两种类风湿关节炎滑膜侵蚀软骨联合免疫缺陷模型的建立及比较

目的 比较背部皮下与肾包囊内2种不同移植方式所建立的类风湿关节炎(RA)滑膜侵蚀软骨联合免疫缺陷(SCID)模型的病理学及血清学改变,为采用人滑膜和软骨进行RA炎症及软骨损伤机制和治疗的体内研究提供实验系统.方法 15只SCID小鼠随机分为皮下移植组、肾包囊移植组及空白对照组,无菌获取RA患者滑膜及人正常软骨,通过相应的移植方式共同植入各组SCID小鼠体内.分别于术后4、8周取移植组织,进行组织病理学分析;留取血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人类风湿因子(RF)水平.结果 皮下移植组成活率及建模成功率较肾包囊组明显增高,两组滑膜中炎细胞浸润、滑膜增殖、软骨侵蚀评分及血清RF-IgM水平差异均无统计学意义(P>0.05).结论 与肾包囊移植相比,背部皮下移植建立的SCID-HuRAg在炎症及骨侵蚀及血清学改变上差异无统计学意义,且操作简便,成功率高,是进行人RA滑膜对软骨侵蚀机制和治疗体内研究的理想动物模型.     

MiR-155在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的表达及功能研究

目的 检测miR-155在类风湿关节炎(RA)患者滑膜成纤维细胞(SFs)中的表达,探讨miR-155对RASFs细胞因子分泌、细胞增殖、侵袭能力的影响及其机制.方法 留取RA患者及骨关节炎(OA)患者各9份膝关节置换术后滑膜组织,分离培养滑膜成纤维细胞,取第3～5代细胞用于实验.①提取总RNA,利用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定miR-155在RASFs和OASFs中固有性表达水平.②Lipo2000脂质体分别转染化学合成的miR-155类似物,miR-155抑制剂及无关序列小RNA对照.③转染48 h后通过酶联免疫吸附试验(E12SA)检测细胞上清基质金属蛋白酶(MMP)-3的分泌;通过3H掺入法检测细胞增殖;通过细胞侵袭试验(transwell)法检测细胞侵袭能力;通过RT-PCR法检测miR-155下游靶标IKBKE的mRNA表达水平.2组比较采用独立样本t检验,多组比较采用方差分析.结果 ①RA患者SFs中miR-155的表达明显高于OA组[分别为(1.79±1.94)和(0.11±0.17),P<0.05];②miR-155可抑制RASFs分泌MMP-3、细胞增殖和侵袭能力;③RASFs过表达miR-155后IKBKE的mRNA水平明显下调(P<0.05).结论 RASFs miR-155的表达上调,可能与滑膜局部的炎症环境相关;miR-155抑制RASFs增殖和降低侵袭能力可能是RASFs分泌MMP-3减少的原因之一,miR-155抑制RASFs分泌MMP-3可能与miR-1.55下调靶标IKBKE mRNA表达水平相关.     

类风湿关节炎滑膜侵蚀软骨SCID鼠模型的建立及初步实验研究

目的建立类风湿关节炎(RA)-SCID小鼠模型,观察滑膜对软骨的侵蚀情况,为探讨RA滑膜侵蚀软骨机制及治疗奠定基础。方法70只SCID小鼠,3～6周龄。无菌获得12例非关节炎患者正常关节软骨,修剪成约2 mm×2 mm×1 mm后备用。同时取10例RA患者(膝关节或髋关节)滑膜组织修剪成约3 mm×6 mm的小块(片),这些小块包裹软骨后共植入SCID鼠肾包囊处,4例骨关节炎(OA)患者滑膜及2例正常滑膜同样处理作对照。术后观察小鼠和移植物的一般情况,从第4周开始分批处死SCID小鼠并切除移植物,进行苏木素-伊红(HE)染色病理分析。结果大部分滑膜及软骨在SCID小鼠体内存活,4周开始滑膜黏附并侵蚀软骨,12周后RA滑膜明显破坏软骨,移植物细胞浸润、软骨破坏与RA病理类似,OA滑膜轻微破坏软骨,而正常滑膜几乎不破坏软骨。结论RA滑膜植入SCID可成活并能侵蚀软骨,RA-SCID小鼠可作为人源化滑膜侵蚀软骨模型,在探讨机制特别是软骨破坏及治疗方面可能有明显优势。     

