富血小板纤维蛋白凝胶和膜显微与超微结构研究

目的观察富血小板纤维蛋白（PRF）的细胞组成和三维结构并讨PRF凝胶和膜的不同。方法 5名志愿者每人采肘静脉全血两份,随机放入A组（PRF凝胶）和B组（PRF膜）,分别进行光镜和扫描电镜（SEM）观察。结果 PRF凝胶中纤维蛋白聚集形成疏松的立体网络结构,有大量的血小板和白细胞分布并呈特定的三维分布,而PRF膜中纤维蛋白立体网络结构坚实致密,以致区分其中的细胞成分有一定的困难。结论 PRF凝胶和膜除了纤维蛋白浓密不同外均聚集了全血中大量的血小板和白细胞,因此,只要遵循主要的生产规则就可以得到一个自体纤维素生物材料。     

人眼基底部玻璃体视网膜界面超微结构的研究

目的通过对不同年龄人眼基底部玻璃体视网膜界面超微结构的研究, 探讨基底部玻璃体视网膜界面年龄相关性变化。方法采用胰蛋白酶消化法去除11只眼库眼球基底部视网膜的细胞成分,暴露视网膜内界膜（inner limiting lamina, ILL）,扫描电子显微镜（SEM）和透射电子显微镜（TEM）观测其超微结构。结果SEM和TEM均显示,基底部ILL表面的胶原纤维束随年龄增长逐渐向ILL侵入。胶原纤维开始以发辫形式散布在ILL表面,纤维发辫逐渐散开、相互重叠,穿透ILL与玻璃体皮质纤维交织结合在一起,最终形成致密的网状结构。结论随年龄增长来自视网膜内的胶原纤维逐渐穿透ILL与玻璃体皮质纤维缠绕结合,使基底部玻璃体视网膜界面粘连延伸。     

富血小板纤维蛋白在口腔医学中的应用进展

富血小板纤维蛋白（platelet rich fibrin,PRF）是通过自体全血离心获得的第二代血小板浓缩液,是由纤维蛋白构成的三维网状结构,富含多种生长因子,具有较高的再生潜力及抗炎抗感染能力。近年来,PRF在口腔医学中应用越来越广泛,在口腔软硬组织的再生、牙髓炎的治疗及神经损伤修复等领域具有较好的应用前景。本文对PRF在口腔医学中的应用进展进行综述。     

富血小板纤维蛋白在颌面部缺损修复中的应用

富血小板纤维蛋白（platelet-rich fibrin,PRF）是通过直接离心自体外周血液获得的蛋白凝胶.它富含血小板、白细胞、多种生长因子及细胞活素等,能促进干细胞的移动、增殖、分化,新血管生成及胶原蛋白合成.有研究表明,PRF作为最新一代的血液制品,对因发育不足、增龄性萎缩、创伤、肿瘤及其他原因导致的颌面软硬组织缺损的修复有明显的促进作用,现将富血小板纤维蛋白在颌面部缺损修复中的应用作一综述.     

羧基化聚酰胺——胺/无定形磷酸钙镁诱导胶原纤维再矿化的研究

目的：制备并表征羧基化聚酰胺—胺稳定的无定形磷酸钙镁纳米复合体（PAMAM-COOH/ACMP），并初步验证其诱导人牙本质胶原纤维再矿化的能力。方法：在水溶液中制备PAMAM-COOH/ACMP并分别使用傅里叶变换红外光谱（FTIR）、透射电子显微镜（TEM），选区电子衍射（SAED），能谱面扫描（EDX-Mapping）进行表征，依次获得化学结构、形貌、物相及元素分布信息。在仿生条件下，利用PAMAM-COOH/ACMP诱导完全脱矿的人牙本质胶原纤维模型再矿化，对牙本质进行FTIR、X射线衍射（XRD）及扫描电子显微镜（SEM）检测以评价再矿化效果。结果：FTIR检测结果提示，PAMAM-COOH/ACMP中存在磷酸根基团，碳氮键和酰胺键。TEM、EDX-Mapping及SEAD结果显示，PAMAM-COOH/ACMP为直径60～90 nm的近似圆形纳米非晶相颗粒，钙磷镁元素集中分布于颗粒中。SEM结果显示，牙本质表面未见大块沉积矿物，但高倍镜下可见5 mg/mL和10 mg/mL PAMAM-COOH/ACMP处理组的胶原纤维被连续矿物包裹并使纤维间隙减小。根据XRD与FTIR的检...     

