基于网络药理学和体外实验探究芍药内酯苷改善阿尔茨海默病的作用机制

基于网络药理学、分子对接技术和体外实验研究芍药内酯苷治疗阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)的作用机制。采用网络药理学预测芍药内酯苷抗AD的潜在作用靶点和通路，结合分子对接技术对芍药内酯苷与关键靶蛋白进行分子对接验证，最后使用芍药内酯苷干预Aβ_25-35诱导大鼠嗜铬瘤细胞(PC12细胞)所构建的AD细胞模型，以验证核心靶点和通路。网络药理学分析结果显示，芍药内酯苷主要作用于丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1,又称ERK2)、白蛋白(ALB)、表皮生长因子受体(EGFR)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(CASP3)、5-羟色胺转运体(SLC6A4)等关键靶点和MAPK、cAMP、cGMP-PKG等信号通路。分子对接结果表明芍药内酯苷与MAPK1(ERK2)有较好的结合性。体外实验显示，与空白组相比较，模型组细胞活力显著下降，B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达水平显著降低，Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达水平显著升高，细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化水平和p-ERK1/2与ERK1/2相对表达量比值均显著下降；与模型组相比较，芍...     

PI3K/Akt通路在芍药苷抗Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的:研究PI3K/Akt通路在芍药苷对PC12细胞神经保护中的作用。方法:芍药苷组(5,10,20μmol·L-1)预处理30 min,然后加入Aβ25-35(20μmol·L-1)共同作用24 h;抑制剂LY294002(10μmol·L-1)于芍药苷(10μmol·L-1)作用前预处理30 min。用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染检测细胞凋亡率,以及Western blot法检测p-Akt,Bax,Bcl-2,cleaved caspase-3蛋白表达。结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,其保护作用可能是通过上调Akt磷酸化水平,增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制caspase-3等的激活而实现的;抑制剂LY294002可减弱上述芍药苷的保护作用。结论:芍药苷可通过激活PI3K/Akt信号通路对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用。     

芍药苷对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力的影响

目的探讨芍药苷对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力的影响。方法 30只SD雄性大鼠等分成空白组、模型组、芍药苷组。采用AlCl3建立AD模型,药物组大鼠用芍药苷溶液腹腔注射。Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力和HE检测大鼠海马细胞的形态学变化。结果芍药苷组大鼠学习记忆能力高于模型组(P<0.05);芍药苷组大鼠海马细胞的形态比AD模型的改善而接近空白组。结论芍药苷可以改善AD模型大鼠学习记忆能力。     

芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究芍药苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:用Aβ25-35造成PC12细胞损伤模型,采用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染流式细胞计量法检测细胞凋亡,JC-1和Fluo-3荧光探针法分别观察线粒体膜电位和细胞内钙离子变化,Western印迹法检测Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,观察芍药苷对PC12细胞损伤的保护作用。结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,并呈剂量相关性,其保护作用可能是通过提高线粒体膜电位、降低Ca2+浓度;增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的激活而实现的。结论:芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用。     

大孔吸附树脂提取赤芍总苷工艺条件研究

赤芍为毛茛科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall.)或川赤芍(Paeonia veitchii Lynch)的干燥根,有效成分主要是芍药苷、芍药内酯苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷等单萜类化合物,合称为赤芍总苷,具有多方面的药理作用[1].本文通过对D101,型大孔吸附树脂富集纯化赤芍总苷工艺条件参数的研究,进一步探索其合理的工艺流程.     

柚皮素改善阿尔茨海默病模型大鼠的认知能力及其机制研究

目的 研究柚皮素对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠认知水平的影响及对其β淀粉样蛋白(Aβ)和Tau抗体的调节作用,探讨其改善AD认知能力的可能机制.方法 于实验第1、3天向大鼠侧脑室内注射(icv)链脲佐菌素(STZ)建立AD模型,ig给予柚皮素、罗格列酮,模型组和对照组则ig等量生理盐水,第1次术后21d用Morris水迷宫检测动物的学习和记忆水平;采用Western blotting检测胰岛素降解酶(insulin-degrading enzyme,1DE),糖原合成酶激酶-3β (glycogen synthase kinese-3β,GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β (pGSK-3β)、Tau、磷酸化Tau (pTau)的表达;采用免疫组化检测Aβ40和Aβ42在大脑的沉积.结果 Morris水迷宫结果显示柚皮素和罗格列酮均可以恢复AD动物的认知能力(P＜0.05):Westem blotting结果显示柚皮素和罗格列酮能增加IDE的表达和降低GSK-3β的活性,减少Tau的磷酸化水平(P＜0.05);免疫组化结果显示柚皮素和罗格列酮处理大鼠的大脑皮质Aβ40和Aβ42均减少.结论 柚皮素作为过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARy)激动剂可以发挥胰岛素增敏剂的作用,可能通过改善与胰岛素相关的IDE和GSK-3β的表达来缓解AD动物的认知能力、Aβ的沉积和Tau的磷酸化.     

