半夏泻心汤及7种单味中药对幽门螺杆菌耐药菌株的体外抑菌实验研究

[目的]研究和探讨了半夏泻心汤及7种单味中药对幽门螺杆菌(Hp)耐药菌株的体外抑菌实验研究。[方法]收集上消化道疾病患者胃黏膜标本,分离、鉴定出8株Hp耐药菌株,采用纸片琼脂扩散法检测其对甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林等抗生素的耐药状况;采用液体稀释法测定半夏泻心汤及7种单味中药对8株临床耐药株的体外抑菌效果。[结果]半夏泻心汤的MIC为0.31mg/ml,黄芩MIC为0.09mg/ml,黄连MIC为0.16mg/ml,甘草MIC为0.31mg/ml,人参MIC为0.75mg/ml,7种单味中药中有4种中药有抑菌作用,抑菌作用强弱依次为黄芩黄连甘草人参,另外3种半夏、大枣及干姜在体外对Hp无抑制作用,采用固体培养基连续稀释法对半夏泻心汤的MIC进行测定,半夏泻心汤对耐药分离株平均MIC为(0.20±0.09)mg/ml,结果表明半夏泻心汤对8种耐药菌株在体外均有较强的抑菌效果。[结论]半夏泻心汤及4种单味中药对Hp耐药菌株的体外抑菌实验有较强的抑菌作用。     

青海鼠疫菌株对12种抗生素体外抑菌活性分析

目的检测青海省鼠疫自然疫源地鼠疫菌株对12种抗生素最低抑菌浓度,掌握该地区鼠疫菌株对12种抗生素的敏感性。方法根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)药敏试验方法中的琼脂稀释法,测定12种抗生素分别对328株鼠疫菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)。结果所测的328株鼠疫菌中未发现对氧氟沙星、环丙沙星、莫西沙星、复方新诺明、硫酸卡那霉素、硫酸链霉素、头孢曲松钠、氨苄青霉素、氯霉素、盐酸壮观霉素、头孢呋辛钠、盐酸四环素具有单个或多个抗菌药物抗性的鼠疫菌株。12种抗菌药物就对鼠疫菌的体外抑菌活性来说,头孢曲松钠、复方新诺明、环丙沙星、氧氟沙星对所检测鼠疫菌株有较好的抑菌活性(MIC90≤0.125μg/ml),其次为莫西沙星、氨苄青霉素、头孢呋辛钠、卡那霉素、氯霉素、链霉素和四环素(0.5≤MIC90≤4μg/ml),抑菌较差的为活性壮观霉素(MIC90≥16μg/ml)。结论所测青海省鼠疫菌株对以上抗菌药物均敏感,通过监测鼠疫菌株的耐药性,可及时发现鼠疫耐药菌株,为临床治疗提供指导性数据。     

大黄抑制鼠疫耶尔森菌的基因芯片检测

目的 研究基因组芯片检测大黄抑制鼠疫耶尔森菌分子机制的方法 .方法 使用的鼠疫耶尔森菌全基因组芯片包含4005条鼠疫耶尔森菌基囚.应用液体稀释法测定大黄对鼠疫耶尔森菌的最小抑菌浓度(MIC),基因芯片表达谱实验中,大黄作用鼠疫耶尔森菌的浓度为10×MIC,作用时间为30 min,提取并纯化鼠疫耶尔森菌总RNA,反转录合成cDNA,用Cy3,Cy5染料标记后,与鼠疫耶尔森菌全基因组芯片杂交,通过芯片扫描仪获得表达谱分析结果 .应用实时定量PCR技术对芯片结果 进行验证.结果 大黄对鼠疫耶尔森菌的MIC为0.02500 kg/L.获得了大黄作用鼠疫耶尔森菌的基因芯片表达谱.大黄作用鼠疫菌的明显差异表达基凶共有498个,上渊基闪358个,下凋基因140个.结论 应用鼠疫耶尔森菌全基因组DNA芯片可以进行大黄抑制鼠疫耶尔森菌的分子作用机制研究.     

