黄连素通过重塑肠道菌群和调节PI3K/AKT信号通路改善多囊卵巢综合征小鼠的作用机制研究

目的 探究黄连素(BBR)对多囊卵巢综合征(PCOS)小鼠肠道菌群的调节作用及其治疗机制。方法 于2021年6月—2022年6月在复旦大学附属上海市第五人民医院实验动物中心进行实验。清洁级健康雌性C57BL/6J小鼠24只,随机选取6只作为正常对照组,其余18只应用来曲唑灌胃制备PCOS模型。造模成功后,将造模小鼠随机分为模型(PCOS)组、阳性药达英-35(0.2 mg·kg^-1·d^-1)组和BBR(100·kg^-1·d^-1)组,每组6只,给予相应药物治疗14 d。收集小鼠结肠内粪便,采用16S rDNA测序检测肠道菌群;称小鼠体质量,观察小鼠阴道脱落细胞形态学改变;检测血清性激素和胰岛素水平;HE染色观察卵巢病理结构;免疫组化检测小鼠结肠Claudin-1、Occludin表达;Western-blot检测卵巢组织PI3K/AKT通路相关蛋白表达。结果 16S rDNA测序结果显示,PCOS组肠道菌群多样性较正常对照组发生变化。在属水平,与正常对照组比较,PCOS组布劳特氏菌属、韦永氏球菌属、孪...     

蛇床子素上调PPARγ表达改善多囊卵巢大鼠卵巢功能

目的:观察现代中药蛇床子素(osthole,OST)对多囊卵巢大鼠卵巢功能紊乱及卵巢组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白表达的调节作用。方法:36只SD大鼠随机分为模型组、OST组和对照组三组,模型组、OST组采用16周持续光照诱导雌性SD大鼠表现多囊卵巢(polycystic ovary,PCO)状态,OST组从14周开始连续3周OST腹腔注射。16周末比较各组每日阴道涂片,卵巢病理改变;称取卵巢、子宫质量,并检测血清雌二醇(estradiol,E_2)、睾酮(testosterone,T)水平及卵巢PPARγ蛋白表达水平。结果:模型组大鼠卵巢周期消失,卵巢多囊样增大,T水平升高,卵巢PPARγ蛋白表达下降;OST组卵巢发情周期增加,血清E2水平提高,卵巢增大被抑制,同时卵巢PPARγ蛋白表达水平增加,但对血清T水平无明显影响。结论:OST可能通过提高卵巢PPARγ蛋白表达水平发挥改善卵巢周期紊乱的作用,可以作为多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)标准化中药治疗的选择。     

补肾化痰方对多囊卵巢综合征大鼠性激素及卵巢形态学的影响

目的:观察补肾化痰方对多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)大鼠性激素及卵巢形态学的影响。方法:采用皮下注射脱氢表雄酮造模法建立PCOS大鼠模型,60只造模大鼠随机分为模型对照组、二甲双胍组、补肾化痰方低剂量组、补肾化痰方高剂量组,另取15只大鼠为正常对照组,各组给予相应药物连续灌胃28 d。行阴道涂片、HE染色观察动情周期;用酶联免疫吸附测定法测定血清促黄体生成素、睾酮水平;行卵巢组织HE染色,光镜下观察卵巢组织形态学变化。结果:与对照组比较,模型组大鼠无规律的动情周期,血清促黄体生成素、睾酮水平升高,卵巢表面苍白、体积增大、黄体数目减少、呈多囊样改变。二甲双胍和补肾化痰方两个剂量组可明显降低模型大鼠血清促黄体生成素、睾酮水平,恢复大鼠动情周期,增加各级卵泡数目及黄体数目,改善卵巢形态学结构。与补肾化痰方低剂量组比较,补肾化痰方高剂量组降低睾酮水平更明显。结论:补肾化痰方可从总体上调节下丘脑-垂体-卵巢轴功能,降低多囊卵巢综合征大鼠促黄体生成素、睾酮水平,恢复大鼠动情周期,改善卵巢形态学结构。     

