梅毒的PCR诊断与梅毒螺旋体基因分型研究进展

梅毒是一种由梅毒螺旋体（苍白螺旋体,Treponema pallidum,TP）引起的性传播疾病,梅毒的广泛流行和传播已成为世界各国严重的公共卫生问题。目前梅毒的实验室诊断方法主要包括梅毒螺旋体检查和梅毒血清学试验。血清学试验是诊断梅毒的主要方法,但因其自身的局限性而在某些情况下可能影响诊断的可靠性。梅毒螺旋体直接检测法由于检测条件要求较高、需要时间长、费用高等缺点而限制了其在梅毒诊断中的应用。PCR技术是一种诊断梅毒重要的实验室方法,可用于检测各种临床样本中的梅毒螺旋体,具有很高的敏感性和特异性,并可以对梅毒螺旋体进行基因分型,而梅毒螺旋体的基因分型对梅毒的流行病学研究以及在区分梅毒的复发与再感染方面具有重要意义。本文主要对PCR技术在梅毒诊断、梅毒螺旋体基因分型方面的应用及近年的研究进展进行综述。     

PCR扩增梅毒螺旋体polA基因及其在一期梅毒诊断中的应用

目的提高对梅毒诊断的灵敏性和特异性.方法运用PCR扩增了梅毒螺旋体(Tp)的DNA多聚酶I基因(polA)的特异性片段,检测了该方法的特异性和灵敏性;用该方法检测了118例生殖器溃疡,同时用Tp PCR试剂盒和血清学方法平行检测同批病人的溃疡或血清标本.结果polA PCR只在扩增Tp时有特异性产物,灵敏性约为20个Tp拷贝;检测118例生殖器溃疡标本,用Tp PCR试剂盒为对照,polA PCR方法的特异性和灵敏性分别为96.8%和95.7%,两种PCR检验结果差异无显著性(x2=o.25,P＞0.05);polA PCR方法与血清学方法对一期梅毒诊断结果差异有显著性(x2=4.45,P＜0.05).结论 polA PCR方法高度敏感、特异,在一期梅毒诊断中优于血清学方法,可作为血清学方法的补充用于梅毒的诊断.     

PCR扩增梅毒螺旋体poIA基因及其在一期梅毒诊断中的应用

目的提高对梅毒诊断的灵敏性和特异性。方法运用PER扩增了梅毒螺旋体(Tp)的DNA多聚酶I基因(polA)的特异性片段,检测了该方法的特异性和灵敏性;用该方法检测了118例生殖器溃疡,同时用Tp PCR试剂盒和血清学方法平行检测同批病人的溃疡或血清标本。结果polA PCR只在扩增Tp时有特异性产物,灵敏性约为20个Tp拷贝;检测118例生殖器溃疡标本,用Tp PCR试剂盒为对照,polA PCR方法的特异性和灵敏性分别为96.8％和95.7％,两种PCR检验结果差异无显著性(x2=0.25,P>0.05);polA PCR方法与血清学方法对一期梅毒诊断结果差异有显著性(x2=4.45,P<0.05)。结论polA PCR方法高度敏感、特异,在一期梅毒诊断中优于血清学方法,可作为血清学方法的补充用于梅毒的诊断。     

先天性梅毒实验室检测方法学评价

目的研究梅毒螺旋体母婴传播的实验室检测的特异性方法,应用于新生儿梅毒的早期诊断。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)或金标法(GICA)作为初筛实验,采用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)与甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)作为确诊实验及疗效观察,根据不同检验目的选用荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)、蛋白印迹技术(WB)、实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术作为辅助检测手段,优化组合实验项目。结果检测产科住院孕产妇24 636例,检测孕产妇分娩的新生儿530例,其中孕产妇TPPA确诊试验阳性患者325例,占孕产妇分娩患者的1.32%,新生儿科TPPA确诊试验阳性患者89例,占孕产妇分娩患者的0.36%。检测出新生儿梅毒患儿7例,占孕产妇分娩患者的0.03%。结论联合检测可提高孕产妇及新生儿梅毒检测的特异性,应用于新生儿胎传梅毒的早期诊断,具有特异、快速、准确的特点。     

