叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Huh7细胞miR-122表达及IGF-1R信号通路的调控作用

目的观察叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Huh7细胞miR-122表达及胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)信号通路的影响,探讨其抗肝癌作用机制。方法采用反义寡核苷酸技术(siRNA)建立miR-122表达抑制肝癌Huh7细胞株(anti-miR-122-Huh7细胞)。体外培养Huh7、anti-miR-122-Huh7细胞,分别设置对照组、叶下珠复方Ⅱ号高剂量组(3.0 mg·mL^-1)和低剂量组(1.5 mg·mL^-1)。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测2种细胞增殖;流式细胞术检测anti-miR-122-Huh7细胞调亡;采用qRT-PCR法和Western Blot法分别检测miR-122及其转录因子C/EBPα、靶基因IGF-1R及下游AKT3、KRAS、ERK1和CyclinG1基因表达。结果与肝癌Huh7细胞比较,anti-miR-122-Huh7细胞miR-122的表达显著下降、靶基因IGF-1R蛋白表达明显升高(P<0.05),miR-122表达抑制肝癌Huh7细胞构建成功。与对照组比较,叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组作用于肝癌Huh7细胞后,可以显著上调miR-122的表达(P<0.05),并下调IGF-1R mRNA的表达(P<0.05);叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组均可显著抑制Huh7、anti-miR-122-Huh7细胞的增殖(P<0.05),且对anti-miR-122-Huh7细胞抑制作用更为明显(与Huh7细胞比较,P<0.05)。与对照组比较,叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组作用于anti-miR-122-Huh7细胞后,细胞晚期凋亡率及总凋亡率均显著升高(P<0.05);高剂量组的miR-122表达及miR-122的上游转录因子C/EBPα的mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05);高、低剂量组的IGF-1R及下游AKT3、KRAS、CyclinG1基因的mRNA、蛋白表达均显著下调(P<0.05),且ERK1蛋白表达亦明显下调(P<0.05)。结论叶下珠复方Ⅱ号可能通过提高miR-122的表达,抑制IGF-1R信号通路活化,从而抑制肝癌Huh7细胞增殖和促进其凋亡。     

叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Huh7细胞增殖、凋亡与自噬的影响

目的:观察叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Huh7细胞增殖、凋亡与自噬的影响,进一步探讨其抗肝癌的作用机制。方法:体外培养肝癌Huh7细胞,设空白组,叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组(40,20 g·L~(-1))和5-氟尿嘧啶(5-FU)(0. 04 g·L~(-1))组,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Huh7细胞增殖的影响,流式细胞仪检细胞凋亡变化,单丹磺酰尸胺(MDC)染色观察药物作用后细胞自噬体的变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K),丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶2(Akt2),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ) mRNA表达的改变,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Akt2和LC3Ⅱ蛋白表达的变化。结果:叶下珠复方Ⅱ号(40,20 g·L~(-1))可显著抑制肝癌Huh7细胞,并诱导其凋亡,凋亡率分别为51. 72%,19. 74%,显著高于空白组(P 0. 01)。采用MDC染色后,叶下珠复方Ⅱ号(40,20 g·L~(-1))组可见大量自噬体的形成。与空白组比较,叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组PI3K,Akt2,Bcl-2 mRNA表达均显著下降,LC3ⅡmRNA表达均显著增加(P 0. 01)。与空白组比较,叶下珠复方Ⅱ号(40,20 g·L~(-1))组处理后的Akt2蛋白表达显著下降,LC3Ⅱ蛋白表达明显增加(P 0. 05,P 0. 01)。结论:叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Huh7细胞增殖有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路活化从而诱导细胞凋亡和自噬有关。     

