一种新型肽对Lewis肿瘤细胞凋亡的影响

目的探讨新型肽对Lewis肿瘤细胞凋亡作用的影响。方法采用吖橙啶/溴乙啶(AO/EB)及线粒体膜电位法检测Lewis肿瘤细胞在48 h细胞凋亡情况,荧光显微镜观察AO/EB双染法检测细胞凋亡及线粒体膜电位的变化。结果新型肽对Lewis细胞具有明显促进凋亡的作用。荧光显微镜下观察:新型肽(2 000μg/ml)治疗组可见典型的细胞凋亡形态学特征性改变;线粒体膜电位显著降低;细胞凋亡率明显增加分别与空白对照及新型肽(1 000μl/ml)治疗组比较均有统计学差异(P0.05)。结论新型肽可能通过降低Lewis肿瘤细胞线粒体膜电位,诱导细胞凋亡,发挥抗肿瘤生长作用。     

microRNA-122抑制肝肿瘤细胞HepG2的增殖研究

目的探究microRNA-122(miR-122)对肝肿瘤细胞HepG2增殖的抑制效应。方法培养肝肿瘤细胞HepG2并随机分为miR-122组、阴性对照组(NC组)、空白对照组,miR-122组使用LipofectamineTM2000试剂转染肝癌细胞株HepG2细胞,NC组将阴性对照siRNA转染HepG2细胞,空白对照组只加胎牛血清RPMI-1640培养基。转染24 h后,采用MTS试剂盒测定细胞活力,计算细胞增殖抑制率,采用荧光定量PCR测定细胞中凋亡抑制蛋白(XIAP)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)、血管内皮生长因子(VEGF)、VEGFR1、VEGFR2、肝细胞生长因子(HGF)的mRNA含量。结果干预后24 h,miR-122组细胞的吸光值(OD)明显低于空白对照组、NC组,细胞增殖抑制率明显高于NC组(t=9.43、19.475、P0.05),miR-122组细胞中XIAP、Cyclin D1、CDK2、CDK4 mRNA含量明显低于空白对照组、NC组(t=8.135、7.542、11.740、5.937,P0.05),VEGF、VEGFR1、VEGFR2、HGF mRNA含量明显低于空白对照组、NC组(t=7.741、13.002、6.347、6.662,P0.05)。结论 miR-122能够抑制肝肿瘤细胞HepG2的增殖,靶向抑制细胞周期相关分子、血管新生相关分子的表达是miR-122发挥增殖抑制效应的可能机制。     

环磷酰胺对胶质瘤体内生长的影响

目的探讨环磷酰胺(CTX)对胶质瘤体内生长的影响及其机制。方法建立Wistar大鼠胶质瘤模型,将其分为对照组(生理盐水腹腔注射)和给药组(CTX腹腔注射25 mg/kg),观察大鼠一般状态、体重的变化,检测肿瘤体积和重量变化,计算抑瘤率。Western印迹检测肿瘤组织中细胞周期蛋白(cyclin)D1蛋白的表达。结果给药组大鼠的一般状态较好,大鼠体重恢复;给药组肿瘤的体积缩小、重量降低,给药10 d时与对照组比较,有统计学意义(P0.05),计算其体积抑瘤率为38.59%。Western印迹显示,给药组表达cyclin D1蛋白减少,与对照组比较,有统计学意义(P0.05)。结论 CTX通过调控细胞周期蛋白cyclin D1来抑制胶质瘤的体内生长。     

