铁皮石斛快繁技术体系研究

目的 以铁皮石斛Dendrobium officinale带芽茎段为材料,对铁皮石斛的组织培养进行系统研究,以期建立铁皮石斛的快繁技术体系。方法 采用植物组织培养的方法对铁皮石斛外植体的消毒方法、原球茎的诱导、增殖、分化、幼苗生根及瓶苗移栽等进行研究。结果 铁皮石斛外植体最佳的消毒方式为75%乙醇消毒30 s,再用0.1% HgCl₂消毒10 min;铁皮石斛带芽茎段原球茎诱导的最佳培养基为MS＋1.0 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L NAA＋2 g/L AC,诱导率达到34.98%;原球茎增殖的最佳培养基为MS＋0.5 mg/L 6-BA＋0.8 mg/L 2, 4-D＋2 g/L AC,增殖率达到89.6%;原球茎分化的最佳培养基为MS＋1.2 mg/L 6-BA＋0.2 mg/L IBA＋2 g/L AC,分化率达到89.6%;幼苗生根的最佳培养基配方为1/2 MS＋2.5 mg/L NAA＋15%土豆汁＋2 g/L AC,生根率达到90.4%～92.8%;瓶苗移栽最佳方式为大苗、树皮块苔藓草做基质、基质中添加0.03 mg/L赤霉素,并接种适量菌根真菌Epulorhiza sp.。结论 建立了铁皮石斛的快繁技术体系,为铁皮石斛的工业化生产奠定技术基础。     

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长的影响

目的 研究固体培养条件下2种真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长的影响.方法 筛选获得铁皮石斛原球茎的继代培养基及其生长曲线.根据生长曲线,在原球茎生长的不同时期加入真菌诱导子,考察诱导子对原球茎鲜质量和干质量的影响.结果 铁皮石斛原球茎继代培养基:1/2MS 20%土豆 3%蔗糖 0.8%琼脂.与对照相比,第11周和第13周加入MF23诱导子使原球茎鲜质量分别提高了16.4%(P<0.01)和23.4%(0.01),干质量分别提高了6.7%A(P<0.05)和17.9%(P<0.01),继代培养基中加入MF23诱导子使原球茎干质量降低了9.9%(P<0.01).与对照相比,第11周和第13周加入MF24诱导子使原球茎鲜质量分别提高了17.7%(P<0.01)和12.0%(P<0.05),第11周加入MF24诱导子使原球茎干质量提高了9.2%(P<0.05),继代培养基中加入MF24诱导子使原球茎干质量降低了13.9%(P<0.01).结论 在原球茎培养的早期加入真菌诱导子,对原球茎的生长有一定抑制作用;在原球茎培养的后期加入真菌诱导子,对原球茎的生长有促进作用.     

离体培养时真菌对铁皮石斛和金钗石斛生长的影响

目的研究离体培养时瘤菌根菌属(Epulorhiza sp.)真菌AR-18对铁皮石斛和金钗石斛生长的影响.方法采用琼脂作支持物,考察真菌对铁皮石斛和金钗石斛的鲜重和干重的影响;采用蛭石作支持物,考察真菌和营养液对铁皮石斛和金钗石斛的鲜重和干重的影响.结果在琼脂培养基上,真菌AR-18对铁皮石斛和金钗石斛的鲜重和干重的增加均没有显著性影响(P＞0.05).在蛭石基质上,真菌AR-18对金钗石斛鲜重的增加具有显著促进作用(P＜0.05),接菌的金钗石斛的鲜重较不接菌提高16%;真菌AR-18对金钗石斛干重的增加具有极显著促进作用(P＜0.01),接菌的金钗石斛的干重较不接菌提高21%.在蛭石基质上,真菌AR-18配合使用蒸馏水极显著促进了金钗石斛鲜重的增加(P＜0.01),接菌的金钗石斛的鲜重较不接菌提高47%,真菌AR-18配合使用营养液对金钗石斛鲜重的增加没有显著性影响(P＞0.05);真菌配合使用营养液或配合使用蒸馏水对金钗石斛干物质的积累没有显著性影响(P＞0.05),所以最佳处理组合为真菌AR-18配合使用蒸馏水.在蛭石基质上,真菌AR-18和营养液对铁皮石斛的鲜重和干重的增加没有显著性影响(P＞0.05).结论在离体培养条件下选择合适的基质和控制真菌的适度生长是建立稳定的共生平衡系统和促进金钗石斛生长的重要条件.在人工栽培金钗石斛的过程中,使用真菌AR-18作为菌肥,有可能取得较好的效果.     

