三氧化二砷对MRL/lpr小鼠CD4+T细胞增殖和IFN-γ、IL-4分泌的调节作用

 目的探讨三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr狼疮小鼠脾脏CD4^+T细胞增殖以及IFN-γ和IL-4转录和翻译水平的影响。方法免疫磁珠分别分选15只MRL/lpr狼疮小鼠和15只C57BL正常对照小鼠脾脏CD4⁺T细胞,进而将CD4⁺T细胞随机分为空白组(RPMI1640),对照组(PHA20mg·L^-1+IL-21000u·mL^-1),ATO组[PHA20mg·L^-1+IL-21000u·mL^-1(48h)后+ATO1.0μmol·L^-1],体外共培养至72h。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测3组CD4⁺T细胞的增殖和抑制水平;酶联免疫吸附反应(ELISA)检测上清液中IFN-γ和IL-4水平;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测上述细胞因子基因的转录水平。结果①分选后获得的CD4⁺T细胞纯度为(94.12±1.08)%,细胞存活率为(95.82±3.41)%;②MRL/lpr小鼠对照组CD4⁺T细胞的增殖水平(A值)(0.343±0.019)较空白组(0.054±0.008)高(P<0.001);却低于C57BL小鼠对照组的水平(0.375±0.018)(P<0.05);③MRL/lpr和C57BL小鼠ATO组CD4⁺T细胞增殖水平(A值)分别为(0.324±0.013)和(0.362±0.013),均低于对照组(P<0.05,P<0.05);④MRL/lpr小鼠对照组IFN-γ的表达水平[(562.287±60.345)ng·L^-1]明显高于C57BL小鼠对照组[(253.208±59.434)ng·L^-1](P<0.05);ATO对MRL/lpr小鼠IFN-γ的抑制程度大于C57BL小鼠(P<0.05);MRL/lpr小鼠对照组的IL-4表达水平[(41.332±8.039)ng·L^-1]与ATO组[(23.046±3.253)ng·L^-1]和C57BL小鼠对照组[(29.303±8.038)ng·L^-1]比较,也具有明显的统计学差异(P<0.05和P<0.05);ATO对MRL/lpr小鼠IL-4的抑制程度高于C57BL小鼠(P<0.05);⑤在转录水平上,与C57BL小鼠相比,ATO对MRL/lpr小鼠IFN-γmRNA和IL-4mRNA的抑制程度更加明显(P<0.05和P<0.05);ATO对IFN-γ和IL-4表达水平的抑制和转录水平的抑制正相关,r=0.720(P<0.001)和r=0.557(P<0.01)。结论MRL/lpr小鼠存在CD4⁺T细胞的异常增殖,ATO能在不影响细胞存活率的浓度下抑制MRL/lpr小鼠CD4⁺T细胞的异常增殖活化,通过抑制其细胞因子IFN-γ和IL-4的mRNA分泌影响两者的表达,且对MRL/lpr小鼠抑制程度大于C57BL小鼠,表明ATO能抑制狼疮鼠的异常免疫功能,可进一步用于SLE的治疗。     