自拟补肾化痰方与补肾活血方对PCO大鼠性激素和P450arom及PAI-1的影响

目的观察自拟补肾化痰方与补肾活血方对多囊卵巢（PCO）大鼠血清性激素水平及卵巢局部因子P450arom和PAI-1表达的影响，探讨其对PCO模型大鼠的不同治疗作用并分析可能的作用机制。方法采用胰岛素联合人绒毛膜促性腺激素（HCG）造模法制备PCO模型大鼠。随机分为PCO模型组、补肾化痰组、补肾活血组、西药组（二甲双胍）和对照组。运用放射免疫法测定血清性激素、胰岛素（INS）水平；免疫组化法测定卵巢组织中P450amm和PAI-1的表达。结果补肾化痰方可以降低PCO模型大鼠血清睾酮（T）水平，升高E2、FSH水平。可上调P450arom的表达，而补肾活血方可以降低PCO模型大鼠血清T、LH和胰岛素（INS）水平，可下调PAI-1的表达。结论卵巢局部因子P450arom和PAI-1在多囊卵巢的发生、发展中起重要作用，自拟补肾化痰方与补肾活血方从不同途径调整内分泌和卵巢局部因子的表达，从而促进卵泡的发育、成熟及排卵。     

姜黄素对多囊卵巢综合征模型大鼠血清和卵巢中VEGF表达的影响

目的观察姜黄素对多囊卵巢综合征（PCOS）模型大鼠血清和卵巢中血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法选用42d龄未成年雌性大鼠60只,采用脱氢表雄酮联合诺和灵N的方法构建大鼠PCOS的病理模型。将大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、姜黄素低剂量组和姜黄素高剂量组。采用ELISA法检测各组大鼠血清中VEGF的表达水平;采用免疫组织化学法检测各组大鼠卵巢组织中VEGF的表达水平;Western blotting法检测VEGF的蛋白水平表达。结果ELISA法结果显示,PCOS大鼠血清中的VEGF表达水平明显高于空白对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;而给予姜黄素腹腔注射后,血清中的VEGF表达较模型对照组均有所降低,且高剂量组的表达低于低剂量组的表达（P〈0．05）。免疫组织化学和Western blotting结果显示：VEGF蛋白在模型对照组卵巢中的表达阳性率均高于空白对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）,而姜黄素干预后其表达水平均降低,且高剂量组的表达阳性率显著低于低剂量组（P〈0．05）。结论姜黄素能够显著降低PCOS大鼠血清和卵巢组织中VEGF的表达,提示其可能对PCOS具有一定的治疗作用。     

补肾促排卵汤对PCOS模型大鼠颗粒细胞芳香化酶的影响

目的 通过观察补肾促排卵汤对多囊卵巢综合征（PCOS）模型大鼠卵巢颗粒细胞芳香化酶的影响,探讨其对PCOS卵巢局部的影响及作用机制。方法 应用补肾促排卵汤作用于以脱氢表雄酮诱导的PCOS大鼠模型,采用RT-PCR法及免疫组化,检测PCOS模型大鼠颗粒细胞芳香化酶mRNA及蛋白的表达。结果 补肾促排卵汤能显著提高PCOS模型大鼠颗粒细胞芳香化酶mRNA及蛋白表达（P<0.05）。结论 补肾促排卵汤能提高PCOS模型大鼠卵巢颗粒细胞芳香化酶的表达,可能是补肾促排卵汤促进卵泡发育及排出的作用机制之一。      

PPA Rγ激动剂干预对急性胰腺炎小鼠肝损伤的影响

目的：探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮对急性胰腺炎小鼠肝损伤的影响并对其机制进行初步研究。方法72只健康雄性昆明小鼠分为3组,急性胰腺炎组（AP组）、罗格列酮预处理组（AP‐ROS组）和生理盐水组（N S组）,每组24只。分别于建模后6 h、12 h和24 h处死小鼠,全自动生化分析仪检测血清淀粉酶、丙氨酸氨基转移酶（A L T ）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST ）水平。运用RT‐PCR方法检测肝脏组织NF‐κB和PPARγmRNA表达,应用Western blot技术检测肝脏组织PPARγ和NF‐κB p65蛋白表达。结果小鼠血清淀粉酶、ALT 和AST水平在相对应的各时间点AP组比NS组明显升高（P＜0．01）,AP‐ROS组较AP组明显降低（P＜0．01）。AP组肝脏组织PPARγmRNA和蛋白表达在造模后6 h和12 h均低于NS组（P＜0．05）;AP‐ROS组PPARγmRNA和蛋白表达在各时间点均明显高于AP组和NS组（P＜0．01）。AP组肝脏组织NF‐κB mRNA和NF‐κB p65蛋白表达水平在各时间点与AP‐ROS组和NS组相比较均升高（P＜0．01）。结论 NF‐κB与小鼠急性胰腺炎肝损伤有明显关系,PPARγ在肝损伤中的表达受到抑制;罗格列酮在AP早期能增强PPARγ表达,抑制NF‐κB的表达。     