叶下珠复方Ⅱ号对肝癌HepG2细胞lncRNA CCAT1表达的调控作用

目的 探讨叶下珠复方Ⅱ号通过抑制长链非编码RNA（lncRNA）结肠癌相关转录因子1（CCAT1）的表达,恢复小分子RNA let-7a（microRNA let-7a）的表达,从而发挥抗肝癌的作用机制。方法 应用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测正常肝细胞LO2与肝癌HepG2细胞lncRNA CCAT1的表达,比较2种细胞的表达差异。采用噻唑蓝（MTT）比色法测定肝癌HepG2在不同浓度的叶下珠复方Ⅱ号与5-氟尿嘧啶（5-FU）作用24,48,72 h后细胞增殖的情况。体外培养肝癌HepG2细胞,设空白组,叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组（1.6,0.8 g·L^-1）,应用Real-time PCR检测各组lncRNA CCAT1,microRNA let-7a和其靶基因高迁移率蛋白A2（HMGA2）,N-RAS基因（N-RAS）mRNA表达改变;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组HMGA2和细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）的蛋白表达。结果 与LO2细胞比较,肝癌HepG2细胞lncRNA CCAT1的表达明显上调（P<0.05）。通过MTT比色实验测定出叶下珠复方Ⅱ号和5-FU作用于肝癌HepG2细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为1.649,0.044 648 g·L^-1;与空白组比较,叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组（1.6,0.8 g·L^-1）均可抑制肝癌HepG2细胞增殖（P<0.05）,叶下珠复方Ⅱ号高质量浓度组（1.6 g·L^-1）最为显著。Real-time PCR结果显示,与空白组比较,叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组（1.6,0.8 g·L^-1）lncRNA CCAT1 的表达明显抑制（P<0.05）,高质量浓度组microRNA let-7a表达明显上调（P<0.05）,叶下珠复方Ⅱ高、低质量浓度组HMGA2 mRNA表达均明显下调,高质量浓度组N-RAS mRNA表达明显下调（P<0.05）。Western blot结果表明,与空白组比较,叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组（1.6,0.8 g·L^-1）的HMGA2,Cyclin D₁蛋白表达均明显下调（P<0.05）。结论 叶下珠复方Ⅱ号可以通过抑制HepG2细胞lncRNA CCAT1表达,恢复microRNA let-7a表达,并抑制其下游相关靶基因的mRNA和蛋白表达,进而抑制肝癌细胞增殖,发挥抗肝癌作用。     

叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Hep3B细胞裸鼠移植瘤生长和miR-122及IGF-1R表达的影响

目的：观察叶下珠复方Ⅱ号对Hep3B2.1-7人肝癌细胞(简称Hep3B细胞)裸鼠移植瘤生长的抑制作用并探讨其机制。方法：建立肝癌Hep3B细胞裸鼠移植瘤模型,并随机分为模型组、叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组(57.5、28.75 g·kg^-1)和5-氟尿嘧啶(5-FU)组(0.025 g·kg^-1),每组8只。叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组均灌胃给药,每日1次;模型组予同体积生理盐水灌胃;5-FU组采用腹腔注射,隔日1次。给药28 d后处死取移植瘤,以免疫组化(IHC)法检测瘤体组织细胞核抗原(PCNA)表达,以脱氧核糖核酸断裂原位末端标记(TUNEL)法检测瘤体组织细胞凋亡,以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测移植瘤组织miR-122和胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的mRNA表达,以蛋白免疫印迹法(Western blot)检测瘤体组织CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、肝细胞核因子-4α(HNF-4α)和IGF-1R的蛋白表达。结果：叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组和5-FU组的抑瘤率分别为74.90%、6...     