益肾养阴合剂对MRL/lpr小鼠免疫调节机制的研究

目的探讨益肾养阴合剂对MRL/lpr小鼠中的CD4+、CD8+、IFN-γ、IL-l0的影响。揭示益肾养阴合剂对MRL/lpr小鼠免疫紊乱发挥疗效作用的调节。方法将C57BL/6雄性小鼠分2组,第1组生理盐水对照;第2组正常中药组(益肾养阴合剂)。再将MRL/1pr雄性小鼠随机分为4组:第3组为生理盐水对照组;第4组为中药组(益肾养阴合剂);第5组为中西药组(益肾养阴合剂+醋酸泼尼松片);第6组为西药组(醋酸泼尼松片)。各组小鼠均为10只。予每日灌胃连续治疗4周。4周后处死,取各组小鼠(每组取5只)新鲜脾脏组织进行研磨、淋巴细胞分离后,用流式细胞术检测CD4+、CD8+细胞比例;再取余下各组5只小鼠新鲜脾脏组织为两部分,一部分用ELISA法检测组织IL-10、IFN-γ浓度;另一部分运用RT-PCR实验检测IL-10、IFN-γmRNA含量。结果 1.4组MRL/1pr小鼠CD4+较C57BL/6小鼠低且治疗后以中药加激素组升高明显(P0.05);4组MRL/1pr小鼠CD8+较C57BL/6小鼠高,在治疗后,中药加激素组较MRL/1pr小鼠生理盐水组降低(P0.05);CD4+/CD8+的比值中4组MRL/1pr小鼠与C57BL/6治疗前无差异且MRL/1pr比值最低,给予治疗后以MRL/1pr中药配合激素组升高最为明显(P0.05)。2.MRL/1pr小鼠IL-10较C57BL/6小鼠有不同程度升高,经治疗后以中药配合西药组降低明显(P0.05);MRL/1pr小鼠IFN-γ较C57BL/6小鼠有不同程度降低,经治疗后以中药配合西药组升高明显(P0.05);IL-10 mRNA、IFN-γmRNA的表达6组间比较差异性与蛋白变化(ELISA结果)一致。结论益肾养阴合剂可通过对CD4+、CD8+、IFN-γ、IL-10的调节缓解MRL/1pr小鼠病情,且治疗调节了CD4+/CD8+比例,说明益肾养阴合剂对调节MRL/1pr小鼠免疫紊乱具有一定疗效。     

针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠Th17/Treg细胞及其细胞因子表达影响的研究

目的:观察针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠的影响,并探讨针灸对调节性T细胞(Treg)及辅助性T细胞17 (Th17)分化及其细胞因子表达的调控作用。方法:将MRL/lpr狼疮性肾炎模型小鼠随机分为针灸组、地塞米松组、模型组,每组10只。另取10只C57BL/6小鼠作为正常组。采用HE染色法检测小鼠肾脏病理改变;PI单染流式细胞术检测各组小鼠肾脏组织中Th17/Treg比例;采用q RT-PCR和ELISA法检测肾脏中叉头样转录因子3 (Foxp3)、维A酸相关孤儿受体-γt (RORγt)及白细胞介素-17 (IL-17)的水平。结果:与正常组比较,模型组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及RORγt、IL-17蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),Foxp3蛋白及mRNA表达水平均下降(P<0.05)。与模型组比较,地塞米松组、针灸组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及肾脏组织RORγt、IL-17蛋白及m RNA表达水平均显著降低(P<0.05);Foxp3蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。结论:针灸能显著减少狼疮性肾炎小鼠肾脏RORγt及IL-17表达,增加Foxp3水平,调控Th17/Treg比例,改善肾脏病理改变,从而对MRL/lpr狼疮肾炎小鼠肾脏起到保护作用。     

利用基因芯片探讨中药复方对MRL/lpr狼疮小鼠肾脏基因表达及Th1/Th2细胞的调节作用

目的探讨中药复方对MRL/lpr狼疮小鼠肾脏基因表达及Th1/Th2细胞因子比例的调节作用.方法将狼疮小鼠随机分为两组.治疗组每天经饲料喂服中药复方,对照组进食正常鼠饲料,两组均自由饮水.观察小鼠存活率、蛋白尿阳性率及肾脏病理改变,将小鼠肾组织mRNA与点有8192条小鼠基因的芯片进行杂交,RT-PCR法检测肾组织干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的表达.结果存活率治疗组为81.3%,对照组为51.2%;蛋白尿阳性率治疗组为40%,对照组为80%;治疗组肾小球与肾小血管病变较轻.芯片结果显示两组间差异表达(2倍以上)的基因共279条.RT-PCR结果显示治疗组肾组织中Th1/Th2细胞因子(IFN-γ/IL-4)比例增加(与对照组比较).结论中药复方能改善狼疮小鼠肾脏病变,调节肾组织多个系统的基因表达,纠正Th1/Th2细胞因子的比例失衡.     