过氧化物酶增殖物激活受体γ抑制肝脏缺血再灌注损伤中Toll样受体4表达的意义

目的研究肝部分缺血再灌注损伤过程中过氧化物酶增殖物激活受体γ（PPARγ）、Toll样受体4（TLR4）和IL-10相互作用的可能机制。方法制作小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型。30只小鼠随机分为4组：罗格列酮组、罗格列酮＋双酚丙控二环氧甘油醚（BADGE）组、BADGE组、对照组。复灌4h取材。采用实时荧光PCR方法检测PPARhTLR4在小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤中的表达,同时检测血清TNF、IL-10、AIT水平。结果罗格列酮组较其它三组PPARγ的表达和血清IL-10水平增高,rrLR4的表达、血清TNF-α和ALT水平较其它三组减弱（P〈0．05）,罗格列酮＋BADGE组、BADGE组及对照组间的PPARγ和TLR4表达无显著差别。结论在鼠肝脏缺血再灌注过程中,罗格列酮激活PPARγ并上调IL-10水平,抑制TLR4表达。     

D-半乳糖诱导小鼠多囊卵巢综合征的动物模型研究

目的 研究D-半乳糖诱导ICR中年雌性小鼠多囊卵巢综合症（PCOS）动物模型的卵巢形态学、性激素以及胰岛素水平变化,并探讨D-半乳糖引致小鼠PCOS的意义。方法 以D-半乳糖腹腔注射20周龄ICR雌性小鼠8周,观察卵巢形态的变化,检测血糖值及动情周期排卵情况,并采用ELISA法测定血清胰岛素、雌二醇（E2）、促卵泡生长激素（FSH）、睾酮（T）水平。结果 D-半乳糖处理组小鼠的卵巢重量显著高于对照组 (P < 0.05),有80%( 10/12) 的单侧或双侧卵巢呈现多囊性扩张,卵巢闭锁增多及颗粒细胞层数减少,并表现为紊乱的动情周期,提示无排卵;与对照组比较,D-半乳糖组小鼠血清T、E2 和空腹血糖水平明显升高（P<0.001）,FSH水平下降（P< 0.0001）,空腹血胰岛素水平显著高于对照组 (P < 0.01),胰岛素敏感指数显著低于对照组 (P < 0.05)。结论 使用D-半乳糖诱导小鼠PCOS模型,无论在影响血清性激素还是卵巢局部形态学改变方面都与临床表现相似,并存在胰岛素抵抗现象,符合PCOS的典型特征,可作为动物模型用于科学研究。     

补肾促排卵汤对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢形态及性激素的影响

目的通过观察补肾促排卵汤对多囊卵巢综合征模型大鼠的性激素、抗苗勒氏管激素(antiMüllerian hormone,AMH)、卵巢形态的影响,探讨补肾促排卵汤治疗多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的作用机制。方法应用补肾促排卵汤作用于以脱氢表雄酮诱导的PCOS大鼠模型,对卵巢进行形态学分析并检测血清性激素、AMH。结果与正常组相比,模型组大鼠卵巢弥漫性囊性重度扩张,可见大小不等的囊腔,粒层细胞被挤压呈扁平或立方形,黄体及各种发育阶段卵泡稀少。补肾促排卵汤能明显改善PCOS模型大鼠成熟卵泡个数、黄体个数、性激素及AMH水平,与模型组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论补肾促排卵汤能改善PCOS模型大鼠血清性激素水平、降低血清AMH及恢复卵巢排卵功能,从而达到治疗多囊卵巢综合征的作用。     

