不同扶正药物及其配伍对SMMC-7721人肝癌细胞的诱导分化作用

目的：探讨不同扶正药物及其配伍对SMMC－7721人肝癌细胞的诱导分化作用及其作用机制。方法：选取临床肝癌治疗常用的益气、温阳、补肾、养阴等扶正治法的代表药物,并根据阴阳治则理论将其分别配伍为益气养阴、温阳养阴及补肾（阳）养阴等复合方治法,分别煎成汤液,采取大鼠灌胃给药后分离药物血清的方法制备药血清,作用于体外培养的SMMC－7721人肝癌细胞,以正常大鼠血清和维甲酸作对照。HE染色观察细胞形态;RIA法测甲胎蛋白（AFP）、环核苷酸（cAMP）;ELISA法测白蛋白（Alb)。结果：养阴、益气养阴、温阳养阴、补肾养阴组细胞Alb分泌量、cAMP含量增加,AFP分泌量降低,细胞核浆比例缩小。结论：养阴药北沙参、麦门冬及其与益气、温阳、补肾配伍后的药物血清具有诱导SMMC－7721人肝癌细胞分化的作用;提高细胞内cAMP水平,可能是扶正药物诱导肝癌细胞分化的重要机制。     

抗癌扶正方及含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制作用

目的:探讨抗癌扶正方的抗肝癌作用。方法:提取抗癌扶正方,使用药物及含药血清,针对人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养,分光光度计检测抗癌扶正方对肝癌细胞生长抑制率的影响。结果:抗癌扶正方及药物血清,具有良好的抑肝癌细胞生长作用,尤以1、10mg/mL剂量组效果最佳,作用程度与化疗药物类似。结论:抗癌扶正方能够抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性。其机制有必要进一步深入探讨。     

抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721的Bcl-2基因表达的调控作用

目的:研究与分析抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721的Bcl-2基因表达的调控作用。方法:首先培养人肝癌细胞SMMC-7721,然后使用噻唑蓝比色法(MTT比色法)检测抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721增殖能力,使用流式细胞仪检测人肝癌细胞SMMC-7721抑制能力和Bcl-2基因表达水平。结果:通过检测发现,抗癌扶正方可以有效抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖。通过流式细胞仪检测发现,抗癌扶正方作用于人肝癌细胞SMMC-7721后,Bcl-2基因表达水平明显降低。结论:抗癌扶正方可以通过调控Bcl-2基因表达从而抑制人肝癌细胞SMMC-7721的活性。     

抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721的Bcl-2基因表达的调控作用

目的探讨抗癌扶正方(KFP)的抗肝癌作用及机制。方法采用人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT法、流式细胞仪检测抗癌扶正方对肝癌细胞生长抑制率的影响及对Bcl-2基因表达的调控作用。结果抗癌扶正方具有良好的抑制肝癌细胞生长作用,尤其以1,10 mg/mL剂量组的效果最佳,作用程度与化疗药物类似。结论抗癌扶正方能够抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性。其机理在于下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达,促进细胞凋亡的产生。     

扶正抗癌方对人肝癌细胞增殖作用影响的实验研究

通过大鼠灌胃给药后,分离药物血清,作用于体外培养细胞的方法,观察扶正抗癌方对人肝癌细胞SMMC7721对增殖的影响;用两个循环聚合——解聚的方法,提取大鼠脑组织中微管蛋白,利用微管蛋白随温度变化而出现的聚合——解聚特点,观察扶正抗癌方对微管蛋白活性的影响,研究扶正抗癌方抑制肿瘤细胞增殖作用的机理。结果表明扶正抗癌方药物血清具有明显抑制人肝癌细胞3~H-TdR掺入和MTT还原作用;扶正抗癌方显著抑制微管蛋白聚合。说明扶正抗癌方具有较好的抑制人肝癌细胞增殖作用。其机理可能在于影响微管构建,破坏纺缍丝形成,使有丝分裂中止,从而抑制肿瘤细胞增殖。     

