关木通肾毒性机制的实验研究

目的：研究揭示关木通肾毒性的组织,细胞学机制。方法：建立体内短期肾病毒动物模型和体外培养牛肾间质成纤维细胞模型,分别观察关木通（9g/kg)及其复方（30g/kg),对体内动物模型,关木通鼠血清和关木通主要毒性成分马兜铃酸及其鼠血清对体外细胞模型的毒性影响,并进一步采用高效液相色谱法检测马兜铃酸鼠血清中马兜铃酸及其代谢产物的含量。结果：关木通组动物体重明显减轻（P＜0．01）,并出现蛋白尿和尿糖,关木通复方组动物体重增长缓慢（P＜0．05）,也出现蛋白尿,但未见尿糖,关木通及其复方组均可见肾小管上皮细胞变性,脱落,间质血管瘀血,肾小球基本正常或有轻度基膜皱缩;关木通和马兜铃酸鼠血清均对牛肾间质成纤维细胞的生长显著抑制作用（P＜0．01）,且该抑制作用不随马兜酸I血药浓度的递减而减弱,而与血药浓度相对稳定的马兜铃酸代谢产物马兜铃内酰胺I相关。结论：在动物模型上确证大量短期服用关木通及其复方均出现肾毒性,并呈现急性肾小管上皮细胞损伤为主而不伴肾间质纤维化的组织病理学特点;证实关木通真正的肾毒性成分还有其固有的和体内代谢生成的马兜铃内酰胺,其作用位点并非局限于肾小管上皮细胞,至少还有肾间质成纤维细胞,该细胞生长受显著抑制的现象与慢性马兜铃酸肾病寡细胞性肾间质纤维化的病理特点相一致。     

关木通及其马兜铃总酸对小鼠肾脏毒性的研究

目的:以马兜铃酸A为剂量标准比较了关木通醇提物和关木通马兜铃总酸对小鼠的急性毒性,探讨关木通致毒的剂量关系。方法:小鼠单次灌胃关木通醇提物及其马兜铃总酸后,测定LD₅₀、肝、肾功能及观察了肝、肾组织形态学变化。结果:小鼠给予关木通醇提物的LD₅₀值为4.4g·kg^-1,折合成马兜铃酸A为40mg·kg^-1,与小鼠灌胃给予马兜铃总酸后的LD₅₀值(折合成马兜铃酸A为♂33mg·kg^-1,♀37mg·kg^-1)相近。给予关木通醇提物剂量折合成马兜铃酸A为4.5mg·kg^-1以上时,可引起血尿素氮和肌酐水平增高,同时可见肾脏组织形态学改变;折合成马兜铃酸A25mg·kg^-1以上时可引起AST增高和肝脏组织形态学改变;以上病变程度均与马兜铃酸A的剂量成正比。结论:关木通除了有明显的肾脏毒性外,还有肝脏毒性,致肾毒剂量较致肝毒剂量低,肾脏毒性是关木通致死的主要原因,马兜铃酸是主要的致肾毒成分。关木通的致死和致肾毒作用与马兜铃酸A的剂量成正比例。     

利用炮制技术去除关木通毒性成分的方法学研究

目的:根据马兜铃酸的化学性质,借鉴传统中药炮制经验,对去除马兜铃酸的炮制方法学进行研究。方法:以关木通为研究对象,马兜铃酸A为指标,采用正交试验等方法对关木通的碱制和醋制工艺进行优化。结果:确定了关木通的炮制工艺为以0.1mol·L^-1碳酸氢钠多次浸泡后醋制的方法。炮制过程中温度对毒性成分的去除率影响较大。不同含量的关木通在实验室小试炮制中,毒性成分去除率在90%以上,10批中试毒性成分的去除率在80%以上,使马兜铃酸A的含量降低到0.35-0.60mg·g^-1。马兜铃酸在药材中部分是盐的形式存在的。结论:该炮制新工艺能够选择性的去除关木通中的绝大部分毒性成分,达到了去毒的目的。     