叶下珠复方Ⅱ号对裸鼠肝癌移植瘤生长的抑制作用及机制

目的观察叶下珠复方Ⅱ号对肝癌HepG_2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法建立BALB/C裸鼠肝癌HepG_2细胞皮下移植瘤模型,随机分为模型组,叶下珠复方Ⅱ号高、中、低剂量组(17.28,8.64,4.32 g·kg~(-1))和氟尿嘧啶(5-Fu)组(0.025 g·kg~(-1)),给药6周后处死裸鼠,剥离瘤组织称质量。体外观察叶下株复方Ⅱ号对HepG_2细胞增殖、集落形成、细胞周期和细胞凋亡的影响,观察药物作用后Wnt1和β-catenin基因mRNA表达的改变。结果叶下珠复方Ⅱ高、中、低剂量组对裸鼠HepG_2肝癌细胞移植瘤生长的抑制作用明显,与模型组比较,肿瘤质量均明显减轻(P0.01),但与5-Fu组比较,差异均无统计学意义(P0.05)。叶下珠复方Ⅱ号体外在10 mg·mL~(-1)以上浓度能明显抑制肝癌Hep G2细胞的增殖,呈明显的量-效关系和时-效关系;叶下珠复方Ⅱ号在2 mg·mL~(-1)以上浓度,对HepG_2细胞集落形成呈明显的抑制作用;叶下珠复方Ⅱ号以15,20 mg·mL~(-1)浓度作用HepG_2细胞48 h后,G0/G1期细胞比例明显降低,S期细胞比例显著增加,与细胞对照组比较,差异均具有统计学意义(P0.01);叶下珠复方Ⅱ号在10,15,20 mg·mL~(-1)浓度,作用于HepG_2细胞48 h,细胞早期凋亡率和总凋亡率明显增加,与细胞对照组比较,差异均具有统计学意义(P0.01)。叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组(20,10 mg·mL~(-1))作用于HepG_2细胞48 h后,Wnt1和β-catenin基因m RNA的表达量均明显低于细胞对照组(P0.01,P0.05)。结论叶下珠复方Ⅱ号对BALB/C裸鼠肝癌HepG_2细胞皮下移植瘤的生长具有明显的抑制作用,作用机制与抑制Wnt1/β-catenin基因表达和信号通路活化,从而阻滞细胞周期、抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡有关。     

叶下珠复方Ⅱ号对二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌形成的抑制作用及机制

目的:观察叶下珠复方Ⅱ号抑制二乙基亚硝胺(DEN)诱导的大鼠肝癌形成效果,并探讨其作用机制。方法:将240只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,叶下珠复方Ⅱ号高、中、低剂量(23.14,11.57 g·kg-1)组,喃氟啶组,采用DEN诱导肝癌大鼠模型,造模18周,同时给药进行干预,每6周各组处死大鼠8只,观察大鼠一般情况,肝功能指标变化和肝癌结节形成情况,镜下观察大鼠肝组织病理变化,放免法检测大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)含量;采用实时定量PCR(qRTPCR)法、免疫印迹法(Western blot)分别检测肝组织IL-6信号通路及microRNA let-7a调控网络基因的mRNA和蛋白表达改变。结果:实验第18周末,叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组大鼠肝癌结节数较模型组明显减少(P0.05);叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组大鼠血清IL-6,谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST)水平与模型组比较均明显降低(P0.05);与模型组比较,叶下珠复方Ⅱ号高剂量组大鼠肝组织microRNA let-7a表达量明显上升,转录因子蛋白家族(NF-κB-p65),IL-6,信号转导与转录激活因子3(STAT3),Harvery鼠肉瘤病毒Ras基因(Ras)和原癌基因(C-myc)mRNA表达量均明显降低(P0.05)。实验第18周,叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组STAT3和p-STAT3蛋白表达均明显低于模型组(P0.05)。结论:叶下珠复方Ⅱ号对DEN诱导的大鼠肝癌形成具有明显的抑制作用,作用机制与上调microRNA let-7a表达和下调NF-κB-p65的表达,从而抑制IL-6的表达和IL-6/STAT3信号通路活化有关。     

三石猫复方对裸鼠肝癌切除术后肿瘤复发的影响及机制

目的观察三石猫复方对裸鼠肝原位移植瘤切除术后肿瘤复发的影响,并初步探讨其机制。方法建立人肝癌Huh7细胞原位移植瘤裸鼠模型,随机分为治疗组和对照组,每组6只。手术切除原位瘤3 d后,分别使用三石猫复方[18 g/(kg·d)]及生理盐水灌胃14 d。观察肝脏肿瘤复发率,采用Western Blot检测复发瘤中转运蛋白Sec62表达;体外建立Huh7过表达Sec62稳转株,三石猫复方干预后,观察Huh7细胞增殖和侵袭迁移情况。结果与对照组比较,治疗组肿瘤术后复发率明显降低[33.3%(2/6)vs. 100%(6/6),P0.05],复发肿瘤组织中Sec62蛋白表达亦降低(P0.05)。体外实验显示,三石猫复方处理浓度≥1.0 mg/mL时,细胞增殖抑制明显(P0.01)。三石猫复方处理浓度在0.2、0.5 mg/mL时,可抑制肝癌细胞Huh7侵袭迁移,将Huh7细胞中的Sec62过表达后,这种抑制作用明显减弱。结论三石猫复方可以抑制人肝癌Huh7细胞原位移植瘤手术切除后复发肿瘤的生长,其机制可能与通过降低Sec62表达抑制细胞的侵袭迁移有关。     

