趋化因子CXCL14在骨肉瘤中的表达及其与预后的关系

目的研究趋化因子CXCL14在骨肉瘤细胞和组织中的表达及其与患者预后的关系。方法利用RT-PCR、酶联免疫吸附法(ELISA)和荧光定量PCR技术检测4种骨肉瘤细胞株及40对骨肉瘤及癌旁肌肉中CXCL14的表达,CCK8细胞增殖实验、克隆形成实验观察CXCL14对U2OS细胞增殖的影响,免疫组化检测CXCL14在骨肉瘤组织中的表达,并运用Kaplan-Meier法进行生存分析。结果 CXCL14在骨肉瘤细胞株中的表达均高于正常成骨细胞,而且其在骨肉瘤组织的表达也显著高于癌旁肌肉组织(P<0.01)。干扰CXCL14表达能抑制U2OS的生长(P<0.05),经两条CXCL14干扰RNA处理后U2OS克隆形成率分别为(4.93±0.25)%和(5.03±0.0.31)%,均显著低于阴性对照组(8.03±1.16)%,差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,CXCL14高表达的患者预后比低表达组差(P=0.02)。结论 CXCL14在骨肉瘤中高表达,它能促进骨肉瘤细胞的增殖并与患者不良预后相关,提示其可能成为潜在的治疗靶点。     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3在肺鳞癌和腺癌中的不同表达及其与预后的关系

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）在两种最常见肺癌病理类型鳞癌和腺癌中的不同表达及其与预后的关系。方
法肺鳞癌和腺癌病人共48名,肝癌对照病人10名,采用免疫组织化学方法检测肺癌组织及其癌旁组织中GPC3蛋白的表达。
应用Kaplan-Meier 法进行生存分析。结果肺癌中的GPC3 蛋白总表达率29.2%（14/48）。GPC3 在肺癌旁组织中不表达。
GPC3蛋白在肺鳞癌中的阳性率为54.5%（12/22）,在肺腺癌中的阳性率为7.7%（2/26）,肺鳞癌中的GPC3蛋白表达明显高于肺
腺癌（P<0.01）。在阳性表达的肺癌样本中,肺鳞癌与肺腺癌有淋巴结转移者和低分化组GPC-3均表达更显著。肺癌与肝癌的
GPC3蛋白表达特点不同。Kaplan-Meier生存分析显示GPC3蛋白与预后无关。结论GPC3蛋白肺鳞癌患者表达更高,提示其
可作为潜在候选标记物检测肺鳞癌。
     

miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控RND3 促进肝癌细胞增殖

目的检测MicroRNA-128a（miR-128a）在肝细胞癌中的表达情况并探讨其在肝癌细胞中的生物学功能及机制。方法收
集19例肝细胞癌及对应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-128a 在肝细胞癌和对应癌旁组织及肝癌细胞株中的表达;应用
miR-128a mimics或inhibitor转染人肝癌细胞,MTT检测转染后细胞增殖活力变化;软件预测miR-128a的潜在靶点RND3,并用
双荧光素酶报告实验证实miR-128a与RND3 3’UTR结合,qRT-PCR和Western blot检测miR-128a潜在靶点RND3的表达变化;
Western blot检测细胞周期蛋白变化。结果在肝细胞癌组织中miR-128a的表达显著高于对应的癌旁组织（P<0.05）;miR-128a
促进肝癌细胞增殖（P<0.05）;在肝癌细胞中miR-128a通过与RND3 3’URT结合下调RND3 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）;抑
制miR-128a的表达可以导致cyclin B1、cyclin D1 和CDK4表达下调。结论miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控
RND3促进肝癌细胞增殖。
     