配伍滋阴养血中药对关木通马兜铃酸A含量的影响

目的:通过反相高效液相色谱法观察比较关木通配伍不同滋阴养血中药后马兜铃酸A的变化趋势,探讨各中药组配伍对马兜铃酸A的影响。方法:以DiamonsilTM(钻石)C18(250mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,以甲醇-水-冰醋酸(体积比74∶24∶1)为流动相,检测波长315nm。结果:与关木通组相比,各配伍组马兜铃酸A含量均有降低;其中配伍当归组,以3∶1比例配伍马兜铃酸A含量最低。结论:在方剂配伍理论指导下,通过合理配伍降低关木通的毒性是可行的。复方配伍减毒理论有一定的科学依据。     

关木通的肾毒性及其防护

介绍关木通和马兜铃酸的肾毒性及其防护的研究进展。关木通有明显肾毒性,给药期间应定期监测肾功能,严格控制给药剂量可有效避免肾毒性的发生。     

丹皮与关木通配伍对马兜铃酸Ⅰ的影响

目的研究马兜铃酸的热稳定性和配伍对关木通煎煮液中马兜铃酸Ⅰ的影响,探讨马兜铃酸Ⅰ的配伍减毒机制。方法HPLC法测定关木通单煎液、关木通与丹皮共煎液、马兜铃酸Ⅰ对照品单煎液、关木通单煎后药渣和关木通与丹皮共煎后的关木通药渣中的马兜铃酸Ⅰ的量。结果马兜铃酸Ⅰ在纯水中煎煮后减少,并在其保留时间前又出现一个色谱峰,此峰同样出现在关木通煎煮液中。丹皮与关木通药对共煎液中的马兜铃酸Ⅰ的量低于关木通单煎液,并且共煎后的关木通残渣中的马兜铃酸Ⅰ也低于单煎后残渣。结论马兜铃酸Ⅰ在加热的条件下不稳定,部分生成另外一种物质。丹皮与关木通配伍后没有抑制关木通中马兜铃酸Ⅰ的溶出量,配伍减少关木通煎煮液中马兜铃酸Ⅰ的原因是后者溶出后发生了化学变化。     

拆方研究当归四逆汤中马兜铃酸A含量的影响

目的:观察比较关木通及当归四逆汤各拆方组中马兜铃酸A的变化趋势,探讨中药配伍对马兜铃酸A含量的影响。方法:参照当归四逆汤原方比例将供试样品分6组:关木通组、全方组、关木通+补气补血组、关木通+散寒组、关木通+甘草组、阴性对照组(全方去关木通);采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,以甲醇—水—冰乙酸(体积比74∶24∶1)为流动相,以DiamonsilTM(钻石)C18(250 mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,检测波长237 nm,测定各组中马兜铃酸A的含量。结果:与关木通组相比,当归四逆汤全方中马兜铃酸A含量最低;关木通+补血组马兜铃酸A含量也有明显降低。结论:在方剂配伍理论指导下,通过合理配伍降低关木通的毒性是可行的。     

关木通水煎剂总马兜铃酸含量测定及大黄、川芎对关木通致大鼠急性肾毒性影响

目的:研究大黄、川芎对关木通致大鼠急性肾毒性的影响.方法:测定关木通水煎剂总马兜铃酸的含量并复制关木通大鼠急性肾毒性模型,观察大黄、川芎对关木通所致大鼠急性肾毒性模型血尿素氮、肌酐、尿蛋白、尿钠、尿渗透压、尿NAG酶及肾脏组织形态学的影响.结果:关木通水煎剂(3 g生药/ml)总马兜铃酸含量平均值为13.4 mg/ml,大黄、川芎均能使大剂关木通所致的大鼠血尿素氮、肌酐升高状况降低,对尿钠、尿蛋白也有降低作用,对尿量、尿NAG酶无明显影响,肾脏组织病变程度也较关木通组轻.结论:大黄、川芎对大剂量关木通所致大鼠急性肾损害有一定的保护作用.     

重视含马兜铃酸中草药的肾毒性

舍马兜铃酸中草药有马兜铃、天仙藤、广防己、关木通、青木香、寻骨风、细辛等;服用后可能会导致急性或慢性马兜铃酸肾病,其病因与发病机制尚不清楚,应重视其肾毒性.     