虫草素通过调控Gli1介导抗肝癌细胞增殖及促凋亡的机制

目的:探讨虫草素抑制人肝癌细胞增殖并促其凋亡的分子机制。方法:采用干扰小RNA(siRNA)技术沉默胶质肿瘤相关癌基因同源物1(Gli1)基因并转染SMMC-7721细胞,细胞增殖与活性检测(CCK-8)及细胞克隆实验检测细胞增殖能力;使用不同剂量的虫草素对肝癌细胞进行干预,检测肝癌细胞的增殖、凋亡情况。使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Gli1及其下游相关基因的表达情况。结果:与正常肝细胞比较,Gli1在SMMC-7721肝癌细胞中的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。CCK-8及克隆形成实验结果显示,与空白组比较,干扰沉默Gli1组SMMC-7721细胞72,96 h的增殖率降低(P<0.05,P<0.01);细胞集落形成能力显著降低(P<0.01)。虫草素干预后,与空白组比较,虫草素80,120μmol·L^-1组72,96 h肝癌细胞的增殖明显降低(P<0.05,P<0.01)。凋亡实验结果显示,与空白组比较,虫草素80,120μmol·L^-1组SMMC-7721肝癌细胞凋亡显著增加(P<0.01)。Real-time PCR及Western blot实验显示,虫草素80,120μmol·L^-1组Gli1在SMMC7721细胞中的mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);虫草素120μmol·L^-1组B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和原癌基因(c-Myc)mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)。结论:Gli1在肝癌中高表达。虫草素可通过对Gli1及其下游与凋亡相关因子的调控从而抑制肝癌增殖并促肝癌细胞凋亡。     

莪术油对骨肉瘤saos-2细胞IGF-1R,Akt及Bcl-2表达的影响

目的:初步研究莪术油对骨肉瘤saos-2细胞的作用,并探讨胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R),蛋白激酶B(Akt)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达情况。方法:以saos-2细胞为研究对象,采用MTT法观察不同质量浓度30,60,120 mg·L-1莪术油作用saos-2细胞24,48,72 h后的增殖影响,流式细胞术观察莪术油(30,60,120 mg·L-1)诱导saos-2细胞的凋亡,RT-PCR检测IGF-1R mRNA的表达,Western blot检测Akt及Bcl-2的蛋白表达变化。结果:与空白组比较,莪术油(30,60,120 mg·L-1)能明显抑制saos-2细胞的增殖,并诱导saos-2细胞凋亡,呈剂量依赖性,明显下调IGF-1R mRNA的表达,明显下调Akt及Bcl-2蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:莪术油具有抑制saos-2细胞生长和诱导凋亡的作用,其抗肿瘤作用与抑制IGF-1R,Akt及Bcl-2的表达有相关性。     

叶下珠复方对人肝癌HePG_2细胞增殖及细胞信号传导通路的影响

目的观察叶下珠复方药物血清对人肝癌HePG2细胞体外增殖的抑制作用并探讨其机制。方法用叶下珠复方药物血清处理HePG2人肝癌细胞株,MTT法检测该药对肝癌细胞株增殖的抑制作用,用流式细胞仪检测该复方诱导肿瘤细胞凋亡情况。通过RT-PCR检测该药对细胞信号传导和转录激活因子3(STAT3)及其下游靶基因bcl-2的表达。结果叶下珠复方药物血清对HePG2细胞有抑制增殖和促进凋亡作用,该抑制作用与药物呈时间浓度关系。不同浓度的叶下珠复方处理HePG2细胞后bcl-2、stat3的mRNA水平明显下调(P0.05)。结论叶下珠复方在体外能抑制肝癌细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与抑制肿瘤细胞增殖的不同信号通路有关。     

