徐州市1999年大肠埃希菌O157:H7动物发病及带菌情况调查

目的：了解徐州市不同地区大肠埃希菌O157：H7出血性肠炎流行季节动物的发病及带菌率。方法：在不同流行强度的地区调查点，调查猪、鸡、牛、羊的发病情况；并采集其粪便，用免疫磁珠法进行病原分离培养。结果：6个调查点共调查动物565头，发病35头，罹患率6．19％；共采集猪、鸡、牛、羊等动物粪便标本901份，分离出大肠埃希菌O157：H7 130株，总带菌率14．4％，其中以牛、羊带菌率较高，分别为21．9％、19．4％。结论：在大肠埃希菌O157：H7出血发表怕炎流行季节各种动物都有不同比例发病，不同地区的动物带菌率也不尽相同。提示加强动物大肠埃希菌O157：H7发病率及带菌率的调查对疫情分析与疾病控制有重要意义。     

徐州市1999年大肠埃希菌O_(157)∶H_7动物发病及带菌情况调查

目的　了解徐州市不同地区大肠埃希菌O157∶H7出血性肠炎流行季节动物的发病及带菌率。方法　在不同流行强度的地区设调查点 ,调查猪、鸡、牛、羊的发病情况 ;并采集其粪便 ,用免疫磁珠法进行病原分离培养。结果　 6个调查点共调查动物 5 65头 ,发病 3 5头 ,罹患率 6 19% ;共采集猪、鸡、牛、羊等动物粪便标本 90 1份 ,分离出大肠埃希菌O157∶H713 0株 ,总带菌率 14 4% ,其中以牛、羊带菌率较高 ,分别为 2 1 9%、 19 4%。结论　在大肠埃希菌O157∶H7出血性肠炎流行季节各种动物都有不同比例发病 ,不同地区的动物带菌率也不尽相同。提示加强动物大肠埃希菌O157∶H7发病率及带菌率的调查对疫情分析与疾病控制有重要意义。     

免疫磁珠富集-实时荧光PCR检测生畜肉中大肠埃希菌O157∶H7的实验研究

目的 建立免疫磁珠富集(immunomagnetic separation,IMS)-实时荧光PCR(q PCR)技术快速检测肠出血性大肠埃希菌O157∶H7的方法。方法 根据肠出血性大肠埃希菌O157∶H7抗原特异性基因rfb EO157设计引物和Taq Man探针,建立q PCR检测体系;对样品中的O157∶H7大肠埃希菌用出血性大肠O157抗体标记免疫磁珠进行特异性捕获,再利用q PCR技术对磁珠吸附的菌株进行检测。结果 采用IMS-q PCR方法检测,当25 g样本中菌量为100cfu,样品被1∶2稀释时,检测结果呈阳性,检测全过程需时2~3 h。结论 IMS-q PCR检测O157∶H7大肠埃希菌的方法具有灵敏度高、特异性强、快速等优点,可用于大肠埃希菌O157∶H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

南宁市O157大肠埃希菌的监测研究

目的探讨南宁市肠出血性O157大肠埃希氏菌人感染、动物和媒介昆虫带菌状况。方法2008年所采集的腹泻病人粪便、动物粪便和苍蝇等标本,经处理后接种mEC肉汤增菌,先用免疫胶体金标法做初筛,阳性标本用免疫磁珠浓缩目标菌,划线接种CHROMagarO157显色琼脂平板,纯化后进行血清学诊断,然后集中进行系统生化鉴定和毒力检测等。结果共检测1083份标本,检出10株O157大肠埃希菌,总阳性率为0．92％,其中猪粪便为9．38％,牛粪为4．00％。苍蝇为4．35％,鸡粪为0．49％,腹泻病人粪便和鸭粪均未能出O157大肠埃希菌,部分标本中检出与0157大肠埃希菌有相关抗原的致病性大肠埃希菌（EPEC）和未能定型的大肠埃希氏菌;对所检出10株O157菌做SLT1、SLT2、eaeA、hlv44种毒力基因的检测,发现3株菌（同一猪场的1份猪粪便和2份苍蝇中检出eaeA＋hly44阳性,未见含有SLT1 SLT2基因,其他菌株SLT1 SLT2eaeAhlyA．均为阴性。结论南宁市养殖场部分动物体携带有一定程度致病力的O157大肠埃希菌,并已造成了周围环境污染,威胁人们的生命健康,提示加强宿主动物O157大肠埃希菌监测和研究是防止未来大流行的关键。     