小蓟饮子各配伍组对关木通肾毒性的比较研究

目的:研究小蓟饮子中君臣佐使药对关木通的减毒作用.方法:将大鼠随机分为关木通组、关木通与小蓟饮子中君臣佐使药不同配伍组,灌胃3周,观察大鼠一般情况及相关肾功能指标,并测定各组马兜铃酸Ⅰ的含量.结果:关木通与小蓟饮子中君药、臣药配伍组大鼠的一般情况,比单纯关木通组有明显改善,相关肾功能指标明显低于单纯关木通组(P＜0.01),马兜铃酸Ⅰ的含量也低于关木通组.结论:小蓟饮子中的君药、臣药能减轻关木通的肾毒性.     

以关木通为例探讨不同入药形式对中药中有毒成分含量的影响

目的:以关木通为例,探讨中药不同入药形式对其毒性成分含量的影响。方法:以3.7mmol·L^-1磷酸缓冲液(pH2.55)-乙腈为流动相,260nm为检测波长,采用RP-HPLC-DAD方法测定以粉末、水煎液2种形式入药的关木通中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ、马兜铃酸Ⅳa的含量情况。结果:关木通水煎液中马兜铃酸Ⅰ,Ⅱ,Ⅳa的煎出率分别为药材粉末中含量的53.4%,75.5%,61.9%;而在水煎后的药渣中马兜铃酸Ⅰ,Ⅱ和Ⅳa的残余量分别相当于粉末中含量的22.3%,15.7%和30.3%;3种马兜铃酸其余的约10%-25%可能在水煎过程中被破坏了;马兜铃酸Ⅰ在水煎液中仍为主要的马兜铃酸类成分。结论:不同入药形式对关木通中的毒性成分含量有很大的影响;应根据毒性成分的性质而选择合适的入药形式,以此来减少中药毒性成分对人体的损害。     

从临床表现和致病机制再认识马兜铃酸类中药的肾毒性

近年来马兜铃酸类中药的肾毒性备受医生和患者的关注。本文根据国内外最新研究进展,全面总结了含马兜铃酸的常用中药(关木通、广防己、马兜铃、细辛、青木香、天仙藤)引起肾脏损伤的特点。从临床表现、毒性机制、肾小管毒性监测等方面进行深入分析,结果提示:马兜铃酸类中药除可引起肾小管、肾间质损伤外,还可造成肾小球足细胞足突节段融合,系膜细胞基质轻度增多,另一方面还可增加尿路癌的发生率,其毒性和致癌性呈剂量-时间依赖性。在临床中应禁用含马兜铃酸成分最高的关木通,其他马兜铃酸类中药应慎用。为避免上述中药毒副作用的发生,需动态监测尿蛋白,特别是尿中能反映肾小管重吸收功能的小分子蛋白(视黄醇结合蛋白、胱抑素C)和N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)等,以便早期发现肾损伤。     

马兜铃属植物的肾毒性

自1993年比利时的Vanherweghem JL等首次报道“中草药”可引起进行性间质性肾纤维化以来,由广防已知关木通等含有马兜铃酸的马兜铃属植物引起的肾病变受到了世界各国的关注。中国、日本和英国也有相关的临床报道。研究发现,马兜铃属植物中所含的马兜铃酸具有较强的肾毒性、致突变性和致癌性。一般认为,临床发生的马兜铃酸肾毒性事件是滥用含有马兜铃酸的药物所致。为此有必要加强对植物药产品的质量控制和鉴定,以及对临床不良反应的监测和研究。目前欧美及亚洲的一些国家已限制使用和进口含有马兜铃酸的植物药制品。     

关于马兜铃酸类成分的毒性反应

我国马兜铃属植物药，除１９９０年版中国药典所载马兜铃，天仙藤，青木香，关木通和广防己以外，还有民间习用的朱砂莲，汉中防己，寻骨风，匀含抗癌活性成分马兜铃酸１及此类（硝基菲类有机酸）衍生物或内酰胺成分，德国的铁线莲状马兜铃，美洲的蛇根马兜铃，印度马兜铃等９种植物亦均含此类成分。据文献报道，马兜铃酸１对家兔，山羊，大鼠，小鼠和人体均有毒性作用，特别是对啮齿类动物有强致癌作用，药代动力学研究提示马兜铃酸     

