功血宁对假孕大鼠黄体功能的影响

目的：观察功血宁对假孕大鼠黄体功能的影响。方法：以假孕大鼠为对象，采用放免方法检测功血宁大、小剂量组、阳性对照组和空白对照假孕大鼠在假孕第4天（d4，余同）,d6,d9,d11,d13血清P（孕酮）水平及d9,d13血清LH（黄体生成激素）水平。观察子宫组织形态学。结果：功血宁大剂量组d6,d9时血清P水平显著提高（P＜0．05），并能显著提高d9血清LH水平（P＜0．05）。子宫组织形态学观察有明显改变。结论：功血宁能够提高假孕大鼠血清P水平，具有促进黄体功能的作用。     

功血宁对假孕大鼠黄体功能的影响

目的观察功血宁对假孕大鼠黄体功能的影响。方法以假孕大鼠为对象,采用放免方法检测功血宁大、小剂量组、阳性对照组和空白对照组假孕大鼠在假孕第4天（d4,余同）、d6、d9、d11、d13血清P（孕酮）水平及d9、d13血清LH（黄体生成激素）水平。观察子宫组织形态学。结果功血宁大剂量组d6、d9时血清P水平显著提高（P0.05）,并能显著提高d9血清LH水平（P<0.05）,子宫组织形态学观察有明显改变。结论功血宁能够提高假孕大鼠血清P水平,具有促进黄体功能的作用。     

滋肾调冲法对诱发排卵大鼠卵巢血管内皮生长因子表达的影响

[目的]观察滋肾调冲法对诱发排卵大鼠卵巢血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.[方法]将80只大鼠随机分成功血宁Ⅱ号高、低剂量组,阳性对照组和模型组4组,免疫组化法检测各组卵巢卵泡发育期和排卵前期VEGF表达水平.[结果]功血宁Ⅱ号组阳性面积、平均光密度、阳性面积率、积分光密度在卵泡发育期和排卵前期均高于模型组;排卵前期各组VEGF表达均高于卵泡发育期.[结论]滋肾调冲法促卵泡发育及排卵的作用机制可能与提高卵巢VEGF的表达、改善卵泡的血供有关.     

电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓及外周血CD34~+内皮祖细胞的影响

目的:观察电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓及外周血CD 34+内皮祖细胞(EPCs)数量、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达的影响,探讨电针动员骨髓CD 34+EPCs入血,促进脑缺血修复的机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组。采用线栓法制备局灶脑缺血/再灌注大鼠模型,局灶脑缺血2h后将各组分为再灌注12、24、48h3个时间点,每个时间点12只大鼠。取大鼠"百会"穴及左侧"四关"穴("合谷"/"太冲")为电针穴位,刺激时间30min,每日1次。采用神经行为学评分法评价大鼠神经功能缺损情况,流式细胞术检测骨髓及外周血CD 34+EPCs数量,Western blot法检测骨髓p-AKT蛋白的表达。结果:模型组再灌注后各时间点均有不同程度的神经功能缺损,电针可明显改善大鼠再灌注后48h神经功能评分(P0.05)。与假手术组比较,模型组各时间点骨髓及外周血CD 34+EPCs数量及骨髓p-AKT蛋白的表达明显增多(P0.01,P0.05);与模型组比较,电针组再灌注后各时间点外周血CD 34+EPCs数量及骨髓p-AKT蛋白的表达亦明显增多(P0.05,P0.01),同时电针组再灌注后12、24h骨髓CD 34+EPCs数量相对模型组明显上调(P0.05,P0.01)。结论:电针可上调局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓及外周血CD 34+EPCs数量,促进骨髓CD 34+EPCs动员入血,其作用可能与电针进一步激活骨髓磷脂酰肌醇-3-激酶/AKT通路相关。     

功血宁Ⅱ号冲剂对诱发排卵大鼠卵巢白细胞介素-8表达的影响

[目的]观察功血宁Ⅱ号冲剂对诱发排卵大鼠卵巢白细胞介素-8(IL-8)表达的影响,探讨该药促进卵泡发育诱发排卵的作用机制.[方法]将未成年雌性大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组和功血宁Ⅱ号高、低剂量组,分别给予蒸馏水、安坤赞育丸和功血宁Ⅱ号冲剂14 d后,皮下注射妊马血清促性腺激素(PMSG) 人绒毛膜促性激素(hCG)制备诱发排卵的大鼠模型.分别在卵泡发育期和排卵前期处死动物摘取卵巢.常规制备卵巢切片,免疫组化法检测各组动物卵泡不同发育时期IL-8表达.[结果]功血宁Ⅱ号组在卵泡发育期和排卵前期IL-8的阳性细胞面积、阳性面积率、积分光密度、平均光密度均显著高于模型对照组(P<0.05或P<0.01),其中高剂量组的作用较低剂量组和阳性对照组显著.排卵前期各组的上述指标均明显高于相应卵泡发育期的各组(P<0.05或P<0.01).[结论]功血宁Ⅱ号冲剂能够通过提高IL-8的表达,吸引和激活中性粒细胞,促进卵泡发育诱发排卵.     

