二仙汤对免疫性卵巢早衰模型小鼠免疫相关指标影响

目的:观察二仙汤对免疫性POF模型小鼠免疫学方面的影响,探讨二仙汤对免疫性POF的作用机理.方法:应用小鼠透明带ZP3第330～342个氨基酸序列(NSSSSQFQIHGPR)为免疫原建立免疫性POF小鼠动物模型,并用二仙汤干预,观察小鼠性周期,用ELISA法检测小鼠外周血抗透明带抗体,称卵巢重量、脾脏、胸腺重量,计算其脏器指数.结果:模型组外周血中AzpAb阳性,水平升高;卵巢重量、胸腺重量降低,脾重指数明显增高;中药处理后POF小鼠上述情况均有不同程度改善.结论;二仙汤对免疫性卵巢早衰动物的免疫功能有一定的改善作用.     

二仙汤对免疫性卵巢早衰模型小鼠FoxP3基因表达的影响

目的:观察二仙汤对免疫性POF模型小鼠FoxP3基因的影响。方法:用小鼠透明带ZP3第330～342个氨基酸序列(NSSSSQFQIHGPR)为免疫原建立免疫性POF小鼠动物模型,并用二仙汤干预,用RT-PCR观察小鼠卵巢上FoxP3基因的表达。结果:模型组卵巢中FoxP3的基因水平下降;各用药组FoxP3的基因表达均增强,中西药无明显差异。结论:二仙汤能使FoxP3基因蛋白表达增强。     

左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠卵巢超微结构的影响

目的探讨补肾填精复方左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠(POF)卵巢超微结构的影响。方法以小鼠透明带3为抗原,皮下多点注射免疫BALB/C雌性小鼠建立免疫性卵巢早衰模型。设左归丸低、中、高不同剂量进行治疗,以己烯雌酚为阳性对照,电镜下观察卵巢超微结构的变化。结果 POF小鼠电镜下可见颗粒细胞核仁固缩,出现髓样小体;卵泡膜细胞形态失常;己烯雌酚组颗粒细胞形态尚规则,卵泡膜细胞略呈椭圆形;左归丸低剂量组卵母细胞透明带部分呈花瓣状,颗粒细胞核固缩;左归丸中剂量组颗粒细胞与卵泡膜细胞排列整齐;左归丸高剂量组小鼠卵母细胞与正常组相似,透明带厚薄均匀,颗粒细胞线粒体偶见空泡化;卵泡膜细胞形态正常。结论 POF小鼠卵巢超微结构紊乱,颗粒卵泡细胞凋亡明显,动情周期紊乱;左归丸中、高剂量及己烯雌酚对其有较明显的改善作用,左归丸的作用呈现一定的量效关系。     

补肾活血方对免疫性卵巢早衰小鼠的影响

目的:探讨补肾活血方对免疫性卵巢早衰(POF)小鼠的治疗作用。方法:以重组猪卵透明带(pZP4)蛋白两后脚掌和皮下多点注射免疫雌性BALB/c小鼠建立POF动物模型。小鼠随机分为正常组、模型组、雌二醇组和补肾活血方高、中、低剂量组(按生药量计分别为15.0,7.5,3.75 g.kg-1),分析ig 20 d后阴道脱落细胞涂片、外周血雌二醇(E2)浓度、血清抗透明带(pZP4)抗体变化及卵巢组织炎形态学观察。结果:补肾活血方高剂量组小鼠阴道涂片显示动情周期基本规则为6～7 d;高剂量组可明显升高小鼠血清E2浓度(P<0.01);高剂量组小鼠的血清抗pZP4抗体滴度显著下降(P<0.05);高剂量组小鼠初级卵泡和次级卵泡的数量显著增加(P<0.05)。结论:补肾活血方能改善卵巢的生殖内分泌功能和卵巢内各期卵泡和黄体的发育状况,并可在一定程度上抑制自身免疫早衰作用。     

