4’-甲醚-黄芩素对绒毛膜癌JAR细胞c-myc表达的影响

目的 探讨4’-甲醚-黄芩素(4-MS)诱导人绒毛膜癌JAR细胞凋亡的分子机制.方法应用透射电镜、流式细胞术、实时定量PCR法和Western blotting方法,体外观察4-MS对JAR细胞的影响.结果 电镜下可见用药后JAR细胞凋亡的形态学改变;流式细胞术显示,随着作用时间和药物剂量的增加,早期凋亡细胞和坏死细胞增加,明显高于对照组(P＜0.01).20、40 mg·L-1 4-MS作用48 h后c-myc mRNA的表达量为0.87±0.12和0.45±0.08;c-myc蛋白的表达量是0.37+0.02和0.25±0.02,均低于对照组(P＜0.01).结论4-MS诱导JAR细胞凋亡,其机制与降低c-myc的表达有关.     

松油烯-4-醇通过线粒体途径诱导宫颈癌Siha细胞凋亡的机制研究

目的 探讨松油烯-4-醇对宫颈癌Siha细胞凋亡的影响以及其可能的机制。方法 采用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养Siha细胞,并将其分为对照组、顺铂组(10μmol/L)和5、7.5、10μmol/L松油烯-4-醇组。MTT法检测不同浓度松油烯-4-醇对Siha细胞增殖的影响,TUNEL荧光染色法和Annexin V-FITC/PI法检测Siha细胞凋亡情况,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,RT-qPCR法检测Siha细胞Bax、cytochrome c、caspase9、HPV E6/E7 mRNA表达,Western blot法检测Siha细胞Bax、Bcl-2、cytochrome c、cleaved-caspase9蛋白表达。结果 松油烯-4-醇(5、7.5、10μmol/L)处理Siha细胞24 h后,细胞增殖能力减弱(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞Bax、cytochrome c、cleaved-caspase9蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),...     

温郁金二萜类化合物C抗胃癌作用的实验研究

目的通过肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激胃癌细胞株SGC7901,探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶MAPK(p38MAPK)调控核转录因子(NF)-κB通路在温郁金二萜类化合物C抗炎和诱导胃癌细胞凋亡中的作用。方法将不同浓度的温郁金二萜类化合物C在不同的时间,体外作用于人脐静脉细胞(HUVECs)、胃癌SGC-7901细胞,采用MTT法检测其对两种细胞株的增殖抑制率;采用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组胃癌细胞凋亡率;细胞免疫荧光检测p65核转位情况,采用Western blot检测各组p38MAPK/P-p38MAPK、p65/P-p65及Caspase-3/P-Caspase-3蛋白表达量。结果温郁金二萜类化合物C对SGC-7901细胞增殖有明显的抑制作用,并能有效地诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡;温郁金二萜类化合物C能一定程度地减少胃癌细胞SGC-7901p65核转位发生;Western blot结果提示,p38MAPK、p65蛋白的表达随着温郁金二萜类化合物C浓度的提高而减少,而Caspase-3蛋白的表达则增加(P0.05)。结论通过p38MAPK调控p65来激活凋亡执行蛋白Caspase-3是温郁金二萜类化合物C发挥抗炎和抗癌可能的作用机制之一。     

仙茅总黄酮诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的机制研究

目的 观察仙茅总黄酮诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡并探讨其可能的机制。方法 采用加热回流提取和大孔吸附树脂纯化方法制备仙茅总黄酮。通过CCK-8法检测MG-63细胞的增殖抑制率，计算半数抑制浓度（IC50）;Hoechst 33258染色法观察凋亡细胞核形态；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blotting法和RT-PCR法检测JNK、p38 MAPK、Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白和mRNA表达水平。结果 纯化后仙茅总黄酮纯度为40.72%；与空白对照组相比，仙茅总黄酮对MG-63细胞的增殖抑制作用明显，且呈时间和剂量依赖性；药物组凋亡率显著升高；Western blotting及RT-PCR结果显示，随药物浓度升高，JNK、p38 MAPK和Bcl-2的蛋白和mRNA表达水平均显著降低，Caspase-3、Bax的蛋白和mRNA表达水平均显著升高（P <0.05,P <0.01或P <0.001）。结论 仙茅总黄酮能显著抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖、促进其凋亡，其作用机制可能与下调MAPK信号通路JNK、p38 MAPK及抗凋亡因子Bcl...     