白花曼陀罗悬浮培养细胞生长和生物碱活性成分合成

目的 研究白花曼陀罗细胞悬浮培养合成生物碱。方法 在MS液体培养基上悬浮培养细胞生产生物碱，以碳源、pH值、接种量等为影响因子进行研究。结果 蔗糖为最佳碳源，细胞接种量以鲜重1.5～2.0g／L、培养液初始pH值5．5～6．0对曼陀罗悬浮培养细胞生长和生物碱合成最有利，加入苯丙氨酸能促进生物碱的合成。结论 白花曼陀罗细胞悬浮培养能有效地合成生物碱。     

萘乙酸浓度对铁皮石斛组培苗生长发育的影响

目的 研究培养基中添加不同浓度的萘乙酸(NAA)对诱导铁皮石斛组培苗的影响.方法 以铁皮石斛种子为材料,在4种培养基(Ⅰ ～Ⅳ)中诱导出原球茎,再以预实验优选出的1/2MS+活性炭1.0g/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L为基本培养基,配制成0～5.0 mg/L的6种不同NAA浓度的培养基(Ⅴ ～Ⅹ)进行原球茎增殖分化和继代培养,筛选促进组培苗根茎叶生长发育最佳的NAA浓度和培养基配方.结果种子在Ⅳ号培养基中的萌发率最高,达94.2％以上;在NAA添加量为4.0 mg/L的Ⅸ号培养基中,原球茎分化后根长、叶长、叶宽、株高、茎粗、单株鲜重分别为1.516 cm、0.943 cm、0.365em、2.991 cm、0.264 cm、0.102 g,各指标均显著优于其它NAA浓度的培养基.另外,在Ⅸ号培养基中添加100 g/L土豆和80g/L香蕉能够显著地促进生根壮苗阶段组培苗根茎叶的生长发育,各指标可增加1～3倍.结论培养基1/2MS+NAA0.2 mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂7.0g/L最适宜铁皮石斛种子萌发,当NAA浓度为4.0 mg/L时更能促进组培苗根茎叶的生长发育.     

AgNO3在铁皮石斛组织培养中抗衰老作用

目的解决铁皮石斛在组织培养过程中的衰老问题。方法在原球茎增殖培养基、丛芽增殖培养基和生根培养基中分别加入AgNO30、1、2mg/L,测定乙烯的产生量,观察试管苗生长情况。结果AgNO3抑制乙烯的产生,提高了原球茎的增殖速度和丛芽的分化效率,明显促进种苗的生长,提高移栽成活率2倍,表现出抗衰老功能。结论1mg/LAgNO3可以作为铁皮石斛组织培养的抗衰老剂。     

胶孢炭疽菌粗毒素对铁皮石斛生长的影响

【目的】探究胶孢炭疽菌粗毒素对铁皮石斛幼苗生长状况的影响,为铁皮石斛抗性突变体筛选和培育提供前期基础。【方法】添加不同浓度胶孢炭疽菌粗毒素的MS培养基对铁皮石斛幼苗进行培养,观察粗毒素对幼苗生长的影响,并初步筛选适宜抗性选择压。【结果】胶孢炭疽菌粗毒素浓度在5%~15%(体积分数)范围内,对铁皮石斛株高、茎粗、新增芽数、根数、鲜重的增长起促进作用,其中以浓度为5%(体积分数)时促进作用最为显著;粗毒素浓度在35%~40%(体积分数)范围内对铁皮石斛株高、叶片数、新增芽数、根数、鲜质量的增长起到抑制作用;粗毒素浓度在20%(体积分数)时,铁皮石斛出现开花现象,且花的形态出现变异现象。【结论】胶孢炭疽病菌粗毒素具有生物活性,且有一定的毒性,可以考虑代替病原菌作为离体筛选铁皮石斛抗炭疽病突变体的选择剂,但筛选铁皮石斛抗性突变体的抗性选择压还有待进一步研究。     

