蒺藜皂苷对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞凋亡和炎症因子分泌的影响

目的:观察蒺藜皂苷对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的软骨细胞凋亡和炎症因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法:(1)软骨细胞培养和转染。采用DMEM培养液培养小鼠软骨细胞(ATDC5细胞),培养后采用转染试剂分别转染pcDNA-circ＿0045714、pcDNA、si-circ＿0045714、si-NC。(2)蒺藜皂苷浓度筛选。将ATDC5细胞接种于96孔板中,一组正常培养(正常组),一组加入10 ng·mL^-1的IL-1β(IL-1β组),其他组在加入10 ng·mL^-1 IL-1β的基础上分别加入浓度为25μg·mL^-1、50μg·mL^-1、100μg·mL^-1、200μg·mL^-1、400μg·mL^-1的蒺藜皂苷。培养后计算软骨细胞存活率,并确定后续实验蒺藜皂苷的浓度。(3)软骨细胞增殖抑制率检测。将ATDC5细胞分为对照组、IL-1β组、IL-1β+蒺藜皂苷低剂量组、IL-1β+蒺藜皂苷中...     

UPLC同时测定通宣理肺胶囊中9个成分含量

目的:建立超高效液相色谱法(UPLC)同时测定通宣理肺胶囊中9个有效成分含量的方法。方法:采用Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,流速为0.3 mL·min-1,柱温为30℃,检测波长为210 nm(盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷)和278 nm(柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、甘草酸铵)。结果:盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷和甘草酸铵质量浓度的线性范围分别为0.005~0.037μg·mL^-1(r=0.9997)、0.002~0.017μg·mL^-1(r=0.9993)、0.005~0.039μg·mL^-1(r=0.9995)、0.010~0.084μg·mL^-1(r=0.9993)、0.010~0.082μg·mL^-1(r=0.9989)、0.007~0.052μg·mL^-1(r=0.9995)、0.007~0.057μg·mL^-1(r=0.9991)、0.038~0.301μg·mL^-1(r=0.9993)、0.002~0.020μg·mL^-1(r=0.9998);平均加样回收率均在98.2%~102.7%,RSD均小于1.5%。测定的样品中上述9个成分质量分数分别为1.12~1.23、0.39~0.54、1.19~1.31、2.54~2.67、2.49~2.66、1.54~1.66、1.66~1.79、9.19~9.54、0.53~0.69 mg·g^-1。结论:UPLC可用于宣理肺胶囊9个有效成分的含量测定,且方法简单、有效、结果准确。     

甘草次酸衍生物受体介导的复方脂质体肝靶向性研究及对肝星状细胞的影响

将3-琥珀酸-30-硬脂基甘草次酸(18-GA-Suc)插入甘草次酸(GA)-丹参酮Ⅱ_A(TSN)-丹酚酸B(Sal B)脂质体(GTS-lip),制备甘草次酸(GA)受体介导的肝靶向复方脂质体(Suc-GTS-lip);通过UPLC比较Suc-GTS-lip与GTS-lip的药代动力学和组织分布，并对Suc-GTS-lip进行活体成像追踪；考察Suc-GTS-lip对肝星状细胞(HSC)增殖抑制的影响，并探究其改善肝纤维化的分子机制。药代动力学研究结果表明，Sal B的AUC由(636.06±27.73)μg·h·mL^-1降至(550.39±12.34)μg·h·mL^-1,TSN的AUC由(1.08±0.72)μg·h·mL^-1降至(0.65±0.04)μg·h·mL^-1,GA的AUC由(43.64±3.10)μg·h·mL^-1增至(96.21±3.75)μg·h·mL^-1;组织分布结果表明，Suc-GTS-lip组肝脏中Sal B...     

