酸敏感离子通道3在胃食管反流大鼠中的表达和意义

目的检测酸敏感离子通道3(ASIC3)在胃食管反流大鼠食管黏膜及背根神经节(DRG)中的表达变化,探讨其在胃食管反流病(GERD)发病中的作用。方法将Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为实验组(G组)和对照组(S组)。实验组采用限制幽门及结扎胃底方法建立GERD大鼠模型。于造模后15 d处死两组大鼠,通过HE染色对大鼠食管黏膜进行组织病理学检测,通过蛋白质印迹法(Western blotting)和实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠食管黏膜及DRG中ASIC3蛋白及mRNA表达变化。结果HE染色显示G组大鼠食管黏膜慢性炎症改变,S组大鼠食管黏膜无异常;Western blotting显示G组大鼠DRG中ASIC3蛋白表达高于S组(6.75±0.74 vs 5.07±0.72)(P0.05),食管黏膜中ASIC3蛋白表达高于S组(8.04±0.67 vs 7.31±0.740)(P0.05);RT-PCR同样显示,G组大鼠DRG中ASIC3 mRNA表达高于S组(0.00030±0.00003 vs 0.00013±0.00002)(P0.05),食管黏膜中ASIC3 mRNA表达高于S组(0.01073±0.00231 vs 0.00088±0.0007)(P0.05)。结论 ASIC3在DRG及食管黏膜上表达上调可能是导致GERD食管内脏高敏感的原因之一。     

miR-144在大鼠反流性食管炎中的作用和机制

[目的]探讨miR-144在反流性食管炎病变中的作用和机制。[方法]取45只SD雄性大鼠随机分为假手术对照组(简称对照组)、胃食管反流病组(简称GERD组)、胃食管反流病miR-144抑制剂治疗组(简称治疗组),每组15只。GERD组、治疗组大鼠胃结扎联合幽门限制法建立胃食管反流病模型;术后第1、2、3天,对照组、GERD组分别尾静脉注射0.9%氯化钠溶液1ml,治疗组分别尾静脉注射miR-144antagomir 5OD。造模第14天处死各组大鼠,肉眼观察食管黏膜损伤情况,苏木素-伊红(HE)染色观察食管黏膜的病理改变,免疫组化法检测食管黏膜核因子E2相关因子(Nrf2)、基质金属蛋白酶3(MMP3)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、CD68、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达,并对其表达进行软件定量分析,计算平均吸光度。[结果]GERD组、治疗组大鼠食管黏膜可见反流性食管炎改变,治疗组重度反流性食管炎比率为15.38%(2/13),较GERD组46.15%(6/13)明显降低(P0.05)。治疗组食管黏膜Nrf2表达明显高于GERD组(P0.05),MMP3、MMP9、CD68、iNOS的表达均低于GERD组(P0.05)。[结论]miR-144抑制剂通过增加食管黏膜Nrf2的表达,减轻炎症反应及氧化应激程度,保护食管黏膜屏障功能,从而减轻反流导致的食管黏膜损伤。     

胃食管反流病与分泌性中耳炎的关系研究及临床意义分析

[目的]探讨胃食管反流病与分泌性中耳炎的关系及临床意义。[方法]选择2010年6月-2015年1月来我院就诊的70例胃食管反流病（GERD）合并分泌性中耳炎患者为研究对象,作为观察组;另选择同期在本院治疗的50例分泌性中耳炎患者为对照组。2组患者均检测pH值、胆汁酸,并进行24h食管pH监测,记录酸反流次数、反流≥5min次数、pH〈4的时间并进行比较;检测2组患者鼓室积液中胃蛋白酶含量、表达阳性率并进行比较。[结果]GERD组的pH值明显小于对照组（P〈0.05）,GERD组的胆汁酸含量明显高于对照组（P〈0.05）;GERD组鼓室积液中胃蛋白酶水平显著高于对照组（P〈0.05）,GERD组胃蛋白酶阳性表达率38.57%显著高于对照组4.00%（χ2=19.022,P〈0.05）;GERD组患者治疗后酸反流次数、反流≥5min次数、pH〈4的时间均比治疗前显著性降低（P〈0.05）,GERD组患者治疗后鼓室积液中胃蛋白酶水平显著低于治疗前水平（P〈0.05）,GERD组患者治疗后胃蛋白酶阳性表达率为22.86%显著低于治疗前38.57%（χ2=4.0614,P〈0.05）。[结论]GERD与分泌性中耳炎的发病机制可能有关,胃十二指肠中的内容物可能因反流进入鼻咽、鼓室内,引发分泌性中耳炎,提示通过治疗GERD可能改善分泌性中耳炎。     

GERD治疗失败病因研究

目的 研究分析部分GERD经临床常规抑酸治疗失败的原因，为临床处理难治性GERD提供理论依据。方法 16例难治性GERD患者（R组）及16例初诊为GERD的患者（P组），行内镜及病理组织学检查，^14C呼气试验检测HP，以便携式PH及胆反流监测仪24小时同步监测食管下端PH及胆反流情况。结果 R组与P组间食管炎严重程度差异有显著性；胃内Hp检出率R组显著低于P组；24小时PH及胆反流监测结果显示；R组食管酸暴露时间与P组比较差异无显著性，而胆红素吸收值≥0.14的总时间百分比R组较P组显著升高，R组混合反流、单纯胆反流与P组差异有显著性；R组反流事件以夜间明显。结论 1.GERD合并严重食管炎，尤其是Barrett食管及出现并发症是GERD治疗困难的原因。2.难治性GERD存在严重DGER，混合反流加重食管损伤，而单纯胆反流及夜间反流可能造成晨起时服用PPI治疗失败。3.HP感染及酸反流可能不是GERD治疗失败的直接原因。4.少数GERD患者症状控制失败，但PH及胆反流监测结果正常，必须对疾病重新作出诊断。     