通心络胶囊对自发性2型糖尿病KK/Upj-Ay小鼠坐骨神经细胞凋亡的机制研究

该研究通过观察通心络胶囊对自发性2型糖尿病KK/Upj-Ay小鼠坐骨神经细胞凋亡的影响,试探讨其改善糖尿病周围神经病变(DPN)的机制.实验以KK/Upj-Ay小鼠为DPN模型,随机分为模型组、通心络低、中、高剂量组(1,2,4g·kg-1),另设C57BL/6小鼠为对照组.灌胃给药12周,测定热痛觉阈值、运动神经传导速度(MNCV)和感觉神经传导速度(SNCV);流式细胞术测定细胞凋亡率;Real-time PCR和Western blot法测定坐骨神经B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原2(Bcl-2)、白血病/淋巴瘤相关抗原相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)mRNA和蛋白的表达;Western blot法测定坐骨神经p38MAPK,p-p38MAPK蛋白水平.研究发现通心络胶囊能不同程度的升高痛觉阈值,增加MNCV和SNCV;通心络胶囊能降低坐骨神经细胞凋亡率;降低Bax和Caspase-3的表达,升高Bcl-2表达;通心络胶囊能降低p-p38 MAPK蛋白水平.结果表明通心络胶囊能够通过抑制p38MAPK磷酸化抑制DPN小鼠细胞凋亡,从而发挥糖尿病周围神经的保护作用.     

马兜铃酸诱导TM3小鼠睾丸间质细胞凋亡机制

目的:探讨马兜铃酸(AAs)对TM3细胞凋亡的作用及分子机制。方法:用2.5、10、25、100、400、1000 μmol/L浓度的马兜铃酸分别对TM3细胞作用24、48、72 h后,CCK-8法测定细胞活力; 25、100、400 μmol/L的马兜铃酸对TM3细胞作用48 h后,TUNEL检测细胞凋亡率,实时荧光定量法检测Caspase通路相关基因Caspase-3、Caspase-9和Bax mRNA相对表达情况,并通过Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9和Bax蛋白表达水平变化。结果:不同浓度的马兜铃酸对小鼠睾丸间质细胞的活力有一定的抑制作用; 用25、100、400 μmol/L浓度的马兜铃酸处理TM3细胞48 h后,通过TUNEL染色发现,不同浓度的马兜铃酸能够促进细胞的凋亡,Caspase-3、Caspase-9、Bax mRNA和蛋白表达水平升高。结论:马兜铃酸通过Caspase途径促进TM3细胞的凋亡来影响生殖细胞的发育。     

走马胎活性组分对肝癌HepG2细胞DUSPs/MAPK信号通路的影响

目的观察走马胎活性组分对肝癌细胞双特异性磷酸酶1/4/5(1,4,5,DUSP1/4/5)mRNA和蛋白表达及其下游ERK/JNK/p38?MAPK信号通路的影响。方法走马胎活性组分(4、8μg/mL)作用肝癌HepG2细胞24、72 h后,分别通过RT?PCR和Western blot检测HepG2细胞DUSP1、DUSP4、DUSP5的mRNA和蛋白表达,进一步采用Western blot观察DUSPs家族所调控的MAPK信号通路中关键蛋白ERK、JNK和p38磷酸化水平。结果与对照组比较,走马胎活性组分处理24、72 h组(4、8μg/mL)DUSP1、DUSP4和DUSP5 mRNA和蛋白表达均有所升高,72 h升高更为明显;同时JNK、ERK和p38的磷酸化蛋白水平明显降低。结论走马胎活性组分的抗肝癌作用可能与增高DUSP1、DUSP4和DUSP5在细胞内的表达,降低ERK、JNK和p38的磷酸化水平相关。     