左归丸对免疫性卵巢早衰模型小鼠卵巢GDF-9/ Smad2信号转导的影响

目的 观察左归丸对免疫性卵巢早衰（premature ovarian failure,POF）模型小鼠卵巢生长分化因子-9（growth differentiation factor-9,GDF-9）/Smad2信号转导的影响,探讨左归丸治疗POF的机制。方法 将84只雌性Balb/c小鼠随机分为空白对照组（12只）、模型组（24只）、左归丸组（24只）及己烯雌酚组（24只）。除空白对照组外,其余3组以小鼠透明带多肽3（zona pellucida 3, ZP3）为抗原,皮下多点注射建立POF模型,左归丸组及己烯雌酚组分别给予2.7 g/（kg·d）左归丸及0.15 mg/（kg·d）己烯雌酚水溶液灌胃,每日1次,每周6次,连续灌胃4、8周。观察各组小鼠卵巢生长卵泡比率;分别采用免疫组化法及Western blot法检测小鼠卵巢组织GDF-9及Smad2蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,模型组造模4、8周小鼠卵巢生长卵泡比率及GDF-9、Smad2蛋白表达均明显减少（P<0.05）;与模型组同期比较,左归丸及己烯雌酚组小鼠卵巢生长卵泡比率、GDF-9蛋白水平表达明显升高（P<0.05）,左归丸组8周Smad2蛋白水平表达升高（P<0.05）。结论 POF的发病可能与卵巢GDF-9蛋白表达水平不足,GDF-9/Smad2信号转导功能低下,导致始基卵泡不能有效募集,原位闭锁有关。左归丸能增加卵泡GDF-9蛋白表达,其机制可能是通过GDF-9/Smad2信号转导通路对卵泡生长发育进行调节,从而发挥治疗POF的作用。     

左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠抗卵巢抗体的影响

目的探讨左归丸对免疫性卵巢早衰(POF)小鼠生殖内分泌及抗卵巢抗体(AoAb)的影响。方法以SD雌性大鼠卵巢组织制备卵巢抗原,皮下多点免疫接种BALB/C雌性小鼠,建立POF模型。用左归丸处理造模过程中不同时间点小鼠,以泼尼松为阳性对照,光镜下观察卵巢组织的形态学特征,放射免疫法检测外周血血清卵泡刺激素(FSH)及雌二醇(E2)水平,酶联免疫法检测外周血AoAb。结果POF小鼠卵巢间质可见淋巴细胞浸润,外周血FSH升高,E2下降,AoAb阳性。左归丸能减缓POF小鼠外周血FSH升高,提高体内E2水平,抑制AoAb产生,早期用药比后期用药作用显著。结论左归丸能改善POF小鼠卵巢免疫性炎症的损伤,对POF具有一定的预防和治疗作用。     

二仙汤对顺铂损伤后小鼠卵巢功能调节作用研究

[目的]探讨二仙汤对顺铂(CDDP)损伤后小鼠卵巢功能的调节作用。[方法]采用化疗损伤性小鼠卵巢功能早衰模型,给予二仙汤周期灌胃,检测血清生殖激素水平、卵巢排卵计数、卵巢组织中丙二醛(MDA)的含量及总抗氧化能力(T-AOC),观察卵巢形态学变化。[结果]与卵巢早衰模型组比较,二仙汤给药组血清卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)降低,而雌二醇(E2)和孕酮(P)均升高;卵巢组织MDA降低,T-AOC升高,卵泡计数增加,卵泡闭锁减少,细胞间质增生减低,卵巢纤维化状况改善。[结论]二仙汤可通过抑制氧化损伤作用,降低细胞外基质的形成,加速细胞外基质降解,从而改善卵泡和颗粒细胞功能状态,提升卵巢功能。     

左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠卵巢Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠(POF)卵巢Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法以小鼠透明带3为抗原,皮下多点注射免疫BALB/c雌性小鼠建立免疫性卵巢早衰模型。设左归丸低、中、高剂量进行治疗,以泼尼松、己烯雌酚为阳性对照,免疫组化法检测卵泡、卵巢间质Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与空白对照组比较,模型组大卵泡及小卵泡Bcl-2蛋白的表达均减少,Bax蛋白的表达均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,左归丸高剂量组大卵泡及小卵泡Bcl-2蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.001);左归丸高、中、低剂量组卵巢间质Bcl-2蛋白的表达均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05～0.001),大卵泡及小卵泡Bax蛋白的表达均减少,差异有统计学意义(P<0.01～0.001);左归丸中剂量组卵巢间质Bax蛋白的表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。左归丸各剂量组卵泡Bcl-2蛋白的表达呈现一定的量效关系。结论卵泡凋亡过快可能导致卵巢早衰,左归丸可能通过上调卵泡及卵巢间质Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,抑制卵泡的过快凋亡,从而改善卵巢功能。     

