通心络对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

①目的 探讨通心络对梗阻性肾病大鼠肾小管间质纤维化的防治作用.②方法 采用单侧输尿管梗阻（UUO）诱导肾间质纤维化的动物模型,以血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ARB）作为阳性对照.将大鼠随机分为：模型组（UUO）、通心络组、缬沙坦（ARB）组,于术后第14天处死大鼠,收集血清测定肌酐、尿素氮水平;肾组织用HE染色及免疫组化半定量检测各组肾间质的α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达.③结果 通心络组、ARB组的肾小管问质TGF-β1、α-SMA的表达均明显低于UUO组;两个治疗组间比较,通心络对TGF-β1、α-SMA表达的抑制作用同于ARB组.④结论 中药通心络可减轻肾间质纤维化.     

FTY720对大鼠肾间质纤维化的抑制作用

目的 研究FTY720对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的防治作用及机制.方法 将45只SD大鼠随机分成假手术组(SHAM),单侧输尿管梗阻组(UUO)和FTY720治疗组(UUO FTY720).治疗组于术前3 d给予FTY720 0.5 mg/(kg·d)灌胃,UUO模型组和SHAM组给予等量生理盐水.3组分别于术后7、14、21 d各处死5只大鼠,并收集血清和24 h尿液,观察肾功能和24 h尿蛋白变化.取梗阻侧肾做组织学检查,观察肾间质纤维化程度.用免疫组化方法检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)、CD3、ED-1的表达水平.结果 术后14 d时治疗组24 h尿蛋白较模型组明显降低(P＜0.05).术后7、14、21 d治疗组血肌酐水平与模型组相比较均明显降低(P＜0.05),治疗组与SHAM组比较差异无显著性意义.治疗组术后7、14 d血尿素氮较模型组均有一定程度下降(P＜0.05).病理检查显示,治疗组纤维化程度较模型组明显减轻.免疫组化结果显示,α-SMA表达,SHAM组仅限于血管,治疗组和模型组表达明显增多,但治疗组表达要弱于模型组(P＜0.05).SHAM组肾间质有少量Ⅲ型胶原表达,模型组表达逐渐增强,治疗组较模型组表达明显减少(P＜0.05).SHAM组肾间质各时间点均未见炎性细胞浸润,与模型组相比,治疗组肾问质CD3、ED-1阳性细胞数降低(P＜0.01).结论 新型免疫调节剂FTY720可以明显减少UUO大鼠肾间质T淋巴细胞和巨噬细胞浸润,在一定程度上可以抑制肾小管上皮细胞转分化和细胞外基质积聚,从而减轻UUO后大鼠肾问质纤维化的程度,保护肾功能.     

单侧输尿管结扎再通大鼠模型的建立方法及其评价

目的比较单侧输尿管结扎(UUO)与单侧输尿管结扎再通(RUUO)建立的SD大鼠肾纤维化模型的优劣,从而得到更符合临床慢性肾衰进展特点的动物模型,以供临床药物筛选、疗效评介、科研、教学使用。方法健康SPF级雄性SD大鼠54只,随机分成假手术组、UUO组及UUO再通组各18只,造模成功后检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG),病理检查肾小管间质纤维化指数和免疫组化检查α-肌动蛋白(α-SMA)。结果无论从肾功能方面,还是病理检查方面,UUO再通的大鼠肾纤维化动物模型均优于UUO大鼠模型。结论再通UUO肾纤维化大鼠模型在功能及病理方面及其相关的免疫组化方面优于UUO组,其病理特点更符合慢性肾小管间质纤维化进程的动物模型。     