黄芩苷对幽门螺杆菌诱导人胃黏膜上皮GES-1细胞损伤的保护作用及机制

目的:探讨黄芩苷(baicalin)对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导人胃黏膜上皮GES-1细胞(human gastric epithelial GES-1 cells)损伤的保护作用及机制研究。方法:采用Hp感染GES-1细胞,加入baicalin(15,30,60 mg·L~(-1))和p38分裂原激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)抑制剂SB203580 20μmol·L~(-1)共培养。噻唑蓝(MTT)比色法测细胞增殖、流式细胞术测细胞凋亡、酶联免疫吸附法(ELISA)测细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及IL-8水平、比色法测细胞乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性、蛋白免疫印迹法(Western blot)测细胞B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2,p-p38 MAPK及total-p38 MAPK(T-p38 MAPK)蛋白表达。结果:与空白组比较,Hp可抑制GES-1细胞增殖,促进GES-1细胞凋亡,诱导GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8并增加LDH活性,增加GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并降低Bcl-2蛋白表达(P0.01);与Hp感染组比较,中、高浓度baicalin组可促进GES-1细胞增殖,减少GES-1细胞凋亡,减少GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8水平并降低LDH活性,降低GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.01);与高浓度baicalin组比较,SB203580可进一步促进GES-1细胞增殖,减少GES-1细胞凋亡,减少GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8水平并降低LDH活性,降低GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:baicalin可通过抗炎、促增殖并抗凋亡减轻Hp诱导的GES-1细胞损伤,其机制可能与抑制p38 MAPK通路有关。     

MAPK信号转导通路在人参多糖诱导白血病K562细胞凋亡中的作用

目的 探讨人参多糖诱导白血病K562细胞凋亡的机制.方法 将对数生长期K562细胞分成对照组和人参多糖组,对照组细胞常规培养,人参多糖组细胞培养体系中加入人参多糖0.4 g/L.各组细胞培养48 h后,流式细胞术和Hoechst33258染色法检测K562细胞凋亡情况;RT-PCR检测细胞p38、JNK基因表达;采用免疫荧光实验检测细胞中p-p38、p-JNK蛋白表达,测定Caspase-3的活性;Western blotting检测细胞中p38、JNK、p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3蛋白的变化.结果 与对照组比较,人参多糖组K562细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),出现明显的细胞核固缩现象,K562细胞p38 mRNA与JNK mRNA明显增多.免疫荧光检测显示,p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3表达明显增强且向胞核转移;Western blotting检测显示,人参多糖组K562细胞p38、JNK总蛋白无明显变化(P＞0.05); p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3有增加的趋势(P＜0.05).结论 人参多糖能促进K562细胞凋亡,其作用可能是通过影响MAPK信号传导通路实现的.     

水蛭通过p38MAPK信号通路对早期动脉粥样硬化大鼠VSMCs的影响

为了探究中药水蛭干预作用下p38MAPK信号转导通路对早期动脉粥样硬化(AS)大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖与凋亡的影响及其可能机制。实验通过生化分析仪检测中药水蛭对大鼠血脂(TG,TC,LDL-C,HDL-C)水平的调控;ELISA检测血清中TGF-β1的水平;免疫组织化学法(IHC)检测VSMCs的PCNA,Caspase-3表达水平;Western blot检测中药水蛭对VSMCs中MKK3,p38及C-myc蛋白表达的影响;HE染色观察大鼠胸主动脉形态变化。结果显示,中药水蛭可使TC,LDL-C明显降低,HDL-C升高,TGF-β1,PCNA的表达水平明显下降,Caspase-3表达上调,MKK3,p38及C-myc蛋白表达水平下降,以及抑制内膜增厚、减少斑块形成。以上结果表明中药水蛭可能通过调降血脂,降低TGF-β1水平,影响p38MAPK信号通路蛋白表达,从而抑制VSMCs的增殖、促进其凋亡,抑制内膜增厚、减少斑块形成等环节,进而干预早期AS进程。     

小青龙汤及其加味方对变应性鼻炎大鼠IL-4和IL-4mRNA表达的影响

目的:观察小青龙汤及其加味方对变应性鼻炎(AR)大鼠血浆IL4含量和脾细胞IL4mRNA表达水平的影响。方法:采用卵蛋白全身致敏与局部攻击方法制作AR大鼠模型,观察小青龙汤加味治疗后血浆IL4含量和脾细胞IL4mRNA的表达。结果:模型组血浆IL4含量和脾细胞IL4mRNA的表达明显升高,小青龙汤加味治疗组血浆IL4含量和脾细胞IL4mRNA的表达明显降低,小青龙汤加味治疗组优于小青龙汤治疗组。结论:小青龙汤加味治疗AR的作用途径之一可能是通过降低IL4mRNA的表达水平,间接降低IL4含量,从而减轻鼻粘膜变应性炎症。     

