基于代谢组学技术的清开灵软胶囊和硬胶囊解热作用差异性研究

运用代谢组学技术比较清开灵软胶囊和硬胶囊的解热作用,为临床合理用药及系列制剂质量控制评价提供依据。采用UPLC-LTQ/Orbitrap的代谢组学分析技术,结合成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)和正交校正的偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等多元变量统计分析方法,研究干酵母诱导大鼠发热模型血浆内源性代谢物的变化,寻找与发热相关的生物标志物,在此基础上比较清开灵2种制剂干预后的解热作用。结果表明,实验各组的代谢轮廓能够明显区分,与正常对照组比较,模型组大鼠血浆中烟酸、胆碱、马尿酸、磷脂酸胆碱、Lyso PC(14∶0)、Lyso PC[16∶1(9Z)]、Lyso PC(18∶0)、Lyso PC[20∶3(5Z,8Z,11Z)]8种内源性代谢物具有差异性变化(P0. 05),可视为与发热相关的生物标志物。但二者对酵母诱导大鼠发热模型血浆代谢物的调节作用存在差异,软胶囊对8种生物标志物均呈不同程度回调,其中对烟酸(P0. 05)、马尿酸(P0. 01)、磷脂酸胆碱(P0. 05)、Lyso PC[20∶3(5Z,8Z,11Z)](P0. 05)呈显著性回调;而硬胶囊仅对烟酸(P0. 05)、马尿酸(P0. 01)、磷脂酸胆碱(P0. 05)呈显著性回调,对胆碱、Lyso PC(14∶0)、Lyso PC[16∶1(9Z)]、Lyso PC(18∶0)、Lyso PC[20∶3(5Z,8Z,11Z)]未出现回调,说明软胶囊对差异代谢物的回调作用较硬胶囊更为显著。此研究通过清开灵软/硬胶囊干预酵母诱导发热大鼠发热模型后相关生物标志物的变化,对二者解热作用及其作用机制进行比较。2种剂型主要通过调节脂类代谢,控制炎症反应发挥解热作用。软胶囊对溶血磷脂类潜在生物标记物的回调作用显著于硬胶囊;从代谢组学的角度阐述了清开灵软/硬胶囊解热作用差异,为临床剂型选择提供了实验数据和理论基础。     

基于UPLC-Q-TOF-MS代谢组学技术研究淫羊藿-川芎对骨关节炎大鼠的调控作用

目的 基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用仪（ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry，UPLC-Q-TOF-MS）代谢组学技术探究骨关节炎大鼠的血浆代谢特征及淫羊藿-川芎配伍对骨关节炎大鼠代谢的调控作用。方法 SD大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组、病理经时评价组、淫羊藿组、川芎组、淫羊藿-川芎组（40 g/kg）、阳性药物组（盐酸氨基葡萄糖0.12 g/kg＋塞来昔布1.00 g/kg）。模型组、病理经时评价组和各给药组采用交叉韧带-半月板损伤术建立骨关节炎模型，造模第6周各给药组给予相应药物干预，正常组、模型组给予等体积蒸馏水。采集0、2、4、6、8、10、12、14周大鼠血浆，通过病理组织学及血浆中基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）检测结果评价药效，UPLC-Q-TOF-MS技术分析大鼠血浆代谢轮廓，并结合多元统计分析，检测各组大鼠血浆代谢相关生物标志物的变化。结果 造模4周后MMP-13水平明显升高（P<0.01），给药8周后显著下降（P<0.01）。基于代谢组学发现给药组大鼠血浆中2种潜在生物标志物发生明显变化，分别为溶血磷脂酰胆碱（16∶0）、磷脂酰胆碱（18∶0/20∶4），主要涉及磷脂代谢通路。结论 淫羊藿、川芎单用和两者配伍均可回调差异代谢物治疗骨关节炎大鼠，且配伍效果优于单用。     