复方肠泰制剂对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜屏障的保护作用

目的：观察复方肠泰制剂在小鼠溃疡性结肠炎中对肠黏膜屏障的保护作用,并探讨其作用机制。方法建立葡聚糖硫酸钠诱导小鼠实验性溃疡性结肠炎模型,实验分为空白组、模型组、不同剂量治疗组（4．3 g／kg与17．1 g／kg）、美沙拉嗪对照组和硫唑嘌呤对照组。造模7d内,观察记录各组小鼠体质量和疾病活动指数变化;采用透射电镜观察各组小鼠结肠的超微结构;HE染色观察各组小鼠炎症;ELISA法测定各组小鼠结肠组织TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-10;蛋白质印迹方法检测各组小鼠结肠组织中ZO-1、Occludin和Claudin-1蛋白的表达。结果模型组小鼠体质量、DAI和结肠长度与空白对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0．05）;结肠组织中TNF-α、IL-6和IFN-γ水平显著降低,差异有统计学意义（P＜0．05）;组织病理显示炎性细胞明显浸润,ZO-1、Occludin和Claudin-1蛋白的表达显著下降,差异有统计学意义（P＜0．05）;高剂量复方肠泰组与空白对照组比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论高剂量复方肠泰制剂对小鼠肠黏膜屏障功能具有一定的保护作用,其机制可能与肠上皮紧密连接蛋白表达升高以及肠道免疫功能调节有关。     

来曲唑诱导多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织中FSH受体的表达及其意义

目的：研究来曲唑诱导的多囊卵巢综合征（PCOS）模型大鼠卵巢组织中促卵泡刺激素受体(FSHR)基因的表达,为该模型的应用提供一定的理论依据。方法：40只雌性SD大鼠随机分为模型组和对照组,每组20只,模型组应用来曲唑诱导大鼠PCOS模型,对照组不作任何处理。应用放射免疫法测定大鼠血清性激素水平;HE染色观察卵巢组织学变化,Real-time-PCR、免疫组织化学和Western blotting法检测FSHR基因在卵巢组织中的表达。结果：与对照组比较,模型组血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)浓度显著增高（P<0.05）,雌二醇(E2)、孕酮(P)浓度降低（P<0.05）。卵巢质量两组间比较差异无显著性(P>0.05)。与对照组比较,模型组可见囊状扩张卵泡明显增多,卵巢白膜增厚,黄体数量明显减少。模型组卵巢组织中FSHR mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组（P<0.05）。结论：来曲唑诱导的PCOS大鼠卵巢组织中FSHR基因表达水平与人类PCOS患者相似,该模型是研究PCOS病理机制的一种理想的动物模型。     

PGC-1ɑ在多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢组织的表达变化

  目的  探讨多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome, PCOS）大鼠模型及肥胖PCOS大鼠模型卵巢组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α（PGC-1α）的表达,以及PCOS 发生的可能机制。  方法  SD大鼠30只,随机分为对照组、PCOS组及肥胖PCOS组,PCOS两组大鼠每日一次予脱氢表雄酮〔DHEA,60 mg/（kg·d）〕溶于0.2 mL注射用大豆油中皮下注射,共21 d,制备PCOS模型,肥胖PCOS模型组大鼠在DHEA制模基础上加入高脂饮食,每组大鼠各10只。造模前（0 d）和造模后第22天称体质量,取腹主动脉血检测血清睾酮（testosterone,T）水平,取大鼠卵巢组织,HE染色观察组织形态学改变,免疫组织化学染色和Western blot检测PGC-1ɑ蛋白表达。  结果   造模前3组大鼠体质量差异无统计学意义,造模后第22天,大鼠增加的体质量以及大鼠血清 T 质量浓度,均为肥胖PCOS组>PCOS组>对照组,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。大鼠卵巢组织HE染色结果显示,对照组大鼠卵巢组织镜下可见不同发育时期的卵泡和少量黄体,颗粒细胞排列多为4～6层;PCOS组及肥胖PCOS组大鼠卵巢组织中未成熟的小卵泡数量明显增加,颗粒细胞1～3层排列、较松散,部分卵泡闭锁,肥胖PCOS组大鼠卵巢闭锁卵泡直径增大,颗粒细胞层数减少,卵母细胞消失等现象更明显。免疫组化染色结果显示,对照组大鼠卵巢组织PGC-1ɑ蛋白阳性表达主要分布于卵丘及颗粒细胞。从PGC-1ɑ蛋白在卵巢组织的表达平均灰度均值来看,PCOS组（0.53±0.06）和肥胖PCOS组（0.36±0.03）均低于对照组（0.75±0.03）,差异有统计学意义（P<0.05）,肥胖PCOS组PGC-1ɑ表达低于PCOS组（P<0.01）。Western blot检测结果与免疫组化染色结果一致。  结论  PGC-1ɑ表达降低与高脂环境下卵巢颗粒细胞损伤有关。PGC-1ɑ在卵巢卵泡的颗粒细胞中表达降低可能是PCOS发生发展的重要原因。     