Initial research on bioactive of EHEC O157:H7 bacterial ghosts

目的 制备肠出血性大肠埃希菌 O157:H7细菌菌影,在细胞及动物水平对其生物学活性进行初步评价.方法 将包含噬菌体phiX174裂解基因E的重组质粒pLSE转化肠出血性大肠埃希菌O157:H7 EDL933及大肠埃希菌DH5α,42℃诱导制备菌影.利用间接免疫荧光实验观察菌影主要抗原结构,并利用电镜观察菌影对Hep-2细胞的黏附.将菌影免疫小鼠后,采用间接ELISA法检测小鼠特异性抗体,并通过小鼠攻毒实验考察菌影的保护效果.结果 成功构建了重组质粒pLSE,制备出O157:H7及DH5α菌影.O157:H7菌影保留了病原菌的主要外膜抗原,能紧密黏附细胞Hep-2但并不侵入细胞.O157:H7菌影免疫雄性BALB/c小鼠诱导特异性IgG抗体的产生.攻击试验结果显示小鼠对致死剂量O157:H7 EDL933强毒株的保护率达到80%.结论 O157:H7菌影的成功制备及生物学活性的初步析为研制O157:H7菌影疫苗奠定了基础.     

天津市蓟县大肠杆菌O157；H7带菌动物监测及防治

为了解天津市蓟县动物大肠杆菌O157：H7的带菌情况，做好大肠杆菌O157：H7感染的预防与控制工作，作者于2001年8月在全县范围开展易携带病原菌的猪、牛、羊、鸡等家畜家禽的监测工作，共采集动物粪便标本403份，用增菌培养法从3份羊粪标本中检出5株大肠杆菌O157；H7（经流研所PCR鉴定），检出率为0.74%。本次是天津市首次从羊粪中检出大肠杆菌O157：H7，证实羊是天津市带菌动物之一。今后开展大肠杆菌O157：H7防治工作的关键在于加强腹泻病人及带菌动物监测，管好传染源，做好饮食饮水卫生，把住“病从口入关”。     

江苏省建湖地区肠出血性大肠杆菌O157：H7监测分析

目的 了解建湖地区腹泻患者肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染情况,家禽、家畜O157∶H7带菌情况,水源水中O157∶H7污染情况. 方法 在2008年5月-9月采集腹泻患者和家禽、家畜的粪便以及水源水、肉制品、苍蝇等标本计836份,应用免疫磁珠浓集、山梨醇麦康凯琼脂(SMAC)分离、生化和血清学反应进行鉴定.结果 共检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7 阳性标本17份,其中腹泻患者阳性率为1.15%,4种动物粪便、肉制品均检出阳性标本,但水、苍蝇标本中均未检出阳性.菌株对青霉素耐药性最高,达100%,对其他受试抗生素均敏感.结论 该地区腹泻患者和家禽、家畜中存在肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染,且具潜在的流行性危险.     

肠出血性大肠埃希菌O157:H7菌影生物学活性的初步研究

目的制备肠出血性大肠埃希菌O157∶H7细菌菌影,在细胞及动物水平对其生物学活性进行初步评价。方法将包含噬菌体phiX174裂解基因E的重组质粒pLSE转化肠出血性大肠埃希菌O157∶H7 EDL933及大肠埃希菌DH5α,42℃诱导制备菌影。利用间接免疫荧光实验观察菌影主要抗原结构,并利用电镜观察菌影对Hep-2细胞的黏附。将菌影免疫小鼠后,采用间接ELISA法检测小鼠特异性抗体,并通过小鼠攻毒实验考察菌影的保护效果。结果成功构建了重组质粒pLSE,制备出O157∶H7及DH5α菌影。O157∶H7菌影保留了病原菌的主要外膜抗原,能紧密黏附细胞Hep-2但并不侵入细胞。O157∶H7菌影免疫雄性BALB/c小鼠诱导特异性IgG抗体的产生。攻击试验结果显示小鼠对致死剂量O157∶H7 EDL933强毒株的保护率达到80%。结论 O157∶H7菌影的成功制备及生物学活性的初步析为研制O157∶H7菌影疫苗奠定了基础。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7流行病学调查

目的 了解芜湖县动物宿主携带肠出血性大肠杆菌 O157:H7的情况,为防治工作提供依据.方法 选择芜湖县境内家畜粪便、水样以及各类养殖场饲料等标本821份,以免疫磁珠法和血清学方法检测EHEC O157:H7.结果 821份标本检出1株EHEC O157:H7,检出率为0.12%.结论 芜湖县部分动物携带EHEC O157:H7.     