柴黄益肾颗粒对糖尿病肾病大鼠保护作用的脂质组学研究

目的:研究柴黄益肾颗粒干预对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏脂质代谢异常的调节作用.方法:采用单侧肾切除加i.p.链脲佐菌素诱导的方法复制DN大鼠模型,将38只Wistar大鼠分成4组,包括空白组、模型组、模型+柴黄益肾颗粒组、空白+柴黄益肾颗粒组.模型+柴黄益肾颗粒组ig给予0.56 g·kg-1柴黄益肾颗粒,于造模成功后第20周,采集肾皮质样品进行基于超高压液相-四级杆飞行时间质谱联用仪( UPLC-QTOF MS)的脂质组学研究,考察干预前后脂质代谢物组的变化.结果:造模成功第20周时,大鼠肾皮质中多种甘油磷脂酰胆碱、甘油磷脂酰乙醇胺、甘油磷脂酰甘油醇、甘油磷脂酰肌醇、鞘磷脂酰胆碱等都显著下调,而胆固醇酯和甘油三酯则显著上升.柴黄益肾颗粒干预对部分异常脂质代谢表现出明显的改善作用,包括4种鞘磷脂酰胆碱和2种甘油磷脂酰胆碱,即SM(d18:1/16:1),SM(C33:1),SM( C42:2),SM( C42:3),PC(36:4)和PC(42:10),其相对变化倍数分别为1.38,1.50,1.29,1.23,1.15和1.30.结论:柴黄益肾颗粒干预可以延缓大鼠DN的进展,该机制可能与其对脂质尤其是鞘脂代谢异常的调节有关.     

基于液质联用技术对急性血瘀证大鼠动物模型的代谢研究

目的:通过基于液质联用技术的代谢组学方法发掘急性血瘀证大鼠动物模型的潜在生物标志物,探索该中医证候模型的发病机制。方法:SD大鼠分为正常组和模型组,应用液相色谱和质谱联用仪的代谢组学方法检测急性血瘀证大鼠血清中代谢物的变化,通过PLS-DA等模式识别方法进行数据处理。结果:与正常组比较,模型组的脂肪酸代谢、磷脂酰胆碱代谢、神经鞘磷脂代谢出现异常。结论:急性血瘀证模型中磷脂酰胆碱、脂肪酸、神经鞘磷脂等成分的代谢都受到了干扰,这些代谢途径的变化可能导致能量代谢的异常,影响血小板功能,进而导致血瘀证的发生。     

大鼠肾阳虚证的代谢组学研究

目的 利用代谢组学技术观察糖皮质激素所造的肾阳虚证大鼠模型的内源性代谢物特征.方法 将24只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组和模型给药组各8只;肌注氢化可的松琥珀酸钠造模;造模成功后,给予模型给药组大鼠白附片溶液灌胃,连续14 d;末次给药24 h后取血制备血浆;采用高效液相色谱-质谱联用的代谢组学技术检测内源性代谢物.结果 正常组与模型组相比,溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)和468.4m/z的未知化合物的谱峰峰形改变较为明显.发生改变的代谢物可作为肾阳虚证的生物标志物做进一步研究.结论 从代谢组学分析中找出特异的标志性代谢产物,以利于深入研究中医证候的生物学本质.     

基于代谢组学的蒙药黄精保健功能的作用机制研究

目的利用代谢组学方法探究保健药黄精对机体的作用机制.方法将超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLCMS)与主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)相结合,对大鼠以黄精灌胃后体内内源性物质的变化情况进行研究.结果在PCA与OPLS-DA模型中,正常组与给药组大鼠血液样本均可明显区分.大鼠给药后共获得6个生物标记物,分别α-生育三烯酚、13'-羧基-γ-生育酚、硬脂酸、胆固醇、溶血磷脂酰乙醇胺[0:0/18:2(9Z,12Z)]、溶血磷脂酰乙醇胺[0:0/20:4(8Z,11Z,14Z,17Z)],其中α-生育三烯酚、13'-羧基-γ-生育酚、硬脂酸的含量升高,而胆固醇、溶血磷脂酰乙醇胺[0:0/18:2(9Z,12Z)]、溶血磷脂酰乙醇胺[0:0/20:4(8Z,11Z,14Z,17Z)]的含量降低.结论蒙药玉竹具有保健作用的原因可能是由于其改变了血液中某些成分的含量。     