不同体质MRL/lpr狼疮鼠RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白质的表达

目的:观察不同体质MRL/lpr雌性狼疮鼠RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白质的表达情况,证实狼疮鼠体质差异的物质基础。方法:将3月龄狼疮鼠按体质分为常体、热体、寒体,饲养1月后,采用RT-PCT、Western Blot方法检测不同组别狼疮鼠血清ds-DNA,肾脏RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白质的表达。结果:不同体质MRL/lpr雌性狼疮鼠间RORγt mRNA的表达无明显差异,RORγt蛋白质的表达、Foxp3 mRNA及蛋白质的表达存在明显差异。MRL/lpr热体组小鼠RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白水平均偏低。结论:MRL/lpr狼疮鼠体质差异与RORγt、Foxp3基因及蛋白质的表达有关。     

砒霜对MRL/lpr自发性狼疮小鼠外周血单个核细胞DNMT1及CD11a表达的影响

目的:探讨砒霜(三氧化二砷ATO)对MRL/lpr自发性狼疮小鼠外周血单个核细胞(PBMC)中DNA甲基转移酶1(DNMT1)和黏附分子淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)的亚基CD 11a表达的影响及其可能作用机制。方法:20周龄(发病期)MRL/lpr狼疮小鼠24只,设C57BL正常小鼠24只做参照,随机平分两组,即治疗组(ATO组)和对照组(NS组),治疗组ATO 0.4mg.kg-1.d-1隔日腹腔注射,对照组隔日腹腔注射同等量生理盐水,疗程为60天,采用RT-PCR检测两组小鼠PBMC的DNMT1及CD11a转录水平的表达情况。结果:MRL/lpr小鼠治疗组中DNMT1-mRNA的灰度比值对照组增高(P<0.05),MRL/lpr小鼠治疗组中CD11a-mRNA的灰度比值较对照组降低(P<0.05)。结论:砒霜能逆转系统性红斑狼疮(SLE)的低甲基化状态。     

三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠淋巴细胞亚群和细胞因子表达的影响

 目的探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对MRL/lpr狼疮鼠淋巴细胞亚群和细胞因子表达的影响。方法MRL/lpr狼疮鼠随机分为ATO组(0.4mg·kg^-1·d^-1,ip)、环磷酰胺(CTX)组(50mg·kg^-1每周1次,ip)和生理盐水(NS)组(按体重取量,ip),给药2个月。取脾脏制成脾细胞悬液,加入佛波醇酯(PMA)和ionomycin活化,同时加monensin抑制蛋白转运,于37℃,5%CO₂培养4h后,用四色流式细胞术测脾脏CD3⁺(T)细胞和CD3⁺CD4⁺(Th)细胞的百分率以及CD3⁺CD4⁺(Th)细胞内细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的水平;分离血清,用ELISA法测血清中抗ds-DNA抗体、IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的浓度。结果①给药后,ATO组小鼠血清的抗ds-DNA抗体水平较给药前明显下降(P<0.01),而NS对照组则明显升高(P<0.05)。②ATO组CD3⁺细胞和CD3⁺CD4⁺百分率均显著低于NS组(P<0.01);③ATO组的血清IFN-γ和IL-12浓度均低于NS组(前者P<0.01,后者P=0.018);④ATO组Th细胞内IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12表达均显著低于NS组(P<0.01)。结论三氧化二砷能显著降低MRL/lpr狼疮鼠血清抗ds-DNA抗体的水平,抑制T细胞和Th细胞增生和活化功能,降低IFN-γ和IL-12的血清水平和Th细胞内IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的水平。     

