鳖甲煎丸对免疫性肝纤维化大鼠TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:观察中药复方鳖甲煎丸对免疫性纤维化模型大鼠肝组织细胞因子TGF-β1mRNA表达的影响,分析鳖甲煎丸的治疗作用,探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机理;并与西药秋水仙碱作对照,为临床防治肝纤维化用药提供科学依据.方法:雄性Wistar大鼠90只随机分为6组:正常对照组、模型对照组、秋水仙碱预防组、秋水仙碱治疗组、鳖甲煎丸预防组、鳖甲煎丸治疗组,选用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型.各组于10周后取10只大鼠断头处死,取肝组织,用原位杂交法检测肝组织内TGF-β1mRNA.结果:鳖甲煎丸能够明显减少TGF-β1mRNA的表达,作用接近或优于秋水仙碱,显示它具有明显的抗纤维化作用.鳖甲煎丸和秋水仙碱的预防效果同治疗效果相比差异均不显著.     

鳖甲煎丸影响免疫性肝纤维化大鼠TNF-α表达的研究

目的:观察复方中药鳖甲煎丸对免疫性肝纤维化模型大鼠肝组织TNF-α表达的影响,分析鳖甲煎丸抗肝纤维化的治疗作用并探讨其作用机制;并通过与抗肝纤维化药物秋水仙碱对照,为临床防治肝纤维化用药提供科学依据。方法:雄性Wistar大鼠90只,随机分为6组:正常对照组、模型对照组、秋水仙碱预防组、秋水仙碱治疗组、鳖甲煎丸预防组、鳖甲煎丸治疗组,选用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型。各组于10周后取8只大鼠断头处死,取肝组织,免疫组化染色,用图像分析法检测TNF-α。结果:鳖甲煎丸能够从多个环节抑制肝脏纤维化病理改变,明显抑制TNF-α的表达,其作用接近或优于秋水仙碱。结论:鳖甲煎丸具有明显的抗肝纤维化作用。     

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠转化生长因子β1表达的影响

目的：观察壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠血清及肝组织中TGF—β1表达的影响，探讨本方治疗肝纤维化的作用机理。方法：将100只Wistar大鼠随机分为正常对照组20只、观察组80只，参照相关文献复制大鼠肝纤维化模型，造模过程中，于第4周末随机处死正常对照组及观察组大鼠各5只，证实肝纤维化形成后，将观察组其余大鼠随机分为病理模型组、壮肝逐瘀煎大、中、小剂量组及秋水仙碱对照组，分别予生理盐水、壮肝逐瘀煎大、中、小剂量及秋水仙碱灌胃，日1次；12周后处死大鼠，应用ELISA法检测血清TGF—β1含量的改变，同时采用免疫组化观察肝脏组织中TGF—β1的表达水平。结果：壮肝逐瘀煎能降低欠鼠肝纤维化血清中TGF—β1的表达，拮抗肝纤维化大鼠肝组织中TGF—β1的分泌。结论：壮肝逐瘀煎能有效抗大鼠肝纤维化，其作用机制是通过抑制TGF—β1的活性来实现的。     

鳖甲煎丸对免疫性肝纤维化大鼠肝组织HGF表达的影响

目的:观察鳖甲煎丸对免疫性肝纤维化模型大鼠肝组织肝细胞生长因子(HGF)表达的影响,分析鳖甲煎丸抗肝纤维化的治疗作用并探讨其作用机制.方法:雄性Wistar大鼠90只,随机分为6组:正常对照组、模型组、秋水仙碱预防组、秋水仙碱治疗组、鳖甲煎预防组、鳖甲煎治疗组,采用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型.各组于10周后随机取8只大鼠断头处死,取血清,检测血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C);取肝组织,免疫组化染色,用图像分析法检测HGF.结果:各预防组、治疗组血清HA,LN,PCⅢ,Ⅳ-C含量均明显降低(P＜0.01或P＜0.05),但以鳖甲煎预防组、治疗组降低最为明显;各预防组、治疗组大鼠肝脏组织HGF均有表达(P＜0.01或P＜0.05),鳖甲煎预防组、治疗组比秋水仙碱组的表达更为明显.结论:鳖甲煎丸能够抑制肝脏纤维化病理改变,增加HGF的表达,具有明显的抗肝纤维化作用.     

