Alu-LTR PCR检测整合型HIV-1实验方法的优化

目的对Alu-LTRPCR检测整合型HIV-1的实验方法进行优化。方法收集20例HIV-1感染患者及10例健康对照者的抗凝血标本,纯化CD4+T细胞并提取DNA,根据整合型HIV-1DNA的特点设计引物,首轮PCR5′端引物来自于人类保守的Alu序列,3′端引物来自于HIV-1LTRU5区序列,扩增片段包含了整合位点上游的人类基因组DNA序列和整合的HIV-1LTR的序列。第二轮引物针对HIV-1LTRU3区的序列。在首轮PCR基础上,PCR产物稀释后进行第二轮PCR。结果经过优化的Alu-LTRPCR,20例HIV病人全部检测到整合的HIV-1。结论经优化后,Alu-LTRPCR检测整合型HIV-1的实验方法的灵敏度明显提高。     

扩增潜伏HIV-1 DNA序列实验方法的优化

目的对PCR扩增潜伏HIV-1DNA序列的实验方法进行优化。方法收集30例经高效抗逆转录病毒治疗（HAART）6~12个月的HIV-1感染者抗凝血标本,分别从外周血单个核细胞（PBMC）和高度纯化的CD4＋T细胞提取基因组DNA,巢式PCR扩增HIV-1env的C2-V5区,电泳检测扩增产物并进行DNA序列测定。结果同一患者PBMC纯化CD4＋T细胞标本扩增HIV-1env基因C2-V5区的效率（93.3%）明显高于直接从PBMC标本扩增该目的片段的效率（10.0%）。结论 PBMC纯化CD4＋T细胞后,再提取基因组DNA进行巢式PCR扩增,可提高扩增潜伏HIV-1DNA序列的效率。     

外周血HIV-1 DNA在艾滋病疗效评估中的应用

目的 通过研究HIV感染者HIV-1 DNA与HIV-1 RNA及CD4+T淋巴细胞间的关系,探讨外周血HIV-1DNA在艾滋病疗效评估中的应用。方法 筛选2018年6—9月贵州省贵阳市公共卫生救治中心的HIV感染者80例,采用面对面问卷调查收集患者资料,并采集患者K2EDTA抗凝血,完成CD4+T淋巴细胞、HIV-1 RNA及HIV-1 DNA的检测并得出结果。通过SPSS等软件分析HIV感染者的病毒库水平,以及HIV-1 DNA与HIV临床分期、CD4+T淋巴细计数及HIV-1 RNA的相关性。结果 HIV感染者CD4+T淋巴细胞数量越多,HIV-1 RNA含量越低,其全血中HIV-1 DNA的水平越低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 HIV-1 DNA可反映抗逆转录病毒治疗(HAART)期间病毒库水平,提示疾病进展情况,评价治疗效果,可为贵州省艾滋病的治疗提供更精准的监测手段。     

HIV/AIDS与肺结核病人CD4+、CD8+的比较

目的 检测HIV/AIDS与肺结核病人的CD4+、CD8+细胞的变化.方法 流式细胞计数仪检测CD4+、CD8+T淋巴细胞,用双侧t检验进行统计.结果 HIV/AIDS与肺结核患者存在以CD4T淋巴细胞下降为突出表现的细胞免疫受损,HIV/AIDS的CD4+细胞降低明显高于肺结核病人,HⅣ/AIDS的CD8+细胞升高明显高于肺结核病人.结论 HIV/AIDS与肺结核病人都存在着不同程度的CD4+T淋巴细胞异常,CD4+T细胞是HⅣ/AIDS重要指标;CD4+T细胞时肺结核病人是用来估计机体的免疫状态或是一个指标,但不是一个绝对指标.CD4+T细胞和CD8+T细胞与肺结核病的类型及病情的变化、预后的关系需要进一步研究.     