Ang-2、Tie-2和VEGFR-2表达在大肠癌血管生成和预后中的作用

目的检测大肠癌组织中Ang-2、Tie-2和VEGFR-2的表达水平,探讨3者在大肠癌发生、复发转移、预后及血管生成中的
调节作用。方法采用免疫组SP方法,检测118例大肠癌组织中、40例癌旁组织及40例肠道良性疾病组织中Ang-2、Tie-2及
VEGFR-2的表达及CD34标记的微血管（MVD）进行检测,分析它们与大肠癌血管生成的关系。结果大肠癌组织中Ang-2、
Tie-2及VEGFR-2在的阳性表达率分别为74.58%、69.49%和61.02%明显高于癌旁组织中的25.00%、17.50%和17.50%及大肠
良性病变组织中的35.00%、32.50%和32.50%;（ P值均<0.05）;大肠癌组织中2个或3个因子共同表达率为61.02%,明显高于单
个因子阳性表达率(15.25%);癌组织中MVD表达量为（31.43±10.50）,明显高于癌旁组织中的（10.61±3.76）和大肠良性病变组织
中的（16.89±3.83）（P<0.05）。三者表达与CEA和MVD均呈正相关（P<0.05）。Ang-2的表达与CA19-9呈正相关（P<0.05）,
Tie-2和VEGFR-2的表达则与CA19-9无关（P>0.05）;根治术后5年内复发转移者和未复发转移者Ang-2、Tie-2和VEGFR-2的
表达差异均有统计学意义（P<0.05）,阴性表达者5年生存率明显高于阳性表达者（P<0.05）。结论Ang-2、Tie-2和VEGFR-2在
大肠癌血管生成过程中发挥重要作用,其高表达与大肠癌的发生、复发转移和预后有关。
     

MK、Ki67在胃癌中异常表达及其与胃癌的临床关系

目的探讨胃癌组织中中期因子（midkine,MK）和Ki67的表达,及其与临床病理学因素的关系。方法应用免疫组织化学
方法检测71 例胃癌组织及20 例胃癌癌旁形态学正常组织中MK、Ki67 表达。结果MK、Ki67 在胃癌组织中的表达水平
（76.1%,73.2%）均显著高于在癌旁形态学正常胃组织中的表达水平（0,5%）（P<0.01）;胃癌组织中MK、Ki67的阳性表达与肿瘤
浸润深度、淋巴结转移及病理分期密切相关（P<0.05）;MK与Ki67表达呈正相关性（P<0.05）,MK、Ki67蛋白表达阳性的患者预
后较差。结论MK、Ki67在胃癌组织中表达水平高于胃癌旁组织,两者在胃癌的形成和进展中起重要作用,其阳性表达与胃癌
患者多项临床病理指标相关,可能与胃癌患者预后密切相关。
     

MUC15在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨黏蛋白MUC15 在肝细胞癌中的表达及临床意义,并分析其和患者预后之间的关系。方法应用实时定量
RT-PCR法及Western blot法检测肝细胞系L02、肝癌细胞系HepG2、MHCC-97H、SMMC-7721,以及122例肝癌组织、对应癌旁
非肿瘤组织中MUC15的表达情况;并分析MUC15的表达与相关临床参数及患者预后的关系。结果肝细胞系L02中MUC15
表达水平显著高于肝癌细胞系HepG2、MHCC-97H、SMMC-7721（P<0.05）;MUC15在肝癌组织的表达水平显著低于癌旁非肿
瘤组织（P<0.05）,且MUC15 的表达与肿瘤的TNM分期、肝内或淋巴结转移、门静脉癌栓、病理分级等明显相关（P<0.05）;
Kaplan-Meier生存曲线表明MUC15的低表达是肝细胞癌患者预后差的指标。结论MUC15的表达与肝癌患者的临床病理特
征及预后密切相关,很有可能是肝癌患者预后的一个新的预测指标。
     