姜黄素对肺纤维化大鼠骨髓及外周血内皮祖细胞的影响

目的探讨姜黄素对肺纤维化大鼠骨髓及外周血中内皮祖细胞(EPCs)数量、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)表达的影响及其机制。方法采用经气管灌注博莱霉素(BLM)的方法制作肺纤维化模型。60只大鼠完全随机分为对照组、模型组、姜黄素组。每组于第14天、28天各处死10只大鼠。肺组织行HE染色观察并进行肺纤维化Ashcroft评级,采用流式细胞术检测骨髓及外周血中EPCs的数量,Western blot法检测骨髓中e NOS蛋白的表达。结果姜黄素组肺泡炎和肺纤维化程度明显低于模型组。与对照组比较,模型组各时间点骨髓及外周血EPCs数量及e NOS蛋白的表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,姜黄素组各时间点骨髓及外周血EPCs数量及e NOS蛋白的表达亦明显增多(P<0.05)。结论姜黄素可上调肺纤维化大鼠骨髓及外周血EPCs数量,促进EPCs动员入血,其作用可能与姜黄素激活e NOS通路相关。     

滋肾调冲法治疗黄体功能不足月经失调的临床观察

[目的]观察滋肾调冲法治疗黄体功能不足月经失调的临床疗效。[方法]应用滋肾调冲法代表方功血宁Ⅱ号方治疗黄体功能不足所致月经失调56例,观察临床疗效及其对中医症状、基础体温的影响。[结果]经治疗痊愈36例,显效12例,有效5例,无效3例,总有效率为94.64%。[结论]滋肾调冲法能够健全黄体功能,恢复正常月经周期,并能明显改善全身症状,是治疗黄体功能不足月经失调的有效法则。     

乌鸡白凤丸对去卵巢骨质疏松大鼠骨形态计量学参数的影响

目的:通过比较去卵巢骨质疏松大鼠骨形态计量学参数的变化,以评价乌鸡白凤丸对骨微观结构的影响.方法:实验选择6月龄SD大鼠,采用卵巢切除致大鼠骨质疏松模型,术后将大鼠随机分为假手术组、去卵巢模型组、乌鸡白凤丸低剂量组(1.0 g/(kg·d))、乌鸡白凤丸中剂量组(2.0g/(kg·d))、乌鸡白凤丸高剂量组(4.0 g/(kg·d))及阳性药仙灵骨葆胶囊组(0.6 g/(kg·d)),连续灌胃给药12周.各组动物于处死前16天和前3天分别腹腔注射盐酸四环素进行荧光标记,处死后取左侧胫骨,制作不脱钙骨切片和甲苯胺蓝染色切片,采用Leica Qwin图象分析系统进行骨组织形态参数计量.结果:去卵巢模型组大鼠骨小梁体积百分比(TBV)明显较假手术组大鼠降低(P＜0.01),骨小梁吸收表面百分比(TRS)、骨小梁形成表面百分比(TFS)、活性生成表面百分比(AFS)、骨小梁矿化率(MAR)、骨小梁骨生成率(BFR)、类骨质平均宽度(OSW)、骨皮质矿化率(mAR)均较假手术组大鼠升高(P＜0.01);乌鸡白凤丸(1.0g/kg、2.0 g/kg、4.0g/kg)组大鼠TBV%较去卵巢模型组大鼠升高,TRS、TFS、AFS、MAR、BFR、OSW、mAR较去卵巢模型组大鼠降低.结论:乌鸡白凤丸能纠正骨质疏松骨形态计量学参数的异常,对骨质疏松症具有一定的治疗作用.     

