软坚消痰活血化瘀法抗肝纤维化的作用机制概述

目的：对软坚消痰、活血化瘀法抗肝纤维化的作用机制进行了概述.方法：本文从三个方面进行了论述：①软坚消痰、活血化瘀法的立法及抗纤软肝颗粒的组方意义;②抗纤软肝颗粒影响肝星状细胞增殖的作用机制;③软坚消痰、活血化瘀法抗胀纤维化的作用机制.结果：肝纤维化的基本病机是血瘀痰结,治疗应软坚消痰、活血化瘀为大法.该法抗肝纤维的主要机制有：①保护肝细胞;②抑制肝星状细胞增殖,促进肝星状细胞凋亡;③干扰肝星状细胞激活的细胞内信号传导.结论：软坚消痰,活血化瘀法具有较好的抗肝纤维化作用     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒(KXR)对肝星状细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的影响.方法:传代培养的大鼠肝星状细胞系HSC-T6与中药复方抗纤软肝颗粒(终浓度为5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml)及药物血清(5%、10%、20%)共同培养48小时后,应用MTT法测定细胞增殖,TUNEL法及流式细胞仪测定细胞凋亡、免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax.结果:抗纤软肝颗粒无论是药物还是含药血清,均能显著抑制HSC-T6增殖,并使细胞周期阻滞于S期,在安全浓度范围内,5mg/ml组和10%药物血清组作用最强(P＜0.01); 并可诱导HSC凋亡, 且凋亡抑制分子Bcl-2表达下调, 促凋亡分子Bax表达增强(P＜0.01).结论:抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的作用机制可能在于抑制肝星状细胞增殖,并通过下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡.     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞增殖的影响

目的从细胞学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制.方法采用酶消化法、密度梯度离心法,分离正常大鼠肝星状细胞(HSC),培养、鉴定及传代.制备抗纤软肝冲剂药物血清,温育传一代HSC,并设生理盐水组和秋水仙碱组为对照.3H-proline掺入法测定细胞活力;3H-TdR掺入法和MTT比色法测定细胞增殖.结果抗纤软肝冲剂组药物血清对细胞形态无影响,还能明显提高细胞的3H-proline掺入(P＜0.01),明显抑制细胞的3H-TdR掺入量和MTT转化(P＜0.01),且对MTT的抑制作用呈浓度依赖性递增趋势.结论抗纤软肝冲剂能提高细胞活力,无细胞毒性作用;能抑制HSC的增殖,这可能是该方抗肝纤维化的细胞学机制之.     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF-β_1 mRNA的影响

目的 :探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法 :分离正常大鼠肝星状细胞 ,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃 ,制备药物血清 ,温育培养细胞 72h ,提取细胞总RNA ,RT PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF β1mRNA的表达。结果 :抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达。结论 :抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达     

络病理论与肝纤维化关系探讨

本文从络病理论出发认为慢性肝病肝纤维化的基本病机是肝络痹阻,血瘀痰结,肝络痹阻,血瘀痰结与肝星状细胞在肝纤维化的作用密切相关.在治疗强调分期辨证,在清化湿热、调和肝脾、滋阴肝肾等相应治法的基础上,活血化瘀、软坚消痰贯穿始终.     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF—β1mRNA的影响

目的：探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞72h,提取细胞总RNA,RT-PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF-β1mRNA的表达。结果：抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-β1mRNA的表达。结论：抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-βmRNA的表达。     

抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞整合素信号及凋亡的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞增殖、凋亡的影响及整合素信号通路的下游信号分子FAK在其中的作用。方法:将传代培养的大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)与中药复方抗纤软肝颗粒药物血清(5%、10%、20%)共同培养48h后,应用MTT法测定细胞增殖;应用流式细胞仪测定细胞凋亡;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测FAK mRNA的表达。结果:抗纤软肝颗粒药物血清,均能显著抑制HSC-T6增殖,20%药物血清组作用最强(P<0.05);流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物血清均可诱导HSC凋亡(P<0.05);抗纤软肝颗粒药物血清能够使HSC的FAK mRNA的表达下调。结论:抗纤软肝颗粒能够抑制HSC增殖及诱导凋亡HSC。其作用可能与其抑制整合素信号通路下游信号分子FAK mRNA的表达有关。     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的 :从细胞分子学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制。方法 :抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC ,以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原 ,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量 ;半定量法RT -PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶 (MMP1)的mRNA表达。结果 :抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组 (P <0 .0 1) ;能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达 (P <0 .0 1) ,且能促进MMP1的mRNA表达 (P <0 .0 1)。结论 :抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达 ,从而可达到抑制胶原合成 ,促进胶原降解 ,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