Kartogenin促进肩袖损伤修复小鼠模型腱-骨愈合的作用及机制

目的构建纤维蛋白-Kartogenin（KGN）释放体系,探索其对肩袖损伤修复小鼠模型腱-骨愈合的作用及机制。方法使用纤维蛋白封闭剂负载KGN,使用高效液相色谱法测定体外释放效率。采用随机数字表法将小鼠分为KGN组和对照组,每组36只。构建肩袖损伤修复小鼠模型,每只小鼠均接受单侧冈上肌腱分离和经骨修复,对照组在腱-骨修复部位应用纤维蛋白空载体系,KGN组在腱-骨修复部位应用纤维蛋白-KGN释放体系。采用qRT-PCR检测两组小鼠肩关节中肌腱重塑和成熟相关分子腱调蛋白（TNMD）、血小板衍生生长因子-AA（PDGFAA）、软骨形成基因Y染色体性别决定区盒转录因子9（SOX9）、成骨基因SP7转录因子（SP7）mRNA表达水平;采用免疫组化染色法检测小鼠肩关节TNMD、PDGFAA、SOX9、SP7蛋白表达情况;采用HE染色及阿尔新蓝染色染色观察纤维软骨面积,采用天狼星红染色观察胶原纤维密度。结果纤维蛋白-KGN释放体系中的KGN可释放5d,释放量随时间递减,以前3天为主,占释放体系中KGN总量的34.29%。与对照组比较,KGN组小鼠肩关节中TNMD、PDGFAA、SOX9、SP7mRNA相对表达水平均上调（均P＜0.01）,相应蛋白的表达增加,纤维软骨面积减小,而胶原纤维密度增加。结论KGN可以促进肩袖损伤修复小鼠模型腱-骨愈合,可能是通过促进骨生成和肌腱的重塑与成熟实现的。     

富血小板纤维蛋白和羟基磷灰石复合物的制备方法及其性能评价

目的 探讨“三明治”法制备富血小板纤维蛋白（PRF）/羟基磷灰石（HA）复合物的工艺流程,并对其性能进行评价。 方法 采用700 r·min^－1×3 min和1 300 r·min^－1×14 min的离心参数,分别制备可注射型PRF（I-PRF）和改良型PRF（A-PRF）,并采用“三明治”法将其与HA复合。冷冻干燥PRF/HA复合物后,扫描电子显微镜（SEM）观察其微观结构;模拟体液（SBF）浸泡材料,在第2、4、8和16天分别观察HA表面类骨层的生长情况,评价其矿化能力;采用PRF/HA复合物浸提液和完全培养基与小鼠前成骨MC3T3-E1细胞共培养作为实验组和对照组,在共培养第1、3和5天,CCK-8法检测各组前成骨MC3T3-E1细胞增殖活性。在日本大耳白兔的颅骨矢状缝两侧对称建立2个直径为6 mm的全层骨缺损区域,一侧不植入任何材料作为对照组,另一侧植入PRF/HA复合物作为实验组;术后4和8周时X射线平片及锥形束CT（CBCT）扫描术区,根据成像结果评价2组白兔体内的成骨效果。 结果 成功制备出具有“三明治”结构的PRF/HA复合物,外侧为A-PRF,中间为包裹了HA颗粒的I-PRF。SEM观察,复合物横断面为明显的三层结构,外侧为致密纤维蛋白网,内部为有纤维蛋白丝附着的多孔HA颗粒。PRF/HA复合物在SBF中浸泡后,第2天时HA表面即形成矿化结节,随着浸泡时间的延长,类骨层逐渐建立,第16天时已形成片层状结构。细胞增殖实验,与对照组比较,第1、3和5天时实验组MC3T3-E1细胞的增殖活性明显升高（P<0.05）。影像学观察,实验组颅骨缺损4周时已有明显的边缘成骨,8周时新生骨已几乎完全充填骨缺损区域,而对照组颅骨缺损新骨形成范围较实验组明显减少。 结论 “三明治”法制备的PRF/HA复合物,具有良好的矿化能力和生物相容性,且能够促进骨组织再生。     

