硼替佐米联合AZD-1775对人多发性骨髓瘤细胞株凋亡的影响

目的 探讨硼替佐米联合WEE1激酶抑制剂AZD-1775对人多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡的影响。方法 培养RPMI8226和U266细胞，逆转录PCR(RT-PCR)检测WEE1 mRNA表达。采用随机数字表法将两种细胞分为对照组、AZD-1775组、硼替佐米组和联合处理组。AZD-1775组细胞加入AZD-1775(10μmol/L)孵育24 h;硼替佐米组细胞加入硼替佐米(20 nmol/L)孵育24 h;联合处理组细胞先加入硼替佐米(20 nmol/L)孵育24 h,再加入AZD-1775(10μmol/L)孵育24 h。采用肿瘤细胞成球实验检测不同处理对RPMI8226和U266细胞成球率影响；采用流式细胞术检测不同处理对RPMI8226和U266细胞凋亡率影响；采用Westen blot检测不同处理对RPMI8226细胞Bcl-2和Caspase-3蛋白表达影响。结果 RT-PCR检测显示，RPMI822和U266细胞均存在WEE1 mRNA表达。与对照组相比，AZD-1775组、硼替佐米组和联合处理组细胞球形成率均降低(P<0.05),而联合处理组细胞球形成率低于AZ...     

基于PI3K/AKT/mTOR探索硼替佐米对多发性骨髓瘤侧群细胞的作用机制

目的 探讨26S蛋白酶体抑制剂硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226和骨髓瘤侧群(side population,SP)细胞的作用机制及其耐药性。 方法 在RPMI8226和SP细胞增殖以及生长周期和凋亡差异性研究基础上,采用Western blotting方法检测硼替佐米对2种细胞内信号通路PI3K/AKT/mTOR磷酸化水平的影响;通过硼替佐米耐药性研究,开展RPMI8226和SP细胞对硼替佐米耐药机制的探索。 结果 SP细胞48 h相对细胞活力(3.62±0.28)显著高于RPMI8226细胞(2.81±0.24,P=0.028);克隆形成能力结果显示SP细胞显著强于RPMI8226细胞(P<0.05)。流式细胞术检测显示硼替佐米增加了2种细胞S期、降低G₂/M期,对RPMI8226的促凋亡率(51.23±5.35)显著高于SP细胞凋亡率(29.62±2.61,P=0.008)。Western blotting结果显示硼替佐米显著降低RPMI8226和SP细胞AKT、mTOR及4E-RP1磷酸化水平;耐药性结果显示SP细胞耐药相关蛋白P-gp、Caveolin-1(Cav-1)、Fatty acid synthase(FASN)及CYP3A4表达显著高于RPMI8226细胞。 结论 硼替佐米主要通过细胞凋亡和降低PI3K/AKT/mTOR信号蛋白磷酸化水平,发挥对RPMI8226和SP细胞的抑制作用;通过P-gp、Cav-1、FASN以及CYP3A4耐药蛋白发挥对多发性骨髓瘤的耐药性。      

硼替佐米联合柔红霉素对成人急性白血病原代细胞生长、凋亡的影响

目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米单药以及联合柔红霉素对成人急性白血病原代细胞生长、凋亡和Bcl-2 mRNA表达的影响.方法 用Ficoll液分离各型成人急性白血病患者骨髓单个核细胞,分别加入不同浓度硼替佐米(5、10、20、50 nmol/L)、柔红霉素(50、100、200、500 nmol/L),以及低浓度硼替佐米(5、10 nmol/L)联合不同浓度柔红霉素(50、100、200、500 nmol/L)进行细胞培养;采用MTT方法检测培养48 h后细胞增殖活性,计算抑制率、半抑制浓度(IC50)和相互作用系数(CDI).流式细胞术检测培养24 h后细胞凋亡率,RT-PCR检测培养48h后凋亡基因Bcl-2 mRNA表达.结果 所测各型急性白血病细胞生长抑制率随硼替佐米或柔红霉素单药浓度增高而增高;柔红霉素联合小浓度硼替佐米(5、10 nmol/L)后,柔红霉素的IC50由(102±27)nmol/L分别减小为(73±26)、(55±22)nmol/L;柔红霉素200 nmol/L联合硼替佐米10 nmol/L时协同作用最为显著,CDI=0.17.柔红霉素100 nmol/L联合硼替佐米20 nmol/L组与未加药组或单药组比较细胞凋亡率增高、Bcl-2 mRNA表达下降(P<0.05).结论 硼替佐米联合柔红霉素对成人急性白血病原代细胞有协同促凋亡和抑制白血病细胞生长的作用,有一定的临床应用前景.     

