不同炮制品入药的青娥丸含药血清对人成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的:研究以不同炮制品入药的青娥丸含药血清对人成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。观察盐炙品及生品青娥丸含药血清对人成骨细胞功能的影响,探讨青娥丸对骨质疏松症的治疗机制,阐述应用盐炙品配伍入药的必要性。方法:以绝经后妇女股骨松质骨分离得到的成骨细胞为研究对象,制备以补骨脂和杜仲生品及盐炙品配伍入药的青娥丸,给予大鼠生品及盐炙品青娥丸水提液ig(10mL·kg-1),给药持续7d,第7天采集大鼠血液制备含药血清。实验分为空白组、空白血清组、青娥丸含药血清组、盐青娥丸含药血清组。采用MTT法检测各组含药血清对人成骨细胞增殖的影响;同时测量成骨细胞碱性磷酸酶活性来评价各组含药血清对人成骨细胞分化的作用;采用细胞钙茜素红染色方法对给予含药血清处理的人成骨细胞进行染色,观察对人成骨细胞矿化的影响。结果:与同浓度空白血清比较,青娥丸的生品和盐炙品的含药血清均有促进成骨细胞增殖的作用(P<0.05),且含药血清浓度相同时,青娥丸盐炙品含药血清促进成骨细胞增殖的作用优于生品含药血清(P<0.05);青娥丸生品及盐炙品含药血清具有促进成骨细胞分化的作用(P<0.05),且盐炙品的作用要优于生品(P<0.01);空白血清对成骨细胞的矿化无显著的作用,而青娥丸生品及盐炙品含药血清具有促进成骨细胞矿化结节形成的作用,且盐炙品的作用要优于生品。结论:青娥丸能提高成骨细胞增殖、分化及矿化活性,其对于骨质疏松症的治疗作用与其能显著提高成骨细胞功能有关,且盐炙品入药的青娥丸效果较好。     

不同炮制品的杜仲含药血清及其环烯醚萜类成分对绝经后妇女成骨细胞增殖与分化的影响

目的研究杜仲盐炙前后含药血清及其环烯醚萜类成分对绝经后妇女的成骨细胞增殖和分化的影响。探讨杜仲对骨质疏松症的治疗机制,阐述应用盐炙品入药的必要性。方法以绝经后妇女股骨松质骨分离得到的成骨细胞为研究对象,给予大鼠生品及盐炙品杜仲水提液灌胃(10 ml·kg-1),给药持续7 d,第7天采集大鼠血液制备含药血清。实验分为空白对照组、空白血清组、杜仲含药血清组、盐杜仲含药血清组。以雌二醇作为对照阳性药物。采用MTT法检测各组含药血清及各单体成分对人成骨细胞增殖的影响;同时测量成骨细胞碱性磷酸酶活性来评价各组含药血清及各单体成分对人成骨细胞分化的作用。结果杜仲生品和盐炙品含药血清均能促进人成骨细胞的增殖,提高碱性磷酸酶的活性,且血清浓度为20%时,杜仲盐炙品含药血清对成骨细胞增殖、分化的促进作用显著优于生品(P0.01);同时杜仲中4种环烯醚萜类成分对人成骨细胞的增殖和分化均有促进作用。结论杜仲生品和盐炙品含药血清均具有良好的促进人成骨细胞增殖和分化的作用,其中盐炙品的作用显著优于生品。杜仲中环烯醚萜类成分可能是其补肾健骨作用的有效成分。     

二至丸含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的 研究二至丸含药血清对体外培养大鼠成骨细胞(Osteoporosis,OP)增殖、分化及矿化的影响.方法 二至丸(9,4.5,2.25 g/kg/d)给大鼠连续灌胃7d,每天2次,于第8天灌胃后1～2 h眼眶取血制备含药血清,采用多次酶消化法获得大鼠原代成骨细胞,将含药血清加入成骨细胞培养液中,采用MTT比色法、碱性磷酸酶(ALP)染色法、茜素红染色法研究其对细胞增殖及功能的影响.结果 二至丸含药血清能不同程度地促进大鼠原代成骨细胞的增殖,二至丸中剂量在24,48,72 h均能显著促进大鼠原代成骨细胞的增殖(P＜0.05);二至丸中、小剂量能显著增加大鼠原代成骨细胞ALP活性(P＜0.05)和矿化结节的数量(P＜0.05),其中二至丸中剂量效果最为显著(P＜0.01).结论 二至丸含药血清具有良好的促进成骨细胞增殖、分化、矿化的作用,其中二至丸中剂量组作用效果尤为显著.     

补骨脂盐炙对实验动物止泻作用影响的研究

目的：考察补骨脂盐炙前后止泻作用的差异，为临床治疗脾肾阳虚所致泄泻提供理论依据。方法：以补骨脂生品、水炙品、盐炙品醇水双提物分别灌胃给药，观察对番泻叶所致急性腹泻小鼠排便点数，大黄造成脾虚腹泻小鼠肠推进率和胃动素含量的影响。结果：补骨脂盐炙品10g/kg剂量能减少急性小鼠腹泻的稀便点数，15g/kg能抑制脾虚小鼠肠推进；水炙品和盐炙品均能促进胃动素的分泌。结论：补骨脂盐炙品对急性以及脾虚腹泻治疗作用优于生品及水炙品；盐炙后止泻作用增强可能与抑制胃肠运动、促进胃动素分泌有关。     