姜黄素对5种非白念珠菌菌丝及生物膜形成的抑制作用

目的观察姜黄素对5种非白念珠菌菌丝及生物膜形成的抑制作用。方法测定姜黄素对热带念珠菌Candidatropicalis、光滑念珠菌C.glabrata、近平滑念珠菌C.parapsilokis、克柔念珠菌C.Krusei、季也蒙念珠菌C.guilliermondii的最小抑菌浓度(MIC)以及抑制50%生物膜浓度(SMIC50),利用光学显微镜观察姜黄素对非白念珠菌菌落形态的影响,利用倒置显微镜与扫描电镜分别观察姜黄素对非白念珠菌菌丝形成以及生物膜形成的影响。结果姜黄素对热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌的MIC分别为64、128、256、256、128μg/m L;SMIC50分别为512、512、512、512、512μg/m L;倒置显微镜与扫描电镜观察发现姜黄素对5种非白念珠菌菌丝以及生物膜的形成均有抑制作用。光学显微镜观察发现姜黄素能抑制这5种非白念株菌在固体培养基上菌落周边菌丝的形成。结论姜黄素对5种非白念珠菌菌丝及生物膜的形成具有抑制作用。     

HPLC法测定金明和胃胶囊中盐酸小檗碱的含量

目的建立高效液相色谱法测定金明和胃胶囊中盐酸小檗碱含量的方法。方法采用DiamonsilC18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,柱温30℃,流动相为乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(50:50)(每100mL中加十二烷基硫酸钠0.4g,再以磷酸调节pH值为4.0),流速1.0mL·min-1,检测波长为345nm,进样量10μL。结果盐酸小檗碱在9.957⁹9.57μg·mL-1范围内线性关系良好(r=1.000 0);平均加样回收率为99.71%,RSD=0.99%(n=6)。结论高效液相色谱法测定金明和胃胶囊中盐酸小檗碱含量,简便、准确、灵敏度高、重复性好。     

人参灰霉病菌对咪鲜胺敏感性基线的建立及抗药性风险评估

为了建立人参灰霉病菌对咪鲜胺的敏感性基线，明确咪鲜胺抗性突变体的适合度以及人参灰霉病菌对咪鲜胺及灰霉病防治常用杀菌剂啶酰菌胺、吡唑醚菌酯、异菌脲和嘧霉胺的交互抗性，该文采用菌丝生长速率法测定人参灰霉病菌对杀菌剂的敏感性；菌剂驯化及紫外线诱导法筛选咪鲜胺抗性突变体；通过继代培养稳定性、菌丝生长速率及致病力测定，明确抗性突变体的适合度；通过菌剂敏感性Person相关性分析，明确咪鲜胺与4种灰霉病杀菌剂的交互抗性。结果表明，供试人参灰霉病菌均对咪鲜胺敏感，EC₅₀为0.004 8～0.062 9μg·mL^-1,均值0.022μg·mL^-1。敏感性频率分布图显示，89株灰霉病菌位于主峰范围内，均为连续单峰曲线，将EC₅₀均值0.018μg·mL^-1作为灰霉病菌对咪鲜胺的敏感性基线。经室内药剂驯化和紫外线诱导，共获得6株抗药突变体，其中2株抗性不稳定，2株多代培养后出现抗药性下降；抗性突变体的菌丝生长速率及产孢量均低于亲本，多数突变体的致病性也较亲本低。另外，咪鲜胺与啶酰菌胺、吡唑醚菌酯...     

三才降糖颗粒的质量控制

目的研究确定三才降糖颗粒(人参、黄连、肉桂、地黄、天冬)的质量控制方法。方法采用TLC法对三才降糖颗粒中肉桂进行定性鉴别;采用HPLC法,以乙腈-水梯度洗脱同时测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、梓醇,以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(50∶50)(每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.4 g,再以磷酸调节pH值为4.0)测定盐酸小檗碱,检测波长分别为203 nm和365 nm。结果 TLC鉴别分离度好,专属性强。人参皂苷Rg1在0.402 4⁸.048μg、人参皂苷Re在0.393 08.048μg、人参皂苷Re在0.393 0⁷.860μg、人参皂苷Rb1在0.423 47.860μg、人参皂苷Rb1在0.423 4⁸.468μg、梓醇在0.062 88.468μg、梓醇在0.062 8¹.256μg、盐酸小檗碱在0.032 681.256μg、盐酸小檗碱在0.032 68³.268μg范围内具有良好的线性关系,相关系数r分别为0.999 9、1.000 0、0.999 9、1.000 0、1.000 0,平均加样回收率分别为99.85%(RSD=2.2%)、98.31%(RSD=2.0%)、101.1%(RSD=1.6%)、98.81%(RSD=2.0%)、101.3%(RSD=1.2%)。结论该方法简便、准确、重复性好,可对三才降糖颗粒质量进行有效控制。     