中医药配合HAART对HIV/AIDS患者CD4+T细胞及病毒载量影响的研究

目的:观察中医药配合HAART对HIV/AIDS患者CD4+T细胞及病毒载量的影响。方法:将180例HIV/AIDS患者随机分成2组,治疗组予以芩花解毒胶囊,艾可清颗粒以及HAART治疗,对照组予以HAART治疗,分别于治疗前后检测患者CD4+T细胞、病毒载量变化以及安全性指标。结果:治疗前后CD4+T细胞绝对计数治疗组与对照组比较均能显著提高(P0.05),治疗组与对照组CD4+T细胞计数与CD4+T细胞上升幅度无显著性差异(P0.05)。安全性方面治疗组并未出现血常规、肝功能以及肾功能,相反,血常规和肝肾功能方面有改善的趋势。结论:艾可清颗粒与芩花解毒胶囊没有影响HAART的免疫学疗效,同时可以改善HIV/AIDS患者血常规、肝肾功能方面的问题以及尿黄、盗汗和便秘等症状。     

HAART治疗与心理干预对HIV感染者外周血CD4~+T细胞凋亡的影响

目的观察高效抗逆转录病毒疗法(HAART)与心理干预对HIV感染者外周血CD4+T细胞内Ca2+浓度、细胞凋亡率、细胞线粒体膜电位的改变,探讨其对HIV感染者外周血CD4+T细胞凋亡的影响。方法应用免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞,流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度,线粒体膜电位,细胞凋亡率。结果 HAART治疗心理干预对HIV感染者外周血CD4+T细胞凋亡百分率明显低于对照组,降低细胞内Ca2+浓度,提高线粒体膜电位,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 HAART治疗可抑制HIV感染者外周血CD4+T细胞凋亡的发生,可能与其稳定线粒体膜电位,抑制细胞内钙超载作用相关。     

HIV(+)与肺结核病人CD4~+、CD8~+变化比较分析

目的比较HIV(+)患者与肺结核病人的CD4+、CD8+细胞的变化。方法采用流式细胞计数仪检测CD4+、CD8+T淋巴细胞。结果HIV/AIDS与肺结核患者存在以CD4+T淋巴细胞下降为突出表现的细胞免疫受损,HIV/AIDS患者的CD4+细胞降低明显高于肺结核病人(P均<0.01),HIV/AIDS患者的CD8+细胞升高明显高于肺结核病人(P<0.01或0.05)。结论HIV/AIDS患者与肺结核病人都存在着不同程度的CD4+T淋巴细胞异常,CD4+T细胞是HIV/AIDS重要指标;CD4+T细胞对肺结核病人是用来估计机体的免疫状态或是一个指标,但不是一个绝对指标。     

HAART治疗与心理干预对HIV感染者外周血CD4+T细胞凋亡的影响

目的 观察高效抗逆转录病毒疗法(HAART)与心理干预对HIV感染者外周血CD4+T细胞内Ca2+浓度、细胞凋亡率、细胞线粒体膜电位的改变,探讨其对HIV感染者外周血CD4+T细胞凋亡的影响.方法 应用免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞,流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度,线粒体膜电位,细胞凋亡率.结果 HAART治疗心理...     

80例HIV/AIDS患者HAART治疗前后脉象变化特点

目的:通过脉象仪采集数据分析HIV/AIDS患者HAART治疗前后脉象特点及与脉象与CD4+T淋巴细胞的相关性。为艾滋病的中医辨证治疗、疗效判定提供客观依据。方法:使用ZM-Ⅲ型智能脉象仪对80例CD4+T淋巴细胞计数≤300cell/ul的HIV/AIDS患者,分别于HAART治疗前和接受HAART治疗52周时进行脉象测定。统计分析采用SPSS11.0软件进行秩和检验,对HAART治疗前CD4+T淋巴细胞计数不同分段的患者的脉象进行比较分析,再对80例患者HAART治疗前后的脉象情况进行比较。结果:①未经HAART治疗的患者CD4+T淋巴细胞计数较低的患者脉无力、脉位沉、脉势低平虚、脉型异常的患者有多于CD4+T淋巴细胞计数较高患者的趋势。②80例HIV/AIDS患者的脉象治疗后较治疗前有改善。结论:①CD4+T淋巴细胞计数较低的患者根据脉象采集辨证为正虚邪实较多。②HIV/AIDS患者脉象特点与CD4+T淋巴细胞计数高低存在一定的联系,但CD4+T淋巴细胞计数高的患者仍有脉象异常的情况存在。③脉象仪在中医临床客观化研究中能够发挥一定作用。     

