双甲五灵冲剂抑制免疫性肝纤维化大鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及基因表达的实验研究

目的探讨中药双甲五灵冲剂对免疫诱导型肝纤维化大鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及基因表达的影响.方法80只雌性Wistar大鼠尾静脉注射人血白蛋白,建立免疫损伤性肝纤维化大鼠模型后分为6组:B预防组造模同时开始喂食双甲五灵冲剂;C治疗1组:在造模结束的同时开始喂食双甲五灵冲剂;D治疗2组:在造模结束3mo后开始喂食双甲五灵冲剂;E秋水仙碱组:在造模结束的同时开始喂食秋水仙碱;F鳖甲软肝片组:在造模结束的同时开始喂食鳖甲软肝片;G模型组:以观察肝纤维化自然恢复情况;另设A组为正常对照组.采用HE染色及Von-Gieson胶原纤维特殊染色以观察观察肝组织结构改变及肝纤维化程度,并采用肝组织原位杂交技术及免疫组织化学染色观察大鼠肝脏组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及基因的表达强度.结果免疫诱导型肝纤维化大鼠,在造模结束后肝组织学改变呈进行性加重,以造模结束后3 mo为著,其Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及基因呈强阳性表达,而经双甲五灵冲剂治疗后的大鼠与模型组大鼠相比,肝组织结构明显好转,纤维组织明显减少,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及基因表达明显降低(P＜0.05),并且其效果为预防组效果最好,治疗1组较治疗2组效果好,三组均明显优于秋水仙碱组.结论中药双甲五灵冲剂可以逆转肝纤维化,其抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及基因的表达是逆转肝纤维化的机制之一.     

软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠TIMP-1、2及工、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白表达的影响

目的观察软肝缩脾丸对纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶组织抑制因子-1、2(TIMP-1、TIMP-2)及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白表达的影响,从胶原降解的角度探索中药抗肝纤维化的可能机理.方法制备大鼠肝纤维化模型,并给予软肝缩脾丸治疗;用原位杂交和免疫组化的方法分别测定TIMP-1、TIMP-2及Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白表达.结果CC14模型组TIMP1、TIMP-2,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白水平明显高于治疗组.正常组大鼠肝组织无一例阳性.结论TIMP-1、TIMP-2与肝纤维化形成密切相关,软肝缩脾丸可以抑制纤维化肝脏TIMP-1、TIMP-2的表达,从而增强间质胶原酶的活性,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解,产生抗肝纤维化作用.     

软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠TIMP-1、2及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白表达的影响

目的　观察软肝缩脾丸对纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶组织抑制因子 -1、2 (TIMP -1、TIMP -2 )及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白表达的影响 ,从胶原降解的角度探索中药抗肝纤维化的可能机理。方法　制备大鼠肝纤维化模型 ,并给予软肝缩脾丸治疗 ;用原位杂交和免疫组化的方法分别测定TIMP -1、TIMP -2及Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白表达。结果　CCl4模型组TIMP -1、TIMP -2 ,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白水平明显高于治疗组。正常组大鼠肝组织无一例阳性。结论　TIMP -1、TIMP -2与肝纤维化形成密切相关 ,软肝缩脾丸可以抑制纤维化肝脏TIMP -1、TIMP -2的表达 ,从而增强间质胶原酶的活性 ,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解 ,产生抗肝纤维化作用。     

秋水仙碱对肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶-1及其抑制因子-1表达的影响

目的 观察秋水仙碱对纤维化肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响,从胶原降解的角度探讨秋水仙碱对肝纤维化有无逆转作用及可能存在的机制.方法 制备免疫性大鼠肝纤维化模型,并给予秋水仙碱治疗;通过RT-PCR检测MMP-1、TIMP-1的表达,并作Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化以及Masson胶原染色.结果 发现秋水仙碱对肝纤维化大鼠MMP-1的表达无明显影响(P>0.05),但可以抑制TIMP-1的表达(P<0.05),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P<0.05);然而在病理形态学的观察中,未发现秋水仙碱治疗组与肝纤维化模型组之间存在的显著性差异(P>0.05).结论 秋水仙碱可以抑制纤维化肝脏TIMP-1的表达,从而增强间质胶原酶的活性,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解,产生抗肝纤维化的作用,但其作用有限.     