Etanercept抑制BNX鼠-人RA移植物嵌合体模型中的滑膜增生和软骨侵蚀及降解

目的观察肿瘤坏死因子（TNF）-α拮抗剂Etanercept能否抑制类风湿关节炎（RA）的滑膜增生和软骨破坏，并探讨作用机制。方法将人RA滑膜和正常关节软骨移植到BNX小鼠皮下构建BNX鼠-人RA移植物嵌合体模型，造模4周后给予Etanercept（100μg）皮下注射，连续4周，对照组给予注射用水。评价移植物中的滑膜增生、滑膜细胞对软骨的侵蚀和软骨细胞周围软骨降解的组织学积分，并检测血清TNF-α含量，滑膜的TNF-α和人血管内皮生长因子（VEGF）的表达以及滑膜细胞凋亡情况。结果与对照组比较．Etanercept组中滑膜增生、软骨侵蚀、软骨降解积分以及血清TNF-α含量均显著降低：滑膜细胞的TNF-α和VEGF表达水平也显著下降。但滑膜细胞凋亡程度差异无统计学意义。结论Etanercept能抑制嵌合体模型中的滑膜增生和软骨侵蚀及降解。其作用机制除了中和滑膜组织和血液中的TNF-α外．还可能与下调滑膜细胞的VEGF表达有关。     

血清淀粉样蛋白A在类风湿关节炎患者体内表达的研究

目的 通过检测血清淀粉样蛋白A(SAA)在类风湿关节炎(RA)患者血清、关节液及滑膜中的表达,探讨其在RA发病机制中的作用.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测RA、骨关节炎患者和健康对照人群血清以及RA与骨关节炎患者关节液中SAA的水平;蛋白印迹法测定SAA在血清中的表达;免疫组织化学技术检测RA和骨关节炎滑膜中SAA的表达.应用t检验或Kruska-Wallis秩和检验进行统计分析.结果 RA血清中SAA含量[(318±132) μg/L]显著高于骨关节炎[(127±47) μg/L]和健康对照组[(127±41) μg/L,P均＜0.01].RA关节液中SAA含量[(571±473) μg/L]显著高于骨关节炎[(129±33) μg/L,t=2.46,P=0.04].蛋白印迹法结果显示各组血清样品中均有SAA条带;RA的SAA表达明显高于其他2组.病理结果显示SAA在RA关节滑膜高表达,位于血管内皮细胞、滑膜成纤维细胞、巨噬细胞以及血管周围;在骨关节炎,SAA仅见于关节血管周围和成纤维细胞.结论 RA血清和关节液中SAA的含量显著增高;SAA在RA滑膜组织中高表达,且表达位置与骨关节炎有明显差别,提示SAA可能参与了RA的炎症反应和关节损害.     

类风湿关节炎成纤维滑膜细胞端粒保护蛋白TPP1及POT1 mRNA表达的研究

目的 检测端粒保护蛋白TPP1及POT1 mRNA在类风湿关节炎(RA)、骨关节炎(OA)患者及健康人成纤维样滑膜细胞(SFs)的表达水平.探讨其在RA发病机制中可能的作用.方法 体外培养SFs,用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测28例RA、15例OA和3名健康者SFs TPP1,POT1mRNA的表达水平,并与疾病活动性等临床指标进行分析.结果 TPP1,POT1 mRNA在RA SFs组的表达低于OA组及健康对照组(P均＜0.05).OA组和健康对照组间差异无统计学意义.TPP1 mRNA在RA SFs的表达水平与RA患者抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体及类风湿因子(RF)呈负相关(P均＜0.05),与疾病活动指数(DAS)、红细胞沉降率(ESR)、血清C反应蛋白(CRP)无相关性;POT1 mRNA表达与DAS、CCP、RF均无相关性.结论 端粒保护蛋白TPP1、POT1基因表达的降低可能在RA SFs出现转化细胞特性中发挥重要作用;TPP1基因表达降低可能与RA出现关节侵蚀性改变密切相关.通过调整端粒保护蛋白TPP1、POT1基因的表达水平,有望为RA的治疗寻找新的靶点.     

