丹参水溶性成分抑制肝窦内皮细胞功能及血管新生的活性评价

目的探讨丹参水溶性成分对肝窦内皮细胞功能及血管新生的影响。方法采用肝窦状内皮细胞HHSEC细胞株,与不同浓度丹参水溶性成分丹酚酸A、丹酚酸C、丹参素钠、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B共孵育24 h,CCK-8法评估各成分细胞毒性。采用内皮细胞生长补充因子(ECGS)诱导HHSEC细胞增殖,以索拉非尼为阳性对照,Ed U法检测细胞增殖;荧光探针法检测胞内NO水平和NOS活力;免疫荧光法检测CD31表达;转基因斑马鱼实验观察斑马鱼荧光血管数量;鸡胚绒毛尿囊膜实验检测血管面积。结果与对照组比较,ECGS能够诱导HHSEC细胞增殖,NO水平和NOS活性升高,CD31表达升高;与模型组比较,索拉非尼及丹酚酸C、丹酚酸B、丹酚酸A能显著抑制ECGS诱导的HHSEC细胞增殖,降低细胞NO量和NOS活性,CD31表达明显降低。丹酚酸B、丹酚酸A、咖啡酸能够显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生;丹酚酸C对转基因斑马鱼功能血管数量具有显著抑制作用。结论丹参水溶性成分丹酚酸A、B、C能够抑制肝窦内皮细胞功能,且具有抑制血管新生的活性。     

芪术颗粒对肝纤维化模型大鼠肝窦微血管新生的影响及其机制研究

目的观察芪术颗粒对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠模型肝窦微血管新生的影响及其机制研究。方法将24只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、复方鳖甲软肝片组和芪术颗粒组,除正常对照组外其余各组腹腔注射CCl4建立大鼠肝纤维化模型。分别干预治疗4周后处死大鼠,取肝脏组织,免疫组化方法染色,检测血小板内皮细胞粘附分子(CD31)、高度糖基化的i型跨膜糖蛋白(CD34)的表达,并进行图像分析;另以CD31、CD34为对象进行微血管密度分析;Western Blot法检测毛细血管内皮表达Ⅷ因子相关抗原(vWF)、陷窝蛋白(Caveolin-1)的蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型对照组的新生微血管密度(MVD)明显增多,肝窦内皮细胞(LSEC)中CD31、CD34、vWF、Caveolin-1表达增强(P 0.01);与模型对照组比较,芪术颗粒组中的MVD值及LSEC中CD31、CD34、vWF、Caveolin-1蛋白表达量均显著降低(P0.01,P0.05)。结论芪术颗粒可降低肝纤维化中肝窦微血管密度,减少肝窦微血管增生,防止肝窦毛细血管化,其机制可能与其下调LSEC中CD31、CD34、vWF、Caveolin-1表达有关。     

电针血清外泌体促进缺氧诱导的人脐静脉血管内皮细胞血管新生的研究

目的：观察电针血清外泌体对缺氧诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)血管新生的影响，探讨电针血清促进脑缺血后血管新生的作用机制。方法：建立改良的急性局灶性脑缺血再灌注大鼠模型，在造模成功后5 min大鼠的“人中(Du26)”和“百会(Du20)”穴进行针刺干预。将HUVECs分为对照组、模型组、电针外泌体组、miR-210模拟物组、miR-210抑制剂组与HIF-lα抑制剂组。采用流式细胞术、CCK-8法检测各组细胞凋亡和增殖情况，Matrigel基质胶实验观察血管生成能力，Western bolt和qPCR检测各组HIF-1α、VEGF、Notch 1、CD34和miR-210的表达水平。结果：与模型组比较，电针外泌体和miR-210模拟物均可显著抑制缺血缺氧诱导后的HUVECs细胞凋亡，并促进细胞增殖及细胞迁移，而miR-210抑制剂显著抑制了电针外泌体作用后的细胞增殖和迁移数量。此外，电针外泌体与miR-210模拟物进一步提高了缺氧缺血后HIF-1α、VEGF和Notch 1的水平，miR-210抑制剂与HIF-lα抑制剂逆转电针外泌体诱导的HIF-1α、VEGF和Notch...     