梅毒的布氏超显微系统暗视野检查和血清学试验结果分析

近年来 ,梅毒在全球有逐渐上升的趋势 ,在我国的发病率也明显增大 ,对梅毒患者的早期准确诊断已成为医务人员的首要任务。我院对于梅毒的实验室诊断 ,采用ＴＰ的布氏超显微系统暗视野检查和梅毒血清学试验 (ＴＲＵＳＴ和ＴＰＰＡ)两种方法。现将我院门诊病人中资料比较完整的梅毒患者的实验室检查结果 ,分析、报告如下。1　临床资料1 1　一般资料 :12 0例均为我院门诊拟诊为梅毒患者 ,男 85例 ,女 35例 ,年龄 18～ 6 5岁。其中一期梅毒 (硬下疳 ) 5 6例 ,二期梅毒 (扁平湿疣 ,鳞屑性斑疹或玫瑰疹 ) 4 4例 ,潜伏期梅毒 (无皮疹 ) 2 0例 ,病程…     

梅毒实验室诊断方法进展与评价

近年来,由于梅毒感染率增加迅速,梅毒实验室检测结果的准确性,对临床诊断及控制梅毒的传播具有非常重要的意义。目前梅毒螺旋体检测技术主要分为病原学检测、血清学检测、聚合酶链反应检测三类。快速、灵敏及特异性高的梅毒诊断技术在不断的更新完善中,本文对近年来有关梅毒的实验室诊断技术的基本原理、技术进展及其优缺点作一综述。     

胎盘组织荧光PCR诊断早期先天梅毒的研究

目的评价胎盘组织荧光PCR(VQ—PCR)在先天梅毒早期诊断中的作用。方法对34例梅毒孕妇和30例非梅毒对照孕妇的胎盘和脐带组织进行梅毒螺旋体DNA的荧光定量PCR检测，并与常规临床及血清学综合诊断方法比较。结果34例梅毒孕妇的胎盘组织中，11例荧光PCR为阳性，阳性率为32．35％，30例非梅毒孕妇的胎盘和脐带样本荧光PCR均为阴性；以常规临床及血清学综合诊断方法为标准，则荧光PCR与常规方法结果的灵敏度为82％，特异性100％，约登指数0．82。显示在诊断先天梅毒新生儿时，FQ—PCR至少有不低于常规综合诊断方法的价值。结论与常规临床血清学综合诊断方法相比，荧光PCR均有明显的优势。     

梅毒患者不同血清学检测方法对比分析

目的比较常用三种梅毒血清学试验方法,观察各种方法诊断符合率,为检验与临床提供参考。方法采用目前临床实验室检测梅毒最常用的血浆反应素环状卡片试验(RPR)、梅毒酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)3种方法对74例住院及门诊梅毒患者及50例健康体检者分别进行检查。结果一期梅毒组和二期梅毒组3种试验方法阳性率差异无显著性,三期梅毒组和临床治愈后复查组TP-ELISA法与TPHA法检测结果差异无显著性,与RPR法检测结果比较差异有高度显著性(P均<0.01)。结论实验室合理选用3种不同方法平行进行梅毒检测,将减少漏诊、误诊率,为梅毒的确诊提供参考依据,并且在判定梅毒的发展、痊愈及药物疗效方面都具有十分重要的意义。     

梅毒血清学检测方法应用近况

近年来,梅毒在中国发病率居高不下。梅毒检测成为许多服务行业、义务献血者等群体体检的必检项目之一,也是现症病人诊断及疗效观察的重要手段。目前实验室梅毒血清学检测方法主要有:性病研究实验室试验(VDRL)、不加热血清反应素试验(USR)、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、荧光螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)、梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)、19S-IgM梅毒螺旋体血球凝集试验(19S-IgM-TPHA)、19S-IgM梅毒螺旋体明胶凝集试验(19S-IgM-TPPA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。不同检测方法的检测结果对不同时期梅毒的诊断具有不同的意义。     

应用荧光定量PCR技术检测梅毒患者血清TP-DNA

[目的]了解梅毒螺旋体(TP)DNA在梅毒患者血清中的检出率.[方法]应用荧光定量PCR技术检测34例不同病程阶段梅毒患者的血清TPDNA.[结果]34例梅毒患者中仅有2例检测出血清TPDNA,阳性率为6%.[结论]血清TPDNA的检出率低,故不宜采用血清作为TPDNA的检测标本.     