对比关节腔内注射重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对脊柱关节炎和类风湿关节炎膝关节炎的疗效

目的 比较单次膝关节腔内注射重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc)对脊柱关节炎(SpA)和类风湿关节炎(RA)膝关节炎的疗效差异.方法 入选确诊SpA或RA并伴有至少一侧膝关节肿胀及积液的受试者,X线显示该膝关节无变形、中重度骨破坏及关节间隙明显狭窄,入组前经过常规剂量改善病情抗风湿药(DMARDs)治疗至少6周,于目标膝关节腔穿刺,吸净滑液后注射1次25 mg rhTNFR:Fc.在注射4周后评价疗效和不良事件,主要疗效指标为改良(纽约)特种外科医院(HSS)膝关节评分.采用配对t检验,两样本t检验和秩和检验进行统计学分析.结果 27例SpA和15例RA受试者入选并完成研究.SpA组改良HSS膝关节评分基线值为(66±14)分,注射4周后为(86±11)分,治疗前后比较差异有统计学意义(P＜0.05)；RA组基线值为(64±13)分,注射4周后为(80±9)分,治疗前后比较差异有统计学意义(P＜0.05).SpA组的改良HSS膝关节评分改善率为24.2％(16.5％～41.9％),RA组为22.2％(15.3％～37.7％),2组比较差异无统计学意义(P＞0.05).SpA组膝关节滑膜厚度改善率为31.8％(9.3％～57.3％),RA组为1.5％(-19.3％～25.5％),2组比较差异有统计学意义(P＜0.05).SpA组6例、RA组2例发生了不良事件,无严重不良事件发生.结论 单次膝关节腔内注射rhTN FR:Fc对SpA和RA膝关节炎安全有效,且SpA膝关节滑膜厚度的减轻程度要大于RA膝关节.     

类风湿关节炎炎性关节中高水平脂联素促进白细胞介素-6单核细胞趋化因子-1和核因子-κB受体活化因子配体表达

目的 研究类风湿关节炎(RA)炎性关节中高水平脂联素(AD)表达的意义.方法 酶联免疫吸附试验(ELISA)测定关节液中AD及白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α、单核细胞趋化因子(MCP)-1和基质金属蛋白酶(MMP)-9等促炎因子/趋化因子的含量,并分析AD与其相关性.双重免疫标记分析RA滑膜中AD在滑膜成纤维细胞(SFLs)、T淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和肥大细胞的表达.ELISA测定重组AD因子刺激SFLs后培养上清液中细胞因子含量变化.实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real-time PCR)分析AD和IL-6共刺激对人滑膜细胞系MH7A中核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达影响.3组间采用多变量方差分析,2组比较采用Student's t检验.Mann-Whitney U检验,相关性分析采用Spearman检验.结果 RA关节液中AD与IL-6含量呈正相关(r=0.27,P=0.03).AD与成纤维细胞双重免疫标记呈阳性反应.以重组AD因子30g/ml刺激SFLs 24 h后,培养上清液中IL-6和MCP-1分泌量与刺激前相比分别增加了11.4倍和8倍(P<0.05).AD和IL-6共刺激后,MH7A中RANKL mRNA表达显著增加(82±26).结论 炎性关节中高水平AD可促进IL-6、MCP-1和RANKL表达,其可能在RA慢性炎症和骨侵蚀过程中发挥重要作用.     