五味子酯甲抑制肝窦内皮细胞功能及血管新生的活性评价

探讨五味子酯甲对肝窦内皮细胞细胞功能及血管新生的影响。0~40μmol·L-1五味子酯甲与SK-HEP-1细胞孵育24 h,MTT法评估五味子酯甲对SK-HEP-1细胞活力的影响。血管内皮生长因子(VEGF)诱导SK-HEP-1增殖,以VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂索拉非尼为对照,同时设空白对照组,五味子酯甲与SK-HEP-1细胞孵育,Ed U法检测细胞增殖;荧光探针法检测胞内NO含量和NOS活性;细胞迁移、Matrigel管腔形成实验检测细胞管腔形成;大鼠主动脉环实验检测血管生长变化;转基因斑马鱼实验观察斑马鱼节间血管、功能血管数变化。与空白对照组比较,VEGF诱导SK-HEP-1细胞增殖、NO含量和NOS活性升高;与模型组比较,五味子酯甲显著抑制VEGF诱导的SK-HEP-1细胞增殖、降低NO含量和NOS活性。五味子酯甲能够显著抑制VEGF诱导的SK-HEP-1细胞迁移和管腔形成,抑制大鼠主动脉环血管形成;对转基因斑马鱼节间血管具有显著抑制作用,显著减少斑马鱼功能血管数量。五味子酯甲能够抑制内皮细胞功能,且具有抑制血管新生活性的作用。     

雷公藤多苷片抑制实验性类风湿关节炎血管新生的作用研究

为了了解雷公藤多苷片对体外血管内皮细胞(HUVEC)管腔形成能力的影响以及对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节滑膜血管新生的作用,该研究拟采用20μg·L-1血管内皮细胞生长因子(VEGF)诱导HUVEC体外模型,观察0. 1,1,10mg·L-1雷公藤多苷片作用7 h后对HUVEC管腔形成和管腔分支点数目影响的情况;另外,通过建立CIA大鼠模型,以9,18,36 mg·kg-1·d-1雷公藤多苷片连续给药42 d,采用HE染色法观察CIA大鼠关节滑膜中血管形态和密度,免疫组化和免疫荧光双染法检测滑膜中血管内皮细胞标志物血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)和α平滑肌肌动蛋白(αSMA)的表达情况,免疫组化和Western blot法观察滑膜组织中低氧诱导因子1α(HIF1α)和血管紧张素(Ang1)的表达水平。结果显示,1,10 mg·L-1雷公藤多苷片可显著降低VEGF诱导的管腔分支点数,0. 1,1,10 mg·L-1雷公藤多苷片可显著降低VEGF诱导的管腔形成面积和长度; 9,18,36 mg·kg-1·d-1雷公藤多苷片能显著降低CIA大鼠炎症关节的滑膜微小血管和血管密度,抑制CD31阳性表达量、CD31+/αSMA-不成熟血管和总血管阳性表达,同时18,36 mg·kg-1·d-1雷公藤多苷片负向调节滑膜中HIF1α和Ang1的含量。提示了雷公藤多苷片对CIA大鼠关节滑膜组织的血管新生和体外HUVEC的管腔形成有抑制作用,且这一作用可能与其调节炎症关节滑膜中失衡的HIF1α/Ang1轴有关。     

黄芪配伍当归对气虚血瘀模型大鼠血管内皮和肝窦内皮细胞CD54表达的影响

目的:探讨黄芪配伍当归(QG)对气虚血瘀模型大鼠心肺血管内皮和肝窦内皮细胞CD54表达的影响。方法:用饥饿 游泳制造"气虚血瘀"大鼠模型,灌胃给药15d后测定心肺血管内皮和肝窦内皮细胞CD54的表达。结果:气虚血瘀模型大鼠心肺血管内皮和肝窦内皮细胞CD54的表达明显增高,QG能显著降低其过度表达。结论:QG益气活血作用与降低心肺血管内皮和肝窦内皮细胞CD54的过度表达有关。     