硼替佐米对前列腺癌细胞抑制作用及其机制

目的:探讨硼替佐米对前列腺癌细胞DU145的抑制作用.方法:采用MTT法检测硼替佐米对DU145细胞的生长抑制作用,流式细胞技术测定细胞周期和凋亡率,Western blot检测Bik和Caspase-3的表达水平的变化.结果:硼替佐米对DU145细胞的生长抑制作用有时间和浓度的依赖性.1.6 μmol/L的硼替佐米作用DU145细胞后,可见明显细胞核凝聚、皱缩和碎裂;细胞的周期处于G0/G1和G2/M期的细胞比例上升,S期的细胞比例下降(P＜0.05);细胞凋亡率明显增加,显著高于对照组(P＜0.05),Bik和Caspase-3表达水平上调.结论:硼替佐米可明显抑制前列腺癌细胞DU145的生长并诱导其凋亡,凋亡作用机制可能与其上调Bik和Caspase-3表达有关.     

芬维A胺和硼替佐米联用调节内质网应激蛋白促进肺癌A549细胞凋亡

目的 探讨芬维A胺\[fenretinide,N-(4-hydroxyphenyl) retinamide (4-HPR),一种人工合成的维甲酸\]与硼替佐米联合应用对非小细胞肺癌A549细胞的促凋亡作用。方法 将非小细胞肺癌细胞株A549用不同浓度的4-HPR(2.5、5、10、20 μmol/L)和硼替佐米(0.1、0.2、0.4、0.8 μmol/L)单独或联合处理24 h。应用MTT法检测4-HPR和硼替佐米单独或联合处理对细胞的生长抑制作用;碘化丙啶(PI)染色和流式细胞术检测细胞周期;Annexin Ⅴ-FITC和PI双染检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测内质网应激相关凋亡蛋白CHOP的表达。结果 4-HPR和硼替佐米单独处理肺癌细胞株A549能够以剂量依赖性方式抑制细胞增殖,两药联用后抗增殖作用明显增强。细胞周期检测显示两药联用能导致细胞停滞于G0/G1期,S期细胞显著减少。与两药单独使用相比,4-HPR和硼替佐米联用能显著增强A549细胞凋亡,伴随内质网应激蛋白CHOP的mRNA和蛋白表达增强。结论 4-HPR和硼替佐米联用能促进肺癌A549细胞的凋亡,为药物联合治疗肺癌提供了实验基础。     

伊马替尼、柔红霉素和硼替佐咪对两种Ph(+)白血病细胞株抗肿瘤效应的比较研究

目的 比较研究化疗药物伊马替尼、柔红霉素和硼替佐咪对两种Ph(+)白血病细胞株K562(髓系白血病细胞株,表达P210蛋白)和SUP-B15(急性淋巴细胞白血病细胞株,表达P190蛋白)的抗肿瘤效应.方法 采用MTT法测定不同浓度的伊马替尼、柔红霉素与硼替佐咪分别作用72 h后两种细胞株的增殖活性,并计算3种化疗药物对两种细胞株作用的半数抑制浓度(IC50);RT-PCR法检测不同浓度伊马替尼作用48 h后两种细胞株bcr-abl基因表达的改变.结果 ①不同浓度伊马替尼、柔红霉素与硼替佐咪分别作用K562和SUP-B15细胞株72h,其对细胞株的IC50值分别为(0.286±0.060)μmol/L、(0.303±0.009)μmol/L、(22.127±3.592)nmol/L和(1.387±0.180)μmol/L、(0.117±0.017)μmol/L、(12.35±0.740)nmol/L,提示伊马替尼对K562细胞敏感性明显高于SUP-B15细胞,而柔红霉素对SUP-B15更敏感,硼替佐咪对两种细胞的敏感性无差异;②伊马替尼0、0.35、1.0μmol/L作用48 h后,两株细胞bcr-abl基因表达均无明显变化.结论 伊马替尼、柔红霉素、硼替佐咪对Ph(+)细胞株K562和SUP-B15均有较好的抗肿瘤效应,伊马替尼对K562更敏感,而柔红霉素和硼替佐咪对SUP-B15均有较好的抑制作用,短时间伊马替尼作用后不影响bcr-abl基因的表达.     

