HPLC法同时测定香加皮中杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛

[目的]同时测定香加皮中杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛的含量。[方法]采用HPLC法,ODS色谱柱,流动相为乙腈∶水=27∶73,检测波长220nm。[结果]杠柳毒苷线性范围0.05～1.6μg,r=0.9994;4-甲氧基水杨醛线性范围0.23～7.4μg,r=0.9993;杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛的精密度分别为1.2%、3.0%,重现性分别为1.4%、2.8%,加样回收率分别为100.2%、99.8%。[结论]本法简便、准确,可同时测定香加皮中的杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛。     

HPLC法同时测定香加皮中杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛的方法改进

[目的]建立同时测定香加皮中杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量的方法。[方法]采用高效液相色谱(HPLC)法,ODS色谱柱,流动相为乙腈∶甲醇∶水=27∶10∶63,检测波长220nm。[结果]杠柳毒苷线性范围0.08～1.0μg,r=0.9993;4-甲氧基水杨醛线性范围0.22～3.0μg,r=0.9999;杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛精密度的峰面积(RSD)值分别为0.79%、0.67%,重现性的RSD值分别为1.2%、2.2%,加样回收率分别为97.1%、96.2%。[结论]本法可同时测定香加皮中杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛的含量,分析时间短,且改进方法的准确度和重现性要优于文献报道方法。     

氮素形态对半夏植株氮代谢及主要化学成分的影响

目的: 研究氮素形态对半夏植株氮代谢及主要化学成分的影响。 方法: 采用无土栽培半夏,同一氮素水平不同氮素形态处理,测定半夏不同部位硝酸还原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)活性,铵态氮(NH₄⁺-N)、硝态氮(NO₃^--N)含量,块茎中总游离有机酸、生物碱、鸟苷含量,统计半夏珠芽和块茎产量。 结果: 随NH₄⁺-N/NO₃^--N的上升,半夏NR活性呈下降趋势;叶片、叶柄及块茎中硝态氮含量呈先升后降的趋势,根中硝态氮含量呈下降趋势;叶片、 叶柄及根中GS活性呈上升趋势,块茎中GS活性呈先升后降趋势;叶片、块茎及根中铵态氮含量先升后降,叶柄中铵态氮含量呈上升趋势。NH₄⁺-N/NO₃^--N为75:25时, 块茎、珠芽及合计产量均最高。全硝态氮营养下,块茎中总生物碱和鸟苷质量分数最高,分别为0.245%, 0.019 7%。铵态氮和硝态氮配比为50:50时,半夏总有机酸质量分数最高,达到了0.7%以上;全硝态氮处理下,总有机酸含量最低。 结论: 铵态氮、硝态氮复合施用对半夏植株氮代谢指标、产量和主要化学成分影响显著。     

不同氮素形态与配比对桔梗生长及桔梗皂苷D含量的影响

研究不同形态氮素处理对桔梗生长和桔梗皂苷D含量的影响,为桔梗氮肥合理施用提供借鉴。采用盆栽方式,对桔梗进行不同氮素形态配比处理,测定桔梗生长相关指标,包括生物量、光合参数及NR,GS活性,硝态氮,铵态氮含量和SOD,POD,CAT活性,桔梗皂苷D含量。结果表明:NH₄⁺-N/NO₃^--N为0 : 100处理,桔梗叶片NR活性、硝态氮含量、净光合速率及生物量达到最大值。叶片中GS活性在NH₄⁺-N/NO₃^--N为25 : 75处理最大,铵态氮含量在NH₄⁺-N/NO₃^--N为75 : 25处理为最大值。随着NO₃^--N比例的增加,SOD活性先降后升,CAT活性先升后降,MDA含量先降后升,且CAT与MDA呈完全相反变化趋势,均在NH₄⁺-N/NO₃^--N为25 : 75处理分别达到最大值与最小值。桔梗皂苷D含量也随NO₃^--N比例增加而呈先升后降的趋势,在NH₄⁺-N/NO₃^--N为25 : 75处理达到最大值,较酰胺态氮处理升高了25.81%。不同氮素形态及配比对桔梗光和特性、氮素代谢和抗逆调节指标、产量及质量影响显著。NH₄⁺-N/NO₃^--N为25 : 75处理较适宜桔梗生长及桔梗皂苷D含量的累积。     