鳖甲煎丸对免疫性肝纤维化大鼠胶原及相关细胞因子表达的影响

目的:探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机理.方法:选用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型,观察经方鳖甲煎丸对免疫性纤维化模型大鼠肝组织胶原及相关细胞因子表达的影响,分析鳖甲煎丸的治疗作用,并以西药秋水仙碱作对照.结果:鳖甲煎丸能够明显减少Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达,并能明显减少TGF-β1mRNA及PDGF-BB、bFGF等细胞因子的表达,作用接近或优于秋水仙碱.结论:鳖甲煎丸具有明显的抗纤维化作用,能够从多个环节抑制肝脏纤维化病理改变.     

鳖甲煎丸对肝纤维化大鼠MMP-1、TIMP-1的影响

目的:通过研究鳖甲煎丸对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶及其抑制剂表达的影响,探讨其防治肝纤维化的作用机制。方法:将雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱预防组、秋水仙碱治疗组、鳖甲煎丸预防组及鳖甲煎丸治疗组,用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型,给予鳖甲煎丸进行防治,采用免疫组化方法,观测基质金属蛋白酶(MMP-1)及其抑制因子(TIMP-1)在各组大鼠肝脏组织中的表达。结果:与正常对照组比较,其余各组MMP-1表达均增高,差别有统计学意义(P0.05);秋水仙碱、鳖甲煎丸MMP-1表达较模型对照组有所升高,但差别无统计学意义(P0.05);鳖甲煎丸预防及治疗组TIMP-1高于正常对照组,低于模型对照组及秋水仙碱各组,差别均有统计学意义(P值均0.05)。结论:鳖甲煎丸可明显抑制TIMP-1的表达,促进细胞外基质的降解,从而实现对肝纤维化的防治作用。     

强肝软坚丸对肝纤维化大鼠肝组织HGF表达的影响

目的：观察强肝软坚丸对肝纤维化模型大鼠肝组织肝细胞生长因子（HGF）表达的影响,分析强肝软坚丸抗肝纤维化的治疗作用并探讨其作用机制。方法：雄性Wistar大鼠120只,随机分为6组：正常对照组、模型组、秋水仙碱预防组、秋水仙碱治疗组、强肝软坚预防组、强肝软坚治疗纽,采用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型。各组于10周后随机取10只大鼠断头处死,取肝组织,免疫组化染色,用图像分析法检测HGF。结果：强肝软坚丸有明显的抑制肝纤维化模型大鼠肝组织HGF的表达的作用,且抑制作用要优于秋水仙碱（P〈0．05）。结论：强肝软坚丸能够抑制肝脏纤维化病理改变,增加HGF的表达,具有明显的抗肝纤维化作用。     

鳖甲煎丸对大鼠肝癌癌前病变血管生成和微环境的机制探讨

目的观察鳖甲煎丸对大鼠肝癌癌前病变各组的血清中TGFβ1、Mmp2、SOD、COX-2、VEGF及肝组织中TGFβ1、Mmp2、SOD、COX-2、VEGF、MVD的影响,探讨鳖甲煎丸通过改变大鼠肝癌癌前病变血管生成和微环境的抗癌的机制。方法选用136只SD大鼠,随机分为3组,正常对照组、模型组、鳖甲煎丸干预组,建立二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠肝癌癌前病变组织短期动物模型,在制模过程中给予鳖甲煎丸制剂进行干预,通过观察大鼠动脉血清中TGFβ1、Mmp2、SOD、COX-2、VEGF的变化,免疫组化学染色观察各组大鼠肝组织内TGF、Mmp2、SOD、COX-2、VEGF、MVD的表达水平。结果干预组组织学中TGFβ1、Mpp2、SOD、COX-2、VEGF、MVD的表达水平显著低于模型组、对照组(P0.01),血清中TGFβ1、Mmp2、SOD、COX-2、VEGF也明显低于模型组及对照组。结论鳖甲煎丸有预防或延缓(DEN)诱发大鼠肝癌发生的作用,其机制可能通过改变肝细胞缺氧微环境抑制TGFβ1、Mmp2、SOD、COX-2、VEGF蛋白的表达,改善肝癌细胞微环境,抑制肝脏微血管生成的病理进程,抑制肿瘤的生长,鳖甲煎丸对肝癌裸鼠移植瘤的生长有明显的抑制作用。     