lncRNA DIO3OS在骨肉瘤中的表达及抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移的研究

目的 探讨lncRNA DIO3OS在骨肉瘤中的表达及其在调控骨肉瘤细胞生物学行为中的作用。方法 收集骨肉瘤标本及配对癌旁正常组织标本6例，qRT-PCR检测骨肉瘤组织中DIO3OS表达。MG-63细胞转染si-DIO3OS或pcDNA3.1-DIO3OS,敲降或过表达DIO3OS后，通过CCK-8实验评估细胞增殖能力，划痕实验和Transwell实验检测骨肉瘤细胞MG-63迁移与侵袭能力。基于TARGET数据库，根据患者骨肉瘤组织中DIO3OS表达水平分为高表达组与低表达组，Kaplan Meier生存分析评估DIO3OS表达水平与患者预后的关系。结果 qRT-PCR结果显示，骨肉瘤组织及细胞中DIO3OS表达下调。敲降DIO3OS表达时，CCK-8实验结果表明骨肉瘤细胞MG-63增殖能力增加，划痕实验和Transwell实验结果显示MG-63细胞迁移与侵袭能力增加(P<0.05)。过表达DIO3OS后，CCK-8、划痕实验和Transwell实验结果显示，MG-63细胞的增殖、迁移与侵袭能力减弱(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示，DIO3OS高表...     

MicroRNA-218在肝细胞癌中的表达及功能

目的检测MicroRNA-218（miR-218）在肝细胞癌中的表达情况并研究其在肝癌中的功能。方法收集46例肝细胞癌及对
应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-218 在肝癌及对应癌旁组织中的表达情况;应用miR-218 mimic转染人肝癌细胞系
HepG2,MTT和流式细胞术检测转染后细胞活力和凋亡变化,qRT-PCR和Western blot检测miR-218潜在靶点的表达变化。结
果miR-218在肝癌组织中的表达显著低于对应的癌旁组织（P<0.05）;miR-218低表达与肿瘤大小（>5 cm）和高TNM分期（Ⅲ+
Ⅳ）具有显著相关性（P<0.05）;在HepG2细胞中,miR-218抑制细胞增殖和诱导凋亡,并下调Bmi-1和CDK6 mRNA及蛋白表达
（P<0.05）。结论miR-218低表达与肝癌的恶性临床病理特征相关,miR-218可能通过下调Bmi-1和CDK6表达抑制肝癌细胞增
殖和促进凋亡。
     

食管鳞状细胞癌中EZH2的表达对患者术后预后的影响

目的通过研究鳞状细胞癌EZH2蛋白的表达,探讨其表达程度高低与患者术后预后的关系。方法对1996~2006年本院
心胸外科食管鳞癌术后病人随访,纳入研究对象,采用免疫组化方法研究其中鳞癌组织（102例）、癌旁组织（30例）、正常组织（30
例）中EZH2蛋白的表达情况,研究该蛋白表达与临床病理参数（性别、年龄、分化、分期、淋巴结转移）的关系;结合随访资料,采
用生存分析研究蛋白表达高低对术后患者预后的影响。结果食管鳞状细胞癌中的EZH2表达高于非癌组织,中低分化鳞癌组
织表达高于高分化组织,有淋巴结转移组织表达高于无转移组织,临床TNM分期Ⅱ、Ⅲ期患者表达高于Ⅰ期患者,低于Ⅳ期患
者,高表达组患者术后远期生存时间较低表达组明显降低（P<0.05）。结论EZH2促进食管鳞癌的淋巴结转移,降低分化程度。
术后患者EZH2高表达组较低表达组预后差。
     

E3 泛素连接酶HERC4在乳腺癌中的表达及临床意义

目的研究HERC4在人乳腺癌组织中的表达,探讨其与乳腺癌临床特征的相关性。方法RT-qPCR法检测67例乳腺癌组
织及配对癌旁乳腺组织标本中HERC4的mRNA表达水平;Western blot和免疫组化法检测67例乳腺癌组织及配对癌旁乳腺组
织标本中HERC4的蛋白表达水平。结果RT-qPCR结果显示HERC4的mRNA的表达水平在乳腺癌组织中较癌旁乳腺组织高
（P<0.05）。Western blot结果显示HERC4蛋白在乳腺癌组织中高表达（P<0.05）。免疫组化结果表明HERC4主要在细胞质中
表达。乳腺癌组织中HERC4阳性表达率为61.2%,癌旁乳腺组织阳性表达率为19.4%。HERC4的表达与乳腺癌TNM分期和
组织学分级密切相关（P<0.05）。结论HERC4与乳腺癌的发生和发展存在相关关系,并有可能作为乳腺癌早期诊断标志物和
治疗靶点。
     