建立金线莲原球茎悬浮体系生产次生代谢产物

研究植物激素浓度和培养周期对金线莲原球茎悬浮培养生长及其代谢产物积累的影响,以增加金线莲悬浮培养的生长量,提高次生代谢产物的生产.结果表明,MS培养基添加S- 3307 1.0mg/L,6- BA0.5mg/L和3％的蔗糖适合总生物量的生长(214.45g/L,FW和18.23g/L DW).而MS培养基添加S -33071.0mg/L,6- BA 3.0mg/L和5％的蔗糖,总黄酮,总酚和多糖的干重(5.43mg/g,2.87mg/g和243.23 mg/g)达到最大化.研究原球茎悬浮培养过程,发现经过7个星期培养就能获得最大的生物质总量(225.98 g/L的FW和18.53 g/L的DW)、总黄酮干重(5.09mg/g)和总酚干重(2.04mg/g),而多糖生产达到其峰值(229.36mg/g干重)是在培养后5个星期.     

珍稀濒危药材铁皮石斛组培快繁关键技术研究

目的研究珍稀濒危药材铁皮石斛组织培养快速繁殖技术。方法以铁皮石斛茎段为试材,比较植物激素浓度配比、人工光源、炼苗驯化方法等对铁皮石斛组培快繁的影响,摸索出一套可进行组培快繁工厂化生产的技术体系,优选出铁皮石斛组培快繁的最适条件。结果 (1)组培各阶段最佳培养基:原球茎诱导:MS+BA 2.5 mg/L+IBA0.2 mg/L;原球茎分化:MS+BA1.5 mg/L+NAA1.2 mg/L+5%香蕉汁;壮苗生根:MS+NAA 0.15 mg/L+5%香蕉汁、MS+NAA 0.20 mg/L+7.5%香蕉汁、MS+NAA 0.25 mg/L+10%香蕉汁(分阶段补加);(2)人工光源:组培特定光谱节能灯;(3)炼苗方法:水培驯化炼苗。结论通过上述技术的应用,缩短了种苗组培育苗周期,解决了从组培苗到大量栽培的技术,该方法简便易用,且降低了生产成本。     

茯苓液体发酵条件的研究

通过摇瓶培养实验,对茯苓生长曲线进行了初步摸索,并进一步对茯苓液体发酵的最适培养基和培养条件进行了初步探讨.茯苓液体发酵的最适发酵培养基为:葡萄糖30 g,酵母浸膏3.9 g,蛋白胨5.1 g,K2HP04 1 g,M gS04.7H2O 0.5 g,水1L.茯苓液体发酵的最适培养条件为:培养温度26℃,摇瓶装量60mL(250 mi三角瓶),转速150 r/min,培养基初始pH值5.5,液体菌种茵龄2天,液体菌种接种量6%,摇瓶培养时间7天.     

天麻的组织培养及快速繁殖

目的：利用组织培养方法快速繁殖成米麻作为种麻,为寻找出一简便可行的快繁天麻种麻的新途径提供理论依据。方法：天麻块茎或茎尖无菌离体培养,米麻块茎诱导培养基为1／2MS＋6－BA 1mg/L NAA0.5mg/L＋香蕉50mg/L;箭麻茎尖诱导培养基为1／2MS＋6－BA2mg/L NAAO.2mg/L。结果：小米麻经50d无菌培养后开始生长出新米麻,70d后原小米麻块茎上生长出多个分枝的新米麻;箭麻茎尖超过140d组织培养,茎尖分化、诱导形成原球茎,超过160d培养原球长大并开花。结论：天麻可以用组织培养方法快速繁殖成米麻作为种麻。     

丽江山慈姑的组织培养及育种技术研究

目的 建立药用植物丽江山慈姑的组织培养和快速繁殖体系。方法 对丽江山慈姑的球茎、地上茎、叶片及根尖等不同部位进行丛生芽及原球茎的诱导，筛选适合生根的培养基配方。结果 通过研究，筛选出了丽江山慈姑原球茎的诱导、增殖及生根培养基配方，建立了丽江山慈姑的快速繁殖体系，实现了大规模的组培生产。结论 在MS培养基上，丽江山慈姑球茎和地上茎诱导丛生芽效果较好，MSF 6—BA 2mg/L NAA0．5mg/L的激素配比既能使丽江山慈姑快速增殖，又能诱导出原球茎，适合大规模生产，在1／2MS IBA0．5mg/L NAA0．2mg/L的培养基上，丽江山慈姑原球茎生根效果较好。     