隐丹参酮调控PKM2抑制内皮细胞血管新生的研究

目的:研究隐丹参酮是否通过调控PKM2表达而抑制内皮细胞血管新生。方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),采用紫草素抑制PKM2的表达,DASA-58激活PKM2,并用隐丹参酮进行干预,MTT法检测不同浓度隐丹参酮对HUVECs增殖的影响;细胞划痕实验及管腔形成实验观测HUVECs迁移及管腔形成能力,qPCR和Western blot分别检测HIF-1α、VEGF、PKM2 mRNA和蛋白表达,并用免疫荧光观察PKM在细胞内分布。结果:隐丹参酮对HUVECs具有呈浓度依赖性的抑制作用,DASA-58激活PKM2后,VEGF、HIF-1α mRNA和蛋白质表达上调,细胞迁移能力与成血管能力增加经隐丹参酮干预后,VEGF、HIF-1α、PKM2 mRNA和蛋白表达显著降低,细胞迁移能力与成血管能力降低。结论:PKM2高表达能促进新血管生成,隐丹参酮可能通过调控PKM2发挥抗血管新生的作用。     

白芍总甙对大鼠肝纤维化形成中肝窦内皮细胞的作用及血清TNF-α的表达研究

目的:研究肝纤维化形成中白芍总甙对肝窦内皮细胞血管化的逆转作用及血清,INF-α的表达.方法:用双抗体夹心法测定法分别检测肝硬化血清中TNF-α水平.结果:各组大鼠肝脏超微结构结果示,治疗组在术后3周无明显肝窦细胞血管化,对照组在术后第三周明显出现肝窦细胞血管化;血清TNF-α明显降低,并与对照组差异有显著性(P＜0.05),对照组在术后第2周和第3周均明显升高,且第3周升高更明显(P＜0.05)).结论:白芍总甙能延缓肝纤维化形成,TNF-α水平与肝纤维化程度密切相关,并可反映肝脏损害的程度.     

疏肝健脾活血方对肝星状细胞/肝窦内皮细胞共培养体系中VEGF/VEGFR表达的影响

目的探讨疏肝健脾活血方逆转肝纤维化进程中肝窦毛细血管化的可能作用机制。方法分离正常大鼠肝星状细胞(HSC)、肝窦内皮细胞(LSEC)和肝纤维化模型大鼠LSEC,利用慢病毒转染得到血管内皮生长因子(VEGF)过表达HSC。实验分为6组,1)正常HSC组:正常大鼠HSC空白血清培养; 2)正常组:正常大鼠HSC及正常LSEC空白血清共培养; 3)模型组:正常大鼠HSC及模型大鼠LSEC空白血清共培养; 4)过表达组:VEGF过表达HSC及模型大鼠LSEC空白血清共培养; 5)模型加中药组:正常大鼠HSC及模型大鼠LSEC 10%含药血清共培养; 6)过表达加中药组:VEGF过表达HSC及模型大鼠LSEC10%含药血清共培养。采用Western Blot法检测各组LSEC中血小板内皮细胞黏附因子CD31及血友病因子(vWF)蛋白表达,HSC中胶原Ⅳ、VEGF及血管内皮生长因子受体2 (VEGFR-2)蛋白表达;采用PCR法检测各组HSC中VEGF、血管内皮生长因子受体1 (VEGFR-1)及VEGFR-2 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组及过表达组CD31及vWF蛋白表达升高(P 0. 01),而模型加中药组较模型组CD31及v WF蛋白表达降低(P 0. 01);与正常HSC组和正常组比较,模型组及过表达组中胶原Ⅳ、VEGF蛋白表达升高(P 0. 05),而模型加中药组较模型组VEGF、VEGFR-2蛋白表达降低(P 0. 05);与正常HSC组和正常组比较,模型组及过表达组VEGF mRNA表达升高(P 0. 01);模型加中药组VEGF mRNA表达较模型组降低(P 0. 05)。结论疏肝健脾活血方可能通过下调VEGF、VEGFR-2蛋白表达,进而抑制VEGF信号通路,恢复LSEC窗孔结构,从而逆转肝窦毛细血管化。     