软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠TIMP—1、2及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察软肝缩脾丸对纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白质酶组织抑制因子－1、2（TIMP－1、TIMP－2）及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRAN及蛋白表达的影响,从胶原降解的角度探索中药抗肝纤维化的可能机理。方案 制备大鼠纤维化模型,并给予软肝缩脾丸治疗;用原位杂交和免疫组化的方法分别测定TIMP－1、TIMP－2及Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRAN和蛋白表达。结果 CCl4模型组TIMP－1、TIMP2,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白水平明显高于治疗组。正常组大鼠肝组织无一例阳性。结论 TIMP－1、TIMP－2与肝纤维化形成密切相关,软肝缩脾丸可以抑制纤维化肝脏TIMP－1、TIMP－2的表达,从而增强间质胶原酶的活性,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解,产生抗肝纤维化作用。     

双甲五灵胶囊与肝纤维化血清TIMP-1的变化及临床疗效观察

目的观察自行研制的中药双甲五灵胶囊治疗慢性肝炎患者前后血清基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)的变化及意义,并观察双甲五灵胶囊治疗的临床疗效。方法将226例慢性肝炎患者随机分为双甲五灵胶囊治疗组和对照组,观察两组治疗半年前后临床症状、体征、肝功能、血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、层粘连蛋白(LN)以及TIMP1的变化,并进行统计学处理。结果双甲五灵胶囊治疗组与对照组比较,治疗组患者临床症状、体征、肝功能及血清肝纤维化指标明显好转(P<0.01)。结论双甲五灵胶囊可使患者血清中TIMP1水平明显降低,用于防治肝纤维化有效。双甲五灵胶囊对防治慢性肝炎肝纤维化有一定效果。     

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝脏基质转换及肝窦毛细血管化的影响

目的:观察抗纤软肝颗粒对实验性肝纤维化时肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)以及肝窦毛细血管化的影响,探讨其防治肝纤维化的作用。方法:250ml/L CCl_4经大鼠皮下注射制备肝纤维化模型并同时给予秋水仙碱、小和大剂量抗纤软肝颗粒治疗,用光镜和电镜观察肝组织病理变化;免疫组织化学法检测肝组织Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、层粘蛋白(LM)原住杂交的方法检测MMP-1 mRNA、TIMP-1 mRNA。结果:抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达(P<0.05),抑制TIMP-1的表达(P<0.01),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P<0.01);有效抑制Ⅳ型胶原、LM的生成和沉积(P<0.01),改善肝纤维化大鼠肝组织病理变化(P<0.01)。减轻肝窦毛细血管化程度。结论:抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达,抑制TIMP-1的表达,促进胶原的降解,抑制肝窦毛细血管化的形成,从而产生抗肝纤维化的作用。     

MMP-1、TIMP-1与实验性肝纤维化形成过程中基质转换的关系及抗纤软肝颗粒的干预作用

目的：动态观察肝纤维化形成过程中肝组织MMP-1、TIMP-1 mRNA及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达，以探讨MMP-1、TIMP-1与基质转换的关系，以及抗纤软肝颗粒对它们的影响。方法：将大鼠随机分为正常对照组、CCl4模型组与治疗组。采用250ml／L CCl4在大鼠皮下注射制备肝纤维化模型，并同时给与抗纤软肝颗粒治疗，各组分别于第3、5、7、9、11周分批处死大鼠，取肝脏标本。采用免疫组织化学法检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原，原位杂交的方法检测MMP-1 mRNA、TIMP-1 mRNA。结果：在肝纤维化形成过程中：①胶原持续增高，治疗组较同期模型组比较有不同程度的降低。②MMP-1 mRNA的表达先逐渐增强，后期有所下降；治疗组较同期模型组比较有不同程度的增强。③TIMP-1 mRNA的表达持续增强，治疗组较同期模型组比较有不同程度的减弱。TIMP-1 mRNA与Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达呈显著正相关（P〈0．01）。结论：在肝纤维化过程中TIMP-1通过对MMP-1活性的抑制，导致ECM在肝脏内的过度沉积；抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达，抑制TIMP-1的表达。促进肢原降解而产生抗肝纤维化作用。     