M3受体激动剂毛果芸香碱对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

 目的研究M3受体激动剂毛果芸香碱对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用Langendorff灌注系统,建立离体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。观察毛果芸香碱5μmol·L^-1对复灌后冠脉流量、心肌丙二醛(MDA)含量、心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性和心肌梗死面积的影响。结果毛果芸香碱改善缺血再灌注后的冠脉流量,其中5 min(P<0.01)和10min(P<0.05)的冠脉流量增加显著;降低心肌MDA含量(P<0.05)并提高心肌SOD活性(P<0.05);缩小心肌梗死面积(P<0.05)。上述作用可被选择性M₃受体阻断剂4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine-methiodide(4-DAMP)3 nmol·L^-1所逆转。结论M₃受体激动剂毛果芸香碱通过激动心肌M3受体而对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤起保护作用。     

犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹模型小鼠血清LTB4、LTC4水平的影响

目的：观察犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹模型小鼠血清LTB4、LTC4水平的影响。方法：50只小鼠随机分为5组,致敏小鼠,实验组采用犀角地黄汤合消风散煎剂给药17天,末次激发后24h处死小鼠,使用酶联免疫吸附试验对小鼠血清LTB4、LTC4进行检测。结果：犀角地黄汤合消风散中药干预1、2组LTB4检测结果分别为0.282ng/ml、0.313ng/ml,与模型组相比有非常显著和明显的差异（P〈0.001和P〈0.05）,LTC4检测结果中药干预组分别为1.509ng/ml、1.602ng/ml,与模型组比较显著的差异（P〈0.01）。结论：犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹模型小鼠血清LTB4、LTC4水平有显著的调节作用。     

猕猴桃根合并化疗治疗晚期胃癌研究

目的：评价猕猴桃根在胃癌治疗中的作用。万法：15例晚期胃癌患者，给予FOLFOX4＋猕猴桃根水剂万案治疗，按WHO标准评价近期疗效和毒性反应，同时观察生存率。结果：经6周期综合治疗，10例可评价病人：CR0例，PR7例，SD3例。5倒手术切除病人在化疗过程中及化疗结灰时术出现周部复发域远处转移症状，患者一般状态明显好转，中做进展时间9．4月：中位生存时间：13．6月。结论：FOLFOX4联合猕猴桃棍水剂治疗晚期胃癌患者有效，临床缓解率较高，不良反应轻，生存时间明显延长。     

姜黄素对CCl4所致急性肝损伤的保护作用研究

目的 观察姜黄素对CCl4所致急性肝损伤的保护作用.方法 将大鼠分为模型组（单纯皮下注射CCl4）,低、中、高剂量姜黄素治疗组（皮下注射CCl4的同时,给予不同浓度的姜黄素腹腔注射）及正常对照组,应用光镜、电镜观察肝细胞的病理学变化.结果 模型组大鼠的肝组织呈现明显的水样变性和脂肪变性,并可见肝细胞坏死灶,姜黄素治疗组的肝细胞未见坏死改变,水样变性和脂肪变性程度减轻,以高剂量姜黄素组的治疗效果最为明显.结论 姜黄素能有效抑制CCl4所致的肝细胞损伤.     

久泻灵冲剂对溃疡性结肠炎模型大鼠炎性细胞因子的影响

目的:观察久泻灵冲剂对大鼠溃疡性结肠炎模型的影响,为临床用药的有效性提供实验依据。方法:采用异种异体结肠黏膜组织致敏法和乙酸局部灌肠相结合的方法制造动物模型。将Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组和久泻灵冲剂高、中、低剂量组。连续给药14d,末次给药后24h,大鼠股动脉取血并分离血清后,采用放射免疫法测定大鼠血清细胞因子IL-4、TNF-α含量及ELISA法测定大鼠血清细胞因子IFN-γ含量。结果:UC模型大鼠血清IFN-γ含量明显升高(P<0.01),久泻灵高、中、低剂量组血清IFN-γ含量低于模型大鼠(P<0.01 orP<0.05);UC模型大鼠血清IL-4含量低于空白对照组(P<0.01),久泻灵高、中剂量组血清IL-4含量高于模型大鼠(P<0.01 orP<0.05);UC模型大鼠血清TNF-α含量明显升高(P<0.01),久泻灵高、中剂量组血清TNF-α含量低于模型大鼠(P<0.01 orP<0.05)。UC模型大鼠结肠粘膜匀浆IL-4含量低于空白对照组(P<0.01),久泻灵高、中、低剂量组大鼠结肠粘膜匀浆IL-4含量高于模型大鼠(P<0.01 orP<0.05);UC模型...     