疏肝健脾活血方含药血清对肝纤维化模型大鼠肝窦内皮细胞失窗孔化的影响

目的探讨疏肝健脾活血方治疗肝纤维化的可能作用机制。方法 10只SD大鼠以10 ml/kg疏肝健脾方浓缩液(浓度2. 7 g/ml)灌胃,每日1次,连续3天后制备含药血清。中药血清设5%、10%、15%、20%、25%共5个浓度,采用MTT法筛选实验药物浓度。采用四氯化碳(CCl4)腹腔注射建立肝纤维化大鼠模型后分离肝纤维化肝窦内皮细胞(SEC),同时集正常大鼠肝星状细胞(HSC)和SEC。实验分为正常组、模型组、DAPT组、NF组、中药组、中药加DAPT组、中药加NF组,共7组。各组均加入HSC,正常组加入正常大鼠SEC,其余组加入肝纤维化大鼠SEC,常规培养24 h。吸出上清液,DAPT组、中药加DAPT组加入0. 2μmol/L DAPT (Notch通路阻断剂),NF组、中药加NF组加入1 gsu/ml rh NF-κB (Notch通路激动剂)。前4组加入含10%FBS DMEM/12培养基,后3组加入含预筛选浓度中药血清、10%FBS DMEM/12培养基,培养72 h后MTT法检测各组HSC活力,Western Blot法检测SEC中CD31、vWF蛋白表达情况。结果筛选出10%浓度的中药血清对细胞增殖有抑制作用。与正常组比较,造模2、4、8周模型组HSC活力上升,造模4、8周CD31蛋白表达升高(P <0. 05或P <0. 01);与模型组比较,NF组HSC活力上升,DAPT组和中药组HSC活力、CD31、vWF蛋白表达下降(P <0. 05或P <0. 01);与NF组比较,中药加NF组HSC活力、CD31、vWF蛋白表达下降(P <0. 05或P <0. 01);与DAPT组比较,中药加DAPT组HSC活力、CD31、vWF蛋白表达均下降(P <0. 05或P <0. 01)。结论疏肝健脾活血方可通过干预Notch通路,抑制HSC活力及SEC失窗孔化,可能是其治疗肝纤维化的作用机制之一。     

密蒙花方对缺氧状态下脐静脉内皮细胞增殖及HIF-1α表达的影响

目的研究密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial,HUVEC）增殖及缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1,HIF-1α）表达的影响。方法应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测密蒙花方对缺氧状态下HUVEC增殖的影响,应用免疫细胞化学法检测密蒙花方对缺氧状态下细胞中HIF-1α表达的影响。结果在缺氧状态下,HUVEC增殖明显且细胞中HIF-1α表达增高（P〈0.01）,密蒙花方能有效的抑制细胞增殖及HIF-1α表达,并呈浓度依赖关系。结论密蒙花方可能通过抑制HIF-1α的表达而抑制血管内皮细胞的增殖,从而对新生血管的形成起到一定的抑制作用。     

基于VEGF相关信号通路研究益气除痰方对缺氧血管新生的影响

目的:研究益气除痰方(YQCTF)对缺氧人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管新生的影响及机制探讨。方法:设立HUVEC常氧(Norm)组、缺氧造模(Hyp)组、缺氧+YQCTF低浓度(L)组、缺氧+YQCTF中浓度(M)组、缺氧+YQCTF高浓度(H)组,采用CCK8法和流式细胞术(Annexin V/PI染色)检测细胞增殖和凋亡;管腔形成实验和transwell小室测定细胞血管生成和细胞迁移能力;Western blot检测HIF-1α、VEGFA、VEGFR2、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结果:与常氧组比较,缺氧造模组HUVEC无明显增殖抑制和凋亡,但迁移和管腔形成能力增强,且HIF-1α、VEGFA、VEGFR2、PI3K、AKT、P-AKT蛋白表达上调;与缺氧造模组比较,YQCTF可明显抑制缺氧下HUVEC增殖,促进凋亡,降低迁移及管腔形成能力,呈现剂量依赖性,并可下调HIF-1α、VEGFA、VEGFR2、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结论:益气除痰方可抑制缺氧诱导的血管新生,可能与其调控VEGF相关信号通路有关。     