康氏抗纤颗粒抗肝纤维化的实验研究

目的：初步探讨康氏抗纤颗粒抗肝纤维化的作用机制。方法：用复合四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型，分为正常对照组、模型对照组、康氏抗纤颗粒大剂量组、等效剂量组和干扰素组。观察肝功能、血清透明质酸、肝组织羟脯氨酸、肝脏病理组织学改变及用免疫组织化学法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果：康氏抗纤颗粒可以显著改善肝功能，降低血清透明质酸和肝组织羟脯氨酸水平，减少肝纤维化面积，减少α-SMA的表达。结论：康氏抗纤颗粒具有良好的抗肝纤维化作用，其机制可能与保护肝细胞调节胶原代谢减少活化的肝星状细胞有关。     

抗纤软肝中剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的从细胞分子学水平探讨抗纤软肝中剂抗肝纤维化的作用机制.方法抗纤软肝中剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照.ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量;半定量法RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶(MMP1)的mRNA表达.结果抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组(P＜0.01);能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达(P＜0.01),且能促进MMP1的mRNA表达(P＜0.01).结论抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达,从而可达到抑制胶原合成,促进胶原降解,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一.     

抗纤软坚冲剂精简方防治肝纤维化的研究

目的:观察抗纤软坚冲剂精简方抗肝纤维化的作用.方法:应用四氯化碳和小牛血清白蛋白建立大鼠肝纤维化模型,以抗纤软坚冲剂和抗纤软坚冲剂精简方防治复合性免疫损伤大鼠肝纤维化,通过病理细胞学,证明抗纤软坚冲剂及其精简方抗肝纤维化的作用.结果:抗纤软坚冲剂及精简方都能明显抑制肝纤维化.结论:抗纤软坚冲剂及其精简方对大鼠肝纤维化模型都具有抗肝纤维化作用,其精简方同样是防治肝纤维化的有效药物.     

抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞整合素信号及凋亡的影响

目的：探讨抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞增殖、凋亡的影响及整合素信号通路的下游信号分子FAK在其中的作用。方法：将传代培养的大鼠肝星状细胞系（HSC—T6）与中药复方抗纤软肝颗粒药物血清（5％、10％、20％）共同培养48h后，应用MTT法测定细胞增殖；应用流式细胞仪测定细胞凋亡；采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测FAKmRNA的表达。结果：抗纤软肝颗粒药物血清，均能显著抑制HSC—T6增殖，20％药物血清组作用最强（P〈0．05）；流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物血清均可诱导HSC凋亡（P〈0.05）；抗纤软肝颗粒药物血清能够使HSC的FAKmRNA的表达下调。结论：抗纤软肝颗粒能够抑制HSC增殖及诱导凋亡HSC。其作用可能与其抑制整合素信号通路下游信号分子FAKmRNA的表达有关。     

舒肝颗粒对大鼠肝星状细胞活化增殖的抑制作用

目的:研究中药舒肝颗粒对体外培养活化大鼠肝星状细胞(HSC)活化增殖的影响,探讨舒肝颗粒抗肝纤维化的作用机制。方法:用空白对照及0.01,0.02,0.04 g.L-1的舒肝颗粒分别处理HSC细胞系HSC-T6 24 h后,MTT比色法检测细胞增殖,光镜下观察HSC形态学变化,免疫组化法测各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的变化。结果:舒肝颗粒作用HSC细胞24 h后,0.01,0.02,0.04 g.L-1终浓度肝星状细胞抑制率分别为7.02%,13.33%,20.85%,明显高于空白对照组,且与药物浓度相关。与对照组比较,随着舒肝颗粒药物浓度的增高,HSC的细胞增殖和胞体伸展受到明显抑制;空白对照组,舒肝颗粒0.01,0.02,0.04 g.L-1组α-SMA阳性表达率分别为(62.83±3.42)%,(47.31±2.74)%,(37.79±3.01)%,(25.74±2.83)%,各组与空白对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:舒肝颗粒抑制肝星状细胞活化、增殖并抑制α-SMA表达,可能是其抗纤维化的作用机制。     

玉米须对大白鼠肝星状细胞增殖分化的影响

目的:观察玉米须(Stigma maydis or corn silk)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells)的增殖,并探讨其抗肝纤维化作用机制。方法:用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Metrizamide密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞,用MTT比色法和ELISA法分别检测大鼠肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原的合成。结果:玉米须能明显抑制肝星状细胞的增殖及Ⅰ型胶原的合成,随着玉米须用量增加,抑制作用增强,呈明显的剂量效应关系(P0.05)。结论:玉米须可通过抑制大鼠肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原合成而起到抗肝纤维化的作用。     