电针对局灶性脑缺血/再灌注大鼠外周血和骨髓内皮祖细胞的作用

目的:探讨电针对局灶性脑缺血/再灌注大鼠外周血及骨髓中与血管再生相关的因子及细胞的影响。方法:54只SD大鼠随机分为正常组、模型组和电针组,采用线栓法制备局灶性脑缺血/再灌注模型,并按局灶性脑缺血2h再灌注后的观察时间点,将模型组和电针组分为1、2、3、7d各4个亚组,每个时间点6只大鼠。电针刺激大鼠双侧"合谷"穴,刺激时间15min,每日1次。采用流式细胞术检测外周血内皮祖细胞(EPCs)、趋化因子受体4+(CXCR 4+)细胞和骨髓EPCs占单核细胞的百分比,酶联免疫法检测血清中基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)蛋白浓度。结果:局灶性脑缺血/再灌注大鼠1d模型组和电针组较正常组外周血EPCs和CXCR 4+细胞数量均显著增高(P<0.01),2d电针组高于模型组(P<0.05);2d电针组骨髓EPCs数量显著高于正常组和模型组(P<0.05,P<0.01);模型组和电针组血清SDF-1α蛋白浓度第1天均增至最高,较正常组差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且第1、2天电针组显著高于模型组(P<0.01)。结论:电针能促进局灶性脑缺血/再灌注大鼠外周血EPCs、CXCR 4+细胞和骨髓EPCs数量的增加,该作用可能与SDF-1α表达上调相关。     

乳宁II号对TA2小鼠乳腺癌MA-891移植瘤中血管内皮生长因子表达的影响

目的研究乳宁Ⅱ号对TA2小鼠乳腺癌移植瘤中血管内皮生长因子(VEGF)表达及肺转移的影响.方法将体外培养的MA-891小鼠乳腺癌细胞接种于TA2小鼠右腋部皮下,造成小鼠移植瘤肺转移模型,同时予乳宁Ⅱ号治疗.结果乳宁Ⅱ号可抑制移植瘤生长,减少肺转移的发生(P＜0.05),降低肿瘤组织中VEGF蛋白及VEGF mRNA表达(P＜0.05).结论乳宁Ⅱ号可通过降低肿瘤组织中VEGF蛋白及VEGF mRNA表达,发挥抑瘤和抗转移作用.     

脑心通胶囊促进后下肢缺血损伤小鼠内皮祖细胞动员与归巢

内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是一种能分化为血管内皮细胞的前体细胞,组织缺血缺氧所产生的信号分子可促使骨髓EPCs动员至外周循环,并归巢于损伤组织参与新生血管的形成。脑心通胶囊(Naoxintong capsule,NXT)具有活血化瘀、行气止痛之功效,其多成分具有血管保护作用,可以有效改善组织缺血症状,但其对EPCs动员和归巢的作用尚不明确。该研究采用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠骨髓移植(bone marrow transplantation,BMT)联合后下肢缺血损伤模型(unilateral hind limb ischemia,UHLI)研究脑心通胶囊对EPCs动员和归巢的作用。受体小鼠经CS137全身照射后,从目内眦静脉丛输注GFP标记的骨髓单个核细胞,建立BMT模型,经过4周骨髓重建后取外周血检测GFP阳性细胞比例。取BMT模型成功的小鼠,采用股动脉结扎复制UHLI模型,术后随机分为3组:模型组、NXT组(模型+NXT)和阳性对照组(模型+辛伐他汀)。采用流式细胞术检测骨髓重建4周后GFP阳性细胞比例,术前及术后第1,3,7,14天外周血中EPCs细胞数;采用免疫荧光组织化学染色检测给药3,7 d缺血腓肠肌组织EPCs细胞归巢数目。BMT小鼠与GFP基因鼠相比,GFP阳性细胞比例无显著性差异;术后1,3 d,NXT组和辛伐他汀组外周血EPCs数量显著性上调;术后3,7 d,NXT组和辛伐他汀组EPCs归巢数量显著高于模型组(P0.001),因此脑心通胶囊能显著促进EPCs的动员与归巢。     