建立反向PCR检测HIV-1整合位点的方法

高效抗反转录病毒治疗（highly active antiretroviral therapy,HAART）可降低艾滋病的发病率和死亡率,使感染者血浆中HIV-1RNA降至常规方法检测不到的水平,但用敏感度高的方法仍可检测到病毒基因和低水平的病毒复制,这是因为存在HIV-1潜伏库,含有整合HIV DNA的静止性CD4^＋T细胞是最主要的HIV-1潜伏库。     

HIV感染者调节性T细胞消耗可导致HIV特异CD8~+细胞凋亡

目的了解在HIV感染患者CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞(Treg)的降低是否能够引起HIV特异CD8+细胞过度凋亡。方法本研究对75例没有治疗的HIV患者进行研究,检测其外周血中Treg细胞计数及CD8+细胞的活化及凋亡情况并分析其相关性;同时纯化Treg细胞及CD8+细胞,在体外进行共培养,用五聚体检测HIV特异CD8+细胞的活化情况。结果在HIV感染患者,Treg细胞与CD8+细胞的活化及凋亡呈负相关,Treg细胞能够抑制HIV特异的CD8+细胞的凋亡。结论 HIV感染患者Treg细胞的降低可导致CD8+细胞、尤其HIV特异CD8+细胞的凋亡增加。     

调节性CD4~+T细胞及非调节性CD4~+T细胞与HIV/AIDS患者疾病进展关系的研究

目的分析比较中国HIV感染者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(CD4+regulatory T cells,Treg)及非Treg细胞与疾病进展的关系,探讨Treg细胞在HIV感染过程中的作用。方法选取76例HIV/AIDS患者,根据其CD4+T细胞计数水平不同分为3组,A组CD4<200个/μL,B组CD4200～400个/μL,C组CD4>400个/μL。采用流式细胞仪胞内染色技术检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的水平,并分析其与CD4计数及病毒载量的相关性。结果随着疾病的进展,Treg细胞百分比逐渐升高,各组间差异有统计学意义;Treg细胞及非Treg细胞的绝对计数均明显下降,且以非Treg细胞下降为主;Treg绝对计数与病毒载量呈负相关(P<0.05)。结论中国HIV感染者随着疾病进展,辅助性T细胞等非Treg细胞的数量下降,对机体免疫保护能力降低,而Treg细胞数量及功能的下降使其对机体的过度免疫活化的抑制作用减弱,病毒复制,加剧病情进展。     

TPRC3通道对MPP~+所致MN9D细胞损伤的保护作用

目的探讨经典瞬间受体电位通道蛋白(transient receptor potential-canonical channel,TRPC)家族在1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-Methyl-4-phenylpy ridinium ion,MPP+)导致的MN9D细胞毒性损伤中的作用。方法用不同浓度(62.5、125、250、500、1000μmol/L)的MPP+处理MN9D细胞24h,500μmol/L MPP+处理MN9D细胞不同时间(3、6、12、24、36h),建立细胞损伤模型。用RT-PCR的方法检测MN9D细胞中内源性TRPC的表达情况;500μmol/L MPP+作用于MN9D细胞,以Western blot法检测MN9D细胞内源性TRPC表达的变化;构建GFP与TRPC3-GFP腺病毒载体,转染到MN9D细胞中,以四甲基偶氮唑盐比色法(methods the tetrazolium,MTT)的方法检测过表达的TRPC3对MPP+引起的MN9D细胞损伤的保护作用。结果500μmol/LMPP+处理MN9D细胞6h就可以显著降低细胞内TRPC3蛋白水平的表达,但对TRPC6的表达无影响。过表达TRPC3能够保护MN9D细胞免受MPP+的毒性损伤。结论MPP+特异性地降低MN9D细胞TRPC3蛋白水平,过表达TRPC3可以抑制MPP+引起的MN9D细胞损伤。这种现象提示TRPC3通道可能参与了帕金森病发病的分子机制。     