miR-451对肝癌细胞增殖、糖酵解及相关基因表达的影响

目的研究miR-451对肝癌细胞增殖、糖酵解及相关基因表达的影响。方法实验分为普通组、增强组和抑制组,增强组和抑制组肝癌MHCC97细胞分别转染miR-451的模拟物mimics和阻遏物inhibitors,普通组常规培养。采用RT-PCR法检测3组肝癌细胞中miR-451和AMPK/mT OR、Ki-67、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、胰岛素样生长因子(IGF-1)表达情况,噻唑蓝(MTT)法检测3组肝癌细胞增殖情况,通过检测3组细胞葡萄糖摄取和乳酸分泌情况评估肝癌细胞糖酵解情况。结果增强组肝癌细胞中miR-451表达量明显高于普通组(P<0.05),抑制组肝癌细胞中miR-451表达量明显低于普通组(P<0.05)。MTT结果显示转染后各时间点增强组吸光度(OD)明显低于普通组和抑制组(P均<0.05)。转染后增强组肝癌细胞mT OR、Ki-67、MMP-9、VEGF、IGF-1mR NA表达量和葡萄糖消耗值、乳酸分泌值均明显低于普通组和抑制组(P均<0.05),而AMPK mR NA表达量明显高于普通组和抑制组(P均<0.05)。结论 miR-451参与调控肝癌细胞增殖及糖酵解,其调控机制可能通过影响AMPK/mT OR信号通路,进而影响细胞中Ki-67、MMP-9、VEGF、IGF-1的表达而实现。     

槐角黄酮通过调控LncRNA FBXL19-AS1/miR-342-3p通路抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究

探讨槐角黄酮对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响并分析其对长链非编码RNA FBXL19-AS1(LncRNA FBXL19-AS1)/微小RNA-342-3p(miR-342-3p)通路的调控机制。采用甲基噻唑基四唑(MTT)法与平板克隆试验检测不同质量浓度(1,5,10 mg·mL~(-1))的槐角黄酮对肝癌Huh7细胞增殖能力的影响;Transwell小室试验检测槐角黄酮对Huh7细胞迁移及侵袭能力的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测槐角黄酮对Huh7细胞中FBXL19-AS1和miR-342-3p表达水平的影响;双荧光素酶报告试验检测FBXL19-AS1是否靶向miR-342-3p;采用上述方法检测抑制FBXL19-AS1表达或FBXL19-AS1过表达后对Huh7细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响;明胶酶谱检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白1(cyclinD1),p21,MMP-2,MMP-9蛋白表达量。槐角黄酮可明显抑制Huh7细胞增殖、迁移及侵袭(P0.05),促进p21蛋白表达(P0.05),抑制cyclinD1,MMP-2,MMP-9蛋白表达(P0.05),并可降低MMP-2和MMP-9活性(P0.05);槐角黄酮处理后Huh7细胞中FBXL19-AS1的表达水平显著降低(P0.05),miR-342-3p的表达水平显著升高(P0.05);双荧光素酶报告试验结果证实FBXL19-AS1靶向抑制miR-342-3p的表达;抑制FBXL19-AS1表达后细胞增殖抑制率显著升高(P0.05),细胞克隆形成数显著减少(P0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P0.05),cyclinD1,MMP-2,MMP-9蛋白表达水平显著降低(P0.05),MMP-2和MMP-9活性显著降低(P0.05),p21蛋白表达水平显著升高(P0.05);FBXL19-AS1过表达可逆转槐角黄酮对Huh7细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。槐角黄酮通过调控LncRNA FBXL19-AS1/miR-342-3p通路抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