鳖甲煎丸对肝纤维化大鼠TGF-β1/samd信号通路的影响

目的 探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机制。方法 SD大鼠随机分成6组：对照组,模型组,秋水仙碱（0.1 mg/kg）阳性对照组,鳖甲煎丸低、中、高剂量（0.55、1.1、2.2 g/kg）组。除对照组外,其他各组大鼠sc 40% CCl₄橄榄油溶液,每周2次,连续给予6周,建立大鼠肝纤维化模型。在造模同时,各给药组每天给予相应药物10 mL/(kg?d) 1次,连续给药11周。于11周末处死大鼠,免疫组化法检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测大鼠肝组织中转化生长因子（TGF-β₁）及smad 3基因的表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠肝组织α-SMA蛋白及TGF-β₁、smad 3基因的表达显著上调（P＜0.05）。与模型组比较,鳖甲煎丸和秋水仙碱可显著降低大鼠肝组织α-SMA蛋白及TGF-β₁、smad 3基因的表达,其中以鳖甲煎丸2.2 g/kg的效果更显著。结论 鳖甲煎丸抗肝纤维化作用机制可能与其下调TGF-β₁/smad 3信号通路、抑制肝星状细胞活化和增殖有关。     

甲乙煎对肝纤维化大鼠肝组织MMP2及TGFβ1表达的影响

目的:观察中药甲乙煎对实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP2)及转化生长因子1(TGFβ1)的影响。方法:雄性清洁级Wister大鼠60只,随机分为正常对照组和肝纤维化模型组,运用DMN(二甲基亚硝胺)对模型组大鼠诱导肝纤维化,四周后将模型组大鼠随机分为模型对照组、甲乙煎高浓度组和低浓度组。对甲乙煎高浓度组和低浓度组给与中药甲乙煎灌胃,共治疗四周,处死全部大鼠。对肝组织进行HE染色观察,并采用免疫组化法检测大鼠肝组织MMP2和TGFβ1的表达。结果:经中药甲乙煎高、低浓度治疗后,大鼠肝组织TGFβ1的表达较模型对照组明显降低(P<0.05),甲乙煎高浓度组较低浓度组TGFβ1的表达亦明显降低(P<0.05),而甲乙煎高、低浓度组MMP2的表达较模型对照组无明显差异(P>0.05)。结论:甲乙煎能下调实验性肝纤维化大鼠肝组织TGFβ1的表达,这是其抗肝纤维化的作用机理之一。     

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TGF-β1及TβR Ⅰ/ⅡmRNA表达的影响

目的:研究中药壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TGFβ1及TβR Ⅰ/ⅡmRNA表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制.方法:采用四氯化碳(CCl4)复合因素大鼠肝纤维化模型,给予壮肝逐瘀煎灌胃,取血清及肝组织做检测,双抗体夹心ABC-ELISA法测定血清TGF-β1含量,实时荧光定量PCR技术对肝组织TβR Ⅰ/ⅡmRNA进行定量分析.结果:治疗6周后,与病理模型组大鼠比较,壮肝逐瘀煎治疗组肝小叶结构趋于正常,纤维间隔明显变薄,TGF-β1及TβR Ⅰ/ⅡmRNA明显降低(P＜0.01).结论:壮肝逐瘀煎能够显著改善肝纤维化大鼠肝组织的病理变化,具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与壮肝逐瘀煎抑制TGF-β1及TβRⅠ/Ⅱ mRNA表达有关.     

二氢杨梅素对实验性肝纤维化大鼠血清和肝组织中TGF—β1表达的影响

目的：观察二氢杨梅素对四氯化碳（CCL．）诱导的肝纤维化大鼠的防治作用及对转化生长因子β1（TGF—β1）表达的影响。方法：56只雄性SD大鼠被随机分为正常组、模型组、二氢杨梅素治疗组及复方鳖甲阳性对照组,采用CCL4皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型。于第13周末检测大鼠血清TGF—β1、I、PCⅢ及ClV的水平,免疫组织化学方法检测肝组织TGF-β1表达。结果：与模型组相比,二氢杨梅素治疗组血清TGF—β1、I、PCⅢ、CⅣ水平显著下降（P〈0．05）,肝组织内TGF—β1阳性面积的表达明显下降（P〈0．05）。结论：二氢杨梅素对CCL4诱导的肝纤维化大鼠有较好的保护作用,对TGF—β1表达的影响可能是其作用机制之一。     

