HPLC法同时测定蟾酥透皮贴剂中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量

目的:研究HPLC法测定蟾酥透皮贴剂中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量。方法 :Kromasil C18色谱柱(5μm,200 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-水(50∶50),流速1.0 mL/min,检测波长296 nm。结果:华蟾酥毒基在0.2632~1.5792μg范围内呈线性关系,平均回收率为99.30%,RSD=1.19%(n=6);脂蟾毒配基在0.3208~1.9248μg范围内呈线性关系,平均回收率99.09%,RSD=1.06%(n=6)。结论:该方法准确、灵敏、重现性好,可用于蟾酥透皮贴剂的质量控制。     

反相HPLC法同时测定牛黄消炎丸中华蟾酥毒基、酯蟾酥配基的含量

目的:建立用反相HPLC法同时测定牛黄消炎丸中华蟾酥毒基、酯蟾毒配基含量的方法.方法:采用反相HPLC法测定华蟾酥毒基、酯蟾毒配基的含量,色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(25mm×5μm,麦科菲);乙腈-0.5%磷酸二氢钾溶液(40:60)(用磷酸调pH值至3.2)为流动相,检测波长为296nm,柱温为40oC.结果:华蟾酥毒基进样量在0.2578μg～1.5468μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999,回归方程Y=768131x-16329,平均回收率为97.67%(n=6):酯蟾毒配基进样量在0.2482μg～1.4892μg范围内,与峰面积里良好的线性关系,r=0.9999,回归方程Y=727051x-18342,平均回收率为100.07%(n=6).结论:定量方法操作简便、结果可靠,可用于牛黄消炎丸中蟾酥的质量控制.     

RP -HPLC法同时测定蟾麝救心滴丸中蟾酥华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量

目的建立采用RP—HPLC法同时测定蟾麝救心滴丸中蟾酥华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量的方法。方法采用反相HPLC法测定华蟾酥毒基、酯蟾毒配基的含量,C18色谱柱;流动相：乙腈-水,梯度洗脱（0→25min,56：44;26→44min,0：100;45→50min,56：44,V／V）,流速：1．0ml／min,检测波长为296nm,柱温为35℃。结果华蟾酥毒基在0．2118—2．118μg范围内呈现良好的线性关系（r=0．9997）,平均回收率为99．49％,RSD值为1．2％（n=6）;酯蟾毒配基在0．2012—2．012μg范围内,呈现良好的线性关系（r=0．9996）,平均回收率为99．97％,RSD值为1．7％（n=6）。结论RP-HPLC法简便可行、准确、重现性好,可作为蟾麝救心滴丸中蟾酥华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量测定方法。     

HPLC法测定"心力丸"中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量

目的建立测定心力丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量的方法。方法采用反相高效液相色谱法,色谱柱Spherisorb C18(5μm,4.6mm×200 mm),流动相为0.5%(ω)磷酸二氢钾溶液-乙腈(体积比60∶40)(用磷酸调节pH值为3.2),流速1.0 mL/m in,柱温35℃,检测波长为296 nm。结果华蟾酥毒基回收率99.20%,RSD=1.27%;脂蟾毒配基回收率99.40%,RSD=0.86%。结论本法简便、准确,可用于控制该制剂质量。     

HPLC法同时测定救心丸中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量

目的：建立救心丸中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量测定方法。方法：色谱柱：C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;柱温：40℃;流动相：乙腈-0.5%磷酸二氢钾（pH=3.2）（50∶50）;流速：1.0 ml/min;检测波长：296 nm。结果：华蟾酥毒基在0.498～2.490μg范围内线性关系良好;脂蟾毒配基在0.570～2.850μg范围内线性关系良好。结论：本方法简便、准确,重复性好,可作为救心丸的质量控制方法。     

HPLC法测定仙蟾胶囊中士的宁、脂蟾毒配基和华蟾酥毒基

目的 建立仙蟾胶囊中士的宁、脂蟾毒配基与华蟾酥毒基的高效液相色谱法测定.方法 士的宁:采用Intersil-ODS3色谱柱;流动相:乙腈-0.01 mol/L十二烷基磺酸钠-0.01 mol/L磷酸二氢钾(40∶30∶30,冰醋酸调节pH值4.0);检测波长:254 nm;体积流量:1.2 mL/min;柱温:室温;脂蟾毒配基与华蟾酥毒基:采用Hypersil C18色谱柱;流动相:0.5%醋酸铵-乙腈(50∶50,氨水调节pH值7.0);检测波长:296 nm;体积流量:0.6 mL/min;柱温:40℃.结果 士的宁、脂蟾毒配基、华蟾酥毒基分别在4.2～41.6、10.8～108.0、9.4～94.0 μg/mL与峰面积的线性关系良好.加样回收率分别为101.8%、97.6%、98.4%,RSD均小于2%.结论 本方法操作简便,灵敏度高,结果准确,重现性好,为仙蟾胶囊的质量控制提供了较全面的定量分析方法.     