蛋白酶体抑制剂联合伊马替尼对K562细胞livin基因表达的影响

目的 研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib,BOR)单独或联合伊马替尼(imatinib,IM)对慢性髓性白血病(chro-nic myelogenous leukemia,CML)急变期细胞株K562中livin mRNA表达的影响.方法 不同浓度BOR(2.5,5,10 nmol/L)和IM(0.25 μmol/L)单药或分别联合处理K562细胞,分别于药物作用12,48,72 h后采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测livin mRNA的表达.结果 BOR或IM单药组K562细胞中livin mRNA的表达下调,而且随着药物浓度的增加表达降低,且在药物作用48 h时达最高.联合作用后,livin mRNA的下降水平显著增加.结论 BOR单药或联合IM可以下调K562细胞中livin mRNA的表达,并可能通过此机制来诱导其凋亡,两药联合具有协同作用.     

硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562的凋亡作用及机制

目的 探讨硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562(K562R)的诱导凋亡作用及机制.方法 采用浓度梯增法建立耐伊马替尼K562细胞系.应用CCK-8法检测不同浓度硼替佐米分别作用K562和K562R细胞24 h、48 h后,对细胞的增殖抑制的效果.使用流式细胞术方法分别检测硼替佐米单独或联合伊马替尼作用于K562R细胞48 h后的细胞凋亡.应用Western blotting检测不同浓度硼替佐米作用K562R细胞48 h后,Mcl-1、Bcl-2、Bcr/Abl蛋白表达的异同.结果 成功将对伊马替尼敏感的K562细胞诱导为K562R,耐药倍数为31.8;硼替佐米对K562及K562R细胞的增殖抑制呈浓度、时间依赖(P均<0.05);随着硼替佐米浓度增加,对K562R细胞的诱导凋亡作用增强,且硼替佐米与伊马替尼联合具有协同作用(P<0.05);硼替佐米可抑制K562R细胞Mcl-1,Bcr/Abl蛋白的表达,Bcl-2无变化.结论 硼替佐米具有对K562R细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与下调K562R细胞Bcr/Abl和MCL-1的表达以及促进MCL-1发生切割有关.     

白花蛇舌草提取物抗多发性骨髓瘤细胞的机制研究

目的 探讨白花蛇舌草提取物（HDE）抗多发性骨髓瘤细胞的机制。方法 观察50、100、150μg/mL HDE、2.5、5、10uM三氧化二砷（As2O3）及25、50、100nM硼替佐米（Bortezomib）浓度对骨髓瘤细胞株的增殖抑制,细胞周期及诱导凋亡的影响,明确白花蛇舌草中具有抗肿瘤作用的单体成分,同时讨论HDE抗肿瘤作用机制。结果 不同浓度As2O3、硼替佐米及HDE作用于RPMI 8226及NCI-H929细胞增殖的抑制作用具有浓度及时间依赖性;浓度增加了25ug/ml,抑制率增加50%,HDE浓度为50-75μg/mL对细胞的抑制作用最为明显。 100nM硼替佐米作用于RPMI 8226及NCI-H929 24h,分别使G2/M期升至为70.10%、73.99%,150μg/mLHDE作用于RPMI 8226及NCI-H929 24h,分别使G0/G1期升至为45.15%、36.28%,而10uM As2O3作用于NCI-H929 24h,使G0/G1期升至为40.59%;3种药物均可诱导细胞凋亡,150μg/mLHDE作用于RPMI 8226及NCI-H929 48h,凋亡率为14.44±0.50%、24.90±0.76%。结论 HDE在一定浓度范围内对多发性骨髓瘤细胞具有较为明显剂量依赖的杀伤作用,其中在浓度50～75μg/mL对细胞的抑制作用增加最为明显。HDE是通过诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期来抑制骨髓瘤细胞增殖。     