电针大肠俞募穴对功能性便秘小鼠结肠组织GDNF表达的影响

目的?探讨电针大肠俞募穴治疗功能性便秘的作用机制。方法?32只小鼠随机分为对照组、模型组、针刺组和EGC抑制组。采用复方地芬诺酯灌胃造模法,电针刺激天枢、大肠俞,每次30?min,共治疗5次。运用光镜、电镜、免疫组化及原位杂交技术,观察电针治疗前后结肠组织上皮细胞形态学改变,结肠组织中GDNF蛋白及mRNA表达水平。结果?与对照组比较,模型组结肠组织GDNF蛋白及mRNA表达水平显著降低（P<0.01）。电针刺激大肠俞募穴可提高结肠中GDNF蛋白及其mRNA的表达水平（P<0.05）,光镜和电镜发现针刺可修复受损上皮细胞,进而改善肠道传输功能。EGC抑制组结肠中GDNF蛋白表达与模型组比较无显著性差异（P>0.05）,与针刺组比较显著降低（P<0.05）,GDNF mRNA的表达水平高于模型组（P<0.05）,低于针刺组,但差异无统计学意义（P>0.05）。光镜和电镜下EGC抑制组结肠组织形态改变较为严重。结论?电针刺激大肠俞募穴可提高EGC细胞中GDNF蛋白及其mRNA的表达水平,修复受损结肠上皮细胞,进而改善肠道传输功能。      

基于miR-34a/SIRT1轴探讨奥沙拉秦钠治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的探讨奥沙拉秦钠对溃疡性结肠炎的治疗效果及其与微小RNA-34a/沉默信息调节因子1（SIRT1）（miR-34a/SIRT1）轴在氧化应激方面的可能作用机制。方法80只雄性小鼠随机分为对照组、模型组、（奥沙拉秦钠）低、中、高剂量组、阴性转染组、miR-34a过表达组、高剂量+miR-34a过表达组（HG组）,每组各10只。观察各组小鼠生长情况并计算疾病活动指数（DAI）评分;采用HE染色检测小鼠结肠组织病理变化并计算病理HI评分;qRT-PCR法检测小鼠结肠组织中miR-34a、SIRT1mRNA表达水平;硝酸还原酶法检测各组小鼠结肠组织氧化应激水平;ELISA法检测各组小鼠血清炎性因子水平;Westernblot法检测小鼠结肠组织中SIRT1蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组小鼠DAI评分、HI评分、结肠组织中miR-34a表达水平、丙二醛（MDA）、髓过氧化物酶（MPO）、一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）水平、血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8水平均明显升高（均P＜0.05）,结肠组织中SIRT1mRNA、蛋白表达、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平均明显降低（均P＜0.05）。与模型组相比,低、中、高剂量组小鼠DAI评分、HI评分、结肠组织中miR-34a表达水平、MDA、MPO、NO、iNOS水平、血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8表达水平均明显降低,结肠组织中SIRT1mRNA、蛋白表达、SOD、GSH-Px水平均明显升高（均P＜0.05）。与高剂量组相比,低、中剂量组小鼠DAI评分、HI评分、结肠组织中miR-34a表达水平均明显升高,结肠组织中SIRT1mRNA表达水平均明显降低（均P＜0.05）,miR-34a过表达组与HG组小鼠结肠组织MDA、MPO、NO、iNOS水平、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8表达水平及结肠组织miR-34a表达水平均明显升高,结肠组织SOD、GSH-Px水平及SIRT1蛋白表达水平均明显降低（均P＜0.05）。与阴性转染组相比,miR-34a过表达组小鼠结肠组织MDA、MPO、NO、iNOS水平、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8表达水平及结肠组织miR-34a表达水平均明显升高,结肠组织SOD、GSH-Px水平及SIRT1蛋白表达水平均明显降低（均P＜0.05）。结论奥沙拉秦钠可下调miR-34a并上调SIRT1表达,进而有效抑制溃疡性结肠炎小鼠氧化应激反应及炎症反应实现治疗目的。     