加减驻景方含药血清对CoCl_2诱导ARPE-19细胞表达VEGF及HIF-1α的影响

目的探讨加减驻景方含药血清对二氯化钴(CoCl_2)诱导后人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞系)中血管内皮生长因子(VEGF)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达的影响。方法 1.体外培养ARPE-19细胞,取对数生长良好的细胞用于实验,分为正常组,缺氧模型组,阳性对照组、含药血清组,并设立不同时间点。2.酶联免疫吸附试验(ELISA)观察CoCl_2诱导后不同时间、各组细胞上清液中HIF-1α的表达。3.蛋白质印迹法(Western blot)观察CoCl_2诱导后不同时间、各组细胞中VEGF、HIF-1α的表达情况。结果缺氧损伤后可诱导ARPE-19细胞中VEGF、HIF-1α蛋白的表达增加;与正常组比较,缺氧模型组VEGF及HIF-1α的表达高于正常组,差异具有统计学意义(P0.05);含药血清组与模型组比较,VEGF及HIF-1α的表达低于模型组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论加减驻景方含药血清对缺氧损伤后ARPE-19细胞中VEGF、HIF-1α蛋白的表达有抑制作用。     

基于HIF-1α介导的VEGF mRNA表达探讨膈下逐瘀汤抗肝纤维化血管新生的机制

目的通过研究肝纤维化大鼠缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)介导的血管内皮细胞生长因子(VEGF)m RNA表达及膈下逐瘀汤对其的影响,探讨膈下逐瘀汤改善肝纤维化血管新生的机制。方法 108只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组及膈下逐瘀汤高(GD)、中(GZ)、低(GX)剂量组,每组18只。大鼠ip50%四氯化碳-橄榄油溶液1 mL/kg制备肝纤维化模型,每周2次,共9周。各组于造模同时给药。对照组及模型组ig无菌水10 mL/kg,NAC组ig给予NAC 0.1 g/kg;GD、GZ、GX组分别ig给予膈下逐瘀汤生药饮片浓煎液26.0、7.8、3.9 g/kg,每日给药1次。在第3、6、9周时间点,各组分别随机选取大鼠处死,Masson染色制作病理标本;免疫组织化学染色半定量分析IV型胶原(collage type IV,Col-IV)及层黏连蛋白(laminin,LN)表达水平;Real-time PCR检测HIF-1a、VEGF mRNA的相对表达量;蛋白免疫印迹法(Westernblotting)检测VEGF、VEGFR2蛋白表达水平。结果与模型组比较,NAC、GD在给药第9周时均能有效抑制大鼠肝细胞外基质LN表达(P0.05);在给药第6、9周,NAC、GD均能有效抑制大鼠肝细胞外基质Col-IV表达(P0.05),NAC、GD及GZ均能有效抑制大鼠肝组织HIF-1α表达(P0.05);在给药第6、9周,NAC和GD能有效抑制大鼠肝组织VEGF mRNA表达(P0.05);膈下逐瘀汤各剂量和NAC均能抑制大鼠肝组织VEGF、VEGFR2的蛋白表达(P0.05)。结论膈下逐瘀汤对HIF-1α介导的VEGF mRNA表达有调控作用,可能是其抗肝纤维化血管新生的作用机制之一。     

缺氧诱导因子-1α对肝星状细胞影响的研究进展＊

肝纤维化是慢性肝病进程中肝脏反复损伤和修复的结果，是以细胞外基质过度累积为主要特征的病理过程。肝星状细胞异常活化是肝纤维化的细胞学基础，其活化受多种因素影响，其中，缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）发挥了重要作用。HIF-1α作为机体适应缺氧应激的关键细胞因子，对肝星状细胞的活化、增殖和促细胞外基质形成、促血管新生能力的改变有重要意义。中医药可通过调控HIF-1α的表达以及改善肝脏乏氧微环境减轻肝纤维化的程度，因此HIF-1α有望成为中医药防治肝纤维化的新靶点。本文就HIF-1α的概述、HIF-1α调控肝星状细胞活化、自噬、凋亡等功能以及中医药调控HIF-1α的表达防治肝纤维化等方面作一综述。     