乙型肝炎病毒Ⅹ蛋白对原代小鼠肝细胞周期的影响

目的 探讨HBV复制过程中HBx蛋白对原代小鼠肝细胞周期的影响. 方法 采用原代小鼠肝细胞为研究系统,用野生型HBV质粒(pHBV)和HBx蛋白表达缺失的HBV质粒(pHBV△X)分别转染细胞.Western blot检测细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin E、cyclin A及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p16 (p16)、p21的表达水平；实时荧光定量PCR和Southern blot检测HBVDNA复制水平.两组之间比较用两样本均数t检验,多样本均数间的比较用方差分析及q检验. 结果 新分离肝细胞和原代培养24、48、72 h肝细胞的细胞周期蛋白表达水平无明显差异；转染48 h后,pHBV组细胞与pHBV△X组细胞周期蛋白条带灰度值相比,前者cyclin D1、p21、cyclin E表达量较高,p16的表达量较低,统计量t值分别为15.713,22.897,14.680,-19.584,P值均＜0.05.培养72 h后提取HBV DNA,Southem blot检测HBV DNA复制中间体松散环状DNA、双链线性DNA、单链DNA的水平,经条带灰度扫描,pHBV组的水平(分别为3288.336±448.011、6458.318±182.163、2760.613±393.561)明显高于pHBV△X组(分别为515.721±62.530、2122.228±28.347、1632.013±207.021)及空白对照组,P值均＜0.05；实时荧光定量PCR检测HBV DNA复制水平,pHBV组[每个细胞(987.50±47.80)拷贝]也明显高于pHBV△X组[每个细胞(303.67±33.94)拷贝],t=20.203,P＜0.05.结论 HBx蛋白能通过调节细胞周期中各蛋白的表达,使细胞由静止期(G0)进入DNA合成前期(G1)并停滞于G1期,从而促进HBV的复制.     

新型肿瘤抑素对C6神经胶质瘤细胞抑制作用的影响

目的探讨新型肿瘤抑素对C6神经胶质瘤细胞增殖及Caspase-3蛋白表达的影响。方法采用CCK-8检测不同浓度的新的肿瘤抑素对C6神经胶质瘤细胞增殖并用Western印迹检测对Caspase-3蛋白的表达。结果新的肿瘤抑素作用C6胶质瘤24 h空白对照组与卡莫司汀组比较差异有显著性(P0.05),与其他实验组比较差异均无统计学意义(P0.05);48 h空白组与卡莫斯汀组、1 500、2 000μg/ml组比较有统计学差异(P0.05);72 h时空白对照组与卡莫斯汀组、1 500、2 000μg/ml组比较有统计学差异(P0.05)。空白对照组与卡莫司汀组、1 500、2 000μg/ml组比较Caspase-3蛋白表达有统计学差异(P0.05)。结论新型肿瘤抑素可能通过调控Caspase-3蛋白表达抑制C6肿瘤细胞增殖。     

干扰Sema4D基因表达对胰腺癌细胞生物学特征的影响

目的探讨干扰Sema4D基因的表达对胰腺癌细胞生物学的影响。方法设计合成Sema4D-siRNA,转染到人胰腺癌细胞系中,将实验分为3组,转染siRNA组、阴性对照组(即转染非特异性对照组)﹑空白对照组(未经任何处理的胰腺癌细胞)。转染48 h后利用RT-q PCR检测转染前后Sema4D mRNA表达的变化,转染72 h后利用Western-Blot的方法检测转染前后Sema4D蛋白表达的变化;采用四甲基偶氮唑蓝显色法观察转染后细胞生长变化;Transwell小室侵袭试验检测转染后肿瘤细胞侵袭性的改变;采用流式细胞技术检测肿瘤细胞凋亡的变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析比较,进一步两两比较采用LSD-t检验法。结果转染Sema4D-siRNA 48 h后,转染siRNA组Sema4D mRNA的表达明显低于阴性对照组和空白对照组,3组比较差异有统计学意义(F=421.990,P<0.001)。转染Sema4D-siRNA 72 h后,转染siRNA组Sema4D蛋白明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义(F=27.074,P=0.002 3)。转染siRNA组48、72、96 h的细胞生长速度明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异均有统计学意义(F值分别为15.314、62.255、223.493,P值分别为0.004、<0.001、<0.001)。转染siRNA组穿膜细胞个数明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义(42.0±5.9 vs 60.0±6.1 vs 61.0±4.6,F=37.21,P=0.000 4]。转染siRNA组穿膜细胞凋亡率明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义[(16.57±0.31)%vs(9.50±0.45)%vs(9.90±0.61)%,F=26.75,P=0.007 4]。结论 siRNA能够下调Sema4D基因在胰腺细胞中的表达,可以抑制胰腺癌细胞增殖,使胰腺癌细胞侵袭能力明显下降,凋亡率下降。     