硼替佐米化疗方案和传统化疗方案对多发性骨髓瘤初治患者疗效的比较

目的比较初治多发性骨髓瘤患者接受以硼替佐米为主的化疗方案和传统化疗方案的疗效。方法选取2009年12月至2013年12月在扬州大学临床医学院、江苏省苏北人民医院血液内科住院,至少完成4个疗程、可以评估疗效的初治多发性骨髓瘤患者40例,采用随机数字表法分为硼替佐米组和非硼替佐米组,各20例。硼替佐米组采用以硼替佐米为主的治疗方案,非硼替佐米组采用传统治疗方案,比较两组患者2个疗程治疗前后血红蛋白、血小板、红细胞沉降率、白蛋白、球蛋白、骨髓浆细胞等指标的变化。化疗4个疗程后全面评价两组疗效。结果治疗2个疗程后硼替佐米组白蛋白显著高于非硼替佐米组[(41±4)g/L比(37±7)g/L,P<0.05];硼替佐米组球蛋白显著低于非硼替佐米组[(22±6)g/L比(33±14)g/L,P<0.05];硼替佐米组红细胞沉降率显著低于非硼替佐米组[(18.8±1.6)mm/1 h比(65.5±3.8)mm/1 h,P<0.05]。治疗4个疗程后硼替佐米组反应良好率显著高于非硼替佐米组[75.0%(15/20)比25.0%(5/20),P<0.05]。结论与传统的治疗方案相比,以硼替佐米为主的化疗方案可提高初治多发性骨髓瘤的疗效,并改善贫血、血小板减少、低白蛋白,使红细胞沉降率下降。     

The pathophysiological and molecular basis of Bartter's and Gitelman's syndromes

Molecular defects affecting the transport of sodium, potassium and chloride in the nephron through the ROMK K⁺ channel, Na⁺/K⁺/2Cl^- cotransporter, the Na⁺/Cl^- cotransporter and chloride channel have been identified in patients with Bartter''s and Gitelman''s syndromes. Defects of the angiotensin II type I receptor and CFTR have also being described. These defects are simple (ie, most are single amino acid substitutions) but affect key elements in tubular transport. The simplicity of the genetic defects may explain why the inheritance of these conditions remains unclear in most kindreds (ie, not just recessive or dominant) and emphasises the crucial importance of the conformational structure of these channels. Application of this molecular information will allow the early genetic identification of patients with these syndromes and enable us to differentiate between the various disorders at a functional level. It may also identify a sub-group in which the heterozygous form may make patients potentially exquisitely sensitive to diuretics.


     

Management of non-Hodgkin's lymphomas

The non-Hodgkin''s lymphomas (NHL) are a heterogenous group of disorders characterised by malignant proliferation of lymphoid cells. The cellular origin is relatively well established with subtypes corresponding to the various stages of lymphocyte differentiation. The term encompasses a hotchpotch of conditions with very different morphological appearance, behaviour and clinical outcome. NHL comprise 2.4% of all cancers, with incidence increasing with age. The commonest presentation is with progressive lymphadenopathy, though extranodal manifestations are present in a significant proportion. The clinical behaviour ranges from a benign, indolent course to rapidly progressive disease; prognosis varies from weeks to many years. Treatment is correspondingly diverse, from `watchful waiting'' to high-dose chemotherapy with bone marrow stem cell transplantation. Cure is possible in an increasing number of patients and much interest currently lies in identifying patients with high-risk disease necessitating the use of intensive treatment regimens.


     

Fournier's gangrene and its emergency management

Fournier's gangrene (FG) is a rare but life threatening disease. Although originally thought to be an idiopathic process, FG has been shown to have a predilection for patients with diabetes as well as long term alcohol misuse; however, it can also affect patients with non-obvious immune compromise. The nidus is usually located in the genitourinary tract, lower gastrointestinal tract, or skin. FG is a mixed infection caused by both aerobic and anaerobic bacterial flora. The development and progression of the gangrene is often fulminating and can rapidly cause multiple organ failure and death. Because of potential complications, it is important to diagnose the disease process as early as possible Although antibiotics and aggressive debridement have been broadly accepted as the standard treatment, the death rate remains high.     

Gradenigo's syndrome

Gradenigo's syndrome, which is characterised by the triad of suppurative otitis media, pain in the distribution of the trigeminal nerve, and abducens nerve palsy may give rise to potentially fatal complications. Knowledge of the aetiology and appropriate investigations can lead to early diagnosis. A case is reported which illustrates this.     

