弓形虫感染对妊娠中期孕鼠血清中胎盘激素含量的影响

目的探讨妊娠中期弓形虫感染对BALB/c孕鼠血清绒毛膜促性腺激素（CG）、胎盘催乳素（PL）和雌三醇（E3）含量的影响。方法在妊娠第8 d,采用腹腔注射法建立弓形虫感染的BALB/c小鼠动物模型,于妊娠第12、14、16、18d分批摘眼球取血,处死孕鼠,采用放射免疫分析法（RIA）测定孕鼠血清CG、PL和E3含量。结果实验组和正常对照组孕鼠血清CG含量均随妊娠天数的增加而降低,PL和E3含量均随妊娠天数的增加而升高（CG：F对照组=19.306,F实验组=57.620;PL：F对照组=17.449,F实验组=46.720;E3：F对照组=239.546,F实验组=22.841,P均〈0.01）;妊娠第16 d和第18 d时3种激素含量实验组与正常对照组比较差异有统计学意义（CG：t16=4.351,t18=13.367;PL：t16=4.034,t18=2.875;E3：t16=4.265,t18=11.499,P均〈0.01）。结论妊娠中期弓形虫感染孕鼠血清中胎盘激素含量较正常对照组显著降低,这可能是虫体感染所致的胎盘组织病理损伤和滋养层细胞凋亡增加的结果,也可能是感染所致胎儿宫内发育迟缓、死产、流产等不良妊娠发生的原因。     

孕中期弓形虫感染对BALB/c孕鼠胎盘细胞凋亡的影响

目的探讨孕中期弓形虫感染对BALB/c孕鼠胎盘细胞凋亡的影响.方法在小鼠妊娠第8天采用腹腔注射速殖子法建立弓形虫感染的动物模型,于妊娠第12、14、16、18天分批处死孕鼠,采用流式细胞技术检测胎盘细胞凋亡率,分光光度法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的活性.结果随着妊娠天数的增加,实验组和正常埘照组胎盘细胞凋亡率及caspase-3的活力均在升高,差异均具有统计学意义(P＜0.01);在相同时间,实验组的凋亡率以及酶活力均高于正常对照组,除第18天组胎盘caspase-3活力单位外,其余各组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论孕中期弓形虫感染可导致孕鼠胎盘细胞捌亡明显增加.     

孕鼠弓形虫感染对胎盘激素水平的影响

目的通过检测弓形虫感染孕鼠胎盘分泌的胰岛素生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)含量和11β-羟基类固醇脱氢酶-2(11β-HSD2)的表达,分析弓形虫感染对孕鼠胎盘激素水平和胎鼠发育的影响。方法腹腔接种弓形虫速殖子0.2ml/只(含50个速殖子)感染孕8d小鼠,分别于感染后12、14、16和18d处死,取胎盘组织,用酶联免疫吸附试验检测IGF-Ⅱ含量,用免疫组织化学法检测11β-HSD2的表达。未感染孕鼠做健康对照。结果健康对照组孕鼠胎盘组织IGF-Ⅱ含量随妊娠天数的增加逐渐升高,弓形虫感染组IGF-Ⅱ含量先降低后升高。IGF-Ⅱ含量不同妊娠天数组内比较差异有统计学意义(P<0.05),相同妊娠天数组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。11β-HSD2含量,不同妊娠天数健康对照鼠差异有统计学意义(P<0.05),不同妊娠天数弓形虫感染鼠含量差异无统计学意义(P>0.05);妊娠14d、16d、18d组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论弓形虫感染鼠孕中期,胎盘IGF-Ⅱ含量及11β-HSD2表达降低,可能影响胎盘血管形成及糖原合成与转运及进入胎儿体内糖皮质激素的含量,从而导致胎儿发育异常。     

弓形虫感染对妊娠中期BALB/c小鼠胎盘细胞凋亡的影响

目的探讨弓形虫感染对妊娠中期BALB/c小鼠胎盘细胞凋亡的影响。方法在妊娠第8d,采用腹腔注射法建立弓形虫感染的BALB/c小鼠动物模型,于妊娠第12、14、16和18d分批处死孕鼠,采用流式细胞技术检测胎盘细胞凋亡率,分光光度法测定半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性。结果随着妊娠天数的增加,实验组和正常对照组孕鼠胎盘细胞凋亡率及Caspase-3酶的活力单位均在升高,差异均具有统计学意义(P<0.01);相同妊娠天数的比较显示,除妊娠18d的Caspase-3酶活力单位外,其余各妊娠天数的凋亡率以及酶活力单位实验组均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论妊娠中期弓形虫感染可导致孕鼠胎盘细胞凋亡明显增加,致使胎盘组织的完整性受到破坏,影响胎盘的功能,导致不良妊娠结局的发生。     