南平市2007-2009年食源性致病菌污染状况

目的了解南平市市售食品中食源性致病菌污染状况及分布和高危食品种类。方法在全国食品污染物监测网与食源性疾病监测网控制体系下,2007-2009年采集4个监测点内的7大类市售食品共计208份,对沙门菌、单核细胞增生性李斯特菌、O157∶H7出血性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌以及副溶血性弧菌5种食源性致病菌进行监测分析。结果 208份食品样品中,分离出目标菌38株,总检出率18.27%。其中生肉类、水产品检出率最高,分别为38.46%（15/39）和73.08%（19/26）,其次为速冻米面,检出率20.00%（4/20）。监测的5种食源性致病菌均有检出,各类食品中沙门菌和副溶血性弧菌的检出率最高,分别为33.33%和50.00%;O157∶H7检出率为0.68%;金黄色葡萄球菌及单核细胞增生性李斯特菌检出率为4.22%和1.79%。O157∶H7经毒力检测存在产志贺毒素。结论通过连续3年对南平市市售食品中食源性致病菌的主动监测,掌握了食源性致病菌的污染状况、高危食品以及5种食源性致病菌在不同食品中的分布情况。     

大肠杆菌O157∶H7异硫氰酸荧光素标记抗体的制备及评价

目的:制备高效价、高纯度、特异性好、荧光强度高及稳定的抗大肠杆菌O157∶H7 异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体,初步探讨其在大肠杆菌荧光免疫检测试验中的应用。方法：复苏培养E.coli O157∶H7标准菌株,甲醛灭活制备疫苗免疫家兔。4次免疫后,颈动脉采血分离血清,经辛酸-饱和硫酸铵法粗提后应用蛋白亲和层析柱HiTrap Protein G HP进行 gG纯化,借助SDS-PAGE电泳、BCA试剂盒法、间接ELISA法分别对蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价进行测定。应用不同FITC与蛋白量比值以及不同标记反应条件对多克隆抗体进行标记。比较荧光抗体F485/535,结合差异性显著分析对FITC与蛋白量比值及反应条件进行合
理选择,应用标记抗体与E.coli O157∶H7和金黄色葡萄球菌混合菌液反应验证标记效果。结果：HiTrap Protein G进行E.coli O157∶H7多克隆抗体纯化的最佳纯化方法为35%、100%二梯度洗脱,制备抗体效价为1∶25　600,与沙门氏菌、阴沟肠杆菌等8种肠杆菌无交叉反应,最佳FITC与蛋白量比值为1∶10,最佳标记反应条件为20℃、2 h。由最佳条件制得的荧光抗体与E.coliO157∶H7反应明显 ,强荧光连续照射15 min后仍显示高亮度荧光反应,且不与金黄色葡
萄球菌反应。结论：本实验首次制备出纯度高、荧光强度高、持续时间长的E.coli O157：H7 FITC标记多克隆抗体,为E.coli O157：H7荧光免疫检测方法的建立完成了关键步骤。
     

免疫磁捕获-PCR检测大肠杆菌O157

目的使用免疫BMPs,对牛粪标本中的大肠杆菌O157进行免疫磁捕获,再对捕获物进行PCR检测,研究免疫磁捕获-PCR检测牛粪标本中大肠杆菌O157的方法。方法从磁性细菌中获取BMPs,将大肠杆菌O157抗体接种于BMPs表面,制成免疫BMPs。使用免疫BMPs,对大肠杆菌O157∶H7浓度为1×103cfu/g的牛粪标本,进行免疫磁捕获,对捕获物以vt1（Vero毒素1基因）、vt2（Vero毒素2基因）为增扩对象,进行PCR检测。作为对照,相同牛粪标本,直接对牛粪标本以vt1、vt2为增扩对象,进行同样PCR检测。结果相同牛粪标本,经免疫BMPs捕获处理,捕获物的PCR结果显示vt1及vt2基因阳性。而未经免疫磁捕获处理的牛粪标本,直接PCR检测的结果显示阴性。结论对牛粪标本,利用免疫BMPs,可捕获目标抗原,同时还可去除牛粪中存在的PCR反应抑制物等影响因素,提高检测敏感度。     