高频超声在类风湿关节炎早期诊断中的应用研究

目的：探讨高频超声在类风湿关节炎（RA）患者早期诊断中的应用价值。方法：RA患者36例,根据病程分为病程〈2年和病程≥2年两组。健康对照30名,分别应用高频超声检测双侧腕关节、第2掌指关节、第2和第3近端指间关节。测量滑膜厚度、示指屈肌腱及尺侧腕伸肌腱腱鞘厚度;观察有无滑膜增殖、滑膜血流增多、关节软骨及软骨下骨侵蚀、肌腱病变。结果：RA组各关节滑膜及腱鞘厚度同健康对照组比较差异有统计学意义（P均〈0.01）。超声检查未发现健康对照组关节内有血流信号、关节腔积液、软骨和软骨下骨侵蚀及肌腱病变。RA组超声发现77%的关节有滑膜增生,67%的关节增厚的滑膜内部及周边血流增多,12个腕关节可见关节腔积液,40%的关节骨皮质有缺损改变。在病程〈2年组,超声发现41个关节有骨侵蚀,而X线只发现21个关节有骨侵蚀。超声发现的肌腱病变主要有腱鞘增宽、肌腱失去正常的纤维状回声结构、肌腱边缘不规则或模糊、不同程度的肌腱撕裂,检出率分别为58%、56%、44%、30%。在病程〈2年组,超声表现主要为滑膜炎和肌腱病变,骨侵蚀性病变多出现在病程≥2年组。结论：高频超声在RA病程早期即可检测出滑膜炎症、肌腱病变、骨侵蚀,较体格检查和X线检测更为敏感,有利于RA的早期诊断。     

类风湿关节炎患者血清软骨寡聚基质蛋白水平及意义的研究

目的 探讨检测软骨寡聚基质蛋白(COMP)水平对类风湿关节炎(RA)患者疾病活动性及早期软骨破坏的临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法,检测94例RA患者及40名健康人血清中COMP的水平.同时测定RA患者的其他实验室及临床指标:类风湿因子(RF)、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、压痛关节数、疼痛关节数、肿胀关节数、晨僵时间及双手X线,分析它们与COMP的相关性.结果 RA患者血清COMP水平(11.3±5.2)U/L明显高于正常对照组的(9.2±1.7)U/L;两组差异有统计学意义(p=0.017).64例RA活动期患者血清COMP水平为(14±6)U/L,30例缓解期患者为(9±4)U/L,组间比较差异有统计学意义(p=0.005).COMP水平与RA思者的ESR、CRP、晨僵时间、压痛关节数、疼痛关节数、肿胀关节数、X,线分期呈正相关(P<0.05),与年龄、病程、RF、抗CCP抗体水平、功能分级无明显关系(p＞0.05).30例RA患者完成2年放射学随访,18例COMP值大于健康者,16例X线有递增现象,2例无递增现象;而12例COMP值正常/低于健康者,有递增5例,无递增7例,两组间差异有统计学意义(p=0.013).结论 RA患者血清中COMP高水平存在提示RA疾病活动性和早期关节软骨破坏.COMP可以作为反映RA疾病急性活动程度与软骨破坏的血清学指标.     

类风湿关节炎患者血管内皮功能研究

目的研究类风湿关节炎（RA）患者血管内皮功能状况以及影响其功能的相关因素。方法控制影响血管内皮功能的因素后纳入观察组66例RA初治患者，以及年龄、性别匹配的对照组54名。采用超声检测血管内皮功能；比较两组临床及实验室炎性指标，分析与血管内皮功能之间的相关性。结果观察组存在血管内皮功能障碍；两组在年龄、性别、体重、血压、血脂、血白细胞介素（IL）-8、可溶性细胞间黏附分子（sICAM）-1、血管性假性血友病因子（vWF）水平差异无统计学意义，观察组的IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α和CD141高于对照组（P〈0．05）；仅舒张压、TNF-α和CD141水平与该组的血管内皮功能障碍相关。结论RA患者存在血管内皮功能障碍，TNF-α可能在其发生机制中起重要作用。     