实验室梅毒诊断若干问题的探讨

梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的性传播性疾病，近年来，梅毒的发病率在我国呈逐年上升趋势。实验室梅毒检测方法的选择，直接关系到结果的准确性，影响梅毒的诊断和治疗。目前，实验室梅毒检测方法很多，包括梅毒的病原学诊断和梅毒的血清学诊断。     

梅毒实验室检测技术研究进展

梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种慢性、接触性传染病。临床主要借助实验室检测对其进行诊断,目前梅毒的实验室检测技术主要分为病原体检测、血清学检测、分子生物学检测三类,各类方法各有其特点,本文就梅毒实验室检测技术的最新进展做一综述。     

一期梅毒螺旋体的分子检测

梅毒螺旋体检查有涂片染色检查与直接荧光抗体检查,暗视野检查等。前两种检查方法敏感性差,临床已不常用,现最常用的是暗视野检查,其阳性率70％左右。随着分子生物学的发展,运用基因体外扩增技术检测性病病原体已十分普遍,但用聚合酶链反应(PCR)检测一期梅毒螺旋体的DNA,国内还未见报道。为了提高一期梅毒的早期诊断的准确率,我们试用敏感度高的PCR技术检测了18例一期梅毒初疮皮损中的梅毒螺旋体DNA,报告如下。     

PCR法和TP-ELISA法检测梅毒的结果分析

目的:探讨巢式PCR法在血液样本梅毒检测中适用性.方法:运用常规及巢式PCR 扩增了梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)的DNA多聚酶I基因(DNA polymerase I,polA) 的特异性片段,与血清学方法比较,评价了两方法在诊断梅毒中的意义.结果:用PCR法和TP-ELISA检测89份拟诊为梅毒的血液标本,TP-ELISA方法与巢式polA(DNA polymerase I)PCR结果差异有统计学意义;巢式PCR敏感性高于常规PCR.结论:巢式polA(DNA polymerase I )PCR虽然具有高度敏感、特异等优点,但对全血、血清等标本要求较高,是否适合用于血液样本的检测有待进一步研究.     

早期梅毒51例临床与实验分析

目的：分析早期梅毒的临床特点,评价梅毒实验室诊断技术。方法：总结５１例早期梅毒的临床表现,对ＲＰＲ、ＦＴＡ－ＡＢＳ、蛋白印迹法以及ＰＣＲ等多种诊断方法进行评价。结果：一期梅毒较少,多表现为不典型下疳,女性患者易于漏诊;二期梅毒较多,临床表现多我样但皮疹常以阴剖为主,掌跖暗红色斑疹、肛周扁平湿疣较为常见。在实验诊断方面,ＲＰＲ对本组病例的敏感性为７３．２％,ＦＴＡ－ＡＢＳ为９４．１％,蛋白印迹法为１     

TP-IgM-WB法诊断早期先天梅毒的价值

目的：评价梅毒螺旋体蛋白印迹试验(TP-IgM-WB)在诊断早期先天梅毒中的作用。方法对92例梅毒孕妇及其所产93例(1例双胞胎)新生儿血标本行梅毒螺旋体明胶凝聚实验(TPPA)、快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）检测和TP-IgM-WB检测，探讨TP-IgM-WB在先天梅毒早期诊断中的价值。结果在梅毒孕妇所生的93例新生儿中，常规综合方法早期诊断先天梅毒26例，TP-IgM-WB法诊断先天梅毒32例，6例TP-IgM-WB血清试验阳性但常规综合方法疑似病例经18个月随访后最终确诊为先天梅毒，两种方法诊断率比较差异具有统计学意义(χ2=0.031)。结论 TP-IgM-WB用于诊断早期先天梅毒优于常规综合诊断法，值得临床推广。     

江苏省2008～2010年哨点监测隐性梅毒病例诊断和治疗情况分析

目的:对836例隐性梅毒病例进行分析,为完善针对隐性梅毒诊断的标准提供依据?方法:收集江苏省6个国家级性病区域监测点2008~2010年诊断的隐性梅毒病例相关资料,并收集这些病例的血清,开展非梅毒螺旋体抗原血清学(TRUST)和梅毒螺旋体抗原血清学试验(ELISA)的复核?结果:836例隐性梅毒病例平均年龄为(42.65 ± 13.26)岁,87.92%(735/836)诊断病例来源于综合性医疗机构,82.66%(691/836)病例由住院和术(输血)前筛查检出,55.86%(467/836)的病例首选青霉素药物治疗,ELISA和TRUST同时阳性者占92.35%(772/836),TRUST阳性且滴度>1∶8的为27.28%(212/777)?结论:要提高非性病诊疗机构人员隐性梅毒的实验室诊断能力和临床治疗的规范性,为实现《中国预防与控制梅毒规划(2010-2020年)》的目标奠定基础?     