补肾活血方对卵巢早衰小鼠颗粒细胞TGF-β1、TGF-βRII、Smad2/3表达的影响

目的探索补肾活血方(紫石英、补骨脂、菟丝子等)对免疫性卵巢早衰(POF)小鼠卵泡壁颗粒细胞转化生长因子(TGF)-β1、TGF-βRII、Smad2/3蛋白表达的影响。方法 Balb/c雌性小鼠皮下多点注射小鼠透明带3建立免疫性POF模型,POF小鼠分成模型组,阳性组(戊酸雌二醇)和补肾活血方低、中、高剂量组。干预30 d后,卵巢组织作苏木精-伊红(HE)染色,免疫组化法与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测卵泡壁颗粒细胞和卵巢组织TGF-β1、TGF-βRII、Smad2/3的蛋白表达。结果与模型组相比,补肾活血方各剂量组、阳性组卵巢成熟卵泡数目明显增多,闭锁卵泡数目减少。卵泡壁颗粒细胞和卵巢组织TGF-β1、TGF-βRII、Smad2/3蛋白表达在补肾活血方各剂量组、阳性组中明显高于在模型组中(P0.05)。结论补肾活血方能通过上调颗粒细胞TGF-β1、TGF-βRII、Smad2/3的蛋白表达改善卵巢功能。     

二仙汤及大豆黄酮对绝经综合征模型大鼠卵巢形态学及功能的影响

目的:通过复制酒精性更年期综合征大鼠模型,观察二仙汤及大豆黄酮对该模型大鼠卵巢形态学及功能的影响,探讨两种药物对绝经综合征症状改善的机理。方法:卵巢注射无水乙醇法制备绝经综合征SD大鼠模型,以戊酸雌二醇作为阳性对照药,测定血清E2(雌二醇)及FSH(促卵泡生成激素)含量,肉眼及HE染色显微镜下观察卵巢的形态学改变,并检测卵巢雌激素受体β。结果:灌胃4周后,除模型组外,各组体重均增加。二仙汤组与模型组比较,SD大鼠血清E2水平明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。二仙汤组、大豆黄酮组与模型组SD大鼠血清FSH水平比较,差异均无统计学意义(P0.05)。肉眼及HE染色观察卵巢与子宫结果示:除假手术组外,均发生明显异常;二仙汤组卵巢部分组织有成熟卵泡、囊腔有新生组织出现;大豆黄酮组卵巢初级、次级卵泡较多,囊腔有大量新生组织出现,子宫结缔组织致密。各组卵巢雌激素受体β比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:二仙汤能明显升高绝经综合征大鼠模型血清E2水平,促进卵巢卵泡成熟及囊腔新生组织出现;大豆黄酮能促使卵巢初级、次级卵泡增多及囊腔新生组织大量出现,增加子宫结缔组织致密性。本研究为二仙汤、大豆黄酮对绝经综合征症状改善提供理论基础。     

加减二仙汤联合西医药物治疗卵巢早衰闭经的疗效观察

目的:分析二仙汤加减联合西医药治疗卵巢早衰闭经的临床疗效,探讨二仙汤治疗卵巢早衰闭经的部分疗效机制。方法:选取2013年8月至2017年8月河南省黄河三门峡医院妇科收治的卵巢早衰闭经患者70例作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组35例。2组患者均行西药戊酸雌二醇+地屈孕酮片常规治疗,对观察组患者再行中医辨证,予二仙汤加减辨治,连续治疗3个月经周期后,比较2组患者治疗前、后主要中医症状积分变化,完成治疗后评价2组患者临床疗效。结果:治疗3个月经周期后,2组患者中医症状积分均较治疗前明显下降,治疗后观察组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组临床疗效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);其他生化指标比较,观察组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:二仙汤联合西药加减辨治卵巢早衰闭经可使患者性激素水平趋于正常水平,稳定患者T细胞亚群平衡,促进自身免疫功能恢复,从而效改善患者卵巢早衰及闭经中医临床症状,提升临床疗效,且安全。     