丙烯腈生物降解实验条件研究

目的:筛选获得高效降解丙烯腈菌株并研究其最佳降解条件。方法:采集长期受高浓度丙烯腈工业废水污染的表层土样,经富集、驯化诱导、分离获得降解丙烯腈菌株,考察影响其降解丙烯腈诸多因素,测定相应情况下丙烯腈降解率或细胞生物量。结果:按5%接种菌量,在装液量25mL/250mL、摇床转速150r/min、30℃、pH7.0及葡萄糖初始浓度20g/L的实验条件下,振荡培养48h,该菌株丙烯腈降解率达到99.4%,且菌株生长良好,降解后水中丙烯腈含量低于国家排放标准。结论:该菌株能高效降解丙烯腈,有望推为工业应用。     

不同剂量甘露醇治疗幕上脑出血的临床疗效及其对早期血肿扩大的影响

目的:观察两种剂量甘露醇治疗方案对中等量幕上脑出血的临床疗效和早期血肿扩大的影响。方法:将我院自2013年1月至2015年3月收治的发病时间在24 h内且血肿体积为15~30 m L的急性幕上脑出血患者随机分为两组:一组给予20%甘露醇250 m L,连续7 d,另一组给予20%甘露醇125 m L快速静脉滴注,连续7 d;采用发病后3月时的mRS评分作为临床疗效指标。mRS评分为0~2分的定义为结局良好;治疗1 d后复查头颅CT,测量血肿体积,以血肿体积增大比入组时增大33%以上定义为早期血肿扩大。结果:共入选78例,两组各39例,采用250 m L甘露醇治疗组发病后3月时结局良好的有17例,占43.9%(17/39),采用125 m L甘露醇治疗组有26例,占66.7%(26/39),两组比较有显著统计学差异(P<0.01);采用250 m L治疗组血肿扩大比率为17.9%(7/39),125 m L治疗组为7.7%(3/39),两组比较有显著统计学差异(P<0.01)。结论:对于中等量的幕上脑出血,125 m L甘露醇的临床疗效好于250 m L,且低剂量治疗对早期血肿扩大的影响较小,临床应扩大样本深入研究有利于其推广。     

不同潮气量的机械通气对老年肺癌病人术后的影响

目的:探索不同潮气量的机械通气对老年肺癌病人手术后的影响。方法:选择老年肺癌手术病人100例,根据病人采用机械通气潮气量的不同分为6 mL/kg组（A组）、8 mL/kg组（B组）和10 mL/kg（C组）,分析比较3组病人术后血气分析指标、相关炎症因子及呼吸指标的变化和术后并发症的发生情况。结果:在T₁、T₂、T₃时间点,呼气末二氧化碳分压（P_ETCO₂）指标B组和C组均低于A组（P<0.05）,C组均显著低于B组（P<0.01）;气道峰压指标C组均显著高于A组和B组（P<0.01）。A组和B组病人在T₁、T₂、T₃时间点的P_ETCO₂组内比较差异均无统计学意义（P>0.05）;C组病人在T₁、T₂、T₃时间点的P_ETCO₂差异均有统计学意义（P<0.01）,T₂、T₃时间点均显著低于T₁时间点（P<0.01）;3组病人在T₁、T₂、T₃时间点的气道峰压指标组内比较差异均有统计学意义（P<0.01）,A组和B 组T₃时间点均高于T₁、T₂时间点（P<0.01）,C组T₂、T₃时间点均显著高于T₁时间点（P<0.01）。白细胞介素-1β在T₂时间点3组差异均有统计学意义（P<0.01）,B组和C组均低于A组（P<0.05）;白细胞介素-6在T₂、T₃时间点3组差异均有统计学意义（P<0.01）,T₂、T₃时间点B组低于A组（P<0.05）,T₃时间点C组高于A组（P<0.05）;肺顺应性指标在T₁、T₂、T₃时间点3组差异均有统计学意义（P<0.01）,B组和C组均显著低于A组（P<0.01）,在T₂、T₃时间点C组均显著高于B组（P<0.01）。3组总体并发症发生情况的差异具有统计学意义（P<0.05）,且B组总体并发症发生率明显降低（P<0.05）。结论:术中选择8 mL/kg潮气量机械通气对老年肺癌病人术后血气指标、炎症因子影响小,不影响病人肺换气功能,且并发症发生率低,是较为合理的机械通气潮气量。     