氮素形态对喜树幼苗喜树碱含量及喜树碱代谢相关酶类的影响

目的：探讨氮素形态对喜树幼苗喜树碱含量及其生物合成途径中色氨酸合酶(TSB)和色氨酸脱羧酶(TDC)活性的影响。方法：在温室内对砂培喜树幼苗进行5 种NH⁺₄-N/NO^-₃-N比例的处理，用HPLC检测了幼叶中喜树碱含量和TSB活性以及茎皮中TDC活性的动态变化过程。结果：喜树碱含量与氮素形态有明显的关系，NH⁺₄-N/NO^-₃-N为25∶75时最有利于喜树碱在幼叶中的合成和积累(最高值达5.69‰)，且在处理的前30 d呈上升趋势而随后下降。幼叶中TSB 活性与氮素形态关系不十分明确。NH⁺₄-N/NO^-₃-N为25∶75时茎皮的TDC活性最大，并且TDC活性的变化与幼叶的喜树碱含量相关。结论：适宜的氮素形态比例对喜树幼苗中喜树碱的积累极为重要，短期NH⁺₄-N/NO^-₃-N为25∶75的处理可通过上调茎皮中TDC活性诱导幼叶中高含量的喜树碱。     

培养基中碳源和氮源对甘草愈伤组织生长和黄酮类化合物合成的影响

目的：研究碳源和氮源对甘草愈伤组织生物量积累和黄酮类化合物形成的影响。方法：在培养基中添加不同质量分数的蔗糖和果糖以及不同比例的NH⁺₄和NO^-₃,进行甘草愈伤组织的诱导和培养,并用HPLC检测愈伤组织中黄酮类化合物的含量。结果：2种碳源中,甘草愈伤组织生物量积累和黄酮类化合物合成均以果糖为碳源时高。在用2%果糖作为碳源时,培养物中5种黄酮类化合物的含量总和是3%蔗糖作为碳源的2倍。果糖作为碳源,在2%～6%时,随着质量分数的增加,培养物中5种黄酮类化合物的含量总和呈下降趋势,但其中甘草查尔酮的含量却增加5倍以上。硝态氮有利于甘草愈伤组织生长和黄酮类化合物的积累。当NH⁺₄/NO^-₃浓度比例为1/2时,甘草愈伤组织中5种黄酮类化合物含量的总和达最大值,为151.47 μg·g^-1。铵态氮抑制甘草愈伤组织生长和黄酮类化合物的形成。结论：果糖作为碳源最有利于甘草愈伤组织生物量积累和黄酮类化合物的生物合成。硝态氮有利于甘草愈伤组织生长和黄酮类化合物的积累。     

杠柳细胞悬浮培养体系的建立及有效成分杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量的测定

[目的]建立杠柳细胞悬浮培养体系,并测定悬浮细胞中杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量。[方法]无菌条件下切取杠柳幼根诱导愈伤组织,将其进行继代增殖培养,然后再将愈伤组织接种到液体培养基中建立细胞悬浮培养体系,并测定细胞中杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量。[结果]建立了杠柳细胞悬浮培养体系,并测定了细胞中杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量分别为4.06μg/g和1.92μg/g。[结论]通过组织培养方式可以成功建立杠柳细胞悬浮培养体系,细胞生长旺盛,但细胞中有效成分含量低,需要进一步对其基本培养基和培养条件进行考察。     