金乡县2005～2008年动物粪便O_(157)∶H7大肠杆菌带菌监测情况分析

目的为进一步摸清O157∶H7大肠杆菌在本地区动物携带情况,于2005～2008年采集金乡县部分农家动物粪便共计1654份。方法用免疫磁珠富集方法捕获O157∶H7,接种于山梨醇—麦康凯培养基,可疑菌落转种科玛嘉大肠杆菌O157∶H7显色培养基之后进行生化和血清学鉴定。结果4年从牛、鸡、猪、羊等动物粪便中共检出O157∶H7大肠杆菌59株,检出率为3.57%,其中牛携带率最高为8.02%,结论提示本地区有肠出血性大肠杆菌O157:H7感染的可能,应加强动物管理和疫情监测,防止疫情扩散蔓延。     

Sporadic occurrence of hemorrhagic colitis associated with Escherichia coli O157:H7 in Newfoundland.

During a 9-month period in 1984, 113 fecal samples obtained from 92 patients with diarrheal illness were cultured for Escherichia coli serotype O157:H7 to determine the occurrence of this agent in diarrheal illness in Newfoundland. E. coli O157:H7 was isolated in almost pure culture from 12 stool specimens obtained from 7 (15%) of the 47 patients who had grossly bloody diarrhea; none of the 12 yielded any of the usual enteric pathogens. The agent was not isolated from the stool specimens obtained from the remaining 45 patients, who did not have bloody diarrhea. All seven patients whose specimens were positive for E. coli O157:H7 had clinical manifestations typical of hemorrhagic colitis, but the syndrome was clinically suspected and a specific test requested in only two cases. The seven cases were not clustered geographically or temporally, and no common exposure was identified. To determine whether hamburger meat was the source of E. coli O157:H7, 66 samples obtained from various retail outlets were tested; none were found to be positive. Hemorrhagic colitis may be a common disease, and E. coli O157:H7 should be considered as an agent in bloody diarrheal illness.     

Preparation of Monoclonal Antibody and Development of Enzyme-linked Immunosorbent Assay Specific for Escherichia coil O157 in Foods

OBJECTIVE: To prepare monoclonal antibodies (MAb) and antisera specific for Escherichia coli (E. coli) O157, and to develop a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect E. coli O157 in foods. METHODS: Spleen cells from BALB/c mice immunized with the somatic antigen of E. coli O157:H7 were fused with murine Sp2/0 myeloma cells. The hybridoma cell line specific for E. coli O157 was established after having been subcloned. Antisera specific for E. coli O157 was prepared by intravenous injection into New Zealand rabbits with a stain of E. coli O157:H7. The sandwich ELISA was developed with the polyclonal antibody as the capture antibody and the MAb 3A5 as the detection antibody. The inoculated ground poultry meat and pasteurized milk were tested to confirm efficiency of the method. RESULTS: MAb 3A5 specific for E. coli O157 and O113:H21 belonged to subtype IgM. The ascetic titers of the antibody was 1:1x10(6). No cross-reactivity of the MAb was observed with strains of Salmonella spp, Yersinia enterocolitica, Shigella dysenteriae, etc. The purified polyclonal antibody had a titer of 1:1x10(5) with E. coli O157. The detection limit of this sandwich ELISA was 10(3)-10(4) cfu E. coli O157/mL in pure culture with a high specificity, which was characterized by every non-O157 strain with negative response. With 10h enrichment procedure, E. coli O157:H7 recovered well from inoculated ground poultry meat and pasteurized milk at levels of 0.1 cfu/g and 0.1 cfu/mL. CONCLUSION: MAb 3A5 specific for E. coli O157 and O113:H21 can be produced by immunizing BALB/c mice with a strain of E. coli O157:H7. Then a sandwich ELISA can be developed with the polyclonal antibody as the capture antibody and the MAb 3A5 as the detection antibody. The method is proved to be a sensitive and specific technique to detect low number of E. coli O157 in food.     

