细胞存活率;生化法检测细胞内MDA、LDH、SOD含量;双氯荧光黄乙酸乙酯(DCF-DA)染色,检测细胞内ROS含量。结果 200μmol/L H2O2作用6 h成功诱导PC12细胞氧化应激损伤;与空白对照组比较,H2O2模型组细胞存活率下降,细胞内LDH、MDA、ROS含量增多,SOD含量下降(P0.05);与H2O2模型组相比,当归红芪超滤膜提取物各剂量组细胞存活率明显上升,细胞内LDH、MDA、ROS含量降低,SOD含量增加(P0.05)。结论当归红芪超滤膜提取物可修复H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤。     

胡桃醌通过PI3K/AKT途径促进前列腺癌LNCaP细胞氧化应激

目的 探讨胡桃醌对人前列腺癌LNCaP细胞的杀伤活性与其诱导氧化应激反应的相关性及机制.方法 采用 0、6.25、12.5、25、50和100 μmol/L胡桃醌作用前列腺癌 LNCaP细胞,MTT法检测不同剂量胡桃醌对LNCaP细胞生长抑制影响;胡桃醌联合抗氧化剂NAC作用细胞后,DCFH-DA作为荧光探针,用荧光酶标法检测活性氧(ROS);胡桃醌联合PI3K/AKT通路抑制LY294002作用细胞后,Western blot法检测p-AKT、AKT和Nrf2蛋白表达变化.结果 与阴性对照组比较,胡桃醌浓度在12. 5 μmol/L或以上显著抑制前列腺癌细胞生长(P＜0. 05, P＜0. 01).胡桃醌能够促进细胞ROS含量(P＜0. 01);胡桃醌联合抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)导致ROS含量下降(P＜0. 05),细胞存活率升高(＜0. 01).胡桃醌抑制p-AKT的表达,NAC能够恢复胡桃醌抑制的p-AKT表达.胡桃醌能够抑制细胞核Nrf2的表达,与PI3K/AKT抑制剂LY294002联合使用进一步抑制了 Nrf2的表达.结论 胡桃醌能够抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,作用的机制可能与促进ROS产生从而抑制PI3K/ AKT途径,导致Nrf2表达下降有密切关系.     

去甲乌药碱对过氧化氢引起的PC12细胞损伤的保护作用研究

目的 探讨去甲乌药碱对过氧化氢(H₂O₂)引起的PC12细胞损伤的保护作用。方法 将PC12细胞分为对照组、H₂O₂组(100 μM H₂O₂)、去甲乌药碱组(50 μM去甲乌药碱+100 μM H₂O₂),CCK8法检测细胞活力,TUNEL染色检测细胞凋亡情况,流式检测ROS水平,氧化应激标志物MDA、SOD分别采用TBA法和WST法检测,蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白Caspase3、Bax和Bcl-2的表达情况。结果 与H₂O₂组比较,去甲乌药碱组细胞活力显著提高,ROS、MDA含量显著降低,SOD活性显著升高,Caspase3、Bax表达量减少,Bcl-2表达量增加。结论 去甲乌药碱能通过抗氧化及抗凋亡抑制H₂O₂引起的PC12细胞损伤。     

沉默lncRNA PCA3减少前列腺癌细胞雄激素受体表达抑制前列腺癌细胞增殖和转移

目的 研究沉默lncRNA PCA3 对前列腺癌细胞的影响。方法 选择前列腺癌细胞LNCaP 和C4-2 细胞,使用siRNA 干扰PCA3 在细胞内的表达,实时定量PCR 法检测干扰效果,检测siRNA 干扰PCA3 后对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,Western blot 法在前列腺癌C4-2 细胞内分别检测雄激素受体及其变体7 的表达情况。结果 PCA3 特异性的siRNA 可明显抑制前列腺癌细胞内PCA3 mRNA 的表达,抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭潜能。沉默PCA3 后的C4-2 细胞内雄激素受体及其变体7 表达明显减少。结论 沉默lncRNA PCA3可减少前列腺癌细胞内AR 及AR-V7 的表达,从而抑制前列腺癌细胞增殖和迁移等恶性转变。     

前列腺癌miRNA表达谱及miR-96在氧化应激信号通路中的作用

【目的】 检测miRNA在前列腺癌与正常前列腺组织的表达差异,并探讨表达异常的miRNA在前列腺癌发病中的作用?【方法】 前列腺癌和正常前列腺组织样品(100 mg),Trizol法提取RNA,应用聚合酶链反应(PCR)芯片检测miRNA的表达;同时以250 μmol/L的过氧化氢(H2O2)刺激前列腺癌PC-3细胞4 h,继续正常培养12 h?检测不同时间点细胞内活性氧(ROS)水平,以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-96在各组细胞中的表达?【结果】 与正常前列腺组织相比,前列腺癌组织中miR-144?miR-216a上调5.9倍,miR-96上调30.4倍,miR-488?miR-873下调到4.9%,差异有统计学意义(P < 0.05)?PC-3细胞内ROS为RWPE-1细胞的5.2倍(P < 0.05),miR-96在PC-3细胞中的表达为RWPE-1细胞的15.4倍(P < 0.05)?H2O2刺激PC-3细胞1?4 h后,胞内ROS为对照组的4.3?6.4倍(P均 < 0.05),miR-96表达水平为对照组的10.2?18.9倍(P均 < 0.05);10?16 h组胞内ROS为对照组的2.5倍?1.2倍,miR-96表达水平为对照组的2.7?1.9倍(P均 > 0.05)?【结论】 在前列腺癌组织中发现了若干有表达差异的miRNA;miR-96参与前列腺癌细胞的氧化应激信号途径,可能是防治前列腺癌的重要分子靶点?     