慢性肾病大鼠血清Bcl-3、Gal-3、TGF-β1与肾间质纤维化的关系

探讨腺嘌呤诱导的慢性肾病大鼠血清Bcl-3、Gal-3、TGF-β1与肾间质纤维化的关系。方法 将20只SPF级雄性大鼠随机分为对照组（n=10）和模型组（CKD组,n=10）,模型组给予腺嘌呤灌胃,对照组给予等体积生理盐水灌胃,分别于第3、6周处死大鼠,留取血检测尿素氮、肌酐及Bcl-3、Gal-3、TGF-β1水平,HE染色观察肾脏病理改变,Masson染色观察肾间质纤维化情况及严重程度,免疫组化染色观察肾组织中α-SMA蛋白的表达情况。结果 与对照组相比,CKD组各时间点的血尿素氮、肌酐、Bcl-3、Gal-3和TGF-β1水平均明显升高(P＜0.05)。CKD组大鼠肾组织HE染色可见肾小管上皮细胞变性坏死、肾间质纤维化等病理改变;Masson染色可见蓝色胶原沉积明显增多,同时α-SMA蛋白表达也明显升高(P＜0.05)。CKD组肾间质胶原纤维相对面积评分明显高于对照组(P＜0.05)。相关性分析显示血Bcl-3、Gal-3、TGF-β1水平与肾间质纤维化相对面积呈正相关（rs=0.776,P＜0.001; rs=0.58,P＜0.001; rs=0.52,P=0.001）。结论 腺嘌呤诱导的CKD模型大鼠血清Bcl-3、Gal-3和TGF-β1水平明显升高,且与肾纤维化严重程度密切相关,有望成为评估肾纤维化的新型生物标志物     

下调miR-192对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的干预作用及机制

目的探讨下调miR-192对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾损伤后肾间质纤维化的干预作用及机制。方法将45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、antagomir-192组。除假手术组外,其他两组大鼠均通过左侧输尿管结扎建立肾间质纤维化大鼠模型。术后第1、7、14天antagomir-192组大鼠给予antagomir-192尾静脉注射,而假手术组和模型组大鼠给予等量生理盐水尾静脉注射。第21天后处死大鼠,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测梗阻侧肾组织miR-192的表达变化,心脏取血测定大鼠血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)含量,HE染色观察梗阻侧肾组织形态学病理改变,Masson染色计算梗阻侧肾间质胶原纤维沉积率,Western blotting检测梗阻侧肾组织上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)及I型胶原蛋白(collagen I)的表达变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾组织miR-192表达水平、血清中BUN、Cr含量、肾间质损伤评分、肾间质胶原纤维沉积率均显著升高(P0.01),肾组织E-cadherin蛋白表达明显降低(P0.01),α-SMA、vimentin及collagen I蛋白的表达均明显升高(P0.01)。与模型组比较,antagomir-192组大鼠肾组织miR-192的表达水平、血清中BUN、Cr含量、肾间质损伤评分、肾间质胶原纤维沉积率均显著降低(P0.01),肾组织E-cadherin蛋白表达明显增高(P0.01),α-SMA、vimentin及collagen I蛋白表达均明显降低(P0.01)。结论 miR-192在肾间质纤维化大鼠肾组织中表达升高,下调miR-192能够抑制UUO大鼠肾间质纤维化从而起到保护作用。     

地灵丹汤对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化的防治作用

目的：研究中药复方地灵丹汤对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）致肾间质纤维化模型大鼠肾间质纤维化的防治作用及其可能机制。 方法：将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组及地灵丹组。采用UUO法建立肾间质纤维化大鼠模型，观察血尿素氮、血清肌酐和24h尿蛋白定量及肾组织病理改变，并采用免疫组织化学法检测转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、纤维连接蛋白（fibronectin，FN）及层黏连蛋白（laminin，LN）的表达。 结果：第7天模型组肾间质大量炎症细胞浸润及胶原表达，TGF-β1、FN和LN表达面积百分率较假手术组明显增加（P＜0．05）；地灵丹组间质纤维化面积较模型组减少（P＜0．05）。第14天地灵丹组和依那普利组肾间质TGF-β1、α-SMA、FN和LN表达面积百分率较模型组减少（P＜0．05），BUN、SCr和24h尿蛋白无明显差异。第21天地灵丹组SCr、肾间质纤维化和TGF-β1表达面积百分率较依那普利组和模型组下降（P＜0．05）。 结论：地灵丹能减轻单侧输尿管梗阻模型大鼠的蛋白尿和肾间质纤维化，抑制TGF-β1、α-SMA、FN和LN的表达。在较长时间应用后，地灵丹对模型大鼠的肾功能保护作用优于依那普利。     