负载ZIF-8的GelMA水凝胶制备及其药物缓释性能和抑菌作用评价

目的：制备一种含沸石咪唑类骨架材料8 (ZIF-8)的复合光交联水凝胶,评价其体外细胞毒性、药物释放能力和抗菌性能。方法：采用水热法合成ZIF-8颗粒,扫描电子显微镜（SEM）观察ZIF-8颗粒微观形态表现。将ZIF-8颗粒以质量分数0.2%的比例与甲基丙烯酸酐化明胶（GelMA）混合获得复合水凝胶GelMA-Z。采用原子吸收光谱法检测各时间点GelMA-Z中锌离子（Zn2+）累计释放量。NIH-3T3细胞分为对照组、GelMA组和GelMA-Z组,将GelMA和GelMA-Z与NIH-3T3细胞共培养1、3和7 d,采用CCK-8法检测各组细胞存活率。大肠杆菌（E. coli）和金黄色葡萄球菌（S. aureus）分为对照组、GelMA组和GelMA-Z组,将GelMA和GelMA-Z分别与E. coli和S. aureus共培养6、12和24 h,采用酶标仪检测不同时间点各组细菌活性,采用平板抑菌实验和活/死细菌染色实验检测各组细菌菌落形成情况和活/死细菌染色情况。结果：SEM观察,采用水热法合成的ZIF-8颗粒具有均匀的粒径。原子吸收光谱法检测,GelMA-Z中Zn2+在1 d内...     

富血小板纤维蛋白对犬牙髓细胞的体外作用

目的：检测比格犬静脉血制取的富血小板纤维蛋白（platelet-rich fibrin,PRF）对自体牙髓细胞（canine dental pulp cells,cDPCs）增殖和趋化的作用,探讨PRF作为自体来源生物材料在临床活髓治疗中应用的可行性。方法：用酶消化法分离培养cDPCs;用Choukroun一步离心法制取PRF,将其浸泡于纯净的最小必需培养基α（minimum essential medium alpha medium,α-MEM）中,于第7天取浸出液,即为PRF浸出液。细胞增殖作用采用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）检测,对照组为含2%（体积分数）胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）的α-MEM培养基,实验组为含2% FBS的PRF浸出液,并按PRF浸出液浓度（体积分数）分为20%、40%、60%、80%、100%共5组,分别记为PRF1、PRF2、PRF3、PRF4、PRF5。趋化实验采用 Transwell模型,实验组PRF浸出液浓度选择对增殖促进作用最显著的浓度,阴性对照组为不含FBS的α-MEM培养基,阳性对照组为含30%（体积分数）FBS的α-MEM培养基,各组上室均接种1×10⁵个细胞。结果：PRF2组的光密度值(1.45±0.06)显著高于对照组（1.21±0.11）,差异具有统计学意义（P＜0.001）,PRF1组、PRF3组、PRF4组、PRF5组光密度值分别为1.20±0.02、1.28±0.04、1.19±0.02、1.22±0.02,与对照组差异无统计学意义（P值分别为0.902、0.084、0.726、0.779）,即40%浓度的PRF浸出液对自体cDPCs的增殖具有显著的促进作用,在该浓度下,PRF组细胞迁移数目为55.89±18.42,与阴性对照组（6.52±1.97）比较差异具有统计学意义（P＜0.001）,而与阳性对照组（59.25±29.17）差异无统计学意义（P=0.970）。结论： PRF与cDPCs有良好的生物相容性,40%浓度的PRF浸出液可促进cDPCs的增殖、趋化作用,提示PRF可作为活髓治疗中牙髓修复的盖髓材料使用。     

富血小板纤维蛋白(PRF)诱导骨髓间质干细胞分化成骨细胞的实验研究

目的研究富血小板纤维蛋白在诱导骨髓间质干细胞向成骨细胞转化的作用。方法取7天新西兰大白兔股骨,分离骨髓间质干细胞进行体外培养,在各自的培养条件下分为三组：实验组（不同剂量的PRF组）、空白对照组（MSCS组）和阳性对照组（BMP-2组）。三组细胞的比较采用MTT测定细胞增值率、PNPP法测定碱性磷酸酶的表达、免疫组化标记Ⅰ型胶原蛋白的表达、检测细胞为成骨细胞。结果细胞形态学观察,MSCS分化后,细胞形态从长梭形变成三角形,多角形,立方形;MTT测定细胞增殖显示,随着PRF膜剂量的增加,细胞增殖数量增加,PRF剂量为4,5mL时,与BMP-2组差别不大;ALP活性结果显示,MSCS分化后,ALP活性远高于MSCS细胞。两者差异具有显著统计学意义（t=24.608,p=0.000）;免疫组化标记Ⅰ型胶原结果显示,PRF组分化后的MSCSⅠ型胶原表达显著。结论富血小板纤维蛋白可以诱导骨髓间质干细胞分化为成骨细胞,分化的类成骨细胞具有成骨细胞的特性,可以作为自体材料应用于口腔种植学领域里骨缺的修复。     