叶下株复方Ⅱ号对裸鼠肝癌移植瘤生长的抑制作用及机制

目的 观察叶下珠复方Ⅱ号肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其作用机制。 方法 建立BALB/C裸鼠肝癌HepG2细胞皮下移植瘤模型,随机分为模型组,叶下株复方Ⅱ号高、中、低剂量组（17.28、8.64、4.32 g·kg-1）和5-Fu组（25mg·kg-1）,给药6周后处死裸鼠,剥离瘤组织称重。体外观察叶下株复方Ⅱ号对HepG2细胞增殖、集落形成、细胞周期和细胞凋亡的影响,观察药物作用后Wnt1和β-catenin基因mRNA表达的改变。结果 叶下株复方Ⅱ高、中、低剂量组对裸鼠HepG2肝癌细胞移植瘤生长的抑制作用明显,与模型组比较,肿瘤重量均明显减轻(P<0.01),但与5-Fu对照组比较,差异均无统计学意义（P >0.05）。叶下株复方Ⅱ号体外在10mg·mL-1以上浓度能明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖,呈明显的量-效关系和时-效关系;叶下株复方Ⅱ号在2 mg·mL-1以上浓度, 对HepG2细胞集落形成呈明显的抑制作用;叶下株复方Ⅱ号以15、20 mg·mL-1浓度作用HepG2细胞48h后,G0/G1期细胞比例明显降低,S期细胞比例显著增加,与细胞对照组比较,差异均具有统计学意义（P<0.01）;叶下株复方Ⅱ号在10、15、20 mg·mL-1浓度,作用于HepG2细胞48h,细胞早期凋亡率和总凋亡率明显增加,与细胞对照组比较,差异均具有统计学意义（P<0.01）。叶下株复方Ⅱ号高、低剂量组(20、10 mg·mL-1) 作用于HepG2细胞48h后,Wnt1和β-catenin基因mRNA的表达量均明显低于细胞对照组（P<0.01、0.05）。结论 叶下株复方Ⅱ号对BALB/C裸鼠肝癌HepG2细胞皮下移植瘤的生长具有明显的抑制作用,作用机制与抑制Wnt1/β-catenin基因表达和信号通路活化,从而阻滞细胞周期、抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡有关。     

辣椒碱对乳腺癌MCF-7细胞增殖及p21和FBI-1表达的影响

目的:观察辣椒碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法:设立辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法(CCK-8)检测辣椒碱(50,100,150,200,250,300μmol·L-1)处理MCF-7细胞24,48,72 h后的细胞活性;克隆形成实验检测辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)处理MCF-7细胞18 h再更换为完全培养基继续培养14 d后的克隆形成能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)处理MCF-7细胞24 h后细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21(p21)和人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子-1(FBI-1)mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)处理MCF-7细胞24 h后细胞中p21和FBI-1蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,辣椒碱(50,100,150,200,250,300μmol·L-1)在体外对MCF-7细胞活性具有明显的抑制作用(P0.05,P0.01),并且这种抑制作用呈浓度和时间依赖效应;与空白组比较,辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)均能显著抑制MCF-7细胞的克隆形成能力(P0.01);与空白组比较,辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)能显著上调MCF-7细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平(P0.01),下调FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平(P0.01)。结论:辣椒碱干预在体外对乳腺癌MCF-7细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其上调细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平,下调细胞中FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平有关。     

蝙蝠葛碱对肝癌Huh7细胞增殖和凋亡的作用及机制研究

目的研究蝙蝠葛碱对肝癌Huh7细胞增殖和凋亡的作用,探索其抗肿瘤的作用机制和与Hedgehog信号通路的关系。方法不同质量浓度(2、4、8μg/mL)的蝙蝠葛碱处理Huh7细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Huh7细胞增殖能力的变化;流式细胞术分析细胞凋亡;real-timePCR、Westernblotting法检测Hedgehog信号通路相关基因及蛋白表达水平。结果随着蝙蝠葛碱质量浓度及作用时间的增加,其对Huh7细胞增殖的抑制率升高。其中蝙蝠葛碱8μg/mL作用48h对细胞增殖抑制率最高(48.8%)。蝙蝠葛碱可明显诱导Huh7细胞发生凋亡。随着蝙蝠葛碱质量浓度的增大,细胞的凋亡率显著升高(P0.05、0.01)。与对照组比较,蝙蝠葛碱各质量浓度组细胞Hedgehog信号通路中PTCH1、GLi1、SMO、SHHm RNA和蛋白表达水平显著降低,同时cleavedCaspase-3蛋白水平显著升高,而Bcl-2表达水平降低(P0.05、0.01),并呈质量浓度依赖性。结论蝙蝠葛碱可明显抑制Huh7细胞的增殖,促进其凋亡,其可能通过抑制Hedgehog信号通路发挥作用。     