Analysis on the Epidemiological Characteristics of Escherichia coli O157:H7 Infection in Xuzhou, Jiangsu, China, 1999

Objective:To determine epidemiologic features of an Escherichia coli O157:H7 outbreak occurred in Xuzhou,Jiangsu Province,China in 1999,and assess the incidence of E. coli O157:H7 in diarrhea patients and host animals and its relationship with disease onset,and provide a scientific basis for establishing prevention and control strategies. Methods: Epidemiological,microbiological,and molecular methods were performed to identify risk factors and describe the ecology of E. coli O157:H7 in the environment. Resu...     

Studies on shiga-like toxin produced by enterohemorrhagic Escherichia coli: purification and characterization of the toxin and development of methods for identifying the toxin

A simple purification method using DEAE cellulose column chromatography and immunoaffinity column chromatography was developed for purifying Shiga-like toxin produced by Escherichia coli O157:H7. About 0.75 mg of purified toxin was obtained from 5 liters of culture (62% recovery). The purified toxin was demonstrated to be immunologically, biologically and structurally indistinguishable from Shiga toxin. A sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for detection of Shiga-like toxin. In the ELISA assay, Shigella dysenteriae type 1, Escherichia coli O157:H7 and some strains of Escherichia coli isolated from traveller's diarrhea were positive. Shiga toxin-resistant Vero cells were isolated by treatment of the cells with nitrosoguanidine. Immunofluorescence studies showed that the mutant Vero cells had lost toxin binding capacity. Samples of S. dysenteriae type 1 and E. coli O157:H7 showed cytotoxicity to the parent cells, but not to the mutant cells. Samples of other organisms showed either no cytotoxicity or cytotoxicity to both cell lines. The results suggested that (1) the presence of a receptor for Shiga-like toxin on Vero cells is essential for expression of cytotoxicity of the toxin, (2) the mutant Vero cells could be used to identify Shiga-like toxin producing organisms.     

2008～2009年茂名市食源性致病菌监测分析

目的监测茂名市主要食源性致病菌污染状况,为预防食源性疾病和食物中毒提供科学依据。方法在本市的大型超市、农贸市场、餐饮店和养殖场等随机采集六类食品,依据《食品卫生微生物学检验）GB／T4789-200312008,对采集样品分剐进行沙门菌、单核细胞增生性李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌0157：1-17和副溶血性弧菌分离、生化及血清学鉴定。结果共监测生禽畜肉、熟肉制品、凉拌菜、豆类制品、水产品及生奶等6类样品273份,检出食源性致病菌33株,总检出率12．09％（33／273）。其中沙门菌22株,检出率8．70％（22／253）;单增李斯特菌3株,检出率1．19％（3／253）;副溶血弧菌5株,,检出率8．93％（5／56）;金黄色葡萄球菌3株,检出率2．65％（3,113）;大肠杆菌0157：H7未检出。结论茂名市食品存在食源性致病菌污染较严重,其中生禽畜肉、生奶、水产品和熟肉制品是主要受污染食品;应加强食源性致病菌的监测,防止食派挂疾病和食物中毒发生。     

江苏省徐州市分离的大肠杆菌O157:H7菌株携带志贺毒素2型别的变化

目的 研究我国分离的大肠杆菌O157：H7菌株的志贺毒素型别的变化。方法使用针对志贺毒素2及其变种的引物对进行PCR检测、细菌染色体DNA的PstⅠ酶切后的Southern印迹实验和PCR产物的HaeⅢ、RasⅠ酶切分析,以及：PCR产物克隆后的序列分析方法以及致病性大质粒的PstⅠ酶切分析。结果1999年分离自徐州市的人的5株菌均携带slt1、slt2,而2000年从江苏省徐州市患者分离的10株和蜣螂标本分离的4株共计14株大肠杆菌O157：H7菌株仅携带slt2vha毒素基因,其致病性质粒的限制性酶切图谱与1999年的菌株相比也发生了改变。结论鉴于江苏省徐州市1999年的分离的5菌株全部携带slt1和slt2基因,结果提示该地的优势菌型发生了改变,可能当地大肠杆菌O157：H7感染的流行病学特点有关。针对slt2变异基因而设计的引物及其以此为基础进行的限制性片段长度多态性分析的方法对于研究O157：H7菌株的志贺毒素型别的变化能够满足特异性及灵敏性的要求。