氧化应激增强体外培养人黑素细胞异位表达免疫活性分子

目的:比较观察氧化应激状态下正常人表皮黑素细胞(MCs)与白癜风非皮损区MCs细胞膜表达CD40,CD80,HIA-DR和ICAM免疫分子水平的变化.方法:自5例健康成年包皮和5例稳定期白癜风下腹部非皮损区分别建立正常人表皮MCs和白癜风MCs的原代培养;将培养第2-3代细胞分别用100 mmol/L过氧化氢(H2O2)作用1h或1.5 J/cm2长波紫外线(UVA)照射进行氧化应激处理;用二氯荧光素标记法测定两种MCs在H2O2处理和UVA照射前后胞内活性氧基(ROS)水平变化;用流式细胞仪分析CD40,CD80,HLA-DR和ICAM 4种免疫分子表达水平变化;用分光光度计法测定两种MCs过氧化氢酶活性.结果:过氧化氢酶活性测定结果显示白癜风MCs过氧化氢酶活性较正常人表皮MC明显减低(P＜0.01).细胞内ROS水平测定发现H2O2处理和UVA照射均导致白癜风非皮损区MCs细胞内ROS水平急剧增高,与正常人MCs比较ROS的荧光强度有显著统计学差异(P＜0.01).流式细胞仪检测结果表明除HLA-DR外,UVA照射可诱导白癜风非皮损区MCs高表达CD40,CD80和ICAM1,与未照射组白癜风MCs和UVA照射组正常人MCs比较均有显著统计学差异(P＜0.01).结论:白癜风非皮损区MCs的抗氧化能力明显减低.UVA照射能上调白癜风MCs胞膜异位表达CD40,CD80和ICAM1免疫分子,提示在氧化应激状态下白癜风MCs可兼有增强的抗原呈递细胞样功能.     

珠子参总皂苷通过促进Nrf2转位拮抗新生大鼠心肌细胞氧化应激损伤

目的观察珠子参总皂苷H2O2所致氧化应激损伤保护效应并探讨其机制。方法 Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H2O2建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100、200μg/ml)孵育24 h后,观察细胞搏动频率,MTT法检测珠子参总皂苷对细胞活力的影响,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测珠子参总皂苷对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内ROS含量的影响,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)含量,同时检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量,实时定量PCR技术检测珠子参总皂苷对SOD/GPX/CAT反应系统SOD1、SOD2、SOD3、CAT和GPX1基因表达的影响,Western blot检测珠子参总皂苷对细胞质和细胞核Nrf2蛋白表达的影响。结果 H2O2明显影响细胞活力和诱导凋亡(IC50为500μmol/L),珠子参总皂苷(100、200μg/ml)处理能显著增加心肌细胞搏动频率和存活率(P<0.01),抑制心肌细胞凋亡和改善细胞形态,降低细胞内ROS含量(P<0.01);减轻H2O2所致乳鼠心肌细胞培养液中LDH、CK释放量,同时能够升高SOD、CAT和GSH-Px活性,降低MDA含量(P<0.05,P<0.01);上调SOD/GPX/CAT反应系统基因表达水平和促进Nrf2核移位,增加心肌细胞核内Nrf2的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论珠子参总皂苷抑制心肌细胞氧化应激损伤,与Nrf2抗氧化途径的激活和清除ROS有关。     

黄秋葵总黄酮对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及其机制研究

目的 观察黄秋葵总黄酮对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）氧化应激损伤的影响。方法 采用MTT法检测黄秋葵总黄酮对HUVECs的保护作用,采用分光光度法测定细胞培养上清液中细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）及一氧化氮（nitric oxide,NO）含量,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中内皮素-1（endothelin-1,ET-1）含量,采用二氯荧光乙酰乙酸盐法检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;Western blot方法检测内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）的表达水平。结果 黄秋葵总黄酮可以提高氧化应激损伤的HUVECs存活率,增加SOD活性,升高NO水平,降低MDA、ET-1水平,降低细胞ROS水平,升高eNOS的表达水平。结论 黄秋葵总黄酮对过氧化氢诱导的HUVECs氧化应激损伤有保护作用,其作用机制可能与调节SOD、MDA、ET-1、NO氧化应激相关因子,调控内皮细胞功能相关蛋白eNOS的表达有关。