补肾安胎合剂对肾虚流产小鼠EPCs动员、归巢的影响

目的研究补肾安胎合剂对肾虚流产小鼠EPCs动员、归巢的影响。方法对100只ICR小鼠作进行性骨髓移植+肾虚流产造模,分为空白组、模型组及补肾安胎合剂高、中、低剂量组。灌胃给药4周后,剖视小鼠子宫检测胚胎丢失率,流式细胞学检测骨髓、外周血、蜕膜组织内皮祖细胞(EPCs)数,ELISA法检测外周血基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)水平和蜕膜组织趋化性细胞因子受体-4(CXCR-4)表达。结果骨髓移植模型造模成功率为53.2%。与空白组比较,模型组、中药低剂量组胚胎丢失率升高(P<0.01);与模型组比较,中药高、中剂量组丢失率降低(P<0.01)。与空白组比较,各流产组骨髓、外周血、蜕膜组织中EPCs数目降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,中药高剂量组EPCs数目升高(P<0.01)。在外周血中,与空白组比较,模型组及中药低、中剂量组SDF-1α水平降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各中药组SDF-1α水平升高(P<0.01)。在蜕膜组织中,与空白组比较,各流产组CXCR-4水平降低(P<0.01);与模型组比较,中药高、中剂量组蜕膜组织中CXCR-4水平升高(P<0.01)。结论补肾安胎合剂可能通过提高外周血SDF-1α水平及蜕膜组织CXCR-4表达来促进EPCs动员与归巢,改善母胎界面血管重铸,从而降低胚胎丢失率。     

芪红合剂含药血清对体外培养人外周血内皮祖细胞NO及NOS的影响

目的观察芪红合剂含药血清对人外周血内皮祖细胞（EPCs）一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）的影响,探讨其对人外周血内皮祖细胞的保护机制。方法12只雄性Wistar大鼠随机分为芪红合剂组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）和对照组,制备含药血清和空白血清。采集健康成人外周血,分离单核细胞,体外培养7d后,收集贴壁细胞,激光共聚焦显微镜及流式细胞仪鉴定正在分化的EPCs,加入含不同浓度芪红合剂药物血清及空白血清的M199培养基孵育24h,将其在倒置荧光显微镜下计数,硝酸还原酶法测定NO,化学比色法测定NOS。结果芪红合剂药物组的血清NO水平和NOS活性明显高于空白血清对照组（P〈0.05）,并且呈剂量依赖性。结论芪红合剂可能通过增加EPCsNOS活性,促进NO分泌,防止血管内皮损伤及动员血管内皮祖细胞修复损伤血管来发挥血管内皮保护作用。     

中药芪红合剂含药血清对人外周血内皮祖细胞增殖的影响

目的观察中药芪红合剂含药血清对体外培养的人外周血内皮祖细胞（EPCs）增殖的影响。方法将12只雄性Wistar大鼠随机分为中药芪红合剂组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）和对照组，制备含药血清和空白血清。采用密度梯度离心法分离获得人外周血单个核细胞，经激光共聚焦显微镜、流式细胞仪鉴定为EPCs。加入各实验血清组培养液培养EPCs，分别作用不同时间（24h、48h、72h）后，倒置相差显微镜下观察EPCs生长情况，噻唑蓝比色试验（MTT法）测定EPCs的吸光度值。结果与对照组比较，中药芪红合剂合药血清低、中、高剂量组EPCs增殖明显（P〈0．05），且呈一定的量效、时效关系。在同一作用时间，低剂量芪红合剂含药血清干预后EPCs的增殖明显（P〈0．05）。在同一剂量组中，芪红合剂含药血清干预后EPCs的增殖随时间推移逐渐增强，于72h达到高峰（P〈0．05）。结论中药芪红合剂含药血清对体外培养的人外周血EPCs的增殖具有一定的促进作用，可能是其防治血管内皮损伤及内皮功能障碍相关性疾病的作用机制之一。     

芪参益气浸膏动员内皮祖细胞促进大鼠梗死心肌血管新生

目的:观察芪参益气浸膏对急性心肌梗死大鼠内皮祖细胞(EPCs)动员,促进梗死心肌新生血管形成,减小梗死面积的效果。方法:①成年Wistar大鼠左前降支结扎造模,随机分为空白组(A)、假手术组(B)、AMI组(C);芪参益气浸膏治疗AMI组(D)。②流式细胞技术检测不同时段大鼠外周静脉血EPC动态变化。③4周末处死大鼠,心肌切片Masson染色,左室心肌正中线孤长方法计算梗死面积。④CD_(31)单克隆抗体免疫组化法标记心肌新生血管内皮细胞并计算各组梗死、梗死周边及非梗死区新生血管数。结果:①造模后第7天,D组外周血EPCs数明显高于A、B、C组(P0.05),C组高于A、B组(P0.05),A、B组间EPCs变化无统计学意义(P0.05);14天D组外周血EPCs数明显高于A、B、C组(P0.05),A、B、C组间依次增高,有统计学意义(P0.05);组内比较,仅D组14天时EPCs仍维持较高水平。②D组梗死及梗死周边区新生血管计数明显多于C组(分别P0.05)。③D组梗死面积小于C组(P0.05)。结论:①芪参益气浸膏能动员急性心肌梗死大鼠内皮祖细胞进入外周血循环,使其数量增加并促进梗死周边区血管新生。②梗死后大鼠应用芪参益气浸膏可以限制梗死面积。     