三七总皂苷对杠柳毒苷代谢产物杠柳次苷药代动力学的影响

[目的]研究三七总皂苷对杠柳毒苷代谢产物杠柳次苷药代动力学的影响。[方法]将18只SD大鼠随机分为杠柳毒苷单独给药组、杠柳毒苷与低剂量三七总皂苷配伍组、杠柳毒苷与高剂量三七总皂苷配伍组3组,每组6只。各组大鼠连续灌胃给药7 d后,采集不同时间点的血浆样品,测定血浆中杠柳次苷的含量,并计算其药代动力学参数。[结果]三七总皂苷配伍杠柳毒苷后,杠柳毒苷代谢产物杠柳次苷在大鼠血浆中的主要药动学参数C_max、T_max、AUC_0-t、AUC_0-∞与杠柳毒苷单独给药相比具有统计学差异。[结论]三七总皂苷与杠柳毒苷配伍使用可使杠柳毒苷代谢产物杠柳次苷的药代动力学行为发生改变。     

芪苈强心胶囊中12种成分的UPLC-MS测定

该文建立了芪苈强心胶囊中12种有效成分的超高效液相色谱结合质谱（UPLC-MS）的定量方法。采用Phenomenex UPLC Kinetex C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,2.6 μm）,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱,流速0.4 mL·min^-1,柱温40 ℃,进样量5 μL,质谱在负离子模式下采用TOF-MS及TOF-MS/MS方法检测。结果表明,12种有效成分毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷、异槲皮苷、柚皮芸香苷、橙皮苷、人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁、杠柳毒苷、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb₁、黄芪甲苷、人参皂苷Rd、杠柳苷H₁在检测的范围内线性良好,R²均大于0.999 0,方法回收率为98.0%~102%,RSD均小于3.9%。该方法简便快速、准确度高,可用于芪苈强心胶囊的质量控制。     

胶束电动毛细管电泳同时检测刺五加中紫丁香苷及绿原酸的含量

 目的建立简单、快速且能同时分离测定刺五加中紫丁香苷、绿原酸含量的胶束电动毛细管电泳法。方法采用胶束电动毛细管电泳法,缓冲体系为100mmol·L^-1 NaH₂PO₄-100mmol·L^-1 Borax-100mmol·L^-1 SDS-双蒸水(6.25∶43.75∶37.5∶12.5,pH9.25),熔融石英毛细管柱(25μm×45cm),分离电压为16kV,检测波长为254nm,进样时间为25s,进样高度10cm。结果紫丁香苷、绿原酸在0.0625～2.0000,0.2500～8.0000g·L^-1与峰面积线性关系良好,线性方程依次为:Y=112904ρ+1645.1(r=0.9999),Y=98191ρ-165.11(r=0.9999);样品回收率分别为100.78%和99.56%;两种成分含量以刺五加根中最高。结论该方法简单、快速、准确、重现性好,可用于刺五加药材的质量控制,不同部位两成分均存在一定的差异。     

香加皮中甾体类化学成分研究

 目的研究香加皮中甾体类化学成分。方法采用各种色谱技术如反复硅胶、Sephadex LH-20、ODS等柱色谱进行分离,利用现代NMR谱学技术确定化合物的结构。结果从中分离并鉴定了7个化合物,分别为periplocogenin(1),21-O-methyl△⁵-pregnene-3β,14β,17β,21-tetraol-20-one(2),△⁵-pregnene-3β,16α,20(S)-triol20-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-digitalopyranoside(3),秦岭藤苷C[△⁵-pregnene-3β,20(S)-diol20-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside,4],△⁵-pregnene-3β,20(S)-diol20-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucoyranosyl-(1→2)-β-D-digitalopyranoside(5),秦岭藤苷D[△⁵-pregnene-3β,20(S)-diol3-O-β-D-glucopyranosyl-20-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside,6],△⁵-pregnene-3β,16β,20(R)-triol20-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-digitalopyranoside(7)。结论化合物1、3为新天然产物,化合物4为首次从香加皮中分离得到,化合物6为首次从杠柳属中分离得到。     