维生素D缺乏与多囊卵巢综合征发病机制的相关性研究

目的：探讨维生素D（vitamin D,VD）缺乏与多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome,PCOS）发病机制之间的关联。方法：检测34例PCOS患者和30例正常健康女性体内VD水平,并对其临床资料进行相关性分析;构建VD缺乏小鼠模型和 PCOS小鼠模型,分为正常对照组（control,CTR组）、PCOS组、VD缺乏组（VD^-组）、VD缺乏联合PCOS组（VD^- +PCOS组）。观察各组小鼠动情周期及卵巢形态改变;检测小鼠血清性激素指标、糖脂代谢指标;实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）法检测各组小鼠卵巢组织中激素合成酶及性激素受体mRNA表达水平。结果：PCOS女性体内25-羟维生素D［25-hydroxyvitamin D,25（OH）D］水平较正常健康女性明显降低［（16.49 ± 6.50）ng/mL vs.（20.08 ± 5.28）ng/mL, P=0.019］。PCOS组血清中黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、睾酮（testosterone,TT）、黄体生成素与卵泡刺激素（follicular- stimulating hormone,FSH）比值即LH/FSH比值、游离雄激素指数（free androgen index,FAI）水平均明显高于对照组,性激素结合蛋白（sex hormone binding globulin,SHBG）水平明显低于对照组,差异均有统计学意义（P < 0.05）。相关性分析结果显示,总样本人群血清25（OH）D水平与LH（r=-0.271,P < 0.05）、LH/FSH 比值（r=-0.314,P < 0.05）、TT（r=-0.276,P < 0.05）、垂体泌乳素（prolactin,PRL）（r=-0.274,P < 0.05）、FAI（r=-0.312,P < 0.05）均呈负相关,PCOS 患者血清 25（OH）D 水平与PRL存在负相关（r=-0.404,P < 0.05）。VD缺乏使小鼠动情周期发生停滞;与CTR组相比,其余各组小鼠血清中LH水平明显升高 （P < 0.05）;与CTR组相比,VD^-组小鼠卵巢组织中雄激素受体（androgen receptor,AR）mRNA表达上调（P < 0.05）。结论：PCOS 患者存在VD缺乏现象,PCOS患者血清25（OH）D水平与PRL存在负相关关系。VD缺乏扰乱了小鼠正常动情周期并影响性激素水平,VD缺乏可能通过调节性激素受体表达来参与PCOS发生。     