前蛋白转化酶枯草溶菌素9小分子干扰RNA对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)基因沉默后对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,初步探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)蛋白表达在其中的作用。方法建立PCSK9小分子干扰RNA(siRNA)模型,培养VSMC,分为空白对照组、阴性转染组和阳性转染组,选取转染效率最高的PCSK9siRNA对VSMC进行干预,分别于12、24、36、48、60h用MTT法测定吸光度(A)值,绘制增殖曲线,观察其对VSMC增殖的影响,转染48h后用Western blot印迹法检测细胞内LRP-1蛋白表达情况。结果与阴性转染组比较,阳性转染组24、36、48和60h的A值明显下降(P<0.05),PCSK9siRNA抑制VSMC的增殖(P<0.05)。与空白对照组和阴性转染组比较,阳性转染组LRP-1蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论 PCSK9siRNA能有效抑制VSMC的增殖作用,且这种作用可能与LRP-1蛋白表达上调有一定的关系。     

索拉菲尼联合紫杉醇对HepG2细胞的抑制作用及其对cyclinD1表达水平的影响

目的探讨索拉菲尼(SOR)单药、紫杉醇(PTX)单药以及两药联合对肝癌细胞株Hep G2增殖的抑制作用及其对周期素依赖性蛋白cyclin D1表达的影响,探讨其协同作用机制。方法以不同浓度的SOR和不同浓度的PTX,分别组成单药组和联合用药组,另设不加药的对照组,作用于Hep G2细胞。MTT法检测SOR、PTX单药及联用后Hep G2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞的凋亡率;RT-PCR检测各组细胞中cyclin D1表达。结果 SOR、PTX单药与联用均能抑制Hep G2细胞增殖,且呈明显时间-剂量依赖效应,两药联用有协同效应,可使Hep G2细胞增殖率明显下降,细胞数减少,联合组与对应的单药组间差异显著(P0.05);药物作用48 h后,给药组cyclin D1 mRNA的表达较对照组明显减少(P0.05),两药联用cyclin D1表达更显著,与单药组比较有显著差异(P0.05)。结论 SOR和PTX联用可协同下调Hep G2细胞中cyclin D1表达,增强了抑制Hep G2细胞增殖及诱导其凋亡效应。     

上调miR-7对胃癌细胞增殖凋亡的影响及其机制研究

目的探讨上调miR-7对胃癌细胞增殖凋亡的影响及其可能的作用机制。方法利用实时定量PCR(q PCR)检测人正常胃黏膜上皮RGM-1细胞和胃癌BGC823细胞中miR-7表达差异;采用脂质体转染法上调BGC823细胞中miR-7表达,并通过q PCR检测其转染效果;CCK-8法检测转染24 h、48 h和72 h后BGC823细胞的增殖情况;转染48 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡的变化;Western blotting检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白的表达。结果 miR-7在胃癌BGC823细胞中的表达明显低于正常胃黏膜上皮RGM-1细胞(P0.05)。转染miR-7 mimics后,与空白组相比,阴性组中miR-7表达水平无显著差异(P0.05),干扰组中miR-7表达显著上升(P0.05)。CCK-8检测结果显示,转染24 h、48 h和72 h后,干扰组BGC823细胞中的OD值较空白组显著降低(P0.05),而阴性组与空白组组间差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞仪检测显示,与空白组相比,阴性组中G1期、S期、G2/M期细胞所占比例和细胞凋亡率差异无统计学意义(P0.05),而干扰组中G1期细胞所占比例和细胞凋亡率显著升高,S期和G2/M期细胞所占比例显著下降,差异均有统计学意义(P0.05)。Western blotting检测结果显示,上调miR-7表达后,BGC823细胞中CDK6、CDK4、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的相对表达水平均显著下降,Cleaved Caspase-3蛋白表达量显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论上调miR-7可抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与上调Cleaved Caspase-3蛋白表达、下调CDK6、CDK4、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达有关。     