MicroRNA-638在骨肉瘤中表达下调及对其细胞增殖的影响

目的 探讨miR-638在人骨肉瘤(OS)细胞增殖行为中的影响。方法通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-638在人OS组织及癌旁组织、人OS细胞株(MG63、U2OS、HOS、SaOS2)和正常人成骨NHOst细胞株中的表达;用LipofectamineTM 2000转染miR-638模拟物或抑制物,细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)检测转染后的吸光光度值,平板克隆形成实验检测菌落数量。结果miR-638在各组细胞中均有表达;OS细胞株中miR-638的表达明显下调(P＜0.05);高表达miR-638能抑制OS MG63和U2OS细胞的增殖(P＜0.05)。 结论miR-638高表达能抑制OS细胞的增殖。     

miR-199a在肾细胞癌中的表达与临床病理特征及预后的关系

目的检测miR-199a在肾细胞癌及癌旁相对正常肾组织中的表达量,分析其相对表达量和肾细胞癌相关的临床病理特征
及其对肾细胞癌预后判断的意义。方法采用RT-qPCR检测67例肾细胞癌及癌旁正常组织miR-199a表达,分析表达的差异与
临床病理特征间的关系。结果在肾细胞癌和癌旁相对组织中均有不同程度的表达,在肾细胞癌的表达显著低于癌旁相对正常
组织,均值13.7倍（P=0.003）。miR-199a的表达在不同肿瘤浸润程度及复发程度之间存在差别（P<0.05,χ2=4.215）,
而与年龄、组织学类型、淋巴结转移、远处转移、Fuhrman分级等无统计学关联（P>0.05）。miR-199a下调组生存期明显低于对照组（Log-rank
test,P=0.017）。结论miR-199a表达下调与肾癌患者原发肿瘤浸润程度、复发及预后不良有关,可作为评估肾癌预后有价值的
一种指标。
     

IFN-γ增强人γδT细胞杀伤骨肉瘤细胞的研究

目的研究干扰素-γ（IFN-γ）增强骨肉瘤患者γδ T细胞对骨肉瘤杀伤作用的影响。方法以唑来磷酸法扩增骨肉瘤患者外
周血γδ T细胞。分别使用实时荧光定量聚合酶链反应和流式细胞术检测IFN-γ处理前后骨肉瘤细胞Fas的表达情况;LDH法检
测骨肉瘤患者γδ T细胞对骨肉瘤细胞的杀伤活性。结果IFN-γ对骨肉瘤细胞Fas的表达明显提高（P<0.01）,骨肉瘤患者γδ T细
胞对骨肉瘤细胞的杀伤作用显著增强（P<0.01）。抗人FasL抗体对γδ T细胞杀伤OS细胞作用影响较小（P>0.05）;但能显著阻断
γδ T细胞杀伤IFN-γ预处理OS细胞的作用,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论IFN-γ可增强骨肉瘤患者γδ T细胞的抗骨肉
瘤作用。
     