达托霉素等抗菌药物对499株血流感染革兰阳性球菌的体外抗菌活性

目的 评价达托霉素、万古霉素、替考拉宁、替加环素、头孢吡普、利奈唑胺等抗菌药物对血培养分离革兰阳性球菌的体外抗菌活性.方法 用微最肉汤稀释法测定达托霉素对499株血培养分离革兰阳性球菌的最小抑菌浓度(MIC)值,用琼脂稀释法测定其余9种抗菌药物MIC值,WHONET 5.4软件分析药敏数据.结果 葡萄球菌对达托霉素、万古霉索、替考拉宁、替加环素、头孢吡普和利奈唑胺的敏感率均为100%.达托霉素在1 mg/L浓度下可抑制所有的葡萄球菌.对于甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林耐药的凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCoN),其MIC50和MIC90均为0.5 mg/L.达托霉素对肠球菌的最高MIC为4 mg/L,粪肠球菌的MIC50和MIC90均为2 mg/L;屎肠球菌的MIC50和MIC90分别为2 mg/L和4 mg/L.1株对利奈唑胺耐药(MIC为8 mg/L)的粪肠球菌对达托霉索敏感(MIC为1 mg/L).3株携带vanA基因的屎肠球菌(万古霉素的MIC均大于32 mg/L,替考拉宁的MIC均为32 mg/L)对达托霉素、替加环素、利奈唑胺均敏感.达托霉素对肺炎链球菌和草绿色链球菌的MIC范围分别为0.032～0.250 mg/L和0.125～1.000 mg/L.结论 达托霉素作为新型的抗菌药物,对血流感染常见的革兰阳性球菌均有很好的体外抗菌活性.可成为临床治疗革兰阳性球菌特别是耐药菌感染的很好选择.     

4种抗真菌药对82株丝状真菌体外抗菌活性的临床研究

目的研究伊曲康唑、伏立康唑、卡泊芬净和两性霉素B对丝状真菌体外抗菌活性。方法采用浓度梯度法(etest)测试伊曲康唑、伏立康唑、卡泊芬净和两性霉素B对中国协和医科大学北京协和医院2004-12-01~2005-07-30的临床分离菌株82株(包括烟曲霉,黄曲霉,黑曲霉,土曲霉,构巢曲霉等)丝状真菌的体外敏感性。结果伊曲康唑、伏立康唑、卡泊芬净和两性霉素B对烟曲霉的最低抑菌浓度(MIC)范围为0·03~2·00mg/L,对黄曲霉的MIC范围为0·01~32·00mg/L。而两性霉素B对黄曲霉的MIC90值为16·00mg/L,高于土曲霉MIC90值(3·00mg/L),也高于烟曲霉的MIC90值(0·75mg/L)和黑曲霉的MIC90值(0·25mg/L)。结论伊曲康唑、伏立康唑、卡泊芬净和两性霉素B对不同种丝状真菌有不同的抗菌活性,实验室将真菌鉴定到种的水平并进行体外抗真菌药敏感试验对临床有重要的指导意义。     

应用鼠疫菌全基因组芯片研究黄连抑菌机制的方法建立

目的建立一种应用鼠疫耶尔森菌全基因组芯片研究黄连对鼠疫耶尔森菌抑制作用分子机制的方法。方法应用液体稀释法测定黄连对鼠疫耶尔森菌的最小抑菌浓度（MIC）;鼠疫耶尔森菌全基因组芯片包含4005条鼠疫耶尔森菌基因。基因芯片表达谱实验中,黄连作用鼠疫耶尔森菌的浓度为10×MIC,作用时间为30min;提取并纯化鼠疫耶尔森菌总RNA;逆转录合成cDNA;Cy3、Cy5染料标记后;与鼠疫耶尔森菌全基因组芯片杂交;通过芯片扫描仪获得表达谱分析结果。应用SAM软件处理结果。结果获得了黄连作用鼠疫耶尔森菌的基因芯片表达谱。结论应用鼠疫耶尔森菌全基因组DNA芯片可以进行黄连抑制鼠疫耶尔森菌的分子作用机制研究。     

大黄抑制鼠疫耶尔森菌的体外转录组学研究

目的应用鼠疫菌全基因组芯片研究大黄抑制鼠疫菌的分子作用机制。方法液体稀释法测定大黄对鼠疫菌的最低抑菌浓度(MIC),以10倍MIC作用鼠疫菌30min,提取鼠疫菌总RNA,逆转录合成cDNA,荧光素标记,与芯片杂交,扫描仪扫描,应用SAM软件分析结果。结果获得了大黄作用鼠疫菌的表达谱。大黄作用鼠疫菌的明显差异基因为498个,其中上调基因358个,下调140个。结论蛋白质合成基因、细胞膜相关基因、转运结合蛋白基因以及部分热休克基因的改变是大黄抑制鼠疫菌的主要作用机制。     