糖蛋白基因表达对人永生化角质形成细胞株活性的影响及机制

目的探讨糖蛋白(GP)基因表达对人永生化角质形成细胞株活性的影响及相关机制。方法体外培养HaCaT人永生化表皮细胞,设计并合成3组GP130 siRNA序列,转染HaCaT细胞,从mRNA和蛋白质水平筛选并验证最佳siRNA序列和浓度。分别于转染HaCaT细胞24 h、48 h时,使用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术检测细胞增殖和增殖周期;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、Western印迹检测白细胞介素(IL)-6 mRNA和蛋白表达。结果培养24 h时siRNA1组、siRNA-nc组、空白对照组HaCaT细胞增殖率之间差异无统计学意义(P0.05);培养48 h时siRNA1组HaCaT细胞增殖率明显低于siRNA-nc组、空白对照组(P0.05)。培养24 h时G1期、S期、G2期的HaCaT细胞水平在siRNA1组、siRNA-nc组、空白对照组之间差异无统计学意义(P0.05);培养48 h时siRNA1组G1期HaCaT细胞数量明显高于siRNA-nc组、空白对照组,S期和G2期细胞数量明显低于siRNA-nc组、空白对照组(P0.01);培养48 h时siRNA1组G1期细胞数量明显高于培养24 h时,G2期细胞数量明显低于培养24 h时(P0.01)。培养24 h时siRNA1组、siRNA-nc组、空白对照组IL-6 mRNA及蛋白表达水平之间差异无统计学意义(P0.05);培养48 h时siRNA1组IL-6 mRNA及蛋白表达水平明显低于siRNA-nc组、空白对照组(P0.01);培养48 h时siRNA1组IL-6 mRNA及蛋白表达水平明显低于培养24 h时(P0.01)。结论下调GP130基因表达可抑制HaCaT细胞增殖,影响细胞增殖周期;其机制可能通过抑制IL-6表达,经Janus激酶(JAK)-信号转导与转录激活子(STAT)3信号通路调控HaCaT细胞增殖。     

二甲双胍对HER2阳性胃癌细胞的增殖抑制作用

目的探讨二甲双胍对HER2阳性胃癌细胞的增殖抑制作用。方法体外培养HER2阳性胃癌细胞株,随机分为研究组和对照组,研究组给予曲妥珠单抗联合二甲双胍,对照组给予曲妥珠单抗。四唑盐比色法检测24 h、48 h、72 h HER2阳性胃癌细胞存活和生存状况,Western blotting法检测HER2阳性胃癌细胞株中Cyclin D1、PI3K、m TOR三种蛋白的表达情况。结果在HER2阳性胃癌细胞存活状况方面,研究组24 h、48 h、72 h细胞存活率分别为(12.05±1.32)%、(19.21±2.17)%、(35.06±2.5)%,对照组24 h、48 h、72 h细胞存活率分别为(19.15±2.72)%、(27.68±2.52)%、(52.32±4.62)%,研究组较对照组肿瘤细胞抑制效果好(P均0.05);在肿瘤相关蛋白表达状况方面,研究组Cyclin D1表达量为0.36±0.17,PI3K表达量为0.27±0.10,m TOR表达量为1.35±0.67,对照组Cyclin D1表达量为1.05±0.31,PI3K表达量为0.85±0.29,m TOR表达量为2.10±0.92,研究组肿瘤相关蛋白较对照组明显降低,差异有统计学意义(P均0.05)。结论二甲双胍能有效抑制HER2阳性胃癌细胞的增殖状态,降低细胞的肿瘤相关蛋白表达量,对肿瘤细胞增殖起到明显抑制作用,临床优势明显。     

奥曲肽联合wortmannin对人胃癌细胞BGC-823生长抑制作用的研究

目的 探讨奥曲肽与磷脂酰肌醇3激酶(PI3'K)通道抑制剂wortmannin联合用药对人胃癌细胞生长的影响及作用机制.方法 2007年6月至8月在武汉大学人民医院消化实验室培养人胃癌细胞BGC-823,以单用浓度为40nmol/L的wortmannin,奥曲肽4个稀释度10-5、10-4、10-3及10-2g/L及它们各稀释度与wortmannin(40nmol/L)的混合培养液作用24h后噻唑蓝(MTT)比色实验检测细胞存活率,单用奥曲肽稀释度为10-3g/L和wortmannin以及二者的混和液作用12、24、36、48 h检测细胞存活率,于24h检测细胞周期及各组p27基因信使核糖核苷酸(mRNA)和蛋白表达.结果 单用奥曲肽组随浓度增加,抑制作用增强,浓度为10-3g/L时,抑制作用明显较对照组增强;单用wortmannin,有较强的肿瘤细胞抑制生长作用,且两者联合用药抑制作用更加明显;单用奥曲肽浓度组随时间的延长其抑制效率逐渐下降,与wortmannin共同作用时,未见细胞明显耐药;通过细胞周期分析,奥曲肽和wortmannin均能抑制肿瘤细胞使其生长停留在G1期,两者联合用药抑制作用更强;在联合用药组中p27蛋白表达明显升高,且随奥曲肤浓度增加表达增加;p27基因mRNA表达在各组无明显差异.结论 奥曲肽和wortmannin对胃癌细胞BGC-823均有较强的抑制和杀伤作用,奥曲肽的抑制和毒性作用具有时间和浓度的依赖性,两者联合用药抑制和毒性效果更显著.P13'K抑制剂wortmannin和奥曲肽均能使肿瘤细胞停止生长在G1期.     