清肝化瘀口服液对大鼠肝纤维化的治疗作用

应用清肝化瘀口服液治疗小剂量CCl_4诱导的肝纤维化大鼠，并与正常对照组、CCl_4模型组、自然恢复组、秋水仙碱治疗组对照。对各组肝脏Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原及结蛋白进行免疫组化染色和计算机图像分析，并用电镜观察肝脏超微结构的变化。结果发现，清肝化瘀口服液可抑制肝细胞变性坏死，减轻炎症反应，改善微循环，抑制Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原及结蛋白在肝内的沉积，并可使已形成的胶原重新溶解和吸收，使肝纤维化逆转，效果优于秋水仙碱（P＜0．01）；同时，CCl_4诱导的大鼠肝纤维化可有一定程度的自然恢复。表明清肝化瘀口服液对大鼠肝纤维化有显著的治疗作用。     

清肝化瘀口服液对大鼠肝纤维化的治疗作用

应用清肝化瘀口服液治疗小剂量ＣＣｌ４诱导的肝纤维化大鼠，并与正常组、ＣＣｌ４模型组、自然恢复组、秋水仙碱治疗组对照。对各组肝Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原及结蛋白进行免疫组化染色和计算机图像分析，并用电镜观察肝脏超微结构的变化。结果发现，清肝化瘀口服液可抑制肝细胞变性坏死，减轻炎症反应，改善微循环，抑制Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原及结蛋白在肝内的沉积，并可使已怕胶原重新溶解和吸收，使肝纤维化逆转，效果优于秋水仙碱，     

Influence of heme oxygenase-1 expression on immune liver fibrosis induced by cobalt protoporphyrin in rats

AIM： To investigate the effect of heme oxygenase-1 （HO-1） expression on immune liver fibrosis induced by cobalt protoporphyrin （CoPP） in rats.
METHODS： An immune liver fibrosis model of rat was established by administering human serum albumin （HSA）. The rats were divided into CoPP, liver fibrosis and normal control groups. Rats in the CoPP group received intraperitoneal CoPP concurrently with HSA. Expression of HO-1 protein was observed by Western blotting and immunohistochemistry. Hematoxylin and eosin （HE） staining was performed to assess fibrosis proliferation and distribution, proliferation extent of fibroblasts, and alterations in hepatocytes and inflammatory cells. Type Ⅰ and Ⅱ collagens were detected with Van Gieson＇s （VG） staining and Foot＇s reticular fiber staining, respectively. In addition, spindle-shaped cells existing at perisinusoidal locations beyond portal and septa areas were investigated with HE staining.
RESULTS： Western blotting and immunohistochemistry showed that the expression of HO-1 protein was higher in the CoPP group than in the liver fibrosis group （P 〈 0.05）. Compared with the liver fibrosis group, the serological index of hepatic fibrosis in the CoPP group decreased significantly （P 〈 0.05）. HE, VG and Foot＇s staining revealed that administration of CoPP reduced the extent of hepatic fibrosis. The levels of serological indicators and the number of spindle-shaped cells at perisinuous locations beyond the portal and septa areas were reduced in the CoPP group. Only a few inflammatory cells were seen around the portal areas and central veins in the CoPP group. CONCLUSION： Increased endogenous HO-1 may suppress liver fibrosis by protecting liver cells, inhibiting inflammatory cell infiltration and hepatic stellate cell transformation.     

芦荟大黄素对血吸虫病性肝纤维化小鼠的影响

目的:探讨芦荟大黄素对血吸虫肝纤维化的影响。方法:采用日本血吸虫尾蚴感染小鼠建立血吸虫性肝纤维化模型,用芦荟大黄素0.3mg.kg-1.d-1治疗8周。测定小鼠肝脏匀浆丙二醛(MDA)水平,免疫组化检测其肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、局部黏着斑激酶(FAK)、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。结果:芦荟大黄素能减轻血吸虫性肝纤维化的组织病理改变,使血吸虫肝纤维化小鼠肝脏Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达降低,显著抑制肝组织中TGF-β1、VEGF和FAK的表达(P<0.01)。结论:芦荟大黄素对血吸虫性肝纤维化有治疗作用,其作用机制可能与影响TGF-β1、VEGF和FAK的表达相关。     