急性弓形虫感染对BALB/c孕鼠胚胎发育的影响

目的观察BALB/c孕鼠胚胎器官发生期急性弓形虫感染对胚胎发育的影响。方法采用整体致畸试验,将受精鼠随机分为阴性对照A组、B1~B4染虫组和环磷酰胺阳性对照C组。孕8 d时A组腹腔注射无菌PBS,B1~B4组分别注射弓形虫速殖子25、50、100、200个/只,C组小鼠注射环磷酰胺20 mg/kg体重。孕18 d处死孕鼠,观察胚胎生长发育状况。结果与A组相比,B2组胎盘、胎鼠重量减轻(P0.05);B3、B4组孕鼠体重、胎盘、胎鼠重量减轻(P0.05),着床数下降(P0.05),活胎率、吸收胎率、死胎率、流产率升高(P0.05),B4组胎鼠畸形率增高(P0.01)。结论 BALB/c小鼠妊娠期急性弓形虫感染可致胎盘功能障碍,胎鼠生长发育缓慢,并出现胎鼠畸形、死胎和流产等病理性妊娠。     

孕期弓形虫感染对胎鼠体内微量元素的影响

目的 探讨刚地弓形虫感染孕鼠后对胎鼠体内微量元素锌(Zn)、铜(Cu)、铁(Fe)含量的影响.方法 孕中期BALB/c孕鼠经腹腔接种弓形虫速殖子.分别于孕10、12、14、16和18 d剖杀,取胎盘,制作组织压片及病理切片,观察孕鼠胎盘组织的感染及损伤情况;取胎鼠组织,采用原子吸收分光光谱法测定Zn、Cu、Fe含量,采用DAB增强的Perl's铁染色观察胎鼠组织中Fe的分布.结果 感染组孕鼠胎盘组织压片可见大量弓形虫速殖子,病理切片HE染色可见炎症细胞浸润及凋亡小体.感染组胎鼠在孕10 d时体内Zn和Fe含量与未感染组比较差异无统计学意义(P＞0.05),在孕12～18 d均低于未感染对照组(P＜0.05);Cu含量在孕10、12、14 d与未感染组比较差异无统计学意义(P＞0.05),在孕16、18 d均低于未感染组(P＜0.05).感染组胎鼠组织铁染色强度与未感染对照组相比明显减弱.结论 孕期感染弓形虫可损伤胎盘组织,进而影响其转运功能,使胚胎体内Zn、Fe和Cu含量降低,影响胚胎的生长发育.     

弓形虫感染对胎鼠铁含量和胎盘铁转运蛋白表达的影响

目的探讨刚地弓形虫感染孕鼠后对胎鼠体内铁(Fe)含量和胎盘铁转运蛋白表达的影响。方法孕8 dBALB/c小鼠经腹腔接种弓形虫速殖子,在孕10、12、14、16和18 d剖腹,取胎鼠,采用原子吸收分光光谱法测定胎鼠体内铁含量;用DAB增强的铁染色法观察胎鼠组织中铁分布;用免疫组织化学染色法检测胎盘膜铁转运蛋白(FP1)和铜蓝蛋白(Cp)的表达。结果在孕10 d,感染组胎鼠体内铁含量与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);孕12~18d,铁含量均低于对照组(P0.05)。感染组胎鼠整体、胎肝及胎脑组织铁染色强度与对照组相比显著减弱。FP1和Cp主要表达于胎盘合体滋养层细胞(STB)基底侧,在孕10、12 d,感染组FP1和Cp与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);在孕14、16和18 d,感染组FP1和Cp表达显著高于对照组(P0.05)。结论小鼠孕期感染弓形虫可使胚胎铁含量降低,并影响胚胎的生长发育;胎盘FP1和Cp高表达可能是胎鼠体内铁缺乏的代偿反应;胎盘FP1和Cp的表达可能受胎鼠体内铁浓度的调控。     