乌梅丸对免疫损伤性肝纤维化大鼠肝组织细胞因子TGF-β1及其mRNA的影响

目的探求乌梅丸抗肝纤维化的作用机理。方法选用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型,观察经方乌梅丸对免疫损伤性肝纤维化模型大鼠肝组织TGF-β1及其mRNA表达的影响,分析乌梅丸的治疗作用,并以秋水仙碱、小柴胡汤作对照。结果乌梅丸能够明显减少TGF-β1及其mRNA的表达,作用优于秋水仙碱及小柴胡汤。结论乌梅丸具有明显的抗纤维化作用。     

鳖甲煎丸对CCl4致大鼠肝纤维化模型中NF-κB信号通路的影响

目的:通过研究鳖甲煎丸对四氯化碳(CCl_4)致大鼠肝纤维化的抑制作用及其对核转录因子-κB(NF-κB)信号通路信号分子及靶基因的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机制。方法:使用CCl4复制肝纤维化大鼠模型,鳖甲煎丸药物溶液灌胃,8周末腹主动脉采血,留肝组织检测指标。苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理形态学改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清中肝纤维化4项,基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9,组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的表达;免疫组化法检测大鼠肝组织中p65,转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝组织中p65,NF-κB抑制蛋白(IκB)α,IκB激酶(IKK)α/β,TGF-β1的表达。结果:病理学结果显示模型组肝小叶被破坏,纤维组织增生严重,而鳖甲煎丸治疗组肝细胞坏死减少,纤维组织增生明显减少,纤维间隔薄;与模型组比较,鳖甲煎丸治疗组大鼠肝纤维化4项指标,TIMP-1含量明显降低(P0.05),而MMP-2,MMP-9含量明显上升(P0.05);免疫组化结果显示鳖甲煎丸治疗组肝组织p65,TGF-β1表达较模型组明显降低,Western blot检测结果显示与模型组比较,鳖甲煎丸治疗组肝组织中p65,TGF-β1蛋白表达明显减少(P0.05),IκBα蛋白表达明显增加(P0.05),而IKKα/β则无显著变化。结论:鳖甲煎丸能够显著减轻四氯化碳致大鼠肝纤维化的程度,减缓其发展,主要与鳖甲煎丸能够抑制p65的表达,从而阻断NF-κB信号通路,减少其下游靶基因TIMP-1,TGF-β1的合成,上调MMP-2,MMP-9的表达,从而加快细胞外基质的降解有关。     

羧甲基茯苓多糖抗大鼠实验性肝纤维化作用的研究

目的：肝纤维化是原发性肝癌（HCC）的重要中间环节，本文研究羧甲基茯苓多糖（CMP）对实验性肝纤维化模型大鼠肝组织病理形态及转化生长因子（TGFβ）的影响，探讨CMP抗肝纤维化的作用机制。方法：采用SD大鼠，四氯化碳复合因素法制作肝纤维化模型，采用1％CMP灌胃，以0．1％秋水仙碱作为阳性对照，光镜观察肝组织形态学变化，免疫组化法检测TGFβ。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肝组织呈现典型纤维化表现，TGF-β表达显著增强（P〈0．01），CMP组与模型组比较，肝组织纤维化明显减轻，TGF-β表达显著下降（P〈0．01），显示了较好的抗纤维化、调节TGF-β表达的作用，CMP组与秋水仙碱组无显著差异（P〉0．05）。结论：CMP对肝纤维化大鼠模型肝组织细胞具有较好的保护作用，对TGF一13表达具有明显抑制作用，可能是其抗肝纤维化的主要机制之一。     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠TGF-β1表达的影响

目的：观察银杏叶提取物（GbE）的抗大鼠肝纤维化作用及其作用机理。方法：采用CCl4诱导大鼠肝纤维化，同时分别以3个剂量的GbE进行干预，并设复方鳖甲软肝片为对照组，6周后取肝组织进行HE及Masson染色，观察肝组织炎症活动度及肝纤维化程度，采用免疫组化法测定肝组织α-SMA、TGF-β1蛋白表达，采用RT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达。结果：GbE各剂量组及复方鳖甲软肝片组肝组织炎症活动度及肝纤维化程度较模型组明显改善，α-SMA蛋白表达及TGF-β1 mRNA和蛋白表达也较模型组显著下降。结论：GbE可能通过抑制肝星状细胞的激活和转化，降低α-SMA蛋白表达及TGF-β1的转录及表达，抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化的发生及发展。     