趋化素样因子1在类风湿关节炎滑膜中的表达研究

目的研究趋化素样因子1(CKLF1)在类风湿关节炎(RA)滑膜中的表达,探讨CKLF1在RA发病过程中的可能的病理作用。方法取35例RA,20例骨关节炎(OA)及20例半月板损伤患者手术切除的膝关节滑膜标本。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测CKLF1在上述3种病变滑膜中的mRNA水平表达水平。采用免疫组织化学方法检测CKLF1在滑膜组织中的蛋白水平表达特征。结果RA滑膜组织中CKLF1在mRNA水平的表达(0．41±0．17)明显高于OA(0．07±0．06)和半月板损伤患者(0．16±0．10)(P<0．05)。免疫组织化学结果显示,OA病例中仅有2例显示少量滑膜衬里层细胞着色,半月板损伤病例仅有5例显示少量滑膜衬里层细胞着色。在RA滑膜中20例染色强阳性,10例染色阳性,5例染色阴性。阳性染色颗粒位于细胞胞质内,阳性细胞定位在滑膜衬里层的成纤维细胞、滑膜下层大量的浆细胞以及增生的血管上皮细胞。结论CKLF1基因在RA滑膜中有高水平的表达特征,为进一步深入研究RA的发病机制提供新的研究思路。     

Estrogens in rheumatoid arthritis; the immune system and bone

Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune disease that is more common in women than in men. The peak incidence in females coincides with menopause when the ovarian production of sex hormones drops markedly. RA is characterized by skeletal manifestations where production of pro-inflammatory mediators, connected to the inflammation in the joint, leads to bone loss. Animal studies have revealed distinct beneficial effects of estrogens on arthritis, and a positive effect of hormone replacement therapy has been reported in women with postmenopausal RA. This review will focus on the influence of female sex hormones in the pathogenesis and progression of RA.     

强直性脊柱炎和类风湿关节炎患者低相对分子质量IgM水平的研究

目的 研究强直性脊柱炎(AS)和类风湿关节炎(RA)患者体内低相对分子质量IgM水平的变化.方法 取AS、RA患者和健康对照人群血清,超滤法分离低相对分子质量IgM,酶联免疫吸附试验测定低相对分子质量IgM比例.采用Mann-Whitney U检验方法进行统计分析.结果 AS和RA患者血清低相对分子质量IgM比例较健康对照明显升高(分别为0.194±0123,0.061±0.026,0.028±0.165);低相对分子质量IgM比例与患者病情活动度无明显相关.结论 低相对分子质量IgM升高可能是AS和RA患者体内体液免疫功能紊乱的表现,但其具体的病理意义尚需进一步研究.

Abstract：

Objective To study the serum levels of low molecule weight IgM (LMW IgM) in ankylosing spondylitis (AS) patients and rheumatoid arthritis (RA) patients and to evaluate the relationship of LMW IgM levels with the disease activities. Methods The levels of LMW IgM and pentameric IgM in AS patients, RA patients and healthy controls were measured with ELISA after separated using ultrafiltration assay. Differences in the percentage of LMW IgM between subject groups were analysed using Mann-Whitney U test. Results The percentages of LMW IgM increased dramatically in AS patients and RA patients compared with healthy controls (0.194 ± 0123, 0.061 ±0.026, 0.028 ±0.165 separately). The LMW IgM percentages were not correlated with the disease activities. Conclusion The increase of LMW IgM indicates humoral immune function abnormality in AS patients and RA. However, the mechanism needs further study.     

类风湿关节炎诊疗规范

类风湿关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎症为主要病理基础的自身免疫病, 致残率高。近年来, RA的诊治取得了突飞猛进的发展, 国际上有关RA的指南亦不断更新。我国RA患者人数多, 规范化诊疗的普及依然欠缺。中华医学会风湿病学分会在借鉴国内外诊治经验和指南的基础上制定了本规范, 对RA的诊断、治疗及管理给予建议, 以更好地控制关节炎症, 改善患者生活质量, 减少残疾及疾病负担。     