脂蟾毒配基、华蟾酥毒基、蟾毒灵配伍对BEL-7402人肝癌细胞的抑制作用

目的:研究蟾酥中脂蟾毒配基、华蟾酥毒基和蟾毒灵三种成分单体及配伍对BEL-7402人肝癌细胞的抑制作用。方法:采用MTT法测定蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基单体不同浓度和时间点,三种成分两两配伍以及三种成分配伍对BEL-7402人肝癌细胞增殖的抑制作用。结果:蟾毒灵对BEL-7402人肝癌细胞增殖的抑制作用最强,其次是华蟾酥毒基,脂蟾毒配基的作用最弱;脂蟾毒配基不能增强华蟾酥毒基、蟾毒灵的作用,且有抑制作用的趋势;华蟾酥毒基与蟾毒灵混合使用与单独使用的抑制作用无明显区别。结论:欲发挥三种成分的抗肿瘤作用,应该单独使用,或者华蟾酥毒基与蟾毒灵混合使用。     

HPLC法测定花蟾胶囊中脂蟾毒配基的含量

目的:测定花蟾胶囊中脂蟾毒配基的含量,控制制剂质量。方法:采用高效液相色谱法,色谱条件:La-bAlliance高效液相色谱仪,紫外检测器,Diamonsil C18色谱柱(5μm,250mm×4.6mm),检测波长296nm,流动相:0.5%磷酸二氢钾:乙腈(50:50),柱温30℃。结果:脂蟾酥毒配基在0.16～16μg范围线性关系良好,回归方程Y=25735876.5X+23179.5,r=0.99987,精密度、重复性、稳定性良好,平均回收率99.42%。结论:该方法操作简便可行,测定结果可靠,能准确监控该制剂的质量。     

脂蟾毒配基、华蟾酥毒基、蟾毒灵不同配伍的镇痛作用比较

目的:研究蟾酥中脂蟾毒配基、华蟾酥毒基和蟾毒灵三种成分配伍后的镇痛效果,以筛选出三种成分的最佳配伍方式。方法:采用醋酸致小鼠扭体法进行镇痛实验研究。结果:蟾毒灵的镇痛作用最强,其次是华蟾酥毒基,脂蟾毒配基的作用最弱;脂蟾毒配基用量较大时,与华蟾酥毒基配伍表现为相互的抑制作用,用量较小时则为协同作用;脂蟾毒配基与蟾毒灵配伍表现为相互的抑制作用;华蟾酥毒基与蟾毒灵配伍主要表现为蟾毒灵的镇痛作用;三者共同配伍时,未表现出相互间的协同或抑制作用。结论:欲发挥三种成分的镇痛作用,应该单独使用,或者华蟾酥毒基与蟾毒灵混合使用,以保证其安全性、有效性和质量可控性。     

HPLC测定静脉给药后大鼠血清中得力生注射液中酯蟾毒配基与柔红霉素的含量

目的:建立大鼠血清中酯蟾毒配基与柔红霉素浓度的测定方法。方法:血清经乙酸乙酯提取,炔诺酮(酯蟾毒配基)、多柔比星(柔红霉素)作内标,采用高效液相色谱法测定酯蟾毒配基与柔红霉素浓度。色谱柱:phenomenex C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢铵溶液(pH 4.65)-冰醋酸(V∶V∶V=30∶20∶0.1)(柔红霉素),乙腈-水(55∶45)(酯蟾毒配基),检测波长:柔红霉素233 nm;酯蟾毒配基296 nm。结果:酯蟾毒配基在55.0～8800μg/L范围内,柔红霉素在0.1478～14.778 mg/L范围内,待测物与内标物的峰面积与浓度呈现良好线性关系,r=0.9997(酯蟾毒配基),r=0.9984(柔红霉素),平均回收率均>80%,日内、日间RSD均<5%(n=3)。结论:该方法快速、简便、准确,适合于临床得力生注射液与柔红霉素浓度的监测。     