黄芪散调节T2DM大鼠血浆磷脂代谢作用研究

目的:研究黄芪散(HQS)对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠血浆磷脂代谢的影响。方法:给予8周龄SD大鼠53.3%高脂饲料13周,建立T2DM模型。在造模的同时灌胃给予黄芪散(HQS),以UPLC/Q-TOF MS为分析手段研究大鼠在2型糖尿病状态以及黄芪散干预下的血浆脂质代谢物的情况。得到大量数据,再通过R软件中BioMark软件包实现对两组样品中特异性的标志物进行筛选。结果:筛选出的标志物经过成分鉴定发现主要为磷脂酰胆碱类(PC)以及其它脂类成分。HQS给药后主要改善了T2DM大鼠血浆中PC类等磷脂成分的代谢紊乱,同时增加血浆中高不饱和PC类磷脂的含量,如PC(40∶8)、PC(40∶7)、PC(40∶4)、PC(42∶9)。结论:黄芪散对T2DM引起的血浆磷脂代谢紊乱有一定的调节改善作用。     

基于代谢组学的中药川芎对寒凝血瘀证大鼠作用机制研究

目的:通过代谢组学研究方法,寻找大鼠寒凝证潜在的生物标志物;研究热性中药川芎对其潜在生物标志物的影响,探讨川芎治疗寒凝证的作用机制。方法:根据寒凝证的临床表现,制造寒凝血瘀大鼠模型;利用UPLC/Q-TOFMS BPI离子流图谱,分别绘制空白组、血瘀模型组、川芎大小剂量给药组的血浆BPI离子流指纹图谱,对图谱中分子离子峰进行分析,通过Markerlynx软件进行色谱峰自动识别和峰匹配,采用主成分分析法(PCA)对不同组间的数据进行模式识别,从而找到寒凝血瘀证潜在生物标志物及药物的作用靶点,阐明其作用机制。结果:找到寒凝血瘀证潜在生物标志物有N-甲基花生四烯酰胺、二氢神经鞘氨醇、N-丙基花生四烯酰胺、花生四烯酰基溶血卵磷脂、亚油酰基甘油磷脂酰胆碱、十六烷酸溶血磷脂酰胆碱、油酰甘油磷酯酰胆碱、十六烷基甘油磷脂酰胆碱8种。结论:热性药川芎对寒凝血瘀证大鼠的作用机制,可能是通过抑制使磷脂酰胆碱转化为花生四烯酸的磷脂酶A2,使血栓烷的合成水平降低,影响磷脂酰胆碱代谢途径,使血瘀症状减轻而发挥治疗作用的。     

基于代谢组学技术的冠心病血瘀证不同进展阶段大鼠潜在生物标志物及代谢通路研究

目的通过超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-TOF/MS)的非靶向代谢组学方法探索冠心病血瘀证形成过程中大鼠心肌组织代谢特征,寻找潜在的生物标志物,为基于代谢组学的心肌保护相关治疗措施寻找有意义的靶点。方法取27只SD大鼠作为模型组制备冠心病血瘀证模型,另设空白组8只。模型组大鼠采用高脂饲料喂养+维生素D3灌胃+皮下注射异丙肾上腺素方法分3个阶段进行冠心病血瘀证模型的逐步制备。通过UPLC-TOF/MS技术获取大鼠心肌组织内源性小分子代谢物,利用SIMCA 14.1软件和MetaboAnalyst5.0软件进行组间差异性代谢物筛选及相关代谢通路分析,使用SPSS21.0对组间差异性代谢物进行定量分析,受试者工作特征(ROC)曲线评估特征代谢物临床诊断效能。结果筛选出磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、1-酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、L-苯丙氨酸、牛磺酸共5种差异最为显著的潜在生物标志物,涉及甘油磷脂代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,苯丙氨酸代谢,牛磺酸和亚牛磺酸代谢4条主要差异代谢通路。ROC曲线分析显示,特征代谢物曲线下面积均大于0.7。结论冠心病血瘀证不同进展阶段大鼠心肌组织代谢组学出现改变,其病理机制主要涉及脂类代谢和氨基酸代谢,且特征性代谢产物具有诊断价值。     