壮通饮预处理对冠心病血瘀证大鼠AngⅡ,AT-1R,Cx43及其对再灌注损伤的影响

目的:观察壮通饮(Zhuangtongyin,ZTY)对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),血管紧张素Ⅱ1型受体(AT-1R),缝隙连接蛋白43(Cx43)mRNA表达水平和蛋白水平的影响,并探讨ZTY预处理在大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中对大鼠心肌细胞的保护机制。方法:采用随机分组的方法将SPF级SD大鼠分为空白组,假手术组(只穿线,不结扎),模型组,壮通饮低、中、高剂量组(6.8,13.6,27.2 g·kg-1)和复方丹参组(0.08 g·kg-1)。连续灌药4周后,通过结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注60 min,建立冠心病血瘀证再灌注损伤模型,术中监测大鼠心电指标,记录心律失常发生情况,再灌注结束后,取下心脏组织,用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测大鼠心肌组织中AngⅡ,AT-1R,Cx43 mRNA的表达水平,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠心肌组织中AT-1R,Cx43的蛋白表达水平。结果:壮通饮各剂量组和模型组比较均可以减少心肌缺血再灌注损伤模型大鼠心律失常的发生(P0.05)。与空白组、假手术组比较,模型组、壮通饮各剂量组、复方丹参组的AngⅡ,AT-1R mRNA表达均上调,Cx43 mRNA表达均下降(P0.05)。与模型组比较,壮通饮各剂量组、复方丹参组的AngⅡ,AT-1R mRNA表达均下降,Cx43 mRNA表达均上升,各剂量组之间,中剂量组AngⅡ,AT-1R mRNA下降,Cx43 mRNA表达上升最明显(P0.05)。壮通饮各剂量组与复方丹参组比较无统计学意义。空白组与假手术组比较,无显著性差异。与空白组、假手术比较,模型组、壮通饮各剂量组、复方丹参组的AT-1R蛋白表达均上调,Cx43蛋白表达均下降(P0.05)。与模型组比较,壮通饮各剂量组、复方丹参组的AT-1R蛋白表达均下降,Cx43蛋白表达均上升,各剂量组之间,中剂量组AT-1R蛋白下降,Cx43蛋白表达上升最明显(P0.05)。壮通饮各剂量组与复方丹参组对比无统计学意义。结论:ZTY对心肌缺血再灌注损伤有保护作用,降低再灌注心律失常的发生,其作用机制可能与壮通饮能调控AngⅡ-(AT-1R)-Cx43通路,导致Cx43表达上调有关。     

华蟾毒配基联合索拉非尼通过AURKA/Ras/Raf/ERK信号通路对肝癌Huh7细胞增殖与凋亡的影响

目的研究华蟾毒配基联合索拉非尼对肝癌Huh7细胞增殖与凋亡的影响及作用机制。方法 MTT法检测Huh7细胞增殖;Hoechst33342/PI荧光双染法检测Huh7细胞凋亡形态变化;流式细胞仪检测细胞周期;免疫细胞化学法检测Ki67蛋白表达;Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Caspase-8、极光激酶A(AURKA)、Ras、Raf、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和p-ERK蛋白的表达变化。结果华蟾毒配基、索拉非尼及联合用药对Huh7细胞的增殖均有抑制作用,联合用药组的增殖抑制作用更明显,具有协同效应;荧光染色可见细胞凋亡形态变化;索拉非尼引起Huh7细胞周期S期阻滞,华蟾毒配基和联合用药引起Huh7细胞周期G2/M期阻滞,联合用药组G2/M期阻滞较单药组更明显;华蟾毒配基和索拉非尼均能减弱Ki67表达,联合用药组的作用更为显著;华蟾毒配基、索拉非尼及联合用药上调Bax和Caspase-8蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax/Bcl-2比例,对ERK蛋白表达无明显影响,显著下调AURKA、Ras、Raf和p-ERK蛋白表达,联合用药组的作用更为显著(P0.05)。结论华蟾毒配基联合索拉非尼通过AURKA/Ras/Raf/ERK信号通路抑制肝癌Huh7细胞增殖,诱导其凋亡。     