刚地弓形虫感染对孕鼠细胞凋亡的影响

目的 探讨刚地弓形虫对孕鼠胎盘细胞凋亡及其相关基因bax、bcl-2表达的影响。方法 建立刚地弓形虫感染的孕鼠模型，采用胎盘组织压片及病理切片，观察胎盘组织的损伤情况；采用DNA缺口末端标记技术（TUNEL）检测胎盘细胞的凋亡情况；采用免疫组织化学法（SP法）观察细胞凋亡调控基因bax和bcl-2在胎盘细胞中的表达。结果 与对照组相比，随着感染时间的延长，感染组胎盘组织压片中可见弓形虫虫体逐渐增加，HE染色可见有大量的淋巴细胞浸润及凋亡小体；TUNEL证实感染组胎盘滋养层细胞凋亡显著增强（P〈0．05）；免疫组织化学结果显示，感染组胎盘滋养层细胞凋亡相关基因bax表达显著增强、bcl-2表达减弱（P〈0．05）。结论 刚地弓形虫侵入胎盘组织，可通过上调滋养层细胞bax基因表达，下调bcl-2基因表达而诱导胎盘滋养层细胞凋亡增加，从而影响胎盘组织结构和功能，导致不良妊娠。     

孕期弓形虫感染对胎鼠体内微量元素的影响

目的探讨刚地弓形虫感染孕鼠后对胎鼠体内微量元素锌（Zn）、铜（Cu）、铁（Fe）含量的影响。方法孕中期BALB/c孕鼠经腹腔接种弓形虫速殖子。分别于孕10、12、14、16和18 d剖杀,取胎盘,制作组织压片及病理切片,观察孕鼠胎盘组织的感染及损伤情况;取胎鼠组织,采用原子吸收分光光谱法测定Zn、Cu、Fe含量,采用DAB增强的Perl＇s铁染色观察胎鼠组织中Fe的分布。结果感染组孕鼠胎盘组织压片可见大量弓形虫速殖子,病理切片HE染色可见炎症细胞浸润及凋亡小体。感染组胎鼠在孕10 d时体内Zn和Fe含量与未感染组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,在孕12-18 d均低于未感染对照组（P〈0.05）;Cu含量在孕10、12、14 d与未感染组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,在孕161、8 d均低于未感染组（P〈0.05）。感染组胎鼠组织铁染色强度与未感染对照组相比明显减弱。结论孕期感染弓形虫可损伤胎盘组织,进而影响其转运功能,使胚胎体内Zn、Fe和Cu含量降低,影响胚胎的生长发育。     

孕鼠感染弓形虫对子代的影响

目的观察孕期感染弓形虫对子代鼠发育、寿命和免疫功能的影响。方法以不同剂量RH株弓形虫腹腔感染孕中期鼠(d10),分娩后观察记录子鼠发育过程中体长、体重、寿命;给予实验目的要求的干预措施,观察智力发育情况及免疫功能变化。结果弓形虫轻感组、重感组、对照组孕鼠分娩子鼠体长差异无显著性,体重、寿命、智力发育有差别;重感组子鼠寿命明显短于对照组和轻感组。轻感组子鼠智力干预前后差异有显著性,子鼠智力可以通过干预措施达到正常或得到改善,其他组无明显变化;受到再攻击感染时,重感染组子鼠感染率显著高于轻感组和对照组,且与IgG含量成反比。孕期弓形虫重度感染使子鼠抗感染能力下降,但血清特异性抗体IgG能起到一定的保护作用。结论孕期感染弓形虫出生子鼠体重、智力、免疫功能降低,寿命缩短,与感染剂量大小有关。对体长无明显影响。     