基于促MC3T3-E1细胞增殖与分化的不同规格鹿茸聚类分析

目的考察8种不同规格鹿茸含药血清对MC3T3-E1成骨细胞增殖和分化的影响并对8种不同规格鹿茸进行聚类分析。方法雌性SD大鼠随机分为9组,给药,制得不同规格鹿茸的大鼠含药血清及空白对照血清。以上述血清对MC3T3-E1成骨细胞培养72 h,MTT法检测成骨细胞增殖情况,ELISA法检测碱性磷酸酶(ALP)分泌量,并以成骨细胞的增殖及ALP分泌量为因素进行聚类分析。结果各规格鹿茸均具有促进MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化作用,且聚类分析结果与传统商品鹿茸药材质量划分结果相同。结论鹿茸药材能显著促进MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化,且作用强弱与商品药材优劣相关。     

续断“发汗”前后水煎液及含药血清对人成骨样MG-63细胞、幼鼠成骨细胞增殖的影响

目的探讨续断"发汗"前后水煎液及含药血清对人成骨样MG-63细胞、成骨细胞增殖的影响。方法将人成骨样MG-63细胞、幼鼠成骨细胞分别与续断"发汗"前后水煎液及大鼠含药血清共同培养。MTT法检测细胞增殖,硝基苯磷酸盐法检测成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性。结果续断水煎液和含药血清均能显著促进MG-63细胞和成骨细胞增殖(P0.01),并能显著提高成骨细胞的ALP活性(P0.01),且相同剂量未"发汗"组作用普遍优于或非劣于"发汗"组。结论结合前期成分研究,推断续断"发汗"前后成分的改变影响了其促进细胞增殖和分化的作用,为其进一步研究奠定基础。     

补骨脂不同炮制品对肾阳虚、脾虚大鼠的影响研究

目的:探讨补骨脂盐炙工艺对肾阳虚、脾虚模型动物作用的差异,以阐明补骨脂炮制工艺的药效差异。方法:以主要脏器指数、血清cAMP/cGMP、TNF-α、Na~+-K~+-ATP酶含量为评价指标,观察不同工艺的补骨脂炮制品即补骨脂生品、水炙品、盐炙品对氢化可的松所致肾阳虚模型大鼠及大黄所致脾虚腹泻模型大鼠的影响。结果:不同工艺的补骨脂炮制品对肝指数、肾指数、胸腺指数、血清cAMP/cGMP、TNF-α、Na~+-K~+-ATP酶均有显著性影响(P0.05);且补骨脂盐炙品与生品有显著性差异(P0.05)。结论:补骨脂给药组的燥性强度依次为生品组水炙品组盐炙品组,加热和盐处理都可缓和补骨脂生品的燥性。     

红曲对大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化的影响

目的:研究中药红曲对骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化的影响。方法:取SD大鼠60只,随机分为空白对照组,红曲低、中、高剂量组,普拉固组和倍美力组,分别予以蒸馏水、红曲水提液、普拉固水溶液、倍美力水溶液胃灌,10天后,制备含药血清;将从4-5周SD大鼠取材制备的骨髓基质细胞培养于含药血清培养液中,应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色等方法观察红曲对骨髓基质细胞向成骨细胞分化、增殖、碱性磷酸酶表达及矿化结节形成的影响。结果:含红曲血清明显增加了骨髓基质细胞向成骨细胞分化、增殖、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成(P<0.05或P<0.01)。结论:体外成功培养了骨髓基质细胞和成骨细胞;证实了含红曲血清可以呈剂量依赖性地促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化、增殖、矿化。     

基于ER/ERK信号通路研究左归丸、左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞功能的影响

目的:对比观察左归丸和左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞功能的影响,从而部分阐明"阳中求阴"配伍防治骨质疏松的作用机制。方法:以成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸、左归丸去补阳药含药血清,选用雌激素受体拮抗剂ICI182780共孵,阻断ER受体后检测左归丸、左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。采用MTT法检测24 h、48 h、72 h左归丸、左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞增殖的影响,采用改良钙钴染色法和茜素红染色法分别观察48 h左归丸、左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞ALP活性和矿化结节的影响,采用Western-blot法检测48 h左归丸、左归丸去补阳药含药血清对ERα、ERK、p-ERK和Osterix蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,左归丸组(9.68 g/kg)促进成骨细胞增殖,提高成骨细胞ALP活性和矿化结节数量,上调ERα、p-ERK和Osterix蛋白表达。ICI 182780阻断ER受体后,左归丸含药血清促成骨细胞增殖、分化和矿化的特性明显下降,ERα和p-ERK蛋白表达降低,相关转录因子Osterix的表达也被部分抑制。与空白对照组比较,左归丸去补阳药组(7.47 g/kg)未呈现促MC3T3-E1细胞增殖作用,可促进成骨细胞ALP活性和矿化结节形成数量增多,左归丸组明显优于左归丸去补阳药组,对ERα、p-ERK和Osterix蛋白表达影响不明显。结论:左归丸含药血清可以促进成骨细胞增殖、分化和矿化,机制可能与其上调成骨细胞ER受体激活ERK信号通路调控转录因子osterix有关;全方效果较好,部分揭示左归丸"阳中求阴"配伍防治骨质疏松的作用机制可能与其影响成骨细胞增殖和部分影响成骨细胞分化和矿化功能密切相关。     

狗脊生、制品不同提取部位对成骨细胞的影响

目的:探索狗脊不同提取部位对体外培养成骨细胞的增殖作用;比较狗脊生、制品对细胞增长的影响。方法:用狗脊生制品的石油醚层、氯仿层、乙酸乙酯层、正丁醇层及粗多糖与成骨细胞共同培养;并且将各提取部位给大鼠灌胃,取大鼠含药血清与成骨细胞共同培养,以MTT法检测细胞的增殖。结果:各提取部位与细胞共同培养试验和含药血清与细胞共同培养试验中,均以狗脊正丁醇提取部位对细胞增殖作用最明显,且制品强于生品。结论:狗脊炮制品正丁醇提取物能够显著促进成骨细胞增殖。