复方鳖甲软肝片抑制大鼠酒精性肝纤维化的实验研究

目的探讨复方鳖甲软肝片对实验性大鼠酒精性肝纤维化的抑制作用机制。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、中药组和西药组。模型组、中药组、西药组以“酒精-吡唑-玉米油”混合液灌胃并饲以高脂饮食,正常组每天用生理盐水灌胃,并以普通饲料喂养。16周后中药（复方鳖甲软肝片）组和西药（复方牛胎肝提取物片）组开始药物治疗。给药4周后检测血生化、肝组织病理学变化、肝组织中TGF—B1蛋白表达变化。结果酒精性肝纤维化模型大鼠肝功能显著异常,肝纤维化明显。经4周治疗,与模型组比较,中药组及西药组血清中ALT、AST、HA含量显著下降（P〈0．01）。光镜观察结果显示,中药组和西药组大鼠肝血窦周围胶原明显减少,相邻血窦间的纤维联络基本消失。免疫组化染色结果显示,中药组大鼠肝组织中TGF—β1蛋白含量显著下降。结论复方鳖甲软肝片通过下调TGF—β1表达抑制胶原纤维的产生,阻止纤维化的发展,从而有效阻止和逆转酒精性肝纤维化的进程。     

芍药苷对感染血吸虫小鼠肝纤维化的影响

目的探讨小鼠感染日本血吸虫后经吡喹酮治疗的不同时期,给予芍药苷对肝组织虫卵肉芽肿和纤维化的影响。方法以日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠构建肝纤维化模型,随机分为(Ⅰ)杀虫前给药组、(Ⅱ)杀虫同时给药组及(Ⅲ)杀虫后给药组。除正常组外,杀虫治疗、芍药苷治疗组和对照组小鼠分别于感染后12d、42d和72d给予芍药苷和对照,并于102d、132d和162d处死。检测透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢP)、羟脯氨酸(Hyp)、虫卵肉芽肿大小、肝纤维化分级以及胶原Ⅰ的表达。结果在组Ⅰ和组Ⅲ,芍药苷明显降低血清中HA、PⅢP和肝组织中Hyp的含量,减小虫卵结节并降低肝纤维化严重程度分级,降低胶原Ⅰ的表达(P<0.05或P<0.01);在组Ⅱ,大部分指标没有明显差别(P>0.05)。结论芍药苷无论是早期或延后给药,都具有抑制虫卵肉芽肿,减少胶原的生成从而对抗小鼠血吸虫性肝纤维化的作用。     

护肝解纤汤治疗肝纤维化及其作用机制的初步研究

目的 观察护肝解纤汤治疗大鼠肝纤维化效果及有关细胞因子的变化,初步探讨护肝解纤汤的作用机制.方法 100只雄性SD大鼠随机分组后,以四氯化碳腹腔内注射的方法建立大鼠肝纤维化模型,造模后施以由低、中、高剂量姜黄等组成的护肝解纤汤,以小柴胡汤和复方鳖甲软肝片为阳性对照.12周后处死大鼠,留取肝左叶同一部位新鲜肝组织,行苏木素-伊红、Masson染色,免疫组织化学染色检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原,转化生长因子β1(TGF β1)、血小板衍生长因子(PDGF-BB)的变化.多组数据间的比较采用SPSS12.0统计软件进行单因素方差分析.结果 护肝解纤汤能降低病理评分,改善肝纤维化病理损伤,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原合成并促使其降解,降低炎症因子TGF β1、PDGF-BB在肝组织的表达,正常组、模型对照组、低姜黄组、中姜黄组、高姜黄组、小柴胡汤组、复方鳖甲组肝组织TGF阳性面积百分比分别为7.56%±2.18%、29.25%±7.84%、13.54%±4.15%、21.82%±6.64%、20.06%±7.14%、13.78%±4.35%、12.75%±3.98%,P<0.05;PDGF-BB阳性百分比分别为1.68%±0.41%、11.70%±2.28%、3.65%±0.76%、5.24%±1.04%、6.37%±1.12%、4.16%±0.61%、3.38%±0.56%,P<0.05.上述作用以低姜黄组效果明显.结论 护肝解纤汤可改善大鼠肝纤维化的病理改变,降低Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成、减少PDGF-BB,TGF β1表达可能是其相关作用机制.     