二仙汤含药血清通过AKT途径介导顺铂所致卵巢颗粒细胞凋亡的作用机制

目的：探讨二仙汤含药血清通过AKT途径介导顺铂所致卵巢颗粒细胞凋亡的防护作用及分子机制。方法本实验采用大鼠原代卵巢颗粒细胞体外培养及顺铂造模的方法。通过选取22-24 d的SD大鼠提取 原代卵巢颗粒细胞,进行细胞培养并建立顺铂致卵巢颗粒细胞凋亡模型,将成模卵巢颗粒细胞随机分为：模型组、阳性对照组、二仙汤组,加入相应药理血清连续培养48 h后,用TUNEL法检测各组颗粒细胞凋亡情况;蛋白印迹法检测各组akt、p-akt蛋白的表达情况;RT-PCR检测各组akt基因表达情况。结果：通过TUNEL法对各实验组卵巢颗粒细胞凋亡形态学观察发现：与正常组相比,模型组凋亡情况十分明显。阳性对照组与模型组相比凋亡情况改善;二仙汤组与模型组相比较凋亡情况也得到了缓解。蛋白印迹分析显示：akt、p-akt蛋白表达量总体趋势走向、强度、结果相似。顺铂造模后的各实验组中的akt、p-akt蛋白表达量均减少,模型组akt、p-akt蛋 白表达量最少;和模型组比较,各治疗组均akt、p-akt蛋白表达量表达增多,其中二仙汤组akt、p-akt蛋白表达量 略低于补佳乐组akt、p-akt蛋白表达量。RT-PCR检测akt基因表达情况,与蛋白表达大体一致。结论二仙汤 能明显减轻顺铂引起的卵巢颗粒细胞凋亡,其作用机制与激活AKT信号通路有关。     

孕康口服液对早发性卵巢功能不全小鼠的影响

目的 观察孕康口服液对早发性卵巢功能不全小鼠的影响.方法 采用正常动情周期ICR小鼠灌胃给予雷公藤多苷溶液40 mg/kg构建早发性卵巢功能不全模型,大鼠随机分为正常组、模型组及孕康口服液高、中、低剂量组(36、18、9 mL/kg),灌胃给药10周.给药期间定期观察小鼠动情周期;ELISA法检测血清中雌二醇(E2)、孕激素(P)、促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、催乳素(PRL)、抗苗勒管激素(AMH)、抑制素B(INHB)水平;HE染色观察卵巢组织形态;TUNEL染色检测卵巢颗粒细胞凋亡;免疫组化检测Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 与模型组比较,孕康口服液高剂量组能缩短小鼠动情周期(P<0.05),改善卵巢组织形态学并增加窦状卵泡数量(P<0.05);升高血清E2水平(P<0.05);减少卵巢颗粒细胞凋亡数量,并能降低Bax表达以及升高Bcl-2表达.结论 孕康口服液能改善雷公藤多苷致小鼠早发性卵巢功能不全,其机制可能是通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达,减少卵巢颗粒细胞凋亡.     

四物合剂对顺铂损伤小鼠卵巢的保护作用

目的:观察四物合剂对顺铂损伤小鼠卵巢的保护作用,并对其作用机制进行探讨.方法:小鼠腹腔注射顺铂3.0 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续7 d,并灌饲四物合剂14 d,观察小鼠动情周期和卵巢、子官的系数变化,血清中雌性激素水平及卵巢形态.结果:注射顺铂3 d始,模型小鼠动情周期停滞于间期,至13 d时,灌饲四物合剂小鼠部分开始恢复动情周期变化;顺铂模型组小鼠卵巢系数显著低于对照组,四物合剂各组小鼠的卵巢系数与对照组比较无差异,与模型组比较有统计学差异;模型组血清E2和P水平较对照组有降低,但无统计学意义,四物合剂大剂量组E2较模型组升高,小剂量组P较模型组升高,但也均无统计学意义;模型组FSH/LH比值较对照组明显升高,四物合剂中、小剂量组可恢复到正常水平,与模型组比较变化显著;卵巢切片显示模犁小鼠卵巢中的各级发育卵泡数量减少,而闭锁卵泡数最增加,四物合剂中剂量组可见多个发育卵泡.结论:顺铂可诱导小鼠卵巢损伤,使其功能下降,四物合剂可改善顺铂诱导的卵巢功能损伤.     