健脾化瘀中药逆转人肝癌细胞恶性表型作用研究

目的:研究健脾化瘀中药960复方(960)对人肝癌细胞恶性表型的逆转作用及机理.方法:用960大鼠灌胃后采集的含药血清体外处理人肝癌SMMC7721细胞,MTT法检测细胞活力,ELISA法检测AFP和白蛋白(Alb),放免法检测环核苷酸水平,PCR-ELISA法检测端粒酶活性.结果:中药血清处理组,细胞活力显著减弱,Alb生成明显增多,以作用6天组作用最为明显,AFP显著降低,端粒酶活性显著低于对照组,与DDP组相近.细胞内cAMP明显高于对照组,DDP组无明显变化.结论:中药960复方具有逆转人肝癌SMMC7721细胞恶性表型作用,作用机理与升高细胞内环核苷酸水平和降低端粒酶活性有关.     

抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721的P~(53)基因表达的调控作用

目的:探讨国医大师经验方"抗癌扶正方"的抗肝癌作用及机制。方法:提取抗癌扶正方,针对人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT法、流式细胞仪检该方对肝癌细胞生长抑制率的影响及对突变型P53基因表达的调控作用。结果:抗癌扶正方具有良好的抑制肝癌细胞生长作用,尤其以1mg/mL,10mg/mL剂量组的效果最佳,作用程度与化疗药物类似。此方可以下调凋亡抑制基因突变型P53的表达。结论:抗癌扶正方能够抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性。其机理在于降低肝癌凋亡抑制基因的表达,促进细胞凋亡的产生。     

健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

[目的]探讨健脾化瘀方对人肝癌细胞系SMMC-7721的抑制率及药物浓度和作用时间对细胞抑制率的影响,以及IC_(50)药物浓度下对SMMC-7721凋亡的影响。[方法]采用MTT法,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及与药物作用时间之间的关系。用AnnexinV/PI双染色法,用流式细胞仪检测健脾化瘀方对肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响。[结果]健脾化瘀方浓度在5mg/mL时,对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖和时间依赖效应关系。健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721作用24h后,肝癌细胞凋亡率升高,并有一定的浓度依赖性。[结论]健脾化瘀方有抑制SMMC-7721细胞的增殖,能诱导人肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡。     

健脾柔肝方含药血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及对VEGF表达的影响

目的:探讨健脾柔肝方含药血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用体外培养SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-FU组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数,荧光定量PCR检测VEGF-mRNA在细胞中的表达。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,抑制VEGF-mRNA的表达;而以化疗药5-FU组作用最强,健脾柔肝汤中、高剂量含药血清组次之,且作用相当。结论:健脾柔肝方含药血清可有效诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,其作用机制可能是通过抑制VEGF-mRNA的表达而实现的。     

健脾柔肝方含药血清抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖及诱导凋亡作用

目的:探讨健脾柔肝方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:SMMC-7721细胞体外培养,以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-Fu组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导细胞凋亡;而以化疗药5-Fu组作用最强,健脾柔肝汤中剂量含药血清组次之。结论:健脾柔肝方含药血清不仅可直接抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,而且可有效诱导细胞凋亡。     

麝黄消瘤汤对人肝癌细胞多药耐药性逆转作用的实验研究

目的:通过观察麝黄消瘤汤对细胞内阿霉素浓度、细胞膜转运蛋白(P-gp)表达以及多药耐药基因表达的影响,探究其逆转人肝癌细胞系耐药的分子生物学机制。方法:制备麝黄消瘤汤含药兔血清,配制成15%、20%、25%、30%等不同浓度,培养人肝癌细胞系(Bel-7402),测定麝黄消瘤汤含药兔血清干预前后阿霉素诱导的细胞半数致死量,计算耐药倍数及逆转耐药倍数;应用荧光分光光度计检测细胞内阿霉素浓度,以流式细胞仪检测Pgp表达,以RT-PCR技术检测MDR1mRNA表达。结果:Bel-7402ADR细胞的耐药倍数约为93.5倍。加入20%含药血清后,其IC50降低为9.3μg/ml,由此计算出麝黄消瘤汤含药血清对Bel-7402ADR细胞的增敏倍数为8.3倍;不同浓度的含药血清作用均可降低Bcl-7402细胞的P-gp阳性细胞率,且呈明显的量效关系,与对照组比较有显著意义;麝黄消瘤汤含药血清可抑制人肝癌细胞中MDR基因的表达,且以20%含药血清浓度对MDR的抑制效果最突出,抑制作用随着作用时间的延长而增强,具有时间依赖关系。结论:麝黄消瘤汤能通过提高肿瘤细胞内化疗药物浓度,降低细胞膜转运蛋白的表达,下调多药耐药基因的表达,从而达到逆转人肝癌细胞多药耐药性产生的作用。     