PD-1/PD-L1在弓形虫感染小鼠妊娠中晚期的表达及与IFN-γ的相互调节作用

目的　探讨程序性死亡蛋白（programmed death protein?1, PD?1）及其配体PD?L1在小鼠妊娠早期弓形虫感染后母胎界面的动态表达,及其与γ干扰素（interferon?γ,IFN?γ）的相互调节作用。方法　将20只孕0 d母鼠随机平均分为4组,即孕12 d对照组（12 dpn组）、孕12 d感染组（12 dpi组）和孕18 d对照组（18 dpn组）、感染组（18 dpi组）。在妊娠第6天时对12 dpi组、18 dpi组孕鼠给予150个弓形虫PRU株速殖子腹腔注射,12 dpn组、18 dpn组孕鼠则注射等量PBS。于小鼠妊娠第12天和第18天分别处死4组小鼠,计数胎盘、胎儿数量并称重。取各组孕鼠胎盘和子宫组织观察其组织病理变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测胎盘、子宫组织中PD?1与PD?L1、弓形虫表面抗原SAG?1及细胞因子IFN?γ mRNA表达水平,并分析PD?1与IFN?γ表达的相关性。设置12 dpn、12 dpi、18 dpn、18 dpi组以及12 dpi PBS阴性对照组、18 dpi PBS阴性对照组,采用免疫组织化学染色检测孕鼠子宫、胎盘组织中PD?1表达水平。结果　 12 dpi组和18 dpi组孕鼠均出现胎盘和胎儿发育不良等不良妊娠结局,且胎盘重量和胎儿体质量均低于12 dpn组、18 dpn组 (t = 5.52、11.44、12.63、11.67,P 均< 0.01)。组织病理观察结果显示,12 dpi组和18 dpi组孕鼠胎盘组织蜕膜及连接区连接疏松,胎盘及子宫组织中均见大量炎性细胞浸润和淤血。经qPCR检测发现,12 dpn、12 dpi、18 dpn组和18 dpi组小鼠胎盘和子宫组织中PD?1、PD?L1、IFN?γ和SAG?1表达均存在差异（F = 22.48、51.23、9.61、47.49、16.08、21.52、28.66、238.90,P 均< 0.05）,其中12 dpi组小鼠胎盘（P均 < 0.05）及子宫组织中（P均 < 0.05）中PD?1、PD?L1、IFN?γ和SAG?1表达水平均较12 dpn组升高。与18 dpn组相比,18 dpi组小鼠胎盘组织中PD?1和PD?L1表达水平均下降（P 均< 0.05）,胎盘和子宫组织中IFN?γ和SAG?1表达水平均升高（P均< 0.05）。与12 dpi组相比,18 dpi组孕鼠胎盘和子宫中PD?1和PD?L1表达水平均下降（P均< 0.05）。免疫组化染色结果显示,PD?1在12 dpi组孕鼠胎盘组织中浸润的炎性细胞上有表达,在18 dpi组中表达不明显;PD?1在12dpi组孕鼠子宫上皮呈强阳性表达,而在18 dpi组呈弱阳性表达。相关分析结果显示,12 dpi组孕鼠胎盘（rs = 0.99,P ＜0.01）、子宫（rs = 0.97,P ＜0.01）,18 dpi组孕鼠胎盘（rs = 0.82,P ＜ 0.05）、子宫（rs = 0.81,P ＜0.05）中 IFN?γ与PD?1 mRNA表达水平均呈正相关。结论　小鼠妊娠早期感染弓形虫后,胎盘和子宫中PD?1/PD?L1表达呈孕中期显著上升、孕晚期下降的动态变化,且与同期 IFN?γ表达趋势一致,其中PD?1与IFN?γ表达呈正相关;故推测在孕鼠妊娠中、晚期,母胎界面PD?1/PD?L1通路与弓形虫感染所诱导的IFN?γ有相互调节关系。     

重组人IL-2及IFN—γ对感染弓形虫妊娠鼠T细胞亚群的影响

目的研究重组人IL-2及IFN-γ对感染弓形虫孕鼠T细胞亚群CD4＋、CD8＋水平的影响。方法取BALB／c孕鼠80只，随机分为空白对照组、感染对照组、IL-2组及IFN-γ组。于妊娠第8天空白对照组腹腔注射0．2ml生理盐水，其余各组腹腔注射200个弓形虫速殖子，并于妊娠第7、8、9天IL-2组每只孕鼠腹腔注射1000UIL-2，IFN-γ组每只孕鼠腹腔注射1000UIFN-γ。其余两组腹腔注射0．2ml生理盐水。妊娠第10、12、14、16、18天取妊娠鼠尾静脉抗凝血100μl，流式细胞仪检测CD4＋及CD8＋水平。结果与空白对照组相比，其他各组小鼠CD4＋T细胞水平在妊娠第10、12、14、16、18天均显著降低，而CD8＋T细胞在妊娠第10、12天显著升高，CD4＋／CD8＋T细胞比值倒置。但与感染对照组比较，其他各组CD4＋T细胞在妊娠第10、12、14天显著升高，CD8＋T细胞在妊娠第10、12天显著降低，CD4＋／CD8＋T细胞比值在妊娠第10、12、14天明显升高。而在妊娠第16、18天，CD4＋、CD8＋及CD4＋／CD8＋T细胞水平与感染对照组比较无明显差异。结论弓形虫攻击孕鼠后，免疫调节失衡，机体抗抵力下降，而重组人IL-2及IFN-γ可以改善机体细胞免疫功能，提高母体免疫力。     