内淋巴囊的光,电镜观察

本文利用20例足月引产胎儿的材料,对内淋巴囊的一般组织学结构和超微结构进行了观察。扫描电镜显示囊腔内面有两种类型细胞。透射电镜观察则显示内淋巴囊上皮有三种类型细胞:A型细胞具有较多的微绒毛,丰富的线粒体和内质网;B型细胞有广泛的细胞侧褶,少量的高尔基体、内质网、溶酶体等;C型细胞的最显著特征是胞质内充满大量的包含体、溶酶体和残余体等。内淋巴囊近侧部上皮下结缔组织疏松,血管丰富;远侧部上皮下结缔组织致密、血管稀少。     

检测Herceptin诱导乳腺癌细胞凋亡的多种显微技术比较

目的:比较多种显微技术在检测细胞凋亡中的应用.方法:以Herceptin诱导乳腺癌SKBR-3细胞凋亡,应用Gieamsa染色光镜,EB和Hoechst染色荧光显微镜,Annexin V/PI染色激光共聚焦显微镜以及扫描和透射电镜分别检测细胞凋亡的发生.结果:在Herceptin作用下,Hoechst染色荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、扫描和透射电镜分别观察到乳腺癌SKBR-3细胞出现不同方面的明显凋亡特征.结论:不同显微技术各有优缺点,要客观地证实凋亡的发生,应联合运用多种检测方法.     

多酚类化合物对白色念珠菌超微结构的影响

目的:电镜观察白色念珠菌与多酚类化合物作用后形态和超微结构的改变,进一步评价该类化合物的抗真菌作用,探讨其抗真菌作用机制.方法:将临床新分离的白色念珠菌与多酚类化合物共同培养24 h 后,分离菌体,按常规方法进行样品处理,在扫描电镜与透射电镜下观察其细胞表面形态结构变化与细胞内超微结构变化.结果:扫描电镜下观察可见酚类化合物作用后的白色念珠菌,细胞表面皱缩不平,细胞壁膜有严重皱折、变薄、剥脱等现象,并且质地变脆,有裂纹形成.透射电镜下可见,细胞壁不完整,局部有缺损,质地疏松,厚薄不均;细胞膜轮廓不清,不连续,有凸起;胞质不均匀,细胞内成分聚集固缩成电子密度较高的团块,且形成大量电子密度高的光亮区,间成有电子光点和空胞状物.结论:酚类化合物与白色念珠菌作用后,可使其超微结构发生明显的改变,此改变表明了其抗真菌作用,并为其抗真菌作用机制的研究提供了线索.     

大鼠骨骼肌肌动蛋白在死亡后的形态学变化

目的探讨大鼠骨骼肌肌动蛋白纤维的形态学变化与死亡时间的相关性。方法分别采用激光扫描共聚焦显微镜和透射电镜对大鼠死后不同时间骨骼肌(右后肢的内收大肌)肌动蛋白纤维的形态学变化进行观察。结果大鼠死后,透射电镜观察可见由肌动蛋白构成的细肌丝逐渐崩解、紊乱,直至肌小节和细肌丝结构消失;激光扫描共聚焦显微镜观察可见,自死后24h起,骨骼肌纤维横纹可有小片状或弥漫状抗肌动蛋白抗体缺染灶出现,并且抗肌动蛋白抗体染色面积随着死亡时间的延长而逐渐减少,其变化趋势与死亡时间相关(Y=0.934-0.005X,R2=0.95,P<0.05);大鼠死后168h内,肌动蛋白阳性产物的积分光密度值随死亡时间的延长而逐渐降低,组间差异均具有统计学意义(P<0.05),至死后168h,几乎无抗肌动蛋白抗体染色。结论大鼠骨骼肌肌动蛋白纤维的形态学改变与死亡时间具有相关性。     