HO-1活性改变对肝癌细胞周期调控因子CKS1和Cyclin D的影响

目的探讨血红素加氧酶(HO)-1活性改变对肝癌细胞株Hep G2细胞周期蛋白(Cyclin)依赖性激酶调节亚基(CKS)1和Cyclin D的影响。方法采用靶向抑制HO-1的小分子RNA(siRNA)沉默细胞癌Hep G2细胞HO-1基因的表达,应用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定Hep G2细胞的增殖情况,应用RT-PCR法测定HO-1、CKS1和Cyclin D mRNA,应用Western印迹检测HO-1、CKS1和Cyclin D蛋白表达水平。结果 MTT实验结果显示,HO-1 siRNA转染组细胞转染后24 h和48 h的吸光度较空白对照组显著降低(P0.01),HO-1 siRNA转染组细胞转染后48 h的HO-1、CKS1和Cyclin D mRNA水平较空白对照组显著降低(P0.01),HO-1 siRNA转染组细胞转染后48 h的HO-1、CKS1和Cyclin D蛋白水平较空白对照组显著降低(P0.01)。结论 HO-1的活性降低可抑制肝癌Hep G2细胞的增殖,其调控作用可能通过降低Hep G2细胞CKS1和Cyclin D表达而实现。     

下调ATAD2表达对胃癌细胞增殖的影响及其机制探讨

目的观察下调三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)表达对胃癌细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法将过表达ATAD2胃癌细胞株MGC-803分为4组,A、B、C组分别给予siRNA1、siRNA2、Neg.siRNA转染48h,D组不转染。采用流式细胞仪检测MGC-803细胞周期,Western blot法检测ATAD2蛋白及细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、Rb。结果与C、D组比较,A、B组G0/G1期细胞比例升高(P均<0.01),S期细胞比例降低(P均<0.05),细胞周期蛋白Cyclin D1和CDK4表达减少,但不引起Rb的表达变化。结论下调ATAD2表达能够抑制胃癌细胞增殖、细胞周期进展,其作用机制与降低Cyclin D1、CDK4等细胞周期相关调节蛋白表达有关。     

cyclinD1蛋白和Rb蛋白表达状况与乳腺癌发生发展的关系

目的探讨细胞周期素(cyclin)D1蛋白和Rb蛋白表达状况在乳腺癌发生、发展中的作用及其临床意义。方法选取攀枝花学院附属医院普外科120例乳腺癌和58例良性乳腺组织,应用免疫组织化学染色方法(S-P法)检测cyclin D1蛋白和Rb蛋白的表达。结果乳腺癌中cyclin D1蛋白阳性表达率显著高于良性乳腺组织(P0.05);而Rb蛋白在乳腺癌中的阳性表达率明显低于良性乳腺组织(P0.05);乳腺癌中cyclin D1蛋白和Rb蛋白阳性表达与其组织学分级、病理分级有关(P0.05);组织学分级越高,cyclin D1蛋白阳性表达越高,而Rb蛋白阳性表达越低;病理分级越高,cyclin D1蛋白和Rb蛋白阳性表达均越低;Rb蛋白表达阳性组的cyclin D1蛋白阳性表达率显著高于Rb蛋白表达阴性组(P0.05)。结论 cyclin D1蛋白和Rb蛋白的异常表达均在乳腺癌的发生过程中起到重要的作用,cyclin D1蛋白的表达与Rb蛋白的表达有关,二者参与了乳腺癌发生、发展过程。     