毛菊苣提取物对小鼠肝纤维化的保护作用

背景肝纤维化是肝硬化发生的基础病理过程,逆转和治疗肝纤维化是防止肝硬化发生的重要治疗手段.毛菊苣,作为传统中药材,已知其保肝作用,本文通过动物实验验证并进一步探索其发挥作用的有效部位.目的研究毛菊苣提取物:CG-Ⅰ(95%乙醇提取物)、CG-Ⅱ(70%乙醇提取物)、CG-Ⅲ(50%乙醇提取物)、CG-Ⅳ(水提取物)对小鼠肝纤维化的保护作用.方法采用10%食用酒精代饮用水,背部皮下注射20%CCl4造肝纤维化模型,造模成功后分为空白对照组、模型组、药物治疗组(CG-Ⅰ组、CG-Ⅱ组、CG-Ⅲ组、CG-Ⅳ组),考察肝脏系数、脾脏系数,血清谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、肝组织碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷光甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的水平,并观察肝脏病理组织学变化.结果与空白对照组相比,模型组小鼠血清及肝组织中的AST、ALT、AKP及LDH水平都显著升高,说明造模成功;与模型组相比,CG-Ⅲ组可以降低脾脏系数(P<0.05);药物治疗组均可降低小鼠血清中AST、ALT的水平(P<0.01);药物治疗组除了CG-Ⅲ组均可以升高小鼠肝组织中GSH-Px的活性水平(P<0.01或P<0.05);药物治疗组CG-Ⅰ和CG-Ⅱ可降低小鼠肝组织中AKP、LDH的含量,具有极显著性差异(P<0.01);通过HE染色和Masson染色切片,可以看出药物治疗组均可不同程度地改善肝脏病理组织纤维化,而CG-Ⅰ组和CG-Ⅱ组效果显著.结论维药毛菊苣提取物对小鼠肝纤维化具有一定的保护作用,其中CG-Ⅰ组和CG-Ⅱ组即95%和70%乙醇提取物组的治疗效果最佳.     

Blockage of transforming growth factor β receptors prevents progression of pig serum-induced rat liver fibrosis

AIM: To test the hypothesis that introduction of antisense TβR Ⅰ and TβR Ⅱ eukaryotic expressing plasmids into a rat model of immunologically induced liver fibrosis might block the action of TGF-β1 and halt the progression of liver fibrosis.METHODS: RT-Nest-PCR and gene recombination techniques were used to construct rat antisense TβR Ⅰ and TβR Ⅱ recombinant plasmids which could be expressed in eukaryotic cells. The recombinant plasmids and empty vector (pcDNA3) were encapsulated by glycosyl-poly-Llysine and then transducted into rats of pig serum-induced liver fibrosis model. Expression of exogenously transfected gene was assessed by Northern blot, and hepatic expressions of TβR Ⅰ and TβR Ⅱ were evaluated by RTPCR and Western blot. We also performed ELISA for serum TGF-β1, hydroxyproline of hepatic tissues, immunohistochemistry for collagen types Ⅰ and Ⅲ, and VG staining for pathological study of the liver tissues.RESULTS: The exogenous antisense TβR Ⅰ and TβR Ⅱ plasmids could be well expressed in vivo, and block mRNA and protein expression of TβR Ⅰ and TβR Ⅱ in the fibrotic liver at the level of mRNA respectively. These exogenous plasmid expressions reduced the level of TGF-β1(antisense TβR Ⅰ group 23.998±3.045 ng/mL, antisense TβR Ⅱ group 23.156±3.131 ng/mL, disease control group 32.960±3.789 ng/mL; F=38.19, 36.73, P＜0.01). Compared with disease control group, the contents of hepatic hydroxyproline (antisense TβR Ⅰ group 0.169±0.015 mg/g liver, antisense TβR Ⅱ group 0.167±0.009 mg/g liver,disease control group 0.296±0.026 mg/g liver; F=14.39,15.48, P＜0.01) and the deposition of collagen types Ⅰ and Ⅲ decreased in the two antisense treatment groups (antisense TβR Ⅰ group, collagen type Ⅰ 669.90±50.67,collagen type Ⅲ 657.29±49.48; antisense TβR Ⅱ group,collagen type Ⅰ 650.26±51.51, collagen type Ⅲ 661.58±55.28;disease control group, collagen type Ⅰ 1209.44±116.60,collagen type Ⅲ 1175.14±121.44; F=15.48 to 74.89, P＜0.01).Their expression also improved the pathologic classification of liver fibrosis models (compared with disease control group, x2=17.14, 17.24, P＜0.01). No difference was found in the level of TGF-β1, the contents of hepatic hydroxyproline and collagen types Ⅰ and Ⅲ and pathologic grade between pcDNA3 control group and disease control group or between the two antisense treatment groups (F =0.11 to 1.06, x2=0.13 to 0.16, P＞0.05).CONCLUSION: Antisense TβR Ⅰ and TβR Ⅱ recombinant plasmids have certain reverse effects on liver fibrosis and can be used as possible candidates for gene therapy.     