PPARγ mRNA在卵巢颗粒细胞的表达调节及与多囊卵巢综合征的相关性

目的:研究PPARγmRNA在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者卵巢颗粒细胞的表达,以及不同浓度的睾酮、胰岛素及罗格列酮对卵巢颗粒细胞细胞核过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)mRNA的表达调节。方法:分别提取5例PCOS患者和30例正常人卵巢颗粒细胞,对PCOS患者及5例正常人(对照组)颗粒细胞应用Real-time PCR方法检测PPARγmRNA表达;剩余25例正常人卵巢颗粒细胞进行体外培养48 h后,分别用含不同浓度的睾酮、胰岛素及PPARγ激动剂(罗格列酮)的培养基培养颗粒细胞24 h后,应用Real-time PCR方法检测PPARγmRNA的表达。结果:PCOS患者卵巢颗粒细胞PPARγmRNA的表达明显低于对照组(P<0.05)。睾酮浓度为1 nmol/L时,PPARγmRNA的表达明显减少(P<0.05);睾酮浓度为10 nmol/L时,PPARγmRNA的表达升高,与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。胰岛素浓度为10 nmol/L时,PPARγmRNA的表达较对照组明显增加(P<0.05);当胰岛素浓度为100 nmol/L时,PPARγmRNA的表达与胰岛素浓度为10 nmol/L时差异无统计学意义(P>0.05)。罗格列酮浓度为1 nmol/L时,PPARγmRNA的表达较对照组明显增加(P<0.05);当罗格列酮浓度为10 nmol/L时,PPARγmRNA的表达较罗格列酮浓度为1 nmol/L时明显增加(P<0.05)。结论:卵巢颗粒细胞PPARγmRNA的表达与睾酮的浓度有关,胰岛素诱导颗粒细胞PPARγmRNA的表达,颗粒细胞PPARγmRNA的表达受PPARγ的正向调节,PCOS患者卵巢颗粒细胞PPARγmRNA的表达异常可能与PCOS的发生有关。     

黄芪对大黄诱导大鼠腹泻的治疗作用及其机制

目的 探讨黄芪对于大黄诱导腹泻大鼠肠道炎症、肠道屏障和肠道菌群的治疗作用,并阐明其可能的作用机制。 方法 50只大鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照组（2.468 g·kg^－1参苓白术散）、低剂量（1.35 g·kg^－1）黄芪组和高剂量（2.70 g·kg^－1）黄芪组,每组10只。采用大黄灌胃结合饮食不节复制大鼠腹泻模型,检测各组大鼠体质量、粪便含水量和腹泻评分;HE染色观察各组大鼠结肠组织病理形态表现,Western blotting法检测各组大鼠结肠组织中蛋白酶激活受体2（PAR-2）、磷酸化p38（p-p38）、肌球蛋白轻链激酶（MLCK）、磷酸化肌球蛋白轻链（p-MLC）、闭锁蛋白1（ZO-1）、闭合蛋白（Occludin）、Toll样受体4（TLR4）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）、髓样分化因子88（MyD88）和核因子κB（NF-κB）蛋白表达水平;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组大鼠血清中胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素10（IL-10）、丙二醛（MDA）和分泌型免疫球蛋白A（SIgA）水平及超氧化物歧化酶（SOD）活性;16S r DNA 基因测序分析各组大鼠肠道菌群情况。 结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量明显降低（P<0.01）,粪便含水量和腹泻评分明显升高（P<0.01）,血清中MTL和GAS水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,阳性对照组、低剂量黄芪组和高剂量黄芪组大鼠体质量明显升高（P<0.01）,粪便含水量和腹泻评分明显降低（P<0.01）,血清中MTL和GAS水平明显降低（P<0.01）。HE染色,与对照组比较,模型组大鼠结肠组织上皮黏膜损伤,有大量炎症细胞浸润,腺体排列紊乱;与模型组比较,阳性对照组和高剂量黄芪组大鼠结肠组织上皮黏膜结构较规则,炎症细胞浸润较少,未见明显腺体紊乱,低剂量黄芪组大鼠结肠组织上皮黏膜结构可见轻微损伤,有部分炎症细胞浸润,腺体排列较整齐。Western blotting法检测,与对照组比较,模型组大鼠结肠组织中PAR-2、MLCK、TLR4、TRAF6、MyD88、NF-κB、p-p38和p-MLC蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,ZO-1和Occludin蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与模型组比较,阳性对照组、低剂量黄芪组和高剂量黄芪组大鼠结肠组织中PAR-2、MLCK、TLR4、TRAF6、MyD88、NF-κB、p-p38和p-MLC蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,ZO-1和Occludin蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。与对照组比较,模型组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平明显升高（P<0.01）,IL-10和SIgA水平及SOD活性明显降低（P<0.01）;与模型组比较,阳性对照组、低剂量黄芪组和高剂量黄芪组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平明显降低（P<0.01）,IL-10和SIg A水平及SOD活性明显升高（P<0.01）。肠道菌群检测,在门水平上,与对照组比较,模型组大鼠肠道菌群中变形菌门和疣微菌门丰度明显升高（P<0.01）;与模型组比较,低和高剂量黄芪组大鼠肠道菌群中变形菌门和疣微菌门丰度明显降低（P<0.01）,高剂量黄芪组大鼠肠道菌群中ε-变形菌门丰度明显升高（P<0.01）。 结论 黄芪对大黄诱导的腹泻模型大鼠有治疗作用,其机制可能与通过TLR4/TRAF6/NF-κB信号通路抑制肠道炎症,进而修复肠道屏障,恢复肠道菌群组成有关。     