ELK1调控PI3K/Akt信号通路促进骨肉瘤细胞增殖及其机制研究

目的 探讨E26转录因子1（ELK1）调控PI3K/Akt信号通路对骨肉瘤细胞增殖能力的影响及其发挥作用的可能机制。方法 Western blotting检测ELK1在骨肉瘤细胞系U2OS、MG-63、HOS及正常成骨细胞hFOB11.9中的相对表达量;选择相对表达量最高的骨肉瘤细胞系进行ELK1 siRNA转染,分为si-NC组、si-ELK1-1组和si-ELK1-2组;MTS检测各组细胞增殖率;平板克隆实验检测各组细胞克隆形成能力;Western blotting检测各组细胞中PI3K/Akt信号通路关键蛋白pPI3K和pAKT的相对表达量;采用PI3K/Akt信号通路激活剂SC79与ELK1 siRNA同时处理骨肉瘤细胞后MTS法检测各组细胞增殖率,平板克隆实验检测各组细胞克隆形成能力。结果 与正常成骨细胞比较,ELK1在骨肉瘤细胞系中的相对表达量均升高（P <0.05）,在U2OS细胞中的相对表达量最高（P <0.05）;U2OS细胞转染ELK1 siRNA,Western blotting结果显示,与si-NC组比较,si-ELK1-1组、si-ELK1-2组U2OS细胞中ELK1的相对表达量降低（P <0.05）;与si-NC组比较,si-ELK1-1组和si-ELK1-2组U2OS细胞增殖率和克隆形成能力均降低（P <0.05）,细胞中pPI3K和pAkt蛋白的相对表达量降低（P <0.05）。SC79处理si-ELK1组U2OS细胞后,ELK1 siRNA对细胞增殖和克隆形成能力的抑制作用减弱（P <0.05）。结论 ELK1在骨肉瘤细胞中高表达,通过激活PI3K/Akt信号通路促进骨肉瘤细胞增殖的能力,ELK1可作为治疗骨肉瘤的潜在靶点。     

Let-7d通过靶向调控Rhotekin基因抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨let-7d在骨肉瘤组织中的表达,并研究let-7d及其靶基因对人骨肉瘤细胞U2OS增殖、迁移和侵袭的影响。方法 收集2010年至2015年于我科行手术切除的25例骨肉瘤患者的肿瘤组织和癌旁组织（距肿瘤组织边缘>5 cm）,并用qPCR检测let-7d的表达情况。构建稳定过表达let-7d的U2OS细胞,用qPCR验证let-7d过表达情况,以转染pCDH空病毒载体的U2OS细胞作为对照组细胞,并分别采用CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验检测过表达let-7d对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。通过微RNA靶基因预测软件和双荧光素酶实验明确let-7d的下游靶基因,检测过表达let-7d的U2OS细胞中靶基因的表达水平,并通过小干扰RNA技术研究抑制靶基因表达对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 骨肉瘤组织中let-7d表达水平低于癌旁组织（P<0.01）。与人成骨细胞hFOB1.19相比,U2OS细胞中let-7d表达水平下调（P<0.01）。与对照组相比,过表达let-7d能抑制U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。微RNA靶基因预测软件和双荧光素酶实验结果显示,Rhotekin（RTKN）基因是let-7d的直接靶基因,且过表达let-7d导致U2OS细胞中RTKN mRNA表达水平较对照组降低（P<0.01）。干扰RTKN表达能抑制U2OS细胞增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。结论 Let-7d通过靶向调控RTKN抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为骨肉瘤治疗一个新的靶点。     

miR-146a在结肠癌中的表达及意义

目的探讨miR-146a在结肠癌中的表达与功能。方法qRT-PCR分析结肠癌组织、毗邻正常细胞组织以及结肠癌细胞系
miR-146a的表达水平,MTT法测定结肠癌细胞系SW620转染miR-146a模拟物后的增值,FACS法检测细胞周期与凋亡状况。
结果43 份结肠癌组织样品中,36 份呈现miR-146a 表达量下调,并且该下调表达情况与肿瘤增殖情况（P=0.010）相一致,
miR-146a表达量还与患者肿瘤大小、临床分期密切相关,同时miR-146a表达量较高的患者较比表达量低的患者寿命要长（P=
0.011）,MTT检测表明,miR-146a能抑制细胞增殖（P<0.005）,流式细胞仪检测结果表明,转染miR-146a的SW620细胞相比对
照组细胞,凋亡比例上升（11.9%∶5.9%）,但是对细胞周期没有什么影响。结论miR-146a可能是结肠癌新的抗癌靶标,能抑制结
肠癌细胞增殖,在结肠癌中具有重要作用。
     

帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响

目的：研究帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法： Western 印迹检测骨肉瘤细胞株(MG-63,Saos-2和U2OS)及正常人成骨细胞株hFOB1.19中DJ-1和第10号染色体上缺失的 磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome 10,PTEN)基因的表达。DJ-1 siRNA处 理人骨肉瘤细胞后,采用Western印迹检测DJ-1的蛋白表达水平;细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细 胞存活率;膜联蛋白V(annexin V)-异硫氰酸荧光素(fl uorescein isothiocyanate,FITC)/碘化吡啶(propidium iodide,PI)双染 检测细胞凋亡;Transwell侵袭和迁移实验检测细胞侵袭和迁移水平。结果：与hFOB1.19细胞比较,骨肉瘤细胞DJ-1蛋 白表达水平显著升高(均P<0.05),其中U2OS细胞升高最为显著(P<0.01)。DJ-1 siRNA可显著降低U2OS细胞中DJ-1蛋白 表达水平、降低细胞存活率、促进细胞凋亡、抑制细胞侵袭和迁移水平,以及增加PTEN蛋白表达水平(均P<0.05)。 另外,与hFOB1.19细胞比较,PTEN在骨肉瘤细胞中的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论：DJ-1可抑制人骨肉瘤 细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭和迁移水平,其机制可能与增加PTEN蛋白的表达水平有关。     

miR-200a在结直肠癌细胞系中的表达及其对高转移细胞系Lovo的影响

目的检测结肠癌细胞系中miR-200a对高转移细胞系Lovo的影响。方法采用荧光定量PCR法检测6种结肠癌细胞系
HCT116、HT29, LS174T、SW480、SW620和Lovo中miR-200a的表达水平,在高转移细胞系Lovo中瞬时转染miR-200a mimics
使其高表达miR-200a,检测高表达miR-200a后Lovo细胞增殖、迁移、细胞同质黏附能力和凋亡等情况的变化。结果miR-200a
在6种细胞系中存在差异性表达,其中具有高转移潜能的Lovo中表达最低,成瘤但不转移的细胞系HCT116表达最高。在Lovo
细胞高表达miR-200a后,Lovo细胞的增殖和迁移能力明显减弱、细胞同质黏附能力增强且凋亡增加。结论miR-200a在结肠
癌细胞系中表达失常,其作用可能与结肠癌细胞的侵袭和转移有关,高表达miR-200a 能抑制Lovo细胞增殖和迁移、增强细胞
间黏附能力、促进凋亡,其分子机制有待进一步研究。
     

沉默信息调节因子3对肝癌细胞增殖的影响

目的探讨沉默信息调节因子3（SIRT3）对肝癌细胞增殖的影响。方法Western blotting检测SIRT3在正常肝组织、永生化
肝细胞及肝癌细胞系中的蛋白表达水平;在肝癌细胞中过表达SIRT3,台盼蓝排斥实验检测过表达SIRT3对肝癌细胞增殖的影
响,EdU标记实验检测SIRT3对肝癌细胞DNA合成的影响;在肝癌细胞中过表达SIRT3,平板集落实验检测SIRT3对肝癌细胞
集落形成能力的影响;qRT-PCR验证SIRT3的沉默效率,台盼蓝排斥实验检测SIRT3沉默对肝癌细胞增殖的影响,EdU标记实
验检测SIRT3沉默对肝癌细胞DNA合成的影响。结果SIRT3在肝癌细胞系中的蛋白水平较永生化肝细胞、正常肝组织降低;
SIRT3在肝癌细胞中成功过表达,过表达SIRT3使肝癌细胞增殖数目减少了约为51%~61%（P<0.001）,使肝癌细胞DNA合成下
降了约57%（P<0.05）;过表达SIRT3抑制肝癌细胞的集落形成能力;SIRT3沉默有效,SIRT3沉默使肝癌细胞的增殖增加了约
51%~61%（P<0.01）,使肝癌细胞的DNA合成能力增强了137%~149%（P<0.01）。结论SIRT3可抑制肝癌细胞的增殖。