牡丹种子化学成分研究

目的:进一步研究牡丹Paeonia suffruticosa种子中化学成分。方法:采用硅胶、ODS及Sephadex LH-20等柱色谱进行分离,通过理化常数和波谱分析鉴定化合物的结构。结果:分离得到13个化合物,分别鉴定为芍药苷(1)、氧化芍药苷(2)、6′-O-β-D-葡萄糖芍药内酯苷(3)、8-去苯甲酰芍药苷(4)、8-debenzoylpaeonidanin(5)、1-O-β-D-glucopyranosylpaeonisuf-frone(6)、1-O-β-D-乙基甘露糖苷(7)、蔗糖(8)、木犀草素(9)、芹菜素(10)、苯甲酸(11)、1-O-β-D-对羟基苯甲酰葡萄糖苷(13)。结论:化合物2,4~6为该种首次分离得到,化合物7和12为首次从芍药科植物中分离得到。     

芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞氧化损伤的影响

目的:研究芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法:Aβ25-35造成PC12细胞损伤,检测细胞的存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率以及细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的变化.采用流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位的变化.Western blot法检测细胞内HO-1,Cyt C和cleaved Caspase-3蛋白的表达水平.结果:芍药苷组(5,10,20 μmol·L-1)能不同程度地对抗Aβ25-35对PC12细胞的损伤,增加细胞存活率,减少LDH漏出率和MDA含量,增加抗氧化酶SOD,GSH-Px和HO-1的活性,减少细胞内ROS形成,提高线粒体膜电位,减少Cyt C释放和cleaved Caspase-3蛋白的表达.结论:芍药苷对Aβ25-35致PC12细胞损伤具有一定的抑制作用,其作用机制可能与抑制Aβ25-35诱导的氧化应激以及减轻线粒体损伤有关.     

松果菊苷及异麦角甾苷对神经细胞尼古丁受体表达的影响

目的 研究肉苁蓉活性成分松果菊苷及异麦角甾苷对神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞神经型尼古丁受体表达的影响及其对抗β淀粉样蛋白(Aβ)神经毒性作用机制,以了解其神经保护作用机制.方法 比色法测定细胞MTT还原率筛选松果菊苷及异麦角甾苷安全浓度范围,并用Aβ<,25-35>处理细胞后,测定MTT还原率,蛋白质印迹法(Western blot)测定尼古丁受体α3、α7蛋白表达的变化.结果 松果菊苷及异麦角甾苷能提高细胞α3及α7神经型尼古丁受体亚单位蛋白质表达水平,呈剂量依赖关系;并能对抗Aβ<,25-35>引起的α3和α7受体亚单位蛋白质水平降低,减弱Aβ<,25-35>引起的细胞损伤.结论 松果菊苷及异麦角甾苷可能通过上调神经型尼古丁受体亚单位蛋白来发挥神经保护作用,在阿尔茨海默氏病的治疗中可能起到一定作用.     

β-淀粉样蛋白在阿尔茨海默病中的作用及中药多靶点对抗研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer,s disease,AD)是以认知功能障碍和记忆损害为主要临床特征的神经退行性疾病,其病理变化之一是患者脑内的神经炎性斑(老年斑),主要成分为细胞外β-淀粉样蛋白(amyloid proteinβ,Aβ)的沉积,而Aβ又由淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)经序列水解而来。研究表明,Aβ可能是各种原因诱发AD的共同通路,是AD形成和发展的关键因素,因此本文以Aβ为靶标,对其产生、神经毒性及中药多靶点抗AD作用的研究进展进行综述。