清香散对肝纤维化大鼠转化生长因子β1及Smad4免疫组化的影响

目的：观察清香散对肝纤维化大鼠转化生长因子β1及Smad4的影响。方法：采用复合因素建立肝纤维化大鼠模型．光镜下观察病理改变，免疫组化方法分析肝组织生长因子β1及信号转导分子Smad4表达的情况。结果：清香散能明显改善模型大鼠肝组织纤维化，并抑制肝组织转化生长因子β1及Smad4的表达。结论：清香散可有效防治大鼠肝纤维化，其作用机制可能是通过抑制转化生长因子β1及信号转导分子Smad4的表达实现的。     

百令胶囊对支气管哮喘模型大鼠血清IFN-γ、IL-4的影响

目的:观察百令胶囊对哮喘模型大鼠血清IFN-γ及IL-4的影响。方法:将48只健康SPF级SD大鼠随机分为正常组、哮喘模型组、地塞米松组及百令胶囊组共4组,每组12只。卵白蛋白致敏并诱喘成功后,正常组和哮喘模型组给予生理盐水30g/kg灌胃;地塞米松组予地塞米松片1mg/kg灌胃;百令胶囊组予百令胶囊2.5g/kg灌胃,治疗7d后,测定各组大鼠血清IFN-γ、IL-4含量并比较其变化。结果:哮喘模型组血清中IFN-γ的含量明显小于正常组(P<0.05),而血清中IL-4含量明显大于前者(P<0.05);地塞米松组与百令胶囊组的IFN-γ含量较模型组均有明显升高(P<0.05),且两种治疗药物之间无显著差异(P>0.05),两个治疗组的IL-4含量较模型组均有明显降低(P<0.05),治疗药物组间差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:百令胶囊和地塞米松均能显著提高哮喘大鼠血清IFN-γ的水平,降低血清IL-4水平,对哮喘有较好的防治作用。     

陆英不同工艺提取物对四氯化碳致小鼠肝损伤的影响实验研究

目的:筛选陆英具有保肝降酶作用的优选提取工艺,并探讨陆英中保肝降酶的活性部位.方法:采用了小鼠急性CCl4肝损伤模型,对陆英不同提取工艺所得的提取物进行保肝降酶药效学筛选,并把筛选出的最佳工艺提取物用不同溶剂萃取法和大孔吸附树脂分离法对活性部位进行了探索.结果:陆英75%乙醇提取物能非常显著地对抗CCl4导致小鼠肝损伤,效果优于其他提取工艺;陆英75%乙醇提取物经乙酸乙酯萃取部分能减少CCl4导致小鼠肝损伤,效果明显弱于陆英75%乙醇总提物,而石油醚、正丁醇和水萃取部分则无明显效果;陆英75%乙醇提取物经大孔吸附树脂纯化后30%、60%和95%乙醇洗脱液的高剂量和低剂量组均能对抗CCl4导致小鼠肝损伤,但30%乙醇洗脱液的作用最显著,并呈现剂量依赖性,且效果与陆英75%乙醇总提物相似.结论:75%乙醇为陆英的优选提取溶剂,陆英75%乙醇提取物若经不同极性溶剂萃取,活性部位为乙酸乙酯萃取部分;若经大孔树脂纯化,则活性有效部分主要集中在30%乙醇洗脱液部分.     

七叶皂甙钠对实验性肝损伤的影响

目的:研究七叶皂甙钠对四氯化碳(CCl4) 导致大鼠肝损伤的影响.方法:大鼠用15?l4石蜡油溶液皮下注射4次(每隔3天一次)造模引起肝损伤.在造模前三天开始以七叶皂甙钠腹腔注射给药,直至实验结束.末次注射CCl4后16小时检测血清ALT、AST水平,第二天取肝测丙二醛(MDA) 含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并作组织病理学检查.结果:七叶皂甙钠组能保护CCl4引起的大鼠肝损伤,表现为血清ALT、AST活力和肝脏MDA含量下降,以及肝脏SOD活性增高,同时其肝脏病变较造模组为轻.结论:七叶皂甙钠对CCl4致大鼠肝损伤具有保护作用.