碳源、氮源和磷源对西洋参悬浮细胞生物量和活性成分积累的影响

 目的研究碳源、氮源和磷源对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb1以及西洋参多糖合成的影响。方法利用组织培养技术结合高效液相色谱法和紫外分光光度法,通过改变培养基碳源种类、氮源和磷源浓度,研究其对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb1以及西洋参多糖含量的影响。结果添加40g·L^-1蔗糖的细胞干重生长率最大,加入30g·L^-1蔗糖得到的人参皂苷Re、Rb1和多糖的含量最高,分别为0.531%,0.145%和3.62%。本实验保持氮源浓度60mmol·L^-1,当培养基中全部为NO₃^-时,细胞干重生长率最低,而人参皂苷Re、Rb1和多糖含量最高,分别为对照组的2.40,1.96和4.41倍。添加5.00mmol·L^-1的KH₂PO₄,细胞干重生长率最大。当培养基中KH₂PO₄浓度为0.63mmol·L^-1时,人参皂苷Re、Rb1和多糖的含量最高。结论本实验确定了西洋参细胞悬浮培养的最佳碳源种类、氮源比例和磷源浓度,表明不同碳源、氮源和磷源对西洋参细胞生长和活性成分有显著影响。     

前体化合物和诱导子对丹参酮ⅡA和原儿茶醛合成的优化研究

 目的研究3种前体化合物和几种非生物诱导子对丹参(Salvia miltiorrhizaBge)不定根生长及其有效成分含量丹参酮Ⅱ_A和原儿茶醛的影响。方法通过添加前体化合物和诱导子两阶段培养丹参不定根,探讨其对丹参不定根生长和丹参酮Ⅱ_A、原儿茶醛含量的影响。结果培养第0天饲喂前体化合物,发现添加1.0 mmol·L^-1乙酸钠、0.5 mmol·L^-1酪氨酸和0.5 mmol·L^-1乙酸钠分别得到了最高的丹参不定根增殖倍数、丹参酮Ⅱ_A含量和原儿茶醛含量。培养第16天各种非生物诱导子处理,发现超声处理丹参不定根产量和原儿茶醛含量明显增加;1.0 mg·L^-1水杨酸促进丹参酮Ⅱ_A合成;高盐和高糖促进丹参不定根生长和次生代谢物合成;硝酸银和硝酸镧促进丹参酮Ⅱ_A合成,但抑制了原儿茶醛合成。结论前体物和诱导子两阶段培养对于丹参酮Ⅱ_A和原儿茶醛合成有显著影响。     

诱导子Ag+,La3+对杠柳不定根生长及杠柳毒苷积累影响的研究

目的:考察杠柳不定根牛长特性以及次生产物杠柳毒苷积累特性,并在此基础上考察Ag+,La3+2种诱导子对杠柳不定根生长与杠柳毒苷积累的影响.方法:每4 d对杠柳不定根进行取样,测量干重及杠柳毒苷含量,绘制杠柳不定根生长及杠柳毒苷积累曲线;在不定根生长稳定期加入不同浓度的诱导子Ag+,La3+以考察适宜杠柳毒苷牛物合成的最佳浓度,并将此浓度的诱导子添加到杠柳不定根不同生长阶段以考察诱导子对不定根生长以及对杠柳毒苷生物合成的影响.结果:杠柳不定根牛长特性旱典型S型牛长曲线,其与杠柳毒苷的代谢旱半偶联关系.诱导子Ag+,La3+诱导杠柳毒苷生物合成的最适浓度均为0.05 mmol.L-1,且在指数生长期末期加入这2种诱导子,诱导杠柳毒苷牛物合成效果最好.结论:杠柳不定根生长与其次生产物杠柳毒苷积累呈半偶联关系;诱导子Ag+和La3+的添加浓度与添加时间能明显的影响杠柳不定根生长与杠柳毒苷的生物合成.     

