大鼠海马神经细胞原代培养及塑料孔板原位鉴定

目的 原代培养大鼠海马神经细胞,探讨简单、有效的塑料孔板原位鉴定方法.方法 采用Hiroaki等的方法并做了改良,在塑料孔板里进行胎鼠海马神经细胞原代培养,7 d后分别用传统和改良的甲苯胺蓝(TB)染色法、改良的神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)染色法对海马神经细胞进行鉴定.结果 无血清细胞培养法神经细胞结构特征明显,能形成明显的神经网络结构.传统的TB染色法染色单一,均为淡蓝色;改良的TB染色法红蓝匹配,对比度好;改良的免疫组化NSE染色法胞质阳性.结论 无血清培养法是海马神经细胞培养的理想方法,塑料孔板细胞培养原位染色简单易行,对细胞及分子水平研究有重要意义.     

用微环境小室培养相对单一的海马原代神经细胞

采用我室自己创建的相对恒定微环境小室培养法，对新生大鼠海马进行了原代分离培养。在不用抑制胶质细胞生长的药物情况下，成功地得到了相对单一的神经细胞培养物和单神经元网络，为进一步开展神经生物学研究，提供了很好的体外模型。     

猪视网膜神经节细胞的培养及超微结构

目的：建立视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs)的体外培养方法,并研究视网膜不同类型神经细胞之间的相互作用,为RGCs的体外实验研究奠定基础。方法：进行猪视网膜细胞混合体外培养和神经节细胞的纯化培养,观察神经节细胞生长状态及轴突生长情况,研究视网膜不同类型神经细胞之间的相互作用。结果：视网膜细胞混合培养时,神经节细胞生长良好,纯化后的神经节细胞间连接减弱,细胞存活时间缩短。结论：视网膜细胞混合培养有利于神经节细胞的贴壁和生长。     

浅谈神经细胞的培养技术

神经细胞体外培养技术在当前神经科学研究中占据前沿地位,并且渗透到多个学科,与许多先进技术结合在一起。但神经细胞又因其对培养条件要求高、培养难度大而影响着它的普及和发展。本文综述了近年来神经细胞离散培养的一些观点、方法,并简要介绍了本文作者们研究的体会和成果。 1 神经组织培养的历史 神经组织的体外培养方法是Harrison1907年首创的,Harrison在蛙的凝固淋巴块上进行蛙的胚神经组织的悬滴培养,发现了神经纤维的生长,从而支持了神经元学说。1956年,Nakai又创造了神经     

中草药桃仁纤溶酶的亲和层析分离

目的 分离出高效、特异、安全、不良反应较小的纤溶酶，为溶栓药物的研究奠定基础。方法 利用硫铵沉淀法提取出桃仁纤溶酶，测定其比活力，并比较不同蛋白酶抑制剂对桃仁纤溶酶活性的抑制作用，采用亲和层析法对桃仁纤溶酶进行分离纯化。结果 亲和层析法分离得到了纤溶酶活性单一组分，比活力为89.08 U·mg^-1，比纯化前提高了7.37倍，该组分属于丝氨酸蛋白酶家族。结论 利用大豆胰蛋白酶抑制剂作为配基，采用亲和层析法分离桃仁纤溶酶可以得到单一活性成分，且比活力相对提高。     

腹腔镜治疗输卵管妊娠68例临床分析

异位妊娠是妇产科常见的急腹症之一,若不及时治疗和积极抢救,可危机患者生命^[1]。其中以输卵管妊娠最为常见,占异位妊娠的95%。传统的方法大多采用开腹手术治疗。随着电视腹腔镜的广泛开展^[2～5],我院自2002年2月起开展电视腹腔镜下治疗输卵管妊娠,取得了良好的临床效果,报道如下。     

新生大鼠视网膜神经元的改良培养及鉴定

目的探讨新生大鼠视网膜神经元获取和体外培养的方法,为视网膜神经细胞的基础研究提供合适的模型。方法采用酶消化法获取生后7—8天的SD（Sprague—Dawley）乳鼠的视网膜神经细胞,使用DMEM／F12培养液在体外培养,倒置显微镜观察细胞形态,免疫组织化学鉴定细胞类型。结果0．25％胰蛋白酶和0．02％EDTA联合消化能使视网膜神经细胞分散,获得单细胞悬液;多聚赖氨酸包被培养皿有助于神经细胞贴壁生长;体外培养第7天的视网膜神经细胞中,视网膜神经元占80％左右,其中50％以上为光感受器细胞。结论酶消化法原代培养视网膜混合神经细胞简单、可行,为视网膜神经细胞的基础研究提供良好的体外模型。     

制备和培养多细胞肿瘤球体的新方法

制备和培养多细胞肿瘤球体的新方法首都医学院细胞室高明庚,李卫红多细胞肿瘤球体(multicellulartumorspheroid,MTS)在体外培养中的生长类似于实体瘤结节^[1],具有活体肿瘤组织的许多特征,即存在细胞与细胞之间的紧密联系,延续的低氧细胞群^[2],以及细胞的异质性^[3,4],这些特征在肿瘤细胞的单层培养或悬浮培养中不出现^[5].     

水解原位萃取分离刺五加异秦皮啶

目的 对刺五加80%体积分数乙醇提取物采用水解原位萃取的方法将结合态异秦皮啶转化成游离态异秦皮啶。方法 确定的工艺条件为每克80%体积分数乙醇浸膏按固液比1∶100加入0.6 mol·L^-1盐酸,加入同体积的1,2-二氯乙烷,搅拌下85 ℃回流水解2.5 h。结果 在此条件下,刺五加根皮、茎皮和根茎混合异秦皮啶分别由原来的0.042 4、0.011 2和0.005 3 mg·mL^-1增加到1.264 1、0.441 2和0.260 0 mg·mL^-1,分别增加28.81、38.39和48.06倍;根木质部和茎木质部由水解前检测不到异秦皮啶增加到0.023 3和0.009 7 mg·mL^-1。结论 将水解原位萃取法分离异秦皮啶工艺与目前常用的传统酸水解-有机溶剂萃取工艺进行了对比,水解温度由原来的100 ℃降低到85 ℃,处理时间由原来的14.5 h降低到2.5 h,溶剂使用量仅为原来的3/4。     

羊心脏浦肯野纤维膜钠泵活动的测量

采用细胞内Na⁺选择电极方法,先以不同频率电刺激驱动羊心脏浦肯野纤维标本,使细胞内Na⁺活度(aⁱN+a)上升到不同高度,在停搏即刻测量Na⁺逐出速率(d(a_Naⁱ)/dt)。进而将所测得d(a_Naⁱ)/dt值相对于各时刻a_Naⁱ作相关曲线(SP-IS:Sodium Pump-Internal Sodium),比较其斜率可以了解膜钠泵活动的相对强弱。这种方法可以较迅速、简便地在生理状态下反复测算膜钠泵活动速率。进而用外差法找到相关曲线与纵坐标交点(Na_ia⁺),它反应了静息态时Na⁺内流速率。还观察了pH值变化、高或低K⁺,高或低Ca²⁺及Mn²⁺、异丙基肾上腺素等对膜钠泵活动速率的影响。