调节“脑中血海”法中药联合骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注大鼠的保护作用

目的:研究调节"脑中血海"中药脑脉I号胶囊联合骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchyrmal Stem Cells,BMSCs)移植治疗缺血再灌注模型大鼠的保护作用。方法:制作大鼠大脑中动脉闭塞模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO),分为模型组、脑脉I号组、BMSC移植组、移植联合治疗组,假手术组。分别于3 d、7 d、14 d观察各组大鼠脑组织含水量及脑神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)表达。结果:与模型组相比,BMSC移植、脑脉1号以及二者联合治疗对大鼠脑含水量有显著改善(P<0.01),但在该指标上两者没有显著性的交互效应。与模型组相比,BMSC移植、脑脉1号以及二者联合可显著增加NSE表达(P<0.01),且两者联合使用存在交互效应,与观察时点存在交互效应(P<0.01)。结论:调节"脑中血海"的中药脑脉I号胶囊可促进BMSC移植治疗大鼠缺血再灌注损伤的作用,保护神经元,减轻脑水肿,随着疗程的延长,效果更加显著。     

肺瘤平膏通过PI3K/Akt通路抑制肺癌细胞上清诱导的骨髓源性内皮祖细胞管腔形成活性研究

目的探讨肺瘤平膏对肺癌细胞培养上清诱导的骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)增殖、管腔形成能力以及PI3K/AKT信号通路的影响。方法采用密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓单个核细胞,并进行体外诱导培养,摄取Dil-Ac-LDL与结合FITCUEA-1双染实验、免疫荧光化学鉴定其表面抗原CD133与血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)等方法对其进行鉴定。分别设置浓度效应组(空白对照组、肺瘤平膏高剂量组和低剂量组大鼠血清分别处理)和时间效应组(肺瘤平膏高剂量组大鼠含药血清分别处理0、12、24、48 h)。利用MTT法、Matrigel法检测EPCs增殖和管腔形成能力。应用Western blot法检测各组EPCs中NF-κB、p-Akt及PI3K p85蛋白的表达量。结果骨髓单个核细胞培养7 d后,多呈圆形、短梭形等形态,贴壁生长,且95%以上的细胞呈Dil-Ac-LDL和FITC-UEA-1双染阳性,且同时阳性表达CD133和VEGFR2。肺瘤平膏高剂量组大鼠含药血清处理EPCs 48 h后,细胞增殖率明显低于空白对照组(P<0.01),且肺瘤平膏对EPCs增殖的抑制作用具有时间依赖性和剂量依赖性。经Matirgel实验,肺瘤平膏高剂量组大鼠含药血清作用48 h后EPCs管腔形成数量也少于空白对照组(P<0.05)。经Western blot法检测,肺瘤平膏高剂量组EPCs中NF-κB、p-Akt及PI3K p85蛋白表达量低于空白对照组(P<0.01)。结论肺瘤平膏含药上清可抑制A549肺癌细胞培养上清诱导的骨髓源性EPCs增殖和管腔形成活性,PI3K/AKT信号通路可能在其中发挥着一定作用。     

丹酚酸B预处理EPCs联合BMSc移植对AMI大鼠心功能的影响

[目的]通过建立大鼠急性心肌梗死模型,将中药丹酚酸B预处理的内皮祖细胞(EPCs)按不同比例与骨髓基质细胞(BMsc)进行混合后注射至缺血局部,观察细胞移植后大鼠急性心肌梗死模型心功能的改善情况.[方法]应用密度梯度离心法和贴壁筛选法培养、纯化EPCs与BMSCs;采用结扎大鼠左冠状动脉前降支,制作大鼠急性心肌梗死模型.丹酚酸B最佳药物浓度处理的EPCs,以不同比例(1:1,2:1,4:1,8:1)与BMSc混合,在大鼠心肌梗死区周边分5点注射.[结果]各细胞移植组均能不同程度的改善心肌梗死大鼠心室结构,增强心功能.超声心动图结果:同-时间细胞移植组均能不同程度的改善心肌梗死大鼠心室结构,增强心功能,与模型组相比,4:1组、8:1组左室射血分数及心输出量明显升高(P<0.05).[结论]丹酚酸B预处理的EPCs联合BMSc的移植促进了AMI大鼠左室功能的恢复.