冬虫夏草对梗阻性肾病大鼠肾间质表皮生长因子及转化生长因子-β1表达的影响

目的探讨冬虫夏草对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用及可能机制。方法将大鼠分成3组:假手术组(SOR组)、单侧输尿管梗阻手术组(UUO组)和冬虫夏草治疗组(CST组)。无菌条件下UUO组及CST组均进行左侧输尿管结扎手术,而SOR组仅分离左侧输尿管但不结扎及剪断输尿管。于手术当天开始CST组予冬虫夏草菌粉,SOR组及UUO组予蒸馏水,均每天一次性灌胃。于术后第7、14、21、28天分别检测血尿素氮、血肌酐;梗阻肾组织行HE染色,ELISA测定表皮生长因子-β1(EGF)及Western blot检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果 3组大鼠的血尿素氮、血肌酐值于各时间点的差异无统计学意义(P>0.05);CST组HE染色见肾间质纤维化程度较UUO组减轻;CST组肾组织TGF-β1的表达明显低于UUO组(P<0.05),EGF的表达明显高于UUO组(P<0.05)。结论冬虫夏草可能通过调节TGF-β1及EGF的表达而减轻输尿管梗阻引起的肾间质纤维化。     

氧化苦参碱对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化的作用及机制研究

目的 观察氧化苦参碱对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型转化生长因子-β1(TCF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平的影响.探讨氧化苦参碱对大鼠肾间质纤维化的干预作用.并阐明其可能的机制.方法 将48只雄性SD大鼠随机分为假手术(SOR)组、UUO组、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂氯沙坦组(LOS组)和氧化苦参碱组(OM组).检测血肌酐,肾组织行苏木精-伊红和Masson染色,免疫组化检测TGF-β1、α-SMA在肾组织中的表达,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测肾组织中TGF-β1和α-SMA的mRNA水平.结果 LOS组和OM组大鼠的血肌酐与UUO组相比差异有统计学意义(P<0.05).但LOS组和OM组间无统计学意义(P>0.05);OM组和LOS组中各时间点TGF-β1、α-SMA的表达均分别低于UUO组(P<0.05),但高于SOR组(P<0.05).两治疗组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 氧化苦参碱可从一定程度上减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度.其作用机制可能为下调TGF-β1和α-SMA表达,从而减少细胞外基质的沉积,延缓肾间质纤维化.     

氯沙坦及霉酚酸酯对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护作用

目的:观察氯沙坦及霉酚酸酯对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏转化生长因子(TGF)β1、Ⅲ型胶原、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达介导的肾间质纤维化的作用. 方法:雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组(Sham、UUO组、氯沙坦组(LSRT、霉酚酸酯组(MMF和联合用药组(L M).制备UUO大鼠模型后,LSRT组给予氯沙坦(50 mg·kg-1·d-1)灌胃、MMF组给予霉酚酸酯(25 mg·kg-1·d-1灌胃、L M组给予氯沙坦霉和霉酚酸酯(剂量同前)灌胃,用免疫组织化学方法检测术后14 d肾组织α-SMA、TGF-β1、Ⅲ型胶原表达量,并进行Masson染色评分.同时测定收缩压、尿蛋白及肌酐清除率. 结果:各组大鼠收缩压、尿蛋白及肌酐清除率均无差异(P＞0.05).与Sham组比较,UUO组及治疗组α-SMA 、TGF-β1、Ⅲ型胶原表达及Masson染色评分均增高,且UUO组高于各治疗组(P＜0.05),而联合治疗组低于单用药组(P＜0.05).结论:氯沙坦及霉酚酸酯可通过下调α-SMA、TGF-β1、Ⅲ型胶原表达减轻UUO术后肾组织间质纤维化,联合用药作用优于单独用药.     

丹参注射液对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护

目的 探讨丹参注射液对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的影响。方法 采用UUO致肾间质纤维化大鼠模型。24只雄性Wistar大鼠，随机分为假手术组、模型组和丹参组。术后第10d肾组织做HE、Masson染色及TGF—β1，α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化检测。结果 丹参组显著改善梗阻侧肾组织病理变化，下调转化生长因子-β1（TGF-β1）和α-SMA表达。结论 丹参注射液对梗阻性大鼠肾间质纤维化有保护作用。