四种中药对临床常见酵母样真菌的抑菌效果

目的研究苦参、土茯苓、苍耳子、浮萍对酵母样真菌的抑菌作用;通过体外联合药敏实验分析各中药间的相互作用。方法选取白色假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌和克柔假丝酵母菌,采用棋盘微量肉汤稀释法测量4种中药的最低抑菌浓度(MIC)及联合抑菌指数(FICI),评价其体外抗真菌活性及联合效果。结果水煎法制备的4种中药及其混合液对白念、光滑和克柔有抑制作用。浮萍对光滑的MIC值为3.125 mg/ml;4种中药对克柔的MIC值均可达0.078 1 mg/ml。苍耳子和浮萍联合应用的FICI在0.5～1.0之间,表现相加作用。结论浮萍抗真菌作用最优,各中药均有抑菌作用,其合剂表现出的抑菌作用各不相同。     

用M—H琼脂进行五味子、白芍对252株临床菌株的体外抗菌效果观察

用 M— H琼脂以琼脂稀释法对五味子和白芍进行了 2 5 2株临床菌株的体外抗菌实验研究 ,结果表明五味子对112株金葡菌的 MIC5 0 为 1.17m g/ ml,MIC90 为 2 .34 0 mg/ ml,白芍对金葡菌的抑菌效果较差 ,其 MIC5 0 为 2 .4mg/ m l,MIC904.8mg/ m l,两药对 112株表皮葡萄球菌抗菌效果相似 ,而对肠球菌其抑菌效果五味子远高于白芍 ,即五味子对 2 8株肠球菌的 MIC5 0 和 MIC90 均为 1.17m g/ ml,而白芍对肠球菌则无抑菌作用。     

源自同一患者的二株血和粪便对碳青霉烯类耐药大肠埃希菌

目的 了解对碳青霉烯类抗菌药物耐药大肠埃希菌的耐药机制及与内源性感染的关系.方法 将临床分离的来源于同一患者血培养和粪便培养的大肠埃希菌2株,采用浓度梯度法(E-test)测定亚胺培南、美罗培南的最低抑菌浓度(MIC)值,纸片扩散法测定其他16种抗菌药物的敏感性,等电聚焦电泳(IEF)检测所产生的β-内酰胺酶,PCR及序列分析确定其基因型,接合试验和Southern杂交进行耐药基因定位,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析2株菌株的同源性.结果 亚胺培南、美罗培南对2株大肠埃希菌的MIC值均≥32 mg/L,均产KPC-2(等电点值为6.7)和SHV-12(等电点值为8.2).blaKPC-2基因位于可转移的54 kb质粒上.PFGE显示2株大肠埃希菌为同一克隆株.结论 2株大肠埃希菌的耐药性及染色体DNA酶切图谱均一致,该患者大肠埃希菌败血症极可能是肠道的大肠埃希菌移位引起的内源性感染.     

鼠疫耶尔森菌小肽基因sORF34缺失株毒力及短期免疫保护效果评价

目的 探索小肽基因34(sORF34)缺失对鼠疫耶尔森菌毒力影响,并评价sORF34缺失株免疫保护活性。方法 基于鼠疫耶尔森菌201株和鼠疫耶尔森菌EV76疫苗株利用λ-Red一步法构建小肽基因缺失株。比较鼠疫小肽基因缺失株和亲本株之间的毒力差别,并采用皮下免疫方式对小鼠进行免疫,与EV76疫苗株比较,评价体液免疫、保护率等方面的差异。结果 PCR扩增结果证实,小肽基因缺失株构建成功。通过皮下LD₅₀测定、生存曲线测定,表明小肽基因缺失株较亲本株毒力下降。鼠疫201ΔsORF34和EV76ΔsORF34皮下免疫后可刺激机体产生抗F1-IgG,其中鼠疫201ΔsORF34免疫组抗体滴度与EV76疫苗株免疫组差异无统计学意义(P>0.05),EV76ΔsORF34免疫组较EV76疫苗株免疫组抗体滴度低;鼠疫EV76ΔsORF34株可刺激机体产生低滴度抗LcrV-IgG,而EV76和201ΔsORF34株不能刺激机体产生抗LcrV-IgG。初免后42 d使用致死剂量鼠疫201株进行皮下攻毒和滴鼻攻毒,3组保护率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 小肽基因缺失株经皮下途径感染BALB/c小鼠的毒力下降,鼠疫EV76ΔsORF34株较EV76疫苗株残存毒力进一步下降,但保护率差异无统计学意义(P>0.05),EV76ΔsORF34株有作为鼠疫减毒活疫苗候选株的潜力。     