Effect of sucrose and potassium nitrate on biomass and saponin content of Talinum paniculatum Gaertn. hairy root in balloon-type bubble bioreactor

Objective:To increase biomass and saponin production in hairy root culture of Talinum paniculatum Gaertn.(T.paniculatum)in balloon-type bubble bioreactor(BTBB).Methods:Hairy roots which were collected from leaf explants of T.paniculatum were infected by Agrobacterium rhizogenes strain LB510.The hairy roots were cultivated at400 m L Murashige and Skoog liquid medium without growth regulator(MS0)in1 000 m L BTBB.Each BTBB had 2 g hairy roots as initial inoculum and these cultures were treated with various concentrations of sucrose(3%,4%,5%,6%w/v)and potassium nitrate(0.5,1.0,1.5 and 2.0 strength of MS medium).Cultures were maintained for 14days.Fresh and dry weights of hairy roots at the end of culture were investigated.Results:Various concentrations of sucrose influenced the biomass accumulation of hairy roots.Maximum biomass was reached by MS medium supplemented with 6%sucrose and it was approximately threefold higher than control.Culture supplemented with potassium nitrate at 2.0 strength of MS0 could increase biomass accumulation of hairy roots until 0.14 g dry weight and it was almost threefold higher than control.However,the maximum saponin content was obtained by MS medium supplemented with 5%sucrose and 2.0 strength potassium nitrate of MS.Conclusions:Based on this research,those conditions can be used to produce biomass and saponin of hairy root of T.paniculatum in the large scale.     

中国红豆杉悬浮细胞培养动力学的研究

考察了中国红豆杉悬浮细胞培养中细胞生长的动态变化，培养基中主要营养成分的消耗，细胞的氧消耗速率，以及次级代谢产物紫杉醇的生产状况。实验结果表明，细胞比生长速率为０．１２９／ｄ，紫杉醇的积累与细胞生长呈部分相关在，培养静止期达到高峰。     

稀土微肥对铁皮石斛试管苗壮苗的影响

目的研究稀土微肥对铁皮石斛试管苗壮苗的影响。方法通过正交试验,以石斛小苗为外植体,培养在附加了3种不同稀土元素组合的1/2MS 20%的香蕉提取物的培养基上进行培养。结果3种稀土元素中的镧(La)对试管苗增质量、叶绿素b、总叶绿素和石斛多糖的量都有显著的影响;3种稀土元素都对试管苗的叶片数、根数、分蘖数以及叶绿素a的量影响不显著。结论为铁皮石斛试管苗的壮苗以及品质的提高提供了科学的依据。     

液体培养基快速分离结核杆菌的效果评价

目的　评估结核杆菌快速分离液体培养基的分离效果。　方法　采用传统的罗 -琴氏培养基与快速液体分离培养基平行对照分离临床标本 ,比较其分离阳性率 ,以评价其分离效率。　结果　液体培养基对 14 2份临床标本总的分离阳性率为 2 3 94% ( 3 4/14 2 ) ,对 12 5份痰标本的分离阳性率为 2 6 4% ( 3 3 /12 5 )。 3 8份标本用罗 -琴氏培养基和液体培养基进行平行接种 ,结果两者的分离阳性率分别为 10 5 3 % ( 4 /3 8)和 3 1 5 8% ( 12 /3 8) ,后者明显高于前者 (x2 =9 686,P<0 0 1) ;阳性结果出现时间 ,前者最早为 2 2d ,平均 2 5 5d ,后者最早 6d ,平均 12 67d ,两者差异有显著性意义 (t =1 90 3 1,P <0 0 5 )。　结论　应用结核杆菌快速液体分离培养基可以明显提高分离阳性率和缩短培养时间