细粒棘球蚴囊液对HepG2细胞增殖的影响

目的 探讨细粒棘球蚴囊液(HCF)对宿主肝细胞丝裂原活化蛋白激酶信号通路及细胞周期的影响.方法 四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度HCF对HepG2细胞的增殖作用.流式细胞仪检测细胞周期.Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(cyclin) D1、cyclin A、cyclin B1、cyclin E的表达水平.对数据采用重复测量方差分析.结果 在48、72h和96h,15％、30％和60％ HCF组与无胎牛血清比较,能明显促进HepG2细胞的增殖(P值均＜ 0.05).Western blot检测结果显示:15％HCF组p-ERK在48h高表达(F=1.916,P＜ 0.01),cyclin D1在24h高表达(F=3.901,P＜0.01),15％、30％HCF组PCNA分别在48h、72h高表达(F=91.140,P＜0.01),cyclin A分别在48h、72h高表达(F=18.587,P＜0.01),cyclin B1分别在48h、72h高表达(F=2.064,P＜0.01),30％ HCF组cyclin E在96h高表达(F=1.068,P＜0.01).结论 HCF对体外培养的HepG2细胞无毒害作用,对其增殖有一定促进作用.     

辛伐他汀对动脉粥样硬化大鼠高迁移率族蛋白1表达的影响

目的 观察辛伐他汀对动脉粥样硬化大鼠高迁移率族蛋白1(HMGB-1)的蛋白及基因表达及斑块形态学的影响,以揭示辛伐他汀抑制炎症反应,对动脉粥样硬化的保护作用机制. 方法 30只大鼠随机分为3组:空白对照组、动脉粥样硬化组和辛伐他汀组,辛伐他汀灌胃进行干预,给药4周.免疫组织化学染色法观察大鼠主动脉血管动脉粥样硬化斑块内HMGB-1的蛋白表达情况,实时聚合酶链反应法检测大鼠主动脉组织HMGB-1的基因表达变化,酶联免疫吸附试验检测大鼠血清HMGB-1蛋白表达. 结果 (1)HMGB-1在动脉粥样硬化斑块内的表达呈强阳性,辛伐他汀组HMGB-1表达较单纯动脉粥样硬化组减少.(2)与空白对照组比较,在动脉粥样硬化斑块内动脉粥样硬化组HMGB-1基因表达水平明显升高,差异有显著性(P＜0.01);辛伐他汀干预组HMGB-1基因表达低于动脉粥样硬化组(P＜0.01),高于空白对照组(P＜0.01).(3)与空白对照组比较,动脉粥样硬化组及辛伐他汀组血清HMGB-1蛋白表达水平均明显升高,差异有显著性(P＜0.01),辛伐他汀组血清HMGB-1表达低于动脉粥样硬化组(P＜0.05). 结论 (1)动脉粥样硬化大鼠主动脉血管HMGB-1的蛋白及基因表达均明显增强.(2)辛伐他汀能够减轻动脉粥样硬化大鼠的斑块形成,降低HMGB-1的蛋白及基因表达,通过减轻炎症反应的途径起到保护作用.     

补气通络解毒方含药血清对人BbPG3胰腺癌细胞抑制作用的研究

[目的]观察补气通络解毒方含药血清对人BbPG3胰腺癌细胞抑制作用。[方法]将补气通络解毒方含药血清和空白对照血清分别在体外培养人胰腺癌细胞系BbPG3,MTT法检测各时间段胰腺癌细胞的OD值和细胞增殖率,流式细胞仪检测血清G0/G1、S、G2/M期细胞数。[结果]培养至4h时,细胞存活率为93.5%,2组OD值差异无统计学意义;24h时,细胞存活率为71.2%,2组OD值差异有统计学意义(P0.05);48h时,细胞存活率为46.9%,2组OD值差异有统计学意义(P0.05);72h时,细胞增殖率为19.7%,2组OD值差异有统计学意义(P0.01)。给药组S期百分比明显低于空白对照组,2组差异有统计学意义(P0.05),空白对照组G0/G1期细胞百分比明显升高,2组比较差异有统计学意义(P0.05)。G2/M期,2组比较差异无统计学意义,给药组PI值明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]补气通络解毒方含药血清有明显抑制人胰腺癌细胞增殖的效应。     