鳖甲煎丸对肺纤维化大鼠TGF-β1及smad3／7信号通路的影响

目的：观察鳖甲煎丸抗博莱霉素所诱导的大鼠肺纤维化的作用机制。方法：SD大鼠50只,随机分为生理盐水对照组、模型对照组、醋酸泼尼松组、鳖甲煎丸中剂量组、鳖甲煎丸高剂量组。采用博莱霉素气管内注入法,制备肺纤维化模型,于实验第28天留取标本,用免疫组化技术检测TGF-β1及smad3、smad,在肺组织中的表达。结果：鳖甲煎丸中、高剂量组大鼠TGF-β1表达减弱,smad,表达增强,smad,在鳖甲煎丸高剂量组表达减弱。结论：鳖甲煎丸能够减轻博莱霉素导致的大鼠肺纤维化程度,其作用机制与调控TGF-β1的smad,门信号转导蛋白表达有关。     

肝脾肾同治法对肝纤维化大鼠转化生长因子β_1的影响

目的研究肝脾肾同治法对肝纤维化大鼠病理及TGF-β_1、Smad3表达的影响。方法将48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、肝脾肾同治组、鳖甲煎丸组。除正常组外,其余组均采用猪血清腹腔注射法建立肝纤维化大鼠模型。造模成功后,肝脾肾同治组和鳖甲煎丸组分别灌胃相应药液,正常组和模型组灌胃等量生理盐水,均连续6周。采用HE染色和Masson染色观察各组大鼠肝组织病理改变,电子显微镜下观察肝窦内皮下基底膜形成情况,Western blot法检测肝组织中TGF-β_1、Smad3蛋白表达情况。结果肝组织HE、Masson染色显示,肝脾肾同治组病理改变明显轻于模型组和鳖甲煎丸组,肝窦结构接近正常。与正常组比较,模型组大鼠肝组织中TGF-β_1、Smad3蛋白相对表达量均显著升高(P均0.05);与模型组比较,鳖甲煎丸组和肝脾肾同治组大鼠肝组织中TGF-β_1、Smad3蛋白相对表达量均显著降低(P均0.05)。结论肝脾肾同治法可明显改善肝纤维化,其可能通过减少TGF-β_1、Smad3蛋白的过表达,切断TGF-β/Smad信号通路传递,阻止肝组织纤维化进程,从而发挥抗纤维化作用。     

鳖甲煎丸对肝纤维化模型大鼠肝组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白及其靶基因表达的影响

目的探讨鳖甲煎丸治疗肝纤维化的可能作用机制。方法 48只大鼠随机分为空白对照组、模型组、秋水仙碱组和鳖甲煎丸低、中、高剂量组,每组8只。除空白对照组外其余各组大鼠腹腔注射四氯化碳(CCl4)建立肝纤维化模型。首次注射后第2天开始给药,鳖甲煎丸低、中、高剂量分别给予为鳖甲煎丸混悬液0.55、1.1、2.2 g/(kg·d)灌胃,秋水仙碱组给予秋水仙碱片混悬液0.11 mg/(kg·d)灌胃,空白对照组和模型组给予2 ml生理盐水灌胃,共8周。Masson染色观察肝脏病理形态学改变;检测各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)等肝功能指标,及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)、转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)水平;Westernblot法检测大鼠肝组织中β-链蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的表达。结果与模型组比较,鳖甲煎丸各剂量组均不同程度纤维组织增生明显减少,血清ALT、AST含量及MDA、HYP、TGF-β1、CTGF、TNF-α、VEGF水平降低,SOD水平升高(P<0.05),肝组织中β-catenin、p-GSK-3β和p-AKT蛋白表达明显减少,且以鳖甲煎丸高剂量组效果更佳(P<0.05)。各组大鼠肝组织中GSK-3β和AKT蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论鳖甲煎丸能够显著减轻CCl4致大鼠肝纤维化的程度,可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化、减少其下游靶基因的表达水平有关。     

鳖甲煎丸对肝纤维化模型大鼠结缔组织生长因子的影响

目的:探讨结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在肝纤维化大鼠的表达及鳖甲煎丸对其影响作用。方法:采用复合因素建立肝纤维化大鼠模型,用免疫组化方法观察鳖甲煎丸对肝纤维化大鼠肝组织CTGF表达的影响。结果:CTGF在模型大鼠肝组织中表达明显增加,鳖甲煎丸能明显抑制大鼠肝纤维化组织CTGF的表达。结论:鳖甲煎丸可有效抑制肝纤维化组织CTGF的表达,这可能是该药抗肝纤维化作用的分子机制之一。