早期梅毒对HIV感染者CD4~+ T细胞计数的影响

目的分析在男男性接触人群中早期梅毒对HIV感染者外周血CD4细胞计数的影响。方法在男男性接触人群中建立HIV感染者新发早期梅毒的研究队列,确诊梅毒后给予苄星青霉素治疗。应用流式细胞仪检测梅毒感染前、感染期间和成功驱梅治疗后3个月、6个月的外周血CD4细胞,运用重复测量方差分析,分别对比梅毒感染前与感染期间、感染期间与成功驱梅治疗后3个月、6个月CD4的变化。结果 HIV合并早期梅毒感染者共50例,其中有45例驱梅治疗成功。与梅毒感染前相比,感染期的CD4计数降低(P=0.04);驱梅治疗后3个月CD4计数较感染期升高,但差异无统计学意义(P>0.05);治疗后6个月CD4计数较感染期显著升高(P=0.02),差异有统计学意义。结论梅毒螺旋体的早期感染使HIV感染人群的CD4计数下降,而成功的驱梅治疗可以逆转这一趋势。     

HAART早期AIDS患者CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的变化及其与免疫活化关系的研究

目的了解高效抗反转录病毒联合疗法(highly active antiretroviral the rapy,HAART)早期AIDS患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(regulatory Tcell,Treg)的变化规律,探讨抗病毒治疗过程中Treg细胞的作用。方法前瞻性分析21例接受HAART规律治疗的AIDS患者,收集患者服药前及服药第2、4、8、12周时的静脉血,采用流式细胞仪胞内染色技术检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的水平,分析Treg细胞在治疗过程中的变化规律,以及Treg细胞的变化与免疫活化间的相关性。结果 HAART治疗开始,Treg细胞计数呈逐渐上升的趋势,前4周呈现快速上升,而后上升速度减慢,Treg百分比变化也有相似的规律;CD8+CD38+表达水平随治疗时间延长而下降,未治疗时Treg细胞计数与免疫活化水平呈负相关,治疗后Treg细胞计数4周内的变化与12周CD8+CD38+水平呈负相关,即治疗开始后,前4周内Treg细胞增加越明显,治疗3个月时免疫活化水平下降越明显。结论抗病毒治疗过程中,活化CD8+淋巴细胞比例的下降与外周血中Treg细胞数的增加相关。Treg细胞数量恢复越早,活化CD8+淋巴细胞比例下降越明显。     

阿尔茨海默病大鼠模型PET在体成像研究

目的研究18F-FDG及Aβ蛋白显像剂(4’-schiff-O[11CH3])PET成像技术在判别阿尔茨海默病大鼠模型中的作用。方法对10只注射Aβ1～40复制阿尔茨海默模型大鼠及10只注射生理盐水对照大鼠行HE染色及刚果红染色,检测大鼠脑内病理学改变。用18F-FDG及4’-schiff-O[11CH3]PET显像技术在体观察2组大鼠脑内Aβ蛋白分布及葡萄糖代谢情况。结果模型组大鼠海马出现神经元减少并形成淀粉样斑块。模型组PET显像可见注射侧海马葡萄糖代谢减低及4’-schiff-O[11CH3]摄取增加。对照组仅见轻微神经元损伤,PET显示葡萄糖代谢轻度减低。结论18F-FDG及4’-schiff-O[11CH3]PET显像结合行为学及病理学观察可作为检测模型成功与否的方法之一。     

Study of T Cell subsets and IL-7 protein expression in HIV-1-infected patients after 7 years HAART

Objective

To study the changes in T cell subsets and IL-7 in HIV-1-infected patients after seven years of highly active antiretroviral therapy (HAART).