类风湿关节炎危险因素病例-对照研究

目的通过流行病学调查，探讨与类风湿关节炎（RA）发生有关的危险因素，估计各主要危险因素的相对危险度。方法应用1：1匹配的病例一对照研究方法，收集RA患者及对照各165例，收集的资料包括人口学特征、既往疾病史、家族史、吸烟、饮酒、饮茶等生活习惯和嗜好、居住和工作环境，以及女性月经史、生育史。对各危险因素进行单因素和多因素条件Logistic回归分析。结果与RA危险性增加有关的因素有阳性家族史、未受过高等教育、既往结核病史、中度及中度以上劳动强度和既往腮腺炎病史（OR=2．10～5．41），女性第一次生育后哺乳史（OR=2．25）及初潮年龄晚（OR=2．17）与RA危险性的增加也有关，饮绿茶（OR=0．27）可降低RA发病的危险性。结论阳性家族史、未受过高等教育、既往结核病史、中度及中度以上劳动强度、既往腮腺炎病史和女性第一次生育后哺乳史、初潮年龄晚是RA发生的危险因素，饮绿茶对RA的发生具有保护作用。     

类风湿关节炎患者血清肽酰基精氨酸脱亚氨酶4水平及其意义

目的 通过检测肽酰基精氨酸脱亚氨酶(PADI)4在类风湿关节炎(RA)患者血清中的水平,探讨其在RA发病机制中的意义.方法 采用ELISA检测100例RA患者、23例其他风湿病患者、24例健康体检者血清中PADI4及抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体水平.结果 (1)RA患者PADI4水平为(620.10±259.82)μg/L,较其他风湿病患者[(404.41±195.38)μg/L]、健康体检者[(522.19±142.40)μg/L]明显升高,差异有统计学意义(F=8.75,P＜0.001).(2)RA患者PADI4-94(rs 2240340)基因型T/T、C/C、T/C PADI4水平分别为(597.43±255.76)μg/L、(674.63±320.67)/μgL、(628.78±274.13)μg/L;PADI4-104(RS 1748033)基因型T/T、Cμg/C、T/C PADI4水平分别为(571.56±138.34)μg/L、(653.41±300.35)μg/L、(640.07±302.82)μg/L.各基因型间PADI4水平差异无统计学意义(P＞0.05).(3)相关性分析:RA组PADI4水平与RA疾病活动评分(DAS28)、ESR呈正相关(r=0.24,P=0.03;r=0.23,P=0.03),而与抗CCP抗体、抗PADI4抗体、C反应蛋白无相关性(r=0.02,P=0.83;r=-0.17,P=0.10;r=0.14,P=0.18).结论 PADI4可能是RA的一个致病性抗原,参与了RA发病,其水平高低反映病情活动程度.

Abstract：

Objective To detect the levels of serum peptidylarginine deiminase (PADI)4 and explore its significance in rheumatoid arthritis ( RA ). Methods The presence of PADI4, anti-PADI4antibodies and anti-cyclic citrullinated peptide (CCP) antibodies levels were examined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Serum samples were obtained from 100 patients with RA, 23 patients with other rheumatic diseases, and 24 healthy controls. The associations between PADI4 and the disease activity score using 28 joint counts ( DAS28 ) score, anti-CCP antibodies, erythrocyte sedimentation rate ( ESR ),C-reactive protein ( CRP), PADI4-94 ( rs 2240340 ) and PADI-104 ( rs 1748033 ) gene polymorphisms and other indexes were analyzed in RA. Results The levels of PADI4 in RA patients were significantly higher than in other rheumatic diseases and healthy controls ( F = 8. 75, P ＜ 0. 001 ). There was no significantly difference in levels of PADI4 among ADI4-94 ( rs 2240340)/PADI-104 ( rs 1748033 ) genotypes. Conclusions PADI4 is associated with disease activity involved in the RA pathogenesis and may be a RA pathogenic antigen.     

类风湿性关节炎患者BAFF—R水平的检测及意义

目的检测类风湿关节炎（RA）患者外周血膜结合型淋巴细胞刺激因子受体（BAFF-R）水平，并探讨其与炎症指标的相关性及临床应用价值。方法取RA患者外周抗凝血，经过荧光标记后流式细胞仪检测BAFF-R。结果RA患者膜结合型BAFF-R与正常人比较有统计学意义，治疗前后对比有统计学意义，且与炎症指标呈相关性。结论RA患者膜结合型BAFF-R水平升高，可作为诊断依据及治疗靶点之一。