升麻鳖甲汤对MRL/lpr小鼠Th_1/Th_2细胞因子失衡的影响

目的：观察升麻鳖甲汤对MRL/lpr小鼠Th1/Th2细胞因子失衡的影响。方法：选用24只雌性MRL/lpr小鼠随机分为中药组、西药组、中西药结合组、模型对照组,另取6只雌性BALB/C小鼠为正常对照组;分别予升麻鳖甲汤、强的松、强的松合升麻鳖甲汤、生理盐水灌胃,给药6周。6周后取血检测干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL-12、IL-10、IL-4）水平,并观察小鼠肾脏病理变化。结果：各治疗组小鼠血清IFN-γ、IL-12水平无显著变化（P〉0.05）;与模型组比较,各药物组血清IL-10、IL-4水平显著降低,血清IFN-γ/IL-4比值升高,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.05）,中西药组能显著升高血清IL-12/IL-10比值（P〈0.05）;各治疗组均能不同程度改善肾组织病理形态及超微结构变化。结论：升麻鳖甲汤对系统性红斑狼疮的治疗作用可能与其能调节Th1/Th2细胞因子之间的失衡、改善肾组织炎性病理改变有关。     

利用基因芯片探讨中药复方对MRL/1pr狼疮小鼠肾脏基因表达及Th1/Th2细胞的调节作用

目的：探讨中药复方对MRL/1pr狼疮小鼠肾脏基因表达及Th1/Th2细胞因子比例的调节作用。方法：将狼疮小鼠随机分为两组。治疗组每天组饲料喂服中药复方。对照组进食正常鼠饲料。两组均自由饮水。观察小鼠存活率,蛋白尿阳性率及肾脏病理改变。将小鼠肾组织mRNA与点有8192条小鼠基因的芯片进行杂交,RT-PCR法检测肾组织干扰素γ（IFN-γ）和白细胞介素4（IL-4）的表达。结果：存活率治疗组为81.3%,对照组为51.2%;蛋白尿阳性率治疗组为40%,对照组为80%;治疗组肾小球与肾小血管病变较轻,芯片结果显示两组间差异表达（2倍以上0的基因共279条,RT-PCR结果显示治疗组肾组织中Th1/Th2细胞因子（IFN-γ/IL-4）比例增加（与对照组比较）。结论：中药复方能改善狼疮小鼠肾脏病变,调节肾组织多个系统的基因表达,纠正Th1/Th2细胞因子的比例失衡。     

艾灸对肉瘤微环境中Th1/Th2漂移的调节作用

摘要：目的：研究艾灸对肉瘤免疫微环境中Th1细胞、Th2细胞和Th1/Th2漂移的作用。方法：SPF级C57BL/6J小鼠分空白组(10只)、模型组(10只)、顺铂组(10只)和艾灸组(10只)。采用S180肉瘤细胞接种C57BL/6J小鼠腋下形成移植瘤。艾灸组采用热敏艾条灸移植瘤,距离3cm,每次10分钟,每日1次,连续干预14天。顺铂组给以顺铂腹腔注射干预。小鼠处死后Luminex液相悬浮芯片检测血清IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10的浓度。检测移植瘤的重量,流式细胞技术检测脾的Th1和Th2数量,Fish(荧光原位杂交技术)检测移植瘤微环境中Th1和Th2的基因表达。结果：模型组S180移植瘤的均数为2.455g±0.23g,艾灸组为1.535g±0.18g,顺铂组为1.972g±0.20g,艾灸可以抑制肉瘤的生长(P = 0.002)。艾灸提高荷瘤小鼠血清IL-2和IFN-γ的浓度,降低IL-10和IL-4的浓度。艾灸增加荷瘤小鼠脾Th1细胞亚群的数量,下调Th2细胞亚群数量的作用。艾灸上调移植瘤微环境中Th1基因的表达,抑制Th2基因的表达。结论：艾灸可抑制S180移植瘤的生长。艾灸提高S180移植瘤微环境中的Th1/Th2的比值,使其由Th2向Th1漂移,从而起抗肿瘤的作用。