薄荷醇对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及IL-8，CXCL-12，VEGF表达的影响

目的:体外实验观察不同剂量薄荷醇对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及白细胞介素-8(IL-8),趋化因子-12(CXCL-12)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,阐释薄荷醇抗肝癌的作用及其相关机制。方法:设立薄荷醇(25,50,100,200μmol·L-1)组以及空白组作用于肝癌HepG2细胞,利用细胞增殖与毒性检测(CCK-8)法和5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EDU)检测方法检测薄荷醇对HepG2细胞增殖的影响,利用迁移实验(Transwell)检测薄荷醇对HepG2细胞迁移能力的影响,利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测薄荷醇处理HepG2细胞炎症和趋化因子IL-8,CXCL-12 mRNA表达水平,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测薄荷醇处理对HepG2细胞中VEGF蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,薄荷醇(25,50,100,200μmol·L-1)在体外对HepG2细胞增殖和迁移均有抑制作用。薄荷醇100μmol·L-1时抑制作用明显(P 0. 05);薄荷醇(50,100,200μmol·L-1)对HepG2细胞迁移能力有明显抑制作用(P 0. 05),呈剂量依赖性。与空白组比较,薄荷醇(100,200μmol·L-1)均能显著抑制HepG2细胞中的IL-8,CXCL-12 mRNA和VEGF蛋白的表达水平(P 0. 05),进一步证实薄荷醇通过抑制炎症趋化因子起到抗癌作用。结论:薄荷醇在体外对肝癌HepG2细胞增殖、迁移具有明显抑制作用,潜在机制可能与其抑制细胞IL-8,CXCL-12,VEGF的表达有关。此结论为薄荷醇抗肝癌作用的阐释提供了实验依据。     

扶阳保元方通过NEDD9/TGF-β1信号介导肝癌QGY-7701细胞增殖、侵袭及迁移的实验研究

目的:探讨扶阳保元方对肝癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及作用机制。方法:将人肝癌QGY-7701细胞株分为空白组、扶阳保元方组、吉西他滨组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测扶阳保元方对人肝癌QGY-7701细胞增殖的抑制作用,Transwell法检测扶阳保元方对人肝癌QGY-7701细胞侵袭和迁移能力的影响;分别采用蛋白质印迹(western Blot)法和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测神经前体细胞发育下调因子9(NEDD9)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、信号传导蛋白Smad2的蛋白水平和mRNA表达。结果:与空白组比较,扶阳保元方组能显著抑制人肝癌QGY-7701细胞增殖,有效拮抗细胞侵袭与迁移,显著下调NEDD9、TGF-β1、Smad2 mRNA表达及蛋白水平(P<0.05或P<0.01)。结论:扶阳保元方能显著抑制人肝癌细胞增殖、侵袭与迁移,其机制可能与抑制NEDD9/TGF-β1信号有关。     

丹参酮IIA对血瘀型冠心病大鼠AngⅡ-(AT-1R)-Cx43的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对冠心病血瘀证大鼠血管紧张素(angiotensinⅡ,AngⅡ)-血管紧张素1型受体(angiotensin-receptor1,AT-1R)-缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)的影响。方法健康SD大鼠40只随机分为空白组、模型组、对照组和观察组。对照组予以0.08g/kg复方丹参丸,实验组予以25mg/kg丹参酮ⅡA磺酸钠注射液,空白组和模型组予以等量生理盐水灌胃。4周后除空白组外其他组采用左冠状动脉前降支高位结扎方法建立血瘀型冠心病大鼠模型。实时荧光定量法和western测定AngⅡ、AT-1R、Cx43基因与蛋白表达,HE染色及电镜观察4组大鼠心肌自噬体情况。结果与空白组比较,模型组AngⅡ、AT-1R mRNA与蛋白表达升高,Cx43 mRNA与蛋白表达降低,与模型组比较,对照组、实验组AngⅡ、AT-1R mRNA与蛋白表达降低,且实验组低于对照组,Cx43 mRNA与蛋白表达较模型组高,且实验组高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);微观结构方面,模型组心肌形态改变、心肌自噬体增多,对照组、实验组优于模型组。结论丹参酮ⅡA可通过调控AngⅡ-(AT-1R)-Cx43信号通路,改善冠心病血瘀证大鼠再灌注损伤的症状。