增免抑瘤颗粒剂抗卵巢癌荷瘤小鼠皮下移植瘤血管生成作用的实验研究

目的 探讨增免抑瘤颗粒剂(Zengmian Yiliu Granule, ZMYLG)抗SKOV3卵巢癌荷瘤小鼠皮下移植瘤血管生成的影响及机制。方法 建立SKOV3卵巢癌荷瘤小鼠模型,随机分为对照组、紫杉醇组、ZMYLG高、中、低剂量组（简称ZMYLG高、中、低 组),每组8只,连续给药10天。采用细胞膜分化抗原34（CD34)抗体标记新生血管内皮细胞法,计算皮下移植瘤内微血管密度（MVD);免疫组化法、RT-PCR法检测皮下移植瘤内血管内皮生长因子（VEGF)及其受体胎肝激酶-1（FLK-1)、缺氧诱导因子（HIF-1α)蛋白及mRNA表达水平。结果 与对照组比较,紫杉醇组和ZMYLG高、中、低剂量组移植瘤内MVD明显降低,差异有统计学意义（P<0.01, P<0.05)。 ZMYLG各剂量组均能下调瘤组织中VEGF、FLK-1及HIF-1α蛋白 及mRNA表达量(P<0.01, P<0.05)。结论 ZMYLG能抑制肿瘤血管新生,其机制可能与下调HIF-1α表达,改善荷瘤小鼠缺氧状态,抑制VEGF及其受体FLK-1表达,发挥抗肿瘤血管生成作用有关。     

健脾软肝方对CCL_4诱导的肝纤维化大鼠肝窦内皮细胞失窗孔的影响

目的:探讨健脾软肝方对CCL_4诱导的肝纤维化大鼠肝窦内皮细胞失窗孔的影响。方法:60只雄性Wistar大鼠随机分为6组,采用2 m L/kg的30%CCL_4与70%橄榄油混合液腹腔注射,2次/周,复制肝纤维化模型。造模同时给予药物干预,正常组和模型组均给予生理盐水灌胃,阳性对照组用扶正化瘀方灌胃,健脾软肝方高、中、低剂量组分别给予不同剂量的健脾软肝方灌胃。4周后,采用HE染色和Mallory染色观察肝组织纤维化程度,透射电镜观察肝窦内皮细胞窗孔变化,ELISA法检测血清HA含量、Real-time PCR及免疫组化ABC法检测CD31、CD44mRNA及蛋白表达。结果:健脾软肝方干预后,光镜显示肝纤维化程度比模型组减轻;电镜显示大鼠肝窦内皮细胞窗孔直径变大、数目增多;HA含量降低(P0.01),且高、中、低剂量组血清HA的降低随剂量的升高而变化,表现为一定的剂量依赖关系;CD44阳性及mRNA表达增高(P0.05),CD31阳性及mRNA表达降低(P0.05),且表达量随剂量的升高而逐渐降低,呈一定的剂量依赖关系。结论:健脾软肝方可减轻肝纤维化大鼠LSEC失窗孔的作用。     