黄连提取物体外对白念珠菌丝侵袭的抑制作用

该文探讨黄连提取物(extract of Coptidis Rhizoma,ECR)体外对白念珠菌丝侵袭的抑制作用。以XTT还原法评价ECR对白念珠菌丝代谢活性的影响;固体培养基上观测白念珠菌落边缘生长的情况;半固体培养基上观察ECR如何影响白念珠菌丝生长;扫描电镜观察ECR对白念珠菌丝形态的影响;荧光显微镜观察ECR对白念珠菌丝形态及活力的变化;qRT-PCR法检测白念珠菌丝侵袭素ALS3,SSA1基因的表达。结果显示,XTT法检测到在64,128,256 mg·L-1ECR干预下,白念珠菌丝活性逐渐降低;128,256 mg·L-1ECR在固体培养基上可抑制菌落褶皱,在半固体培养基中可明显抑制菌丝侵袭性生长;扫描电镜与荧光显微镜下发现,128,256 mg·L-1ECR能显著抑制白念珠菌丝形成;qRT-PCR法显示,64,128,256 mg·L-1ECR作用下,侵袭素ALS3,SSA1基因表达均下调,且在256 mg·L-1ECR干预下,侵袭素ALS3,SSA1基因表达分别下调4.8,1.68倍。该研究表明,黄连提取物通过抑制菌丝生长及侵袭素表达从而影响白念珠菌的侵袭力。     

HPLC测定连参通淋片中盐酸小檗碱的含量

目的:建立连参通淋片中盐酸小檗碱含量的测定方法。方法:高效液相色谱法,C18柱(4·6mm×250mm,5μm),乙腈-水(1∶1)(每1000mL中加磷酸二氢钾3·4g,十二烷基硫酸钠1·7g)为流动相,检测波长345nm。结果:盐酸小檗碱在0·1274~0·6370μg呈良好线性关系,平均回收率为98·62%,RSD=1·17%。结论:该方法简便、灵敏、准确,适用于连参通淋片中盐酸小檗碱的含量测定。     

HPLC法测定大鼠血浆和唾液中盐酸川芎嗪的浓度

目的:建立测定大鼠体内血浆和唾液中盐酸川芎嗪含量的HPLC分析方法。方法:采用色谱柱:Diamonsil（R）C₁₈柱（250mm×4.6mm,5μm）;流动相:甲醇:水（70:30,v:v）;柱温:30℃;流速:0.8mL·min^-1;检测波长:295nm。结果:血浆和唾液中盐酸川芎嗪浓度在0.5～50μg·mL^-1和0.3～30μg·mL^-1范围内相关系数分别为0.9992和0.9999,线性关系良好;盐酸川芎嗪血浆和唾液的相对回收率分别为97.03%～101.19%和99.55%～99.88%;日内、日间精密度的RSD<10%。结论:建立了盐酸川芎嗪唾液样品检测方法以及用HPLC法同时测定大鼠体内血浆和唾液中的含量方法,该方法简便、快速、准确,为盐酸川芎嗪的临床药动学研究提供了新的方法学基础。     

穿心莲内酯对白念珠菌生物膜分散的影响

随着真菌感染日渐增多,白念珠菌的防治成为当前抗真菌感染的重点。该研究拟探讨中药单体穿心莲内酯（AG）对白念珠菌生物膜分散的影响。实验以微孔板结合医用导管片构建白念珠菌生物膜模型,分别通过XTT减低法和平板法发现1 000,500,250 mg·L^-1AG能不同程度的影响白念珠菌生物膜分散细胞的活性;以扫描电镜观察导管片残余生物膜形态结构,发现1 000,500,250 mg·L^-1AG能剂量依赖性的诱导白念珠菌生物膜的分散,且分散出的细胞以酵母相为主;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测发现AG使HSP90表达上调,使UME6和PES1表达下调。该研究表明AG能一定程度的诱导白念珠菌生物膜分散。     