干蟾皮药材中华蟾酥毒基的含量测定

目的建立了干蟾皮中华蟾酥毒基的含量测定方法。方法色谱法：采用Waters Xbridge C18反相色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相：0.5%磷酸二氢钠溶液∶乙腈（52∶48）加磷酸调pH 3.2;检测波长为294 nm;流速：1 mL/min;柱温为室温。结果华蟾酥毒基在进样量2.5~15.0μg（r=0.9999）范围内呈良好的线性关系,线性回归方程y=-4×107x-10 196（r=0.9999）;溶液精密度、重复性均良好;在12 h内测定,其稳定性最佳;溶液加样回收实验考察得平均回收率为97.4%,RSD=2.8%。5批干蟾皮药材的含量分别为0.012、0.009、0.013、0.011、0.007 mg/g,平均含量为0.010 mg/g。结论本方法建立的色谱条件科学、快速、稳定,可作为干蟾皮药材内在质量的控制方法。     

微乳毛细管电泳法测定蟾酥及其制剂中蟾毒内酯类成分的含量

目的应用微乳毛细管电泳法测定蟾酥及其制剂中蟾毒内酯类成分的含量。方法运行微乳缓冲液由0.81%正庚烷、6.61%正丁醇、3.31%SDS及89.27mmol/L硼砂溶液组成,pH=9.2。运行电压15kV(恒压分析);柱温40℃;检测波长298nm。结果华蟾毒精和酯蟾毒配基的线性范围分别为54.8~548.0mg/L及51.6~516.0mg/L;平均回收率分别为97.29%~99.82%(RSD为1.86%~2.91%,n=6)及97.52%~101.69%(RSD为2.14%~3.02%,n=6)。结论该方法简便、准确、重现性好,可作为蟾酥及其制剂中蟾毒内酯类成分的质量控制方法。     

High Performance Liquid Chromatography Determination of Serum after Intravenous Injection in Delisheng Toad Poison Ester Ligand and Daunorubicin Content

目的:建立大鼠血清中酯蟾毒配基与柔红霉素浓度的测定方法.方法:血清经乙酸乙酯提取,炔诺酮(酯蟾毒配基)、多柔比星(柔红霉素)作内标,采用高效液相色谱法测定酯蟾毒配基与柔红霉素浓度.色谱柱:phenomenex C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢铵溶液(pH 4.65)-冰醋酸(V:V:V=30:20:0.1)(柔红霉素),乙腈-水(55:45)(酯蟾毒配基),检测波长:柔红霉素233 nm；酯蟾毒配基296 nm.结果:酯蟾毒配基在55.0～8800 μg/L范围内,柔红霉素在0.1478～14.778 mg/L范围内,待测物与内标物的峰面积与浓度呈现良好线性关系,r=0.9997(酯蟾毒配基),r=0.9984(柔红霉素),平均回收率均＞80％,日内、日间RSD均＜5％(n=3).结论:该方法快速、简便、准确,适合于临床得力生注射液与柔红霉素浓度的监测.     

均匀设计法筛选蟾酥贴剂的透皮吸收促进剂

目的筛选蟾酥贴剂的复合型透皮吸收促进剂。方法以裸鼠皮肤为实验屏障,应用均匀设计法从氮酮、丙二醇、油酸中选择蟾酥贴剂的最佳吸收促进剂及其最佳配比。结果氮酮、丙二醇、油酸的质量分数配比为6%∶10%∶0%时,蟾酥贴片中的蟾酥有最大的透皮速率常数。结论氮酮丙二醇复合透皮吸收促进剂可促进蟾酥中蟾毒内酯类成分的透皮吸收。     

复方鸦胆子油软胶囊质量标准及初步药效学研究

目的:建立复方鸦胆子油软胶囊的质量控制方法,观察复方鸦胆子油软胶囊制剂对S180肿瘤模型小鼠的治疗作用。方法:采用薄层色谱法对复方鸦胆子油软胶囊中的鸦胆子和蟾皮进行定性鉴别,采用气相色谱法对复方鸦胆子油软胶囊中的油酸进行含量测定,采用高效液相色谱法对复方鸦胆子油软胶囊中脂蟾毒配基和华蟾酥毒基总含量进行测定;通过S180腹水型肿瘤细胞建立肿瘤模型,以抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数为考察指标,观察复方鸦胆子油软胶囊对肿瘤小鼠的治疗作用。结果:TLC鉴别方法分离度良好、斑点清晰;油酸在0.270 4 mg/mL~1.622 4 mg/mL范围线性关系良好,平均回收率95%~105%;脂蟾毒配基和华蟾酥毒基在0.005 6 mg/mL~0.061 6 mg/mL范围线性关系良好,平均回收率95%~105%;用S180腹水型肿瘤可以成功地制备小鼠肿瘤模型,复方鸦胆子油软胶囊具有治疗作用。结论:本方法专属性强、结果准确、耐用性好,可很好地控制复方鸦胆子油软胶囊的质量,值得进一步开发研究。     