Smad-7与Timp-1siRNA质粒联合作用对大鼠肝纤维化的影响

目的观察Smad-7与Timp-1siRNA真核细胞表达质粒联合作用对大鼠肝纤维化的影响。方法采用已构建的重组Smad-7与Timp-1siRNA真核细胞表达质粒,用脂质体包埋法通过腹腔注射将其导入肝纤维化模型大鼠体内。通过病理形态学、Western blot法及半定量RT-PCR法观察两种质粒联合作用对大鼠肝纤维化的影响。结果 两种质粒联合治疗组与各单一治疗组之间病理学分级有显著性差异（P〈0.05）;两种质粒联合治疗组中Ⅰ型胶原表达量显著低于单一治疗组（P〈0.05）,并较单一治疗组明显抑制Smad-2、Timp-1mRNA在肝纤维化肝脏中的表达（P〈0.05）。结论 Smad-7与Timp-1siRNA表达质粒联合抑制大鼠肝纤维化的疗效优于各单一治疗组。     

肝复康对大鼠肝组织血小板衍生生长因子表达及对胶原合成的影响

目的探讨中药肝复康对大鼠肝组织血小板衍生生长因子(PDGF)表达的影响及其对胶原合成的调节作用。方法制备四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠模型,应用肝复康干预;测定各组大鼠血清白蛋白、球蛋白、谷丙转氨酶和谷草转氨酶的含量;采用免疫组织化学法检测肝组织PDGF表达;采用RT-PCR法测定肝组织及HSC-T6细胞Ⅰ型胶原mRNA水平的变化。结果治疗组与模型组相比,血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶和球蛋白水平均降低,白蛋白及白/球比例则升高(P<0.01);模型组肝组织PDGF的表达上调,而肝复康治疗组表达则下调(P<0.01);模型组肝组织及HSC-T6细胞Ⅰ型胶原mRNA水平较正常对照组明显上调(P<0.01),而肝复康治疗组则明显下调(P<0.01)。结论肝复康通过降低PDGF的表达,抑制Ⅰ型胶原的合成,对肝纤维化具有一定的防治作用。     

金钗石斛多糖对肝纤维化大鼠TGF-β1、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达的影响

目的探讨金钗石斛多糖(DNP)对肝纤维化(HF)大鼠肝组织转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法SD大鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.2 mg/kg),扶正化瘀组(0.415 g/kg),DNP低、中、高剂量组(5、10、20 g/kg),采用50%四氯化碳腹腔注射和30%乙醇灌胃诱导大鼠HF模型,造模8 w后,给予相应药物(10 ml/kg)进行灌胃,每日1次,给药4 w,正常组、模型组灌胃生理盐水。苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色观察HF程度;免疫组化法检测肝组织TGF-β1、α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达;荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果与正常组比较,模型组明显纤维化(P<0.01),TGF-β1、α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达明显升高(P<0.01),Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达亦明显升高(P<0.01);与模型组比较,DNP各组肝纤维化程度均有所减轻(P<0.01),DNP降低TGF-β1、α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达(P<0.01),DNP降低Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达(P<0.01)。结论DNP有抗纤维化作用,其机制可能与下调TGF-β1、α-SMA、Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白表达,降低Ⅰ、Ⅲ胶原mRNA表达有关。