三七皂苷通过PPARγ调控SIRT1介导的狼疮肾炎小鼠脾淋巴细胞激素耐药及脂代谢影响的研究

[目的]观察三七皂苷(Panax notoginseng saponin,PNS)对激素耐药狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)小鼠脾淋巴细胞过氧化物酶增殖体活化受体γ(peroxidase proliferator activated receptor gamma,PPARγ)、沉默信息调节因子相关酶1(silent information regulation factor related enzyme 1,SIRT1)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(adenosine triphosphate binding cassette transporter A1,ABCA1)表达的影响,探索PNS改善激素耐药和脂代谢紊乱的双重作用,为运用活血化瘀中药提高难治性LN临床疗效提供科学依据。[方法]采用密度梯度法分离NZB/WF1小鼠的脾淋巴细胞,用小剂量甲基强的松龙诱导细胞产生激素耐药,将诱导后的细胞分为模型组、PPARγ质粒转染组、PPARγsi RNA+PNS组和PNS组,并以未诱导耐药的NZB/WF1小鼠脾淋巴细胞作为对照组,各组细胞培养72h后以Real-time PCR检测各组淋巴细胞PPARγ和SIRT1 m RNA表达,Western blot检测PPARγ和SIRT1蛋白表达,荧光分光光度法检测细胞内胆固醇酯含量,流式细胞术检测ABCA1蛋白表达。[结果](1)上调PPARγ能抑制SIRT1高表达,模型组PPARγm RNA和蛋白表达水平均低于对照组,SIRT1 m RNA和蛋白表达水平均高于对照组(P0.05);通过质粒转染上调PPARγ水平后,PPARγ质粒转染组的SIRT1 m RNA和蛋白表达水平均低于模型组(P0.05);(2)PNS组PPARγ表达高于模型组,SIRT1表达则减低(P0.05)。尽管PNS组PPARγm RNA表达水平低于PPARγ质粒转染组,但两组SIRT1 m RNA表达水平无统计学差异(P0.05);与模型组比较,PPARγsi RNA+PNS组的SIRT1 m RNA和蛋白表达水平均下降(P0.05)。(3)PNS具有调节细胞内脂代谢紊乱作用,模型组细胞内胆固醇酯含量低于对照组(P0.05);PNS组细胞内胆固醇酯含量高于对照组,ABCA1蛋白表达则低于对照组(P0.05)。[结论](1)激素耐药的LN小鼠脾淋巴细胞内存在脂代谢紊乱。(2)PNS具有逆转激素耐药和调节细胞内脂代谢紊乱的双重效应。     

溪黄草黄酮对小鼠非酒精性脂肪肝纤维化的影响及其机制探讨

观察不同浓度溪黄草黄酮（FRSH）对非酒精性脂肪肝纤维化小鼠的影响,并探讨初步机制。方法将小鼠随机分为5 组：对照组、模型组及FRSH 低、中、高剂量组（FRSH-L、FRSH-M、FRSH-H）。检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）和谷氨酸氨基转移酶（AST）平;苏木精- 伊红染色法观察肝脏组织的病理状态;Western blot检测肝组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肝组织中转化生长因子-β（TGF-β）、过氧化物酶体增殖物活化受体-γ（PPARγ）mRNA 的表达。结果与模型组比较,FRSH 能够降低血清中ALT、AST 的含量,并改善肝组织的脂肪变性,减轻症、坏死程度;肝组织中TIMP-1 蛋白和TGF-β mRNA 表达降低,MMP-9蛋白和PPARγ mRNA表达增加。结论FRSH能抑制非酒精性脂肪性肝纤维化的发生、发展,可能与MMP-9、TIMP-1、TGF-β 及PPARγ 的表达相关。