Methods

Seventy-five individuals were included in this study (25 with effective HAART, 18 with ineffective HAART, 17 untreated HIV+ patients, and 15 volunteers in the HIV negative control group). The counts of CD4⁺, CD8⁺, CD8/CD38⁺, and CD8/HLADR⁺ T cells as well as the IL-7 protein expression was measured at 5 time points during a period of seven years in patients starting HAART (baseline) and in the HIV negative control group. The expression of CD127 on CD3⁺ T cells was measured by flow cytometry at a single time point (after 7 years) in patients with HAART and was compared with untreated HIV+ patients and the HIV negative control group.

Results

At baseline CD4⁺ T cell counts of HIV-1-infected patients were lower than that in the control group (p < 0.01), whereas the CD8⁺, CD8/HLADR⁺ and CD8/CD38⁺ T cell counts were higher than those in the control group (p < 0.01). After seven years of effective HAART, the CD4⁺ T cell counts had increased and the CD8⁺ T cell count had decreased, although not to the normal levels (p < 0.05). Both the CD8/HLADR⁺ and CD8/CD38⁺ T cell counts had gradually approached those of the control group (p > 0.05). In the ineffective HAART group, the CD8/CD38⁺ T cell count had not decreased significantly, and CD8/HLADR⁺ T cell count gradually decreased. Before treatment, IL-7 serum levels of patients were significantly higher than that in the control group (p < 0.01). After seven years of effective HAART, IL-7 levels had gradually decreased, but were still higher than in the control group (p < 0.01). The CD127 expression on CD3⁺ CD8⁺ T cells in effective HAART patients was higher than in untreated HIV+ patients (p < 0.05), but was lower than that in the control group (p < 0.05). CD127 expression on CD3⁺ CD4+ T cells was not significantly different among the control group, untreated HIV+ patients and effective HAART group.

Conclusion

After seven years of effective HAART, the quantity and capacity of T cell subsets and IL-7 in HIV-1-infected patients had been partially restored, and the abnormal immune activation has significantly diminished.

     

肌苷衍生物的碱基核糖化研究

目的研究N1-核糖肌苷衍生物的合成反应。方法用丙叉保护肌苷2′,3′-OH,单甲氧基三苯甲基保护5′-OH,在碳酸钾、18-冠醚-6作用下与2,3,5-O-三苄基-1-溴代核糖反应。结果反应得到N1-核糖肌苷衍生物。结论用酰基做保护基易发生酰基重排反应,改用丙叉保护肌苷2′,3′-OH,再用单甲氧基三苯甲基保护5′-OH与2,3,5-O-三苄基-1-溴代核糖在碳酸钾18-冠醚-6作用下得到目的物N1-(2,3,5-O-三苄基-D-核糖)-2′,3′-O-异亚丙基-5′-O-单甲氧基三苯甲基肌苷。     

槲芪散及槲寄生提取物对肝癌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的探讨方剂槲芪散及其君药槲寄生提取物多糖、总碱对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及其对细胞内游离钙离子浓度的影响。方法采用MTT法测定槲芪散对细胞增生的抑制作用;利用流式细胞仪分析细胞周期、凋亡;利用激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度。结果槲芪散及槲寄生提取物有较好的抑制肿瘤细胞增生的作用,高剂量组除了槲芪散和槲寄生总碱48 h时间点外,OA值均较对照组明显降低(P<0.001),呈现出时间-剂量依赖性;经药物作用48 h后,槲寄生多糖及总碱组G1期细胞比例增加,S期细胞和G2期细胞比例降低,槲芪散组G1期细胞比例无明显变化,S期比例降低,G2期比例增加,3者均使细胞凋亡增加;加入不同浓度的槲芪散、槲寄生多糖及总碱,低浓度时荧光增强不明显,而高浓度均导致细胞内荧光强度瞬间增强,升高到一定水平后,基本维持在一高水平,除槲寄生总碱组有略微下降外,其余2组未见明显下降趋势。结论槲芪散、槲寄生多糖及总碱均能抑制肿瘤细胞增生,促进细胞凋亡,且这3种药物引起胞内钙超载可能是诱导HepG2凋亡的机制之一。