3''R,4''R-二取代角型吡喃香豆素的不对称合成

目的:寻找具有钙离子拮抗作用和乙酰胆碱酯酶抑制活性双重作用机制的早老性痴呆(Alzheimer′sDisease,AD)新型抑制剂。方法:间二苯酚为底物,AD-mix-β作不对称双羟基化试剂进行凯林内酯类香豆素的全合成;所有产物进行乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制活性测试。结论:立体选择性地合成cis3′-R,4′R-二取代角型二氢吡喃香豆素,但AchE抑制活性明显低于cis3′-R,4′R-二取代线型二氢吡喃香豆素。     

抗菌肽PR39真核表达载体的构建及其在巨噬细胞中的表达和抗菌作用

目的 构建抗菌肽PR39的真核表达载体,转染后观察PR39在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达及抗菌作用.方法 采用拼接PCR法合成抗菌肽PR39基因,克隆到真核表达载体pIRES2-GFP中,经鉴定后用阳离子脂质体转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,通过RT-PCR和免疫荧光法检测目的 基因的表达,并对其抗菌活性进行初步检测.结果 成功构建了抗菌肽PR39的真核表达载体pIRES2-GFP/PR39,并能在小鼠巨噬细胞RAW264.7中表达抗菌肽PR39.表达抗菌肽PR39的巨噬细胞杀灭和清除胞内菌的能力明显增强.结论 抗菌肽PR39基因能够在小鼠巨噬细胞RAW264.7中表达并发挥抗菌作用.     

两种不同方法在黑热病诊断中的应用比较

目的:比较用骨髓检查和rK39试纸条2种不同方法对于临床黑热病现症患者检测的效果.方法:以rK39试纸条样品带区出现红色条带为阳性,骨髓检查中查到利什曼原虫为阳性,并比较两种不同方法对诊断黑热病的效果.结果:检测病例372例.354例做骨髓检查,阳性254例(阳性率(71.75%),阴性100例,未做18例(rK39均阳性);做rK39检测125例,阳性110(阳性率88.0%),阴性15(骨髓检查阳性13例);骨髓+rK39均做107例,双阳性51例,双阴性2例,骨髓阳性,rK39阴性13例,骨髓阴性,rK39阳性41例.结论:两种方法单一阳性检出率统计学差异有显著性,说明rK39试纸条法在诊断黑热病中更具有优势,该法快速、简便、敏感性和特异性高,费用相对低、患者痛苦小,更适于黑热病的诊断.骨髓检查做为病原学检查,是确诊实验,两者结果应互为参考.     

基于蒙特利尔病变部位分型的克罗恩病患者临床特征分析

目的 探讨回肠末段型（L1）、结肠型（L2）及回结肠型（L3）克罗恩病（CD）患者的临床特征、实验室检查、疾病行为等方面的差异。方法 回顾性研究2021年1月—2022年6月武汉大学人民医院181例CD患者的临床资料,其中L1型CD患者66例,L2型CD患者20例,L3型CD患者95例。收集患者临床资料和实验室检查结果等,分析3组患者在临床特征和实验室检查结果等方面的差异。多因素二元Logistic回归分析L1、L2和L3型CD患者临床特征。绘制受试者工作特征（ROC）曲线,分析部分临床特征预测CD病变部位的效能。结果 L1组患者平均年龄大于L3组患者（P <0.05）。L1组患者黏液脓血便构成比低于L2和L3组患者（P <0.05）。L1组患者平均血小板计数低于L3组患者（P <0.05）。L1组患者肛周病变构成比低于L2和L3组患者（P <0.05）。多因素二元Logistic回归分析结果显示,L2型CD［O^R =1.017（95% CI：1.004,1.031）］和L3型CD［O^R =1.026（95% CI：1.016,1.037）］与CD疾病活动指数（CDAI）相关（P <0.05）,L3型CD［O^R =7.088（95% CI：2.390,21.018）］与肛周病变风险增加相关（P <0.05）。ROC曲线分析结果显示,与L1型CD比较,当血沉为29.50 mm/h时,L2型CD的ROC曲线下面积（AUC）为0.724（95% CI：0.579,0.868）,此时预测L2型CD敏感性为77.8%（95% CI：0.519,0.926）,特异性为64.1%（95% CI：0.510,0.754）;当血小板计数取临界值307×10⁹/L时,L3型CD的AUC为0.702（95% CI：0.618,0.785）,此时预测L3型CD敏感性为72.3%（95% CI：0.602,0.826）,特异性为65.2%（95% CI：0.554,0.752）。结论 L1型、L2型及L3型CD患者的临床表现、实验室检查、疾病行为等均存在差异,基于这些特征将有助于鉴别CD患者的不同病变部位。