高效液相色谱法测定心可宁胶囊中华蟾毒配基的含量

目的:建立高效液相色谱法测定心可宁胶囊中华蟾毒配基的方法。方法:采用Zorbax ODS（250mm×4.6mm,5μm）为色谱柱,以甲醇:水（75:25）为流动相,流速:0.5ml·min¹紫外检测器波长:296nm,用索氏提取器提取心可宁胶囊中的华蟾毒配基。结果:华蟾毒配基的浓度在（0.02725～0.13625）μg·ml^-1（r=0.9994,n=5）范围内线性关系良好,平均回收率为99.07%。结论:本方法操作简便、精密度好、回收率高、稳定可靠、适用于心可宁胶囊的质量控制。     

蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基大鼠体内药动学研究

目的 建立检测大鼠血浆中3种蟾蜍甾烯类化合物蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的HPLC法,并用于蟾酥在大鼠体内的药动学研究。方法 分别于大鼠尾iv给予蟾酥提取物0.8 mg/kg后2、5、10、15、20、30、45、60、90 min,眼眶取血,采用乙腈沉淀蛋白与液液萃取相结合方法进行血浆样品预处理,以HPLC法测定大鼠血浆中蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的质量浓度,以Kinetica软件拟合药动学参数。结果 蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基均得到很好的分离,重现性、精密度、线性关系良好,达到体内分析要求;经非房室模型拟合,得到蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基在大鼠体内主要药动学参数;iv给药30 min时,血药浓度均降至C_max的1/5以下。结论 建立的蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基血药浓度测定方法操作简单、结果准确可靠;蟾蜍甾烯类成分在大鼠体内代谢较为迅速,所得数据可为蟾酥提取物的药动学研究提供参考。     

RP-HPLC法测定梅花点舌丸中脂蟾毒配基、华蟾毒配基的含量

目的：建立梅花点舌丸中脂蟾毒配基、华蟾毒配基的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法，使用C18柱，乙腈－0．5％KH2PO4溶液（50：50）为流动相，检测波长：296nm。结果：此方法线性关系良好，脂蟾毒配基的平均加样回收率为97．40％，RSD为2．22％。华蟾毒配基的平均加样回收率为97．78％，RSD为2．63％。结论：方法简便、可靠，分离度较好，结果稳定，可用于梅花点舌丸的质量控制。     

华蟾素实验研究及临床应用概况

<正> 华蟾素(Cinobufotalin)是中华大蟾蜍全皮中提取的水溶性制剂。近年来,国内对华蟾素的实验研究不断深入,其临床应用范围也不断拓展。现就其实验研究及临床应用概况综述如下。 1 实验研究 1.1 化学成分:华蟾素注射液是传统性生物药蟾酥的灭菌水溶性制剂,蟾酥含多种成份:华蟾蜍毒素,华蟾蜍素,华蟾蜍次素,去乙酰华蟾蜍素,蟾蜍配基,椿氨酸,辛二酸等。脂蟾毒配基,蟾毒灵和华蟾毒精是蟾酥的主要毒性和活性成分,通过对中华大蟾蜍皮的化学成份研究,发现其抗癌有效成分有四个蟾蜍毒素:蟾毒灵3—丁二酰精氨酸酯(Ⅱ),蟾毒它灵3—丁二酰精氨酯(Ⅰ),华蟾毒精3—丁二酰精氨酸酯(Ⅲ),脂毒素酯基3—丁二酯精氨酸酯(Ⅳ)。     

HPLC法同时测定不同产地蟾酥中的5种活性成分

目的 建立了同时测定蟾酥中活性成分的HPLC方法,并对5个不同产地的药材中5种活性成分进行测定。方法 采用HPLC法测定,色谱柱为Hypersil ODS柱（250 mm×4.6 mm,25 μm）,流动相为醇-水（50∶50）,检测波长296 nm,柱温30 ℃,体积流量1 mL/min,并在此色谱条件下测定不同产地经60%甲醇回流提取的蟾酥样品中活性成分的量。结果 各成分的质量浓度和峰面积具有良好的线性关系,且有很好的分离度。日蟾毒它灵、蟾毒灵、沙毒精、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基平均回收率为99.9%、99.6%、97.9%、96.7%、99.5%,RSD为2.8%、3.2%、1.9%、1.0%、3.4%。不同产地蟾酥样品的HPLC色谱图差别明显,所含成分的种类和质量分数差异较大。结论 本方法简便、灵敏度高,具有实用性,可作为蟾酥药材的质量控制方法。