弓形虫感染妊娠中期BALB/c小鼠对胎鼠生长发育及胎盘系数的影响

目的 探讨弓形虫感染妊娠中期BALB/c小鼠对胎鼠生长发育以及胎盘系数的影响.方法在妊娠第8天采用腹腔注射法建立弓形虫感染的动物模型,于妊娠第12、14、16、18天分批处死孕鼠,分离胎盘胎鼠,解剖显微镜下观察胎鼠存活情况,电子天平称量胎盘和胎鼠重量,游标卡尺测量胎鼠体长和尾长. 结果 随着妊娠天数的增加,实验组孕鼠吸收胎明显增多,出现死胎和流产,正常对照组未见异常;正常对照组胎鼠重量、体长和尾长增加明显(胎鼠重量:40.69±11.63,173.43±30.19,495.56±73.97,967.62±83.34:体长:11.53±0.95,16.83±1.15,20.86±1.25;尾长:5.26±0.56,8.08±0.98,10.54±0.58),胎盘重量呈现先增后减趋势(48.62±11.87,87.14±14.05,94.44±12.29,93.33±13.00),胎盘系数呈降低趋势(1.30±0.52,0.51±0.09,0.20±0.05,0.10±0.02),实验组变化趋势不及正常对照组的明显(胎鼠重量:51.11±13.89,148.16 ±36.09,296.11±58.63;体长:11.51±1.42,14.04±1.59;尾长:4.04±0.95,6.87±0.87;胎盘重量:49.31±9.42,66.41±13.28,52.22±12.15;胎盘系数:1.03±0.32,0.48±0.15,0.18±0.05),组内比较差异均有统计学意义(P<0.05);相同时间点的比较显示除第12天组的胎盘胎鼠重量、第14和16天的胎盘系数,还有第14天的胎鼠体长外,其他数据实验组均低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 弓形虫感染妊娠中期BALB/c小鼠可导致胎盘功能障碍,胎鼠生长发育受限,且随着感染天数的增加,可出现死胎和流产等病理性妊娠.     

弓形虫致鼠胚神经系统畸形中NCAM的表达及青蒿素保护作用的研究

目的探讨弓形虫感染孕早期大鼠致胚胎神经系统畸形的分子机制及青蒿素对胚胎的保护作用。方法将SD孕鼠随机分为对照组、模型组和模型治疗组,各组孕鼠于妊娠第3 d(E3)腹腔注射弓形虫RH强毒株,并分别于E12、E14、E16、E18剖腹取胎鼠,进行形态学观察;PCR法检测羊水中弓形虫B1基因表达,免疫荧光染色观察神经细胞粘附分子(NCAM)在胚胎不同发育时期的神经细胞中的表达规律。结果模型组胚胎发育状况差,活胎率低,为11.82%;PCR检测到模型组胚胎羊水B1基因的表达。对照组和模型治疗组E14、E16鼠胚神经细胞中NCAM呈阳性,模型组染色较其他4组弱。结论 NCAM低表达是神经系统畸形发生的重要因素,青蒿素对鼠胚弓形虫感染有保护作用。     

孕鼠感染弓形虫对子鼠发育影响及干预措施

目的观察孕鼠感染弓形虫后出生子鼠的身体、智力发育、寿命、免疫功能及干预效果。方法以1×103个/ml和2×103个/ml RH株弓形虫0.1ml腹腔感染孕中期鼠(d10),获得分娩子鼠。1.1比较不同剂量感染母鼠产子鼠体重、智力发育、寿命情况;1.2非感染组、孕期感染弓形虫所产阳性、阴性子鼠的体重、智力发育、寿命比较;1.3对阳性子鼠干预效果观察。结果重度感染组、感染阳性组子鼠体重轻、智力低、寿命短。治疗组较未治疗组智力高、寿命长;与非感染组比较,智力低、寿命无差别,感染阳性组治愈后再感染时,非感染组12月龄感染率最低,重度感染组2月龄最高。阳性率与抗体IgG含量呈负相关。结论孕期感染弓形虫可使存活子代体重减轻、智力降低、寿命缩短,其严重程度与感染剂量大小有关,及早地采取有效干预,可使子代的发育得到改善。