基于“扶阳补虚”理论探讨炮附子、干姜配伍关木通的减毒存效机制

目的:研究炮附子、干姜配伍关木通对马兜铃酸A含量的影响,对大鼠利尿作用、急性肾功能损伤的影响,以及对体外肾细胞毒性的影响。方法:根据中医药理论,选取不同比例炮附子、干姜配伍关木通,通过HPLC比较配伍前后关木通中马兜铃酸A的含量变化,流动相乙腈-0.4%冰乙酸水溶液(42∶58),检测波长318 nm;通过大鼠水负荷动物模型比较配伍前后关木通的利尿作用变化;通过大鼠急性肾损伤试验比较配伍前后大鼠急性肾功能损伤的变化;通过倒置显微镜观察细胞形态,利用CCK-8检测细胞活力,比较配伍前后关木通对人肾小管上皮细胞毒性的变化。结果:炮附子-干姜-关木通(3∶2∶1)配伍使用时关木通中马兜铃酸A显著降低,降低率达19.18%,而对大鼠的利尿作用没有影响,对大鼠急性肾功能损伤明显低于关木通生品,细胞活力优于关木通生品。结论:炮附子、干姜配伍关木通可以达到一定的减毒存效作用,对解决含马兜铃酸A的中药饮片现有临床应用问题具有一定的指导意义。     

不同剂量竹叶对关木通中马兜铃酸A溶出量的影响实验研究

目的 观察不同剂量竹叶对关木通中马兜铃酸A溶出量的影响.方法 采用反相高效液相色谱法测定不同剂量竹叶配伍关木通中马兜铃酸A的溶出量.结果 关木通马兜铃酸A溶出量为0.106 mg/ml;竹叶与关木通1∶4配伍其溶出量为0.041 mg/ml.结论 中药竹叶可明显降低关木通马兜铃酸A溶出量61%;竹叶与关木通以1∶4配比对其马兜铃酸A的溶出量降低最明显.     

中药关木通中总马兜铃酸的含量测定

目的：测定关木通中总马兜铃酸的含量,保证临床用药安全有效。方法：紫外分光光度法,检测波长为310nm。结果：20批关木通样品中总马兜铃酸含量为0．63％～2．84％。结论：各地所用商品关木通中总马兜铃酸含量差异较大,且与药材性状具一定关系。     

10种微生物对含马兜铃酸A中药材的生物减毒研究

利用微生物对含马兜铃酸A中药材进行生物转化脱毒,筛选出合适的菌种,为后期进一步研究微生物法对含马兜铃酸类中药材的"去毒存效"奠定基础。采用UPLC对12种含马兜铃酸类中药材进行检测,其中有4种中药材检测到含有马兜铃酸A,分别是关木通、青木香、马兜铃和寻骨风,另外8种则未检测到。选取了黑曲霉、米曲霉等10个菌种,以关木通、青木香、马兜铃和寻骨风药材粉末为原料,运用液体发酵技术,在一定条件下进行生物转化脱毒,观察菌种的生长情况,采用UPLC测定发酵前后药材中马兜铃酸A的含量。结果表明有1个菌种对降低关木通、青木香、马兜铃、寻骨风中的马兜铃酸A含量均有一定的效果。     

浅析木通的肾毒性损害

90年代初比利时学者Vanherweghem首次报道“中草药肾病”(CHN),研究表明,只有马兜铃酸(AA)才是引起“中草药肾病”的毒性物质,认为“马兜铃酸肾病”才是更为合理的命名,得到了学者的认同。中草药制剂,包括:关木通、马兜铃、导赤散、复方地虎汤、龙胆泄肝汤、排石汤、小蓟饮子等     

反相HPLC法测定不同产地关木通中马兜铃酸A的含量

关木通为马兜铃科植物东北马兜铃Aris tolochiamanshuriensisKom的干燥藤茎。近年来,关于关木通能够引起肾损害的问题在国际上争议较大,并受到产业界、学术界、政府各个方面的极大关注。为了去除关木通中的马兜铃酸类有毒成分,利用炮制手段达到“去毒存效”的目的,我们首先应明确其含量。文献中测定马兜铃酸A的含量有TLC扫描法[1,2 ] ,测定马兜铃酸的含量有HPLC法[3,4 ] ,测定马兜铃酸总酸的方法有紫外分光光度法[5] 。本文将报....