复方茵丹汤对急性肝内胆汁淤积大鼠肝组织法尼醇受体及多耐药相关蛋白3表达的影响

目的研究复方茵丹汤对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的大鼠急性肝内胆汁淤积的作用机制。方法将108只雄性SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,中药复方茵丹汤高、中、低剂量组和阳性药对照组,每组18只,依据取材时间不同又将各组随机分为24、48、72 h 3个亚组,每组6只。模型组、中药组、阳性药对照组大鼠一次性给予2%ANIT按100 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃造模,正常对照组予等容积色拉油灌胃。造模2 h后,中药高、中、低剂量组分别给予生药含量为24.48 g·kg~(-1)·d~(-1)、12.24 g·kg~(-1)·d~(-1)和6.12 g·kg~(-1)·d~(-1)的复方茵丹汤中药煎剂l ml/100 g体质量灌胃,模型组和正常对照组给予等容积生理盐水灌胃,阳性药对照组给予67.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)熊去氧胆酸(UDCA)水溶液l ml/100 g体质量灌胃,均1次/d。造模后分别于24、48、72 h处死相应时相大鼠,采用RT-q-PCR、Western Blot和免疫组化技术检测法尼醇受体(FXR)及多耐药相关蛋白3(MRP3)在大鼠肝组织的表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 RT-q-PCR结果显示,与同时相正常组比较,模型组FXR mRNA表达均明显降低(P值均0.05);与同时相模型组比较,中药各剂量组及UDCA组FXR mRNA表达明显升高(P值均0.05);中药高剂量组各时相FXR mRNA表达明显高于中、低剂量组(P值均0.05)。与同时相正常组比较,模型组MRP3 mRNA表达均显著升高(P值均0.05);与同时相模型组比较,除低剂量组24 h外,中药各剂量组及UDCA组MRP3 mRNA表达均明显升高(P值均0.05);中药高剂量组48 h、72 h的MRP3 mRNA表达均明显高于中、低剂量组(P值均0.05)。免疫组化结果显示,与同时相正常组比较,模型组FXR蛋白表达均显著降低(P值均0.05);与模型组比较,24 h中药各剂量组及各时相UDCA组FXR蛋白表达均显著升高(P值均0.05);中药高剂量组FXR蛋白表达明显高于同时相中、低剂量组和模型组(P值均0.05)。与同时相正常组比较,模型组MRP3蛋白表达显著升高(P值均0.05);与同时相模型组比较,除低剂量24 h外,中药各剂量组及UDCA组MRP3蛋白表达明显升高(P值均0.05);中药高剂量组MRP3蛋白表达显著高于同时相低剂量组及72 h中剂量组(P值均0.05)。Western Blot结果显示,与同时相正常组比较,模型组FXR蛋白表达均显著降低(P值均0.05);与同时相模型组比较,中药各剂量组及UDCA组FXR蛋白表达均显著升高(P值均0.05);中药高剂量组FXR蛋白表达均显著高于同时相中、低剂量组(P值均0.05)。与同时相正常组比较,模型组MRP3蛋白表达均显著升高(P值均0.05);与模型组比较,48 h及72 h中药中、高剂量组及UDCA组MRP3蛋白表达均明显升高(P值均0.05);中药高剂量组48 h和72 h的MRP3蛋白表达均高于相应的中、低剂量组(P值均0.05)。结论复方茵丹汤对ANIT灌胃诱导AIC大鼠的治疗作用可能与其上调FXR和MRP3基因、蛋白表达有关。     

担载丝裂霉素纳米纤维对膀胱移行细胞癌T24细胞增殖的抑制作用及对细胞周期相关蛋白的影响

目的评价担载丝裂霉素的可生物降解载药纳米纤维对膀胱移行细胞癌T24细胞增殖的抑制作用及对细胞周期相关蛋白的影响。方法采用胰酶消化后人工计数法及MTT法检测对T24细胞增殖率的影响;采用Western印迹方法检测细胞周期素依赖激酶(cyclin dependent ki-nase4,CDK4)、WAF1/p21、细胞周期蛋白(cyclin D1)的含量变化。结果 (1)与空白对照组相比,2、4、8 mg的担载丝裂霉素的纳米纤维在24 h后显著地降低了T24细胞数目;载药纤维以剂量-时间依赖的方式,使细胞存活率(OD值)显著下调。(2)随载药剂量逐渐增加,WAF1/p21含量增加,cyc-lin D1和CDK4蛋白含量逐渐降低。结论 (1)担载丝裂霉素的纳米纤维材料以时间和剂量依赖的方式能显著地抑制T24细胞的增殖。随药物剂量升高(0.1～0.8 mg),作用时间延长(12～48 h),抑制作用增强。(2)担载丝裂霉素的纳米纤维对细胞周期相关蛋白的影响表现为剂量依赖的方式(药物剂量0.1～0.8 mg),显著地增强了WAF1/p21的表达,降低了cyclin D1和CDK4的表达。