TP-ELISA、RPR与TPPA检测诊断梅毒的临床意义

目的:探讨梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)、梅毒螺旋体抗体快速血浆反应素试验(RPR)和梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)3种不同梅毒检测方法对梅毒诊断的临床价值。方法:2681例梅毒患者,分别对其血清标本用TP-ELISA、RPR和TPPA方法进行检测,检测方案分为单项目、双项目和3项目共18种,用四格表卡方检验比较3种检测方法的结果。结果:在各单项检测方案中TPPA方法的灵敏度(98.13%)和特异度(96.21%)最高(P<0.05)。在联合检测中,TP-ELISA+RPR+TPPA的灵敏度(88.87%)和特异度(99.98%)最高(P<0.01);(TPELISA+TPPA)/(TP-ELISA+RPR)/(RPR+TPPA)的灵敏度(87.76%)和特异度(99.17%)也较高(P<0.01)。结论:TPPA检测方法在辅助梅毒诊断中具有重要价值,联合检测方案TPELISA+RPR+TPPA对梅毒诊断最有价值。     

130例梅毒筛查检测弱反应性结果分析

目的探讨梅毒实验室检测弱反应性结果,分析梅毒免疫印迹检测在临床诊断中的应用价值。方法选取2018年1月至2019年6月河北燕达医院梅毒雅培i2000化学发光法检测S/CO值1～9弱反应性的130例样本进行临床方法学诊断。选用梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)和西门子XP化学发光免疫分析(CLIA)进行复核,以梅毒螺旋体免疫印迹试验(TP-WB)检测方法为确证实验。结果 130例化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)初筛梅毒检测的S/CO值为1～9弱反应性样本,以CLIA复核,92例阳性,38例阴性,与CMIA相比,灵敏度为0. 586,特异度为1. 000,差异有统计学意义(P <0. 001);以TPPA复核,98例阳性,32例阴性,与CMIA相比,灵敏度为0. 570,特异度为1. 000,差异有统计学意义(P <0. 001); TPPA复核结果和CLIA方法相比,灵敏度为0. 516,特异度为0. 543,差异无统计学意义(P> 0. 05);以TP-WB平行检测作为确证方法,40例反应性结果,其中8例阳性,32例可疑阳性,90例阴性,与CMIA相比,灵敏度为0. 942,特异度为1. 000,差异有统计学意义(P <0. 001)。TP-WB反应性结果显示阳性判读,抗体表达为2个条带并着色强度低;可疑阳性判读,抗体表达单一着色强度明显降低。结论当梅毒检测结果为弱反应性时,应结合患者生理情况或基础疾病等因素进行综合分析,不能将CMIA、CILA、TPPA检测作为临床梅毒诊断依据,避免漏诊和误诊;以免疫印迹检测作为梅毒临床诊断试验,检测结果可疑阳性多见,故梅毒实验室临床确证在临床诊断中对于弱反应人群尤为重要。     

脑神经梅毒的临床特点(附11例报告)

目的　本文通过分析脑神经梅毒的分型及临床特点 ,为早期诊断及减少误诊提供帮助。方法　回顾性分析经临床和实验室检查而确诊的 11例脑神经梅毒病人的有关资料。结果　脑神经梅毒的临床特征包括 :( 1)急性、亚急性起病多 ,少数慢性起病 ;( 2 )临床以间质型 ,尤其脑卒中最常见 ;( 3 )血清学梅毒螺旋体血凝试验 (TPHA)及PRP试验阳性率极高 ;( 4 )脑脊液检查表现为蛋白增高 ( 76%) ,细胞数增高 ( 5 0 .2 %) ;( 5 )头颅CT或MRI表现为高血压、糖尿病所致常见的脑梗死不同 ,病灶多发 ,可分布在脑的所有部位。结论　脑梅毒的临床表现多变 ,早期误诊率高 ,临床表现与脑损害部位有关 ,实验室及影像学检查是诊断的主要依据