参桃软肝丸含药血清对HepG-2细胞凋亡及细胞周期影响的实验研究

目的：观察参桃软肝丸含药血清对人肝癌细胞HepG-2细胞凋亡及细胞周期的影响,验证参桃软肝丸可能的作用机理。方法：将9只雄性新西兰家兔分为3组,每组3只,实验分空白对照组、实验组和阳性药物对照组,人肝癌细胞株HepG-2细胞接种于RPMI 1640培养液中,细胞培养为3～5d。MTT法观察细胞抑瘤率,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期。结果：参桃软肝丸对人肝癌细胞株HepG2的生长有抑制作用,且随剂量的增加而增强。其中,高浓度组抑瘤率最高可达43.2%。有较好的诱导凋亡作用,凋亡率可达15.6%,且阻滞细胞增殖于G0/G1期。结论：参桃软肝丸对人肝癌细胞HepG-2有较好的抑瘤和诱导细胞凋亡作用,诱导肿瘤细胞凋亡可能是其抗肿瘤作用机制之一。     

消癌解毒方含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

目的 观察消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 采用人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT 法、流式细胞仪Annexin V-FITC法检测消癌解毒方含药血清对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 消癌解毒方具有良好的抑制肝癌细胞生长、促进凋亡的作用,尤其以高剂量组[抑制率为35.8％,凋亡率为(23.0±1.6)％]的效果最佳,作用程度与化疗药物顺铂[抑制率为35.3％,凋亡率为(22.8±4.4)％]相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方含药血清能抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,作用机制需要进一步的研究.     

消癌解毒方含药血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的 探讨消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 消癌解毒方含药血清作用人肝癌SMMC-7721细胞后,采用电镜技术观察细胞的形态改变,流式细胞仪Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况.结果 消癌解毒方能明显促进肝癌细胞的凋亡.电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变;凋亡作用以高剂量组效果最佳,凋亡率与顺铂组相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方通过诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长.     

叶下珠对人肝癌细胞的影响

目的：研究叶下珠对人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１的影响。方法：噻唑蓝（ＭＴＴ）还原法和氚标胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＲｄＲ）掺入法观察叶下珠提取物对人肝癌细胞ＳＭＭＣ７２２１细胞活性及ＤＮＡ合成的影响。结果：经叶下珠提取物处理后，ＳＭＭＣ７７２１活力明显减弱，３Ｈ－ＴｄＲ掺入率明显降低，ＤＮＡ合成抑制率与药物剂量成线性关系。结论：叶下珠具有杀伤人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１和抑制其增殖作用。     

益气养阴诱导SMMC-7721肝癌细胞分化作用与意义

目的：探讨中医常用扶正代表药物及其配伍诱导肝癌细胞分化的作用与意义,为临床应用提供基础。方法：选取临床肝癌治疗常用的益气药黄芪、白术,温阳药附子、肉桂,补肾药虫草菌丝、仙灵脾,养阴药麦冬、北沙参,分别煎成汤液,观察灌胃给药后大鼠含药血清对SMMC-7721人肝癌细胞增殖、细胞形态、凋亡,AFP与A1b分泌量,细胞内cAMP含量以及p53、P21^ras基因蛋白表达的影响。结果：养阴药可显著抑制细胞增殖,余三组均无作用;养阴药分别与其他三组药配伍后均可抑制细胞增殖,但只有益气养阴的作用显著强于养阴药;在降低细胞核浆比与AFP,提高Alb、细胞内cAMP含量与p53蛋白、抑制p21^ras蛋白表迭等与其抑制增殖的结果基本一致;以提高细胞内cAMP含量的作用最突出,与对照组相比,养阴药提高44．5％,益气药下降24．3％,而益气养阴组较养阴药提高60．3％,较维甲酸提高20．8％。结论：养阴药北沙参、麦门冬可显著抑制肝癌细胞增殖、诱导细胞分化;益气药黄芪、白术对养阴药这一作用有显著放大效应,而提高细胞内cAMP含量是其主要作用环节。     