梁河家鼠鼠疫疫源地鼠疫噬菌体的分离及其流行病学意义

目的 调查梁河县家鼠鼠疫疫源地宿主动物中是否携带鼠疫噬菌体,并探讨其流行病学意义。方法 2017年采集梁河家鼠鼠疫疫源地4个曾流行过鼠疫乡镇的鼠类标本,以鼠疫疫苗株EV76为饲养菌,采用双层平板法分离鼠疫噬菌体,同时挑取部分噬菌体进行电镜扫描。结果 共获得338份标本(黄胸鼠234只,臭鼩鼱43只,其余61只),分离到29株鼠疫噬菌体,总分离率为8.58%(29/338),其中19株分离自黄胸鼠,分离率为8.12%(19/234),8株分离自臭鼩鼱,分离率为18.6%(8/43);4个乡镇全部有分离到鼠疫噬菌体,其中遮岛镇分离率最高为16.13%(5/31);初次分离这些鼠疫噬菌体时,其噬斑在双层平板上表现为大(直径≥2.0 mm)、中(≥1.0 mm,≤2.0 mm)及小(≤1.0 mm)3种噬斑;2株有代表性噬菌体皆为肌尾病毒科噬菌体。结论 梁河家鼠鼠疫疫源地中普遍存在鼠疫噬菌体,黄胸鼠是主要的携带宿主,所分鼠疫噬菌体为肌尾病毒科噬菌体且具有多态性,值得进一步研究。     

基于上转发光免疫层析检测鼠疫抗体方-法的初步优化与评价

目的 优化基于上转发光免疫层析检测鼠疫抗体的方-法(YPAb-UPT-LF)并对其进行评价。方法 依据《中国生物制品规程》收录方-法改进制备的F1抗原免疫家兔,制备兔多抗作为质控品和质控带;通过筛选试纸上的最适F1抗原对YPAb-UPT-LF进行优化,再用健康人血清稀释的多种血清和多抗进行评价。结果 质控品兔抗F1抗体的ELISA效价为31.25 ~ 62.5 μg/L。优化后的YPAb-UPT-LF对质控品的检测灵敏度为1 mg/L,比之前提升了10倍;已被ELISA方-法滴定的F1疫苗接种者血清和多种鼠疫菌株兔免血清稀释100倍后均可被YPAb-UPT-LF检出,覆盖度良好;对F1免疫兔血清、兔抗EV76和羊抗EV76的检测灵敏度分别为1:40 960、1.25 mg/L、0.625 mg/L,考虑到免疫层析的样本需经10倍稀释处理,判定YPAb-UPT-LF的检测能力与ELISA基本持平。结论 本研究成功优化了YPAb-UPT-LF,为鼠疫免疫诊断和F1疫苗评估等提供了备选方-法。     

鼠疫菌对抗生素的敏感性综合评价

目的 建立鼠疫菌对抗生素敏感性综合评价方法,并用该方法就鼠疫菌对6种抗生素的敏感性进行综合评价。方法 通过查阅文献,收集鼠疫菌对抗生素敏感性实验数据,以抗生素对强毒141菌株、弱毒EV76paris菌株和云南分离菌株的抑菌情况,即抑菌环直径作为评价指标,用层次分析法综合评价鼠疫菌对所选6种抗生素（头孢他啶、氨苄青霉素、头孢唑啉、环丙沙星、诺佛沙星、链霉素）的敏感性。结果 鼠疫菌对不同抗生素的敏感性存在差异,鼠疫菌对所选6种抗生素的敏感性由高到低依次为头孢他啶、氨苄青霉素、头孢唑啉、环丙沙星、诺佛沙星、链霉素,综合评分指数分别为1.730 77、1.631 77、1.581 95、1.567 80、1.449 48、0.999 99。结论 运用层次分析法评价鼠疫菌对不同抗生素的敏感性可以取得合理、客观和较为准确的评价结果,可以利用该方法及其评价结果为进一步筛选适宜的鼠疫治疗药物提供参考依据。     

鼠疫耶尔森氏菌Pla蛋白的分离纯化与质谱分析

目的建立一种从鼠疫耶尔森氏菌疫苗株EV76中分离纯化纤维蛋白酶原激活因子（Pla）的方法。方法采用超声破碎与硫酸铵盐析结合的方法初步提取Pla,经CHT陶瓷羟基磷灰石层析分离纯化,所获取的Pla进行质谱分析及Western blot实验。结果菌悬液超声破碎后上清以0~10%饱和硫酸铵沉淀,获得含有相对分子质量（Mr）约为31 000、35 000、37 000的3条Pla蛋白带,约占蛋白总量33%;CHT柱层析后,3条带约占蛋白总量80%。经质谱分析,在Mr约为31 000、35 000的条带中含有Pla,Pla单克隆抗体能特异性地识别该蛋白。结论采用超声破碎结合硫酸铵盐析的方法可从鼠疫菌中提取Pla,CHT柱层析可达到基本纯化,获得的样品经质谱分析和Western blot实验证实为Pla蛋白。     