抗纤软坚冲剂对实验性肝纤维化大鼠TGFβ_1及其受体的影响

既往的临床与动物实验证实了抗纤软坚冲剂有抗肝纤维化作用,为进一步探讨抗纤软坚冲剂抗肝纤维化的机制,本实验从其对促肝纤维化关键细胞因子之一——转化生长因子TGFβ1及其受体含量、mRNA表达的影响这一角度进行观察,以探讨抗纤软坚冲剂对肝纤维化这一环节的作用。选择复合性损伤大鼠为模型,秋水仙碱为对照,应用免疫组织化学、原位杂交技术检测TGFβ1及其受体的阳染面积,并用图像分析系统计算出阳性表达率,结果得出抗纤软坚冲剂可抑制TGFβ1分泌及其传导,与正常组、模型组比较,有显著性差异(P<0.05);与秋水仙碱组比较,无显著差异(P>0.05)。证明抗纤软坚冲剂能抑制肝纤维化大鼠TGFβ1及其受体的表达。其机理可能是通过抑制HSC的活化进而减少了TGFβ1及其受体的表达。     

抗纤Ⅰ号复方药物血清对肝星状细胞 L型钙通道的影响

目的:应用膜片钳全细胞技术研究抗纤Ⅰ号复方药物血清对单个肝星状细胞L型钙通道的影响,并进一步探讨该药防治肝纤维化的机制.方法:制备大鼠含抗纤Ⅰ号复方药物血清,分别用药物血清和CCl4处理大鼠肝星状细胞(HSC),孵育24h后,应用膜片钳全细胞技术观察细胞L型钙通道.通过正交设计方法,研究不同浓度CCl4、抗纤Ⅰ号复方药物血清及其作用的先后顺序和二者作用的时间间隔对肝星状细胞L型钙通道的影响.结果:不同浓度抗纤Ⅰ号复方药物血清、CCl4及其作用的前后顺序对细胞L型钙电流的影响有显著性(P＜0.05),两因素作用的时间间隔对结果没有显著性(P＞0.05).CCl4在5～20mmol/L范围内能显著增加肝星状细胞L型钙电流峰值,5%～40%抗纤Ⅰ号复方药物血清明显降低肝星状细胞L型钙电流峰值(P＜0.05).结论:抗纤Ⅰ号具有防治肝纤维化的作用,其机理可能与其调节肝星状细胞L型钙通道有关.     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状态细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的：从细胞分子学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制。方法：抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC，以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原，并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量；半定量法RT－PCR法和检测Ⅰ型胶原，间质胶原酶（MMPI）的mRNA表达。结果：抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组（P＜0．01）；能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达（P＜0．01），且能促进MMP1的mRNA表达（P＜0．01）。结论：抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达，从而可达到抑制胶原合成，促进胶原降解，这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

抗纤抑癌方对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶表达的影响

目的:研究抗纤抑癌方对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1及TIMP-1表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法:以复方鳖甲软肝片和秋水仙碱为对照药,观察抗纤抑癌方对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化模型大鼠肝脏组织病理的影响,并通过免疫组化方法测定各组大鼠肝脏MMP-1、TIMP-1的表达。结果:与模型组相比,抗纤抑癌组MMP-1表达显著升高,TIMP-1表达明显降低;鳖甲软肝组和秋水仙碱组MMP-1表达均显著高于模型组。与各治疗组相比,抗纤抑癌组MMP-1表达高于鳖甲软肝组。结论:抗纤抑癌方具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与增加MMP-1表达、降低TIMP-1表达、促进细胞外基质降解等有关。     

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝脏MMP-1mRNA及TIMP-1mRNA表达的影响

目的观察抗纤软肝颗粒对实验性肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响,探讨其防治肝纤维化的作用.方法采用250mL/L四氯化碳给大鼠皮下注射制备肝纤维化模型,并同时给与秋水仙碱及抗纤软肝颗粒小、大剂量治疗,免疫组织化学法检测肝组织Ⅰ、ⅢⅡ型胶原,原位杂交的方法检测MMP-lmRNA、TIMP-1mRNA.结果抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达(P＜0.05),抑制TIMP-1的表达(P＜0.01),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P＜0.01).结论抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达,抑制TIMP-1的表达,促进胶原的降解,产生抗肝纤维化的作用.     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞整合素α5β1蛋白表达的影响

目的观察抗纤软肝颗粒对肝星状细胞整合素α5β1、蛋白表达的影响。方法运用细胞培养技术,以HSC-T6细胞系为研究对象,分为空白包被+10%生理盐水组,纤维连接蛋白(FN)+10%生理盐水组,FN+5%抗纤软肝颗粒含药血清(KXR)组,FN+10%KXR组,FN+20%KXR组。按以上分组进行药物干预,干预后继续培养48h。采用MTT法检测细胞增殖,甲苯胺蓝染色方法测定细胞黏附率,流式细胞仪测定HSC凋亡;应用免疫细胞组织化学方法检测整合素α5β1蛋白的表达。结果抗纤软肝颗粒含药血清组HSC的整合素α5β1蛋白表达显著下调,与对照组及FN组相比有显著性差异(P0.05,P0.01)。结论抗纤软肝颗粒能够下调HSC整合素α5β1的表达,可能是其阻抑整合素信号转导的位点之一。