小半夏加茯苓方含药血清抑制HepG2细胞增殖及促进凋亡

目的:采用血清药理学的方法,观察小半夏茯苓方对肝癌HepG2细胞增殖的影响,初步探索该方诱导肝癌细胞凋亡相关因子表达的影响。方法:制备含药血清,正常实验用动物Wistar大鼠,采用灌胃或腹腔注射给药途径,连续给药3 d,其中,正常对照组,灌服生理盐水;环磷酰胺(CTX)组,腹腔注射CTX;原方汤剂组,灌服小半夏加茯苓汤;原方汤剂加CTX组,灌服小半夏加茯苓汤的同时腹腔注射CTX;颗粒剂高中剂量组,灌服相当于小半夏加茯苓汤等量、二倍量的颗粒剂,末次给药后12 h,腹主静脉取血,制备含药血清,刺激体外培养的HepG2肝癌细胞,采用MTT法检测其对细胞增殖抑制的影响,流式细胞术检测其对各时相细胞周期分布,免疫组织化学的方法观察其对凋亡相关蛋白半胱天冬酶-3(caspase-3)、半胱天冬酶-9(caspase-9)的影响。结果:小半夏加茯苓方能抑制人肝癌HepG2细胞的生长,在作用24 h时效果最明显。流式检测结果显示,药物作用细胞24 h,小半夏加茯苓方阻滞细胞于S期,环磷酰胺将细胞阻滞于G2期。小半夏加茯苓方作用24 h能诱导HepG2细胞的凋亡,caspase-3表达与药物的剂量呈正相关。结论:小半夏加茯苓方可能通过激活caspase-3蛋白表达,从而诱导肝癌细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期,有效抑制细胞增殖,发挥抗肿瘤的作用。     

PUMA在EGCG调节肝癌细胞生长中的作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响及其可能作用机制。方法采用不同浓度的EGCG处理SMMC-7721细胞,以四唑氮蓝还原法(MTT)观察处理后细胞的生长情况,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测抑癌基因PUMA mRNA表达水平的变化,Western-Blot检测PUMA蛋白水平的表达。结果 EGCG处理后SMMC-7721细胞生长明显抑制,并且呈现时间、剂量依赖性,凋亡细胞比例明显上升。抑癌基因PUMA的mRNA水平和蛋白表达水平随着EGCG浓度的增加而升高。结论 EGCG可以明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长,诱导其凋亡;其可能机制为上调抑癌基因PUMA的表达水平,从而促进细胞凋亡。     

葛根提取物诱导人肝癌细胞分化的研究

目的 :探讨葛根提取物对Bel-740 2人肝癌细胞的作用。方法 :实验组Bel-740 2人肝癌细胞用葛根提取物处理 ,对照组用培养液处理 ,观察并对照两组AFP ,γ -GT ,ALD ,TAT ,OCT ,ALP的分泌量。结果 :治疗组AFP分泌量、γ -GT和ALD活力明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,而OCT ,TAT和ALP的活力则明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,差异均具有显著性。结论 :葛根提取物能有效诱导Bel-740 2人肝癌细胞的分化。     

绞股蓝总皂甙对肝细胞瘤细胞凋亡的诱导作用

目的：探讨绞股蓝总皂甙（Gp）对人肝细胞瘤细胞（Huh-7）细胞凋亡的影响及作用机制。方法：采用流式细胞术检测Gp对人Huh-7细胞凋亡的影响，Western blot分析Gp作用Huh-7细胞后表达的Bcl-2，Bcl-XL，Bax和Bad蛋白水平。结果：20mg／ml Gp作用于细胞24h后，64％的Huh-7细胞发生凋亡，而人纤维细胞凋亡率为12％。Western blot结果显示Gp作用后Huh-7细胞中Bcl-2表达明显降低，而Bax表达显著上调。结论：Gp可诱导人Huh-7细胞凋亡，其作用机制是通过下调Bcl-2和上调Bax的表达而发挥作用。