芪术颗粒对肝纤维化模型大鼠肝窦内皮细胞vWF及Caveolin-1表达的影响

目的观察芪术颗粒对肝纤维化模型大鼠肝组织内Ⅷ因子相关抗原(vWF)及陷窝蛋白-1(Caveolin-1)蛋白表达的影响。方法将24只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、芪术颗粒组、复方鳖甲软肝片组,每组6只。模型组、芪术颗粒组及复方鳖甲软肝片组腹腔注射40%CCl_4橄榄油溶液制备肝纤维化模型,同时,芪术颗粒组给予芪术颗粒1.25 g/(kg·d)、复方鳖甲软肝片组给予复方鳖甲软肝片0.625 g/(kg·d)灌胃;模型组给予等容积的无菌水灌胃。连续给药4周。正常组同等条件下饲养,不造模。用免疫组化法及Western blot法检测肝组织内vWF、Caveolin-1蛋白表达。结果 vWF、Caveolin-1表达于肝窦内皮细胞。与正常组比较,模型组肝组织内vWF、Caveolin-1蛋白表达明显增强;与模型组比较,芪术颗粒组、复方鳖甲软肝片组肝组织内vWF、Caveolin-1蛋白表达量相对较低(P0.05)。结论芪术颗粒可下调vWF、Caveolin-1蛋白的表达。     

柔肝抑纤饮抗DMN肝纤维化大鼠肝窦毛细血管化的实验研究

目的:以复方鳖甲软肝片为对照,观察柔肝抑纤饮抗大鼠肝窦毛细血管化的作用并比较两种药物的疗效差别。方法:建立DMN大鼠肝纤维化模型,将动物随机分组:A组(正常组);B组(模型组);C组(柔肝抑纤饮组);D组(复方鳖甲软肝片组)。分别灌服相应药物。检测血清HA、col-Ⅳ,行胶原染色(Masson)染色、免疫组化染色观察并测定肝组织vWF、LN的表达,电镜观察窦周隙超微结构。结果:C组在降低血清HA、col-Ⅳ水平,减少胶原染色百分比含量以及LN、vWF免疫组化阳性面积等方面,作用明显优于D组(P<0.05);电镜观察发现,C组肝窦内皮失窗孔和内皮下连续性基底膜的形成等病变也相对为轻。结论:柔肝抑纤饮能显著改善LN、vWF等反映肝窦毛细血管化的敏感指标,一定程度上逆转DMN大鼠肝窦毛细血管化,整体疗效优于复方鳖甲软肝片。     

天冬多糖低氧下抑制肝癌作用的体外实验研究

目的探讨低氧环境下天冬多糖对人肝癌细胞生长的影响及初步作用机制。方法氯化钴(CoCl2)化学模拟低氧下培养4种人肝癌细胞株(HepG2、Hep3B、SMMC-7721及Bel-7402),加入不同浓度的天冬多糖(0mg/m L、0. 9 mg/m L、1. 2 mg/m L、1. 8 mg/m L、2. 4 mg/m L、2. 7 mg/m L、3. 6 mg/m L)培养,CCK-8法检测天冬多糖对4种人肝癌细胞株细胞增殖的影响,根据IC50选取0. 9 mg/m L、1. 8 mg/m L、2. 7 mg/m L作为后续实验的天冬多糖低、中、高剂量浓度。后续实验4种细胞均设6组:常氧对照组只加入培养液培养;低氧对照组加入200μmol/L CoCl2培养;低氧低剂量组加入200μmol/L CoCl2+0. 9 mg/m L天冬多糖培养;低氧中剂量组加入200μmol/L CoCl2+1. 8 mg/m L天冬多糖培养;低氧高剂量组加入200μmol/L CoCl2+2. 7 mg/m L天冬多糖培养;常氧高剂量组加入2. 7 mg/m L天冬多糖培养。培养24 h后,Real-time PCR检测各组血管内皮生长因子(VEGF)、Bax、Bcl-2 mRNA表达情况,Western-blot方法检测各组缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、VEGF、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果低氧下天冬多糖可明显抑制人肝癌细胞株的生长,且抑制作用呈剂量依赖性。天冬多糖可明显抑制HIF-1α、VEGF、MMP-9蛋白表达及VEGF mRNA、Bcl-2mRNA表达,促进Cleaced Caspase-3蛋白及Bax mRNA表达,且低氧下高剂量作用最明显。结论天冬多糖在体外低氧条件下能抑制肝癌细胞的生长,其可能通过抑制HIF-1α/VEGF表达及肝癌细胞的侵袭、促进肝癌细胞凋亡起到抗肝癌的作用。