弱毒鼠疫菌在鼠蚤体内的繁殖和传播

本文观察印鼠客蚤叮咬带菌鼠,吸入弱毒鼠疫菌后,在体内可存活30天。再叮咬时可把鼠疫菌传给健康动物。而缓慢细蚤吸入弱毒鼠疫菌后,可在蚤体内大量繁殖,并存活20天。但叮咬健康动物,不能传播鼠疫,这与印鼠客蚤不同。     

鼠疫菌感染兔血清抗体谱分析

目的分析鼠疫耶尔森菌感染的兔血清(鼠疫菌感染兔血清)中抗体产生的种类与规律,为了解鼠疫菌的致病机制及筛选新的疫苗亚单位提供实验依据。方法利用含有145个鼠疫菌毒力相关蛋白的蛋白质芯片检测鼠疫菌感染兔血清抗体谱,并与鼠疫菌活疫苗EV76株免疫兔血清(免疫兔血清)抗体谱比较。结果在鼠疫菌感染兔血清中共检测到41个蛋白相应的抗体,其中28个抗体在免疫兔血清中也检测到,有6个蛋白抗体只在鼠疫菌感染兔血清中检测到。结论鼠疫菌感染兔血清的抗体谱与免疫兔血清的抗体谱不完全一致,通过对鼠疫菌感染兔血清抗体谱的研究,可为深入了解细菌的致病机制及筛选新的疫苗亚单位奠定基础。     

用鼠疫EV菌对草原雕进行模拟感染的实验报告

1984年4月～1987年4月我们用鼠疫EV菌感染的小白鼠饲喂草原雕(Aquila rapax nipa-lensis)进行了鼠疫模拟感染试验。结果,在收集的吐物中进行鼠疫FI抗原及鼠疫菌检测均为阴性。从受试的草原雕血清中也未能检出FI抗体。用鼠疫EV菌经草原雕皮下注射感染,在其血清中能检出FI抗体,且至少可保持240天。用不同N浓度的HCI及NaOH溶液水解鼠疫EV菌,对用鼠疫EV菌感染的小白鼠在2N以上的HCl及0.4N以上的NaOH溶液中作用12小时,可使小白鼠全部或部分水解,用抗体中和、反向血凝以及细菌学方法对上述溶液进行检测,在1N以上的HCl与0.4N以上的NaOH水解液中未能检测到FI抗原,细菌培养阴性。而在1N以下的HCl与0.4N NaOH以下的水解液中,则能检测到FI抗原,并培养出鼠疫菌。在鼠疫EV菌菌体的水解液中,检出FI抗原及鼠疫菌的N浓度比前者稍低。实验结果证明足够N浓度的酸、碱溶液,作用于EV菌体或感染鼠,均能使菌体蛋白质分解,而丧失抗原性。     

Immunity in plague: protection of the vervet (Cercopithecus aethips) against pneumonic plague by the oral administration of live attenuated Yersinia pestis.

Protection against pneumonic plague by the oral administration of a live, attenuated Yersinia pestis vaccine, EV76 (Paris) F, was evaluated in the vervet (Cercopithecus aethips). Six animals were vaccinated with a dose of 1.175 X 10(9) colony-forming units (cfu); all tolerated the dose and developed antibodies to Fraction I of Y. pestis. Three immunized animals were challenged with an inhaled dose of 3.2 X 10(6) cfu (160 LD50 [50% lethal dose]) of virulent Y. pestis strain 195/P and two survived; the other three received a challenge dose of 4.9 X 10(6) cfu (245 LD50) and one survived. The three surviving monkeys had high titers of antibody to Fraction I. At necropsy of the animals that succumbed to the challenge infection, almost complete consolidation of the lungs was apparent, and sizable effusions were present in the thoracic cavities. Indeed, the striking pathology indicated the severest form of pneumonic plague. Since it can be assumed that the animal surviving challenge with the larger inoculum would have survived the smaller dose, we conclude that the immunization procedure protected half of the vervets that were exposed to challenge.     

Screening test for anti-Helicobacter pylori activity of traditional Chinese herbal medicines

AIM:To evaluate the anti-Helicobacter pylori (H.pylori) activity of 50 traditional Chinese herbal medicines in order to provide the primary evidence for their use in clinical practice.METHODS:A susceptibility test of water extract from 50 selected traditional Chinese herbal medicines for in vitro H.pylori Sydney strain 1 was performed with broth dilution method.Anti-H.pylori activity of the selected Chinese herbal medicines was evaluated according to their minimum inhibitory concentration (MIC).RESULTS:The ...