Antifungal cyclic peptides from Psammosilene tunicoides

Three new cyclic peptides, tunicyclins B-D, and a known cyclic peptide, psammosilenin B, were isolated from the root of Psammosilene tunicoides. The structures of new cyclic peptides were elucidated by extensive NMR and MS analysis. Tunicyclin B contains an unusual α,β-dehydrotryptophan (Δ(Z)-Trp) residue, previously reported from marine sponges and bacteria. Tunicyclin D showed a broad spectrum of antifungal activity against Candida albicans (SC5314), Candida albicans (Y0109), Candida tropicalis, Candida parapsilosis, and Cryptococcus neoformans (BLS108) with MIC(80) values of 4.0, 16.0, 0.25, 1.0, and 1.0 μg mL(-1), respectively.     

没食子酸抑制白念珠菌生物膜作用的研究

目的:研究没食子酸对体外白念珠菌生物膜的影响.方法:采用XTT减低法评价没食子酸对白念珠菌的生物膜及黏附性的影响;镜下观察没食子酸对白念珠菌生物膜的形态学影响;细胞毒试验检测该药的毒副作用.结果:没食子酸抑制白念珠菌生物膜最低药物浓度SMIC_(50),SMIC_(80)分别是500,1 000 mg·L~(-1);100,1 000 mg·L~(-1) 的没食子酸对白念珠菌的早期黏附及菌丝生长有抑制作用;没食子酸对人细胞毒性较弱.结论:没食子酸对体外白念珠菌生物膜有较强的抑制作用.     

Synergistic Antimicrobial Activity of Combination of Berberine Hydrochloride,Baicalein and Borneol against Candida albicans

Objective To determine the effects of combination of berberine hydrochloride, baicalein and borneol on Candida albicans. Methods The broth microdilution method was used to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) of the three agents, and the checkerboard method was simultaneously used to determine the MIC and fractional inhibitory concentration index (FICI) of the combination of three antimicrobial agents to study their extracorporeal effects. Results Berberine hydrochloride was the most potent inhibitor of C. albicans (MIC and MBC of 0.160 and 0.640 mg/mL), followed by borneol (MIC and MBC of 0.320 and 0.640 mg/mL) and baicalein (MIC and MBC of 1.28 and 20.48 mg/mL). Moreover, the antifungal effect of the combination was significantly stronger than that tested alone. Further in vivo study showed that the mortality rate of tainted mice reduced over 50% compared with the control group. Conclusion The results of experiments in vitro and in vivo indicate the synergistic effect of the combination of three antimicrobial agents on C. albicans, which can make reference for the future clinical treatment.     

Synergistic Antimicrobial Activity of Berberine Hydrochloride, Baicalein and Borneol against Candida albicans

Objective To determine the synergistic effects of berberine hydrochloride, baicalein,and borneol in different combinations on Candida albicans. Methods The broth microdilution method was used to determine the minimal inhibitory concentration(MIC) and minimal bactericidal concentration(MBC) of the three agents, and the checkerboard method was simultaneously used to determine the MIC and fractional inhibitory concentration index(FICI) of the combination of three antimicrobial agents to study their extracorporeal effects. Results Berberine hydrochloride was the most potent inhibitor of C. albicans(MIC and MBC of 0.160 and 0.640 mg/mL), followed by borneol(MIC and MBC of 0.320 and 0.640 mg/mL) and baicalein(MIC and MBC of 1.28 and 20.48 mg/mL). Moreover, the antifungal effect of the combination was significantly stronger than that tested alone. Further in vivo study showed that the mortality rate of tainted mice reduced over 50% compared with the control group. Conclusion The results of experiments in vitro and in vivo indicate the synergistic effect of the combination of three antimicrobial agents on C. albicans, which can make reference for the future clinical treatment.     