高脂血症大鼠造模过程中血液代谢组学研究

目的采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-TOF-MS)代谢组学法动态观察高脂血症大鼠造模过程中血液的代谢轮廓的改变,寻找高脂血症演化过程中的生物标志物。方法将SD大鼠分成正常对照组和模型组,运用高脂乳剂灌胃法复制高脂血症大鼠模型,并收集不同时间点的血样,采用UPLC-TOF-MS检测并进行主成分分析。结果随着造模时间的延长,高脂血症大鼠血清代谢轮廓呈现动态演变。与正常对照组比较,模型组鞘磷脂、乙酰糖蛋白、谷酰胺、3-羟基丁酸、甲硫氨酸、甜菜碱、磷脂酰胆碱、柠檬酸、乌头酸、肌酸、3-吲哚硫酸、赖氨酸、甘氨酸等21种物质发生明显改变。结论在高脂血症进展过程中,不仅大鼠血液脂质代谢发生了紊乱,而且还伴随着糖代谢、氨基酸代谢的紊乱以及炎症和氧化应激。     

退热灵口服液的解热抗炎作用研究

目的：研究退热灵口服液的解热抗炎作用。方法：给小鼠左耳涂二甲苯,大鼠足后足趾注射角义莱胶,分别计算其抑制率,肿胀率。结果：退热灵口服液大剂量组效果显著,与蒸馏水对照组比较有明显差异优于阿斯匹林组。结论：退热灵口服液对小鼠耳廓、大鼠足趾肿胀,致热家兔有明显的抗炎,解热作用。     

热毒平的解热作用研究

对于内毒素、类脂A、肿瘤坏死因子．干扰素、鹿角菜胶、酵母或2.4-二硝基酚引致家兔或大鼠的实验性发热．热毒平灌服有显著的解热作用。量效关系明显。对内毒素或类脂A所致发热．热毒平作用尤强．lg／kg的作用与100mg／kg阿斯匹林相当；对于鹿角菜胶、酵母及2.1-二硝基酚性发热，2g／kg的热毒平的作用与100mg／kg阿斯匹林相当。本文还对七种发热模型的病因、过程和特点与中医临床证候的比类进行了讨论。     

Antipyretic activity of alpha- and beta-santonin

The antipyretic activity of two sesquiterpene lactones, beta-santonin and arsubin, isolated from the lipid fraction of Artemisia coerulescens subsp. gallica was determined in rats along with the activity of alpha-santonin. In its alpha- and beta-forms, santonin caused a decrease in the body temperature of rats made febrile by the subcutaneous injection of beer yeast. This decrease, more pronounced in the case of beta-santonin, was dose-dependent and antagonized by pretreatment with haloperidol, an agent that also opposes the antipyretic activity of dopamine. These findings seem to show that the alpha- and beta-forms of santonin act on rectal temperature in a way similar to dopamine.     