心理应激对大鼠颞下颌关节盘和翼外肌微结构的影响

目的 观察心理应激及实施对抗措施对大鼠颞下颌关节(temporomandibular joint,TMJ)盘及翼外肌的影响,为临床防治颞下颌关节病(temporomandibular disorders,TMD)提供实验理论依据.方法 采用交流箱心理应激大鼠动物模型,并在应激前后分别应用抗焦虑药物,去除应激源等措施.运用透射电镜、扫描电镜分别观察施加对抗措施前后空白对照组、心理应激组(PS组)、心理应激加注射抗焦虑药物地西泮组(PS +DI组)大鼠翼外肌和TMJ盘的微结构.结果 透射电镜显示PS组1,3,5周时大鼠翼外肌出现程度不同的肌纤维线粒体水肿、基质密度降低、线粒体嵴减少;去除应激源恢复各组、PS+DI组1,3,5周肌纤维线粒体嵴和基质密度正常.扫描电镜显示PS组1周时大鼠关节盘表面部分滑膜脱落,3周时大鼠关节盘表面胶原纤维出现大小不等的条状磨损样变,5周关节盘表面胶原纤维错乱;去除应激源恢复各组、PS+ DI组1,3,5周关节盘无明显微结构改变.结论 施加对抗措施能有效对抗心理应激对TMJ的影响,可为临床治疗应激引起的TMD提供借鉴.     

人及哺乳动物甲状腺滤胞上皮超微结构的研究

用透射电子显微镜、扫描电子显微镜,冷冻蚀刻等方法,研究了人及哺乳动物甲状腺上皮的超微结构。人材料四例,大鼠、小鼠,家兔材料各10只,观察结果如下:上皮多为立方形、细胞间有圆孔并有细胞连接。扫描电镜结果,外表面有圆形小孔、内表面有微绒毛,中心鞭毛。冷冻蚀刻观察,可见核表面有大量核孔,细胞质中粗面内质网、线粒体、高尔基复合体、溶酶体。细胞间可见紧密连接,缝隙连接。     

磷霉素在减轻卡那霉素耳毒中的作用

为研究磷霉素减轻卡那霉素耳毒的作用机理,我们选用了50只健康豚鼠分两组进行实验,对照组用卡那霉素400mg·kg~(-1)/d 肌注,连续7天;实验组肌注卡那霉素,用量同对照组,连续7天,第四天起肌注磷霉素300mg.kg~(-1)/d,连续7天。两组豚鼠均行 ABR,再用扫描电镜、透射电镜及组织化学反应来检查耳蜗结构.ABR 示自第11天起对照组Ⅳ波消失,而实验组Ⅳ波除1例外均存在,且波形清晰。电镜检查及组织化学反应检查均显示实验组耳蜗外毛细胞损伤明显比对照组耳蜗外毛细胞损伤轻。结果表明,磷霉素可以减轻卡那霉素的耳毒性。     

五例孢子丝菌病组织病理及病原体的光镜电镜对比观察

本文选择5例孢子丝菌病多菌标本进行光镜、扫描电镜和透射电镜的对比观察。组织液直接涂片光镜及扫描电镜下均发现孢子。病理组织HE及PAS染色光镜下,在真皮內主要见到三区病变、小脓肿及孢子,1例见到星状孢子。在扫描电镜下真皮组织间隙见到散在或聚集的孢子。透射电镜下真皮细胞间及细胞内发现圆形及椭圆形孢子,并发现一个生芽孢子,它正处于被一个中性粒细胞包围将被吞噬状态,其结构清楚,为一较难遇到的图象。观察例均经真菌培养证实为申克氏孢子丝菌。     

脑膜瘤临床病理分析

[目的] 探讨脑膜瘤临床病理特征和预后特点。[方法] 采用光镜、电镜和免疫组化方法。[结果] 脑膜瘤55例；复发7例，脑膜内皮型12例，过渡型13例，纤维型14例，砂粒体型7例，血管瘤型3例，微囊型4例，分泌型2例：Vim，EMA，ER，PR，NSE均不同程度表达，GFAP及C-erbB-2均阴性。[结论] 发现内皮型脑膜瘤可能增殖、分化能力较强，可能容易复发，预后较不良。