京万红组方成分体外抗白色念珠菌抑菌效应探讨

目的:研究京万红组方成分中盐酸小檗碱、黄芩苷及冰片的体外抗白色念珠菌作用。方法:以白色念珠菌为研究对象,K-B纸片扩散法分别测定50,100,150 g·L^-1的盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片及制霉菌素药液抑菌圈直径;采用试管双倍稀释法和棋盘法,测定盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片、制霉菌素分别最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),测定盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片两两联用及3种组分联用的MIC,计算出联合抑菌分数(FIC)。结果:盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片MIC分别为160,1 280,320 mg·L^-1;MBC分别为640,20 480,640 mg·L^-1。盐酸小檗碱与黄芩苷联用FIC指数0.5,为协同作用;黄芩苷与冰片联用FIC指数为0.625,为相加作用;盐酸小檗碱与冰片联用FIC指数为0.5,为协同作用。3种组分药物联合使用FIC指数为0.375,有一定的协同作用。结论:盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片对白色念珠菌均有抑制作用,且3种组分药物联合使用具有一定的协同作用。     

RP-HPLC法测定小儿肺炎散中盐酸小檗碱的含量

目的：建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定小儿肺炎散中盐酸小檗碱的含量。方法：采用RP-HPLC法进行测定,以Angilent C18,5μm,4.6μm×250.0 mm为色谱柱,以乙腈：水（11）（每1 000 mL中加磷酸二氢钾3.4 g和十二烷基硫酸钠1.6 g）为流动相,流速为1 mL/min,检测波长为265 nm。结果：盐酸小檗碱在0.334 8-0.781 2μg范围内线性良好,分离度大于1.5。结论：本方法可有效地控制小儿肺炎散中盐酸小檗碱的含量。     

吴茱萸碱和盐酸小檗碱对大肠癌HT29细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨左金丸的主要成分吴茱萸碱和盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞凋亡及端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响,为临床应用左金丸治疗大肠癌提供实验依据。方法:体外培养人结肠癌HT29细胞,加入不同浓度的吴茱萸碱及盐酸小檗碱进行培养,采用活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,TRAP法检测端粒酶活性,RT-PCR法检测hTERT的表达。结果:吴茱萸碱和盐酸小檗碱作用HT29细胞后,增殖明显受到抑制,呈剂量和时间依赖性;能够降低HT29端粒酶活性,但二者无协同作用;并且端粒酶hTERT表达降低,具有剂量依赖关系。结论:吴茱萸碱和盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞具有显著生长抑制作用,该抑制作用可能通过下调端粒酶hTERT基因表达,降低端粒酶的活性,为临床治疗大肠癌提供实验依据。     

重铬酸钾比色法测定盐酸小檗碱片的含量

 目的研究盐酸小檗碱片中盐酸小檗碱的含量测定方法,并与中国药典方法的测定结果比较,评价两种方法的相关性。方法用重铬酸钾比色法测定含量,以421 nm为测定波长,0.2 mg·mL^-1的基准重铬酸钾溶液作对照液。结果盐酸小檗碱在4.0～28.0μg·mL^-1之间呈良好的线性关系,相关系数r=0.9999,平均回收率为100.05%(n=5),RSD为0.43%。比较本法和中国药典方法的测定结果,相关性显著。结论本法简便、准确、重现性好,可用于盐酸小檗碱的含量测定。尤适于生产过程中的快速分析。     

HPLC法测定清热化毒丸中黄芩苷的含量

目的：用HPLC法测定清热化毒丸中黄芩苷的含量。方法：采用高效液相色谱法,使用Agilent ZORBAX SB—C18（250mm×4．6mm,5μm）色谱柱,以甲醇-水-磷酸（47：53：0．2）为流动相,检测波长为315nm,流速：1．0mL·min-1,柱温：40℃。结果：黄芩苷在0．1028～1．0275μg范围内呈良好的线性关系,回归方程为Y=10225920x-1083344（r2=0．9925）。平均回收率为99．61％,RSD=1．4％。结论：本法灵敏、准确、专属性强,回收率高,重现性好,可作为清热化毒丸中黄芩苷的含量测定的检测方法。