9-羟基利培酮手性异构体HPLC拆分方法的建立

 目的应用α₁-酸性糖蛋白(α₁-AGP)柱,建立9-羟基利培酮手性异构体的HPLC拆分方法,为研究9-羟基利培酮手性异构体药动学提供基础。方法在α₁-酸性糖蛋白柱上,考察了流动相pH值、有机改性剂种类及比例、缓冲盐种类及浓度、柱温对9-羟基利培酮手性异构体分离的容量因子、分离度、分离因子的影响,以摸索最优的拆分方法。结果以50mmol·L^-1醋酸铵(pH6.8)-异丙醇(96.5∶3.5)为流动相,流速0.9mL·min^-1,柱温25℃,在α₁-AGP柱上成功拆分9-羟基利培酮手性异构体。结论9-羟基利培酮对映体在AGP固定相上得到了完全分离且分离良好。     

氮素形态对杭白菊生长及品质的影响

以杭白菊为实验材料,设置不同的铵态氮和硝态氮比例,分析氮素形态及配比对杭白菊生长和品质的影响。结果表明:氮素形态及配比对杭白菊生长和品质有较大影响。叶绿素总量和净光合速率（P_n）均在NH₄⁺-N/NO₃^--N为25:75时达到最大值;根、茎、叶、花蕾等不同部位中NR的活性均在NH₄⁺-N/NO₃^--N为0:100时达到最大值;根和叶中硝态氮的含量在NH4₊^-N/NO₃^--N为50:50时达到最大值;随着硝态氮比例的增加,GS和GOGAT的活性均呈现下降的趋势,两者均在NH₄⁺-N/N0₃^--N为100:0时达到最大值,铵态氮的含量则在NH₄⁺-N/NO₃^--N为75:25时达到最大值;淀粉含量在NH₄⁺-N/NO₃^--N为100:0时达到最大值,可溶性总糖在NH₄⁺-N/NO₃^--N为25:75达到最大值;绿原酸,3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量基本呈现先升高后降低的趋势,两者的含量在NH4₊^-N/NO₃^--N为25:75时达到最大值,质量分数分别为0.673%,1.838%;木犀草苷的含量则随着硝态氮比例的增加而增加,并在NH₄⁺-N/NO₃^--N为0:100时达到最大值,质量分数0.108%;NH₄⁺-N/NO₃^--N为25:75时产量达到最大值。结论:氮素形态及配比对杭白菊的光合作用、碳氮代谢、产量品质影响显著,NH₄⁺-N/NO₃^--N为25:75时较利于杭白菊的生长及品质提升。     

高效液相色谱法测定人血中脂溶性维生素的含量

 目的建立同时测定人血中5种脂溶性维生素的高效液相色谱法。方法取血清0.5mL,甲醇蛋白沉淀后用正己烷、乙醚分2次提取,提取液氮气吹干,用甲醇-氯仿(3:1)液定容进样。色谱柱:Hypersil ODS(4.0 mm×250 mm);流动相:0-4.0min 甲醇-水(90:10),4.5-9 min甲醇-异丙醇(95:5),10-20 min甲醇-异丙醇(60:40);检测波长:维生素A 325 nm,25-羟基维生素 D3和维生素D3 265 nm,维生素E 290 nm,β-胡萝卜素450 nm;流速:1.0 mL·min^-1;柱温:30℃。结果维生素A和β-胡萝卜素在0.1～1.2 mg·L^-1,25-羟基维生素D₃在10.0～120.0 μg·L^-1,维生素D₃在20～240μg·L^-1,维生素E在2.0～24.0 mg·L^-1内线性良好;提取回收率均大于69％,方法回收率均大于92％,日内、日间RSD均小于6％;以本法测定了50例体检儿童血清中5 种脂溶性维生素的浓度。结论本方法快速、灵敏,操作简便易行。     

高效液相色谱法测定L-肌肽原料药的含量及其有关物质

 目的建立HPLC测定L-肌肽原料药的含量并进行有关物质检查。方法采用Kromasil NH₂色谱柱(4.6mm×200mm,5μm),流动相为乙腈-40mmol·L^-1磷酸氢二钾溶液(44∶56,磷酸调pH6.3),流速1.0mL·min^-1,检测波长为210nm,柱温35℃。结果L-肌肽在9.93～99.3mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为100.5%(RSD=1.0%),检测限为1ng(S/N=3)。L-肌肽与有关物质分离良好。结论该方法操作简便、重复性好、专属性强,可用作L-肌肽原料药的含量测定和有关物质检查。