解热注射液的药理实验研究

解热注射液主治温病,用于风寒、风热之发热。解热注射液使三联菌苗发热模型的家兔异常升高体温降低,具有解热作用,使小鼠因疼痛出现的扭体次数及强度减缓,具有镇痛作用,使注射阈下催眠量戌巴比妥钠的小鼠睡眠,具有镇静作用,使小鼠的耳廓肿胀得到抑制,具有抗急性炎症作用。     

注射用清开灵冻干粉解热镇痛作用及解热机制的试验研究

目的:研究注射用清开灵冻干粉解热、镇痛作用及其解热机制.方法:建立家兔2,4-二硝基苯酚发热模型及大鼠内毒素发热模型,观察清开灵冻干粉解热作用;采用小鼠扭体法及热板法,观察清开灵冻干粉镇痛作用.并用放免法检测大鼠下丘脑cAMP及IL-1β含量的变化.结果:注射用清开灵冻干粉能有效抑制内毒素导致的大鼠发热和2,4-二硝基苯酚导致的家兔发热,显著降低发热大鼠下丘脑IL-1β及cAMP的含量;明显减少醋酸致痛小鼠扭体次数,推迟热致痛小鼠添后足时间.结论:注射用清开灵冻干粉具有解热、镇痛作用,其解热机制可能通过抑制内生致热原IL-1β的生成,从而降低下丘脑发热介质cAMP的含量.     

小儿退热解毒颗粒对发热大鼠下丘脑中PGE2及cAMP含量的影响

目的 探讨小儿退热解毒颗粒解热作用的机理。方法 采用酵母混悬液复制大鼠发热模型，观察小儿退热解毒颗粒对发热大鼠下丘脑中PGE2和cAMP含量的影响。结果 小儿退热解毒颗粒可降低发热大鼠下丘脑中PGE2和cAMP含量。结论 小儿退热解毒颗粒可通过抑制下丘脑中PGE2和cAMP含量升高而发挥其解热作用。     

甘草酸二伪麻黄碱盐的解热及抗炎作用

 目的研究甘草酸二伪麻黄碱盐(DPG)的解热及抗炎作用。方法用白百破三联菌苗制备家兔发热模型，观察DPG对家兔肛温的影响；分别用角叉菜胶、弗氏完全佐剂、棉球法造成大鼠炎症模型(以肿胀程度、肉芽肿重为指标)，观察DPG对各类炎症反应的抑制作用和免疫器官重量的变化；以荧光光度法和紫外分光光度法检测局部炎症介质的含量。结果DPG能明显降低致热家兔的肛温；DPG对急性和慢性炎症均有明显的抑制作用(P＜0.01)；可以使局部炎症介质前列腺素E2(PGE2)、五羟色胺(5-HT)、组胺(His)的含量明显降低。结论DPG有较好的解热、抗炎效果，DPG抑制局部炎症介质含量可能是其抗炎作用的机制之一。     

柴胡的清热与抗病毒作用

柴胡对伤寒－副伤寒所致家兔体温升高无显著降低作用，但能显著抑制鸡胚流感病毒，降低鼠肺炎病毒所致肺指数增高，阻止肺组织渗出性病变，降低肺病毒所致小鼠的死亡率，对抗地塞米松对巨噬细胞吞噬活性的抑制作用     

清热利咽冲剂的抗炎与解热作用

清热利咽冲剂对角叉菜胶引起的小鼠中有明显的抗炎作用，对伤寒三联菌苗引起的家兔发热有明显的降温作用，对金黄色葡萄球菌，乙型溶血性链球菌，肺炎球菌和伤寒杆菌有明显的抑制作用，对甲状腺纱引起的阴虚模型小鼠血浆的ｃＡＭＰ浓度降低有明显的升高作用。     

清热利咽冲剂的抗炎与解热作用

清热利咽冲剂对角叉菜胶引起的小鼠足肿胀有明显的抗炎作用，对伤寒三联菌苗引起的家兔发热有明显的降温作用，对金黄色葡萄球菌，乙型溶血性链球菌，肺炎球菌和伤寒杆菌有明显的抑制作用，对甲状腺素引起的阴虚模型小鼠血浆的ｃＡＭＰ浓度降低有明显的升高作用