二仙汤、二至丸和地黄煎对小鼠脾细胞和卵巢颗粒细胞的调节作用

目的探讨二仙汤、二至丸和地黄煎对小鼠脾细胞和卵巢颗粒细胞的调节作用。方法取小鼠脾脏和卵巢分别制备脾单个核细胞和卵巢颗粒细胞,于24孔板中培养,分别加入二仙汤、二至丸以及地黄煎的水提物和醇提物,以香菇多糖水溶剂为阳性对照药物,运用MTT法观察细胞增殖情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中IL-1、IFN-γ及E2的浓度。结果二仙汤、二至丸、地黄煎各组对脾单个核细胞及卵巢颗粒细胞均具有较好的增殖作用(P0.05,P0.01);三方均可提高小鼠脾单个核细胞培养上清液中IL-1、IFN-γ的含量(P0.05,P0.01),但与阳性对照组相比,三方均无差异(P0.05);三方均可提高小鼠卵巢颗粒细胞上清液中的E2水平(P0.01,P0.05);与阳性对照组相比,三方均无差异(P0.05)。结论二仙汤、二至丸、地黄煎对小鼠脾细胞和卵巢颗粒细胞均有较好的调节作用。     

二仙汤研究及临床应用进展

二仙汤出自《中医方剂临床手册》,是20世纪50年代张伯讷教授创制的经方,具有温补脾肾、填精养血、调和冲任之效。近几十年来,二仙汤的研究不断进展,应用也更加广泛。本文总结了二仙汤在更年期综合征、卵巢早衰、骨质疏松、更年期高血压病、慢性尿路感染、月经病、皮肤病、风湿病、神经精神疾病及其他各科疾病的临床应用进展。     

抗苗勒氏管激素在免疫性卵巢早衰中的发病意义及左归丸的作用机制

目的:研究抗苗勒氏管激素(AMH)在免疫性卵巢早衰(POF)中的发病意义及左归丸对POF小鼠AMH及其信号转导通路[AMH/活化素蛋白激酶2(ALK2)/Smad1]的影响,探讨左归丸的作用机制。方法:8周龄Balb/c雌性小鼠随机分为正常组、模型组、戊酸雌二醇组、左归丸组。以小鼠透明带3多肽建立POF动物模型,予左归丸及戊酸雌二醇进行治疗。电化学发光法检测小鼠血清AMH,卵泡刺激素(FSH)的水平,光学显微镜检测小鼠生长卵泡比率,免疫组化法及蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测小鼠卵巢AMH及其信号转导蛋白ALK2,Smad1蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清AMH水平明显降低,FSH水平明显升高(P0.05);与模型组比较,左归丸组明显升高小鼠血清AMH水平,明显降低FSH水平(P0.05)。与正常组比较,模型组小鼠卵巢生长卵泡比率明显减少(P0.01),与模型组比较,左归丸组生长卵泡比率明显增高(P0.05)。AMH,ALK2,Smad1蛋白均在卵泡颗粒细胞胞浆表达。与正常组比较,模型组小鼠卵巢AMH,ALK2,Smad1蛋白表达明显下降(P0.05);与模型组比较,左归丸组小鼠卵巢AMH蛋白表达明显升高(P0.05),免疫组化检测显示ALK2,Smad1表达均有上升,但无统计学差异,Western blot检测显示ALK2,Smad1表达也均明显升高(P0.05)。结论:POF的发生与AMH分泌不足、卵巢AMH蛋白表达低下有关,其通过影响AMH/ALK2/Smad1信号转导,影响始基卵泡的募集,从而使卵泡消耗过快,卵巢功能过早衰竭,卵巢处于衰老状态。左归丸可促进POF小鼠AMH分泌,上调卵巢AMH蛋白的表达,并通过影响AMH/ALK2/Smad1信号转导,抑制始基卵泡的过快募集和消耗,改善卵巢功能。     

中药周期疗法对卵巢早衰大鼠性激素和抑制素B的影响

目的:观察探讨中药周期疗法治疗卵巢早衰的疗效及作用机制。方法:24只大鼠分空白组、模型组、中药组各8只,模型组和中药组用腹腔注射顺铂法制备卵巢早衰动物模型,造模后中药组用促排卵汤和调助汤按动情周期灌胃,以放免法检测大鼠血清性激素水平、酶联免疫法检测抑制素B。结果:中药组大鼠雌二醇、血清抑制素B升高,促卵泡生成素下降。结论:中药周期疗法可使卵巢早衰大鼠受损卵巢的内分泌功能恢复。