食管动力在咽喉反流发生中的作用

目的:探讨食管动力在咽喉反流发生过程中的作用. 方法:对怀疑由胃食管反流引起的22 例反流性咽喉炎患者(LPR 组)和存在典型食管反流症状(反酸烧心)却没有咽喉炎症状的23 例胃食管反流病患者(GERD 组)进行食管压力测定和24 h 食管pH 监测. 结果:LPR 组的食管上括约肌压力(UESP) 和距食管下括约肌(LES)8 cm 处的食管收缩力明显低于GERD 组(41.23±19.61 mmHg vs 55.82 ±20.51 mmHg;58.77±30.84 mmHg vs 77.40 ±36.12 mmHg,P = 0.009,0.035),2 组的食管上括约肌长度(UESL) 、食管下括约肌长度(LESL) 、食管下括约肌压力(LESP) 和食管其余各段(距LES 3 、13 、18 cm) 的收缩力无明显差异. LPR 组病理性酸反流的发生率明显低于GERD 组(χ2 = 3.979,P = 0.046),差异有统计学意义. 结论:UESP 和食管下段的收缩力在阻止咽喉反流的发生中起重要作用.     

促动力药治疗胃食管反流病的循证评价和进展

胃食管反流病（GERD）系胃内容物反流人食管,引起不适症状和（或）并发症的一种疾病,食管下括约肌（LES）功能障碍和胃排空延迟引起胃内容物反流是GERD的主要发病机制。促动力药可通过改善胃食管动力治疗GERD,主要包括多巴眩受体拮抗剂、5-羟色胺（5-HT）。受体激动剂、1-氨基丁酸B型（GABAB）受体激动剂、5型代谢型谷氨酸受体（mGluR5）、选择性胆囊收缩素（CCK）-A受体拮抗剂、胃动素和5-HB部分激动剂。本文就促动力药治疗GERD的循证评价和进展作一慨述.     

高分辨率食管测压下胃食管反流病吞咽延迟时间与食管动力的相关性研究

目的探讨高分辨率食管测压（HRM）下胃食管反流病（GERD）患者吞咽延迟时间（DL）与食管动力的关系。方法51例行HRM且24h食管pH监测诊断为GERD的患者根据HRM结果是否存在食管异常蠕动分成动力异常组（n=28）和阴性组（n=23）,另选择14例非GERD者行HRM作为对照（对照组）,统计分析各组HRM监测结果。结果动力异常组DL（7．27±1．44）S明显高于阴性组的（6．704±41）S和对照组的（5．86±0．96）2,差异均有统计学意义（P〈0．01）,且阴性组也明显高于对照组（P〈0．01）;动力异常组的远端收缩积分（712．49±703．10）mmHg·s·cm明显低于阴性组的（1285．85±850．83）mmHg·s·cm和对照组的（1109．74±611．70）mmHg·s·cm,差异均有统计学意义（P〈0．01）,而阴性组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;各组间食管下括约肌压力、收缩前沿速度及食管下括约肌处食团内部压力差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论HRM下DL的延长与GERD患者食管蠕动减弱明显相关,GERD患者表现为更长的DL,证明食管动力的改变是GERD发生发展的重要环节。     

不同亚型胃食管反流病食管黏膜下层炎症因子变化特点研究

目的分析3种亚型胃食管反流病患者与对照组食管黏膜的组织变化和局部IL-4、IL- 6表达,探讨Th2型炎症因子在胃食管反流病发生发展中的作用。 方法选取2016年12月至2017年12月新疆维吾尔自治区人民医院69例患者临床资料,根据Gerd Q评分和内镜结果将所有入选研究者分为Barrett食管（BE）、糜烂性食管炎（EE）、非糜烂性反流病（NERD）和对照4组,利用食管24 h pH监测法评价胃食管反流病（GERD）患者食管酸暴露及反流特点;通过食管组织HE染色进行组织病理学评分,使用免疫组化法和酶联免疫吸附剂测定法检测食管局部及血清中IL-4、IL-6表达情况。 结果食管24 h pH监测结果中,3亚组间DeMeester指数、弱酸反流次数、反流总事件数比较,差异均无统计学意义（P均>0.05）,NERD组酸反流次数较其余2组低,差异有统计学意义（P均<0.05）;4组样本食管黏膜组织病理学评分中发现,BE组、EE组与其余2组相比均明显升高,差异有统计学意义（P均<0.05）,BE组与EE组评分之间亦有显著差异（P<0.05）,NERD组与对照组间差异不明显;IL-4在4组食管标本中均有不同程度表达,但4组间IL-4阳性率的比较并无显著差异（P均>0.05）;IL-6在NERD组和对照组表达量较低甚至不表达,EE组IL-6阳性率明显高于对照组（P<0.05 ）,但与NERD组间无显著差异,BE组阳性率与对照组和NERD组之间均有明显差异（P均<0.05 ）。 结论GERD食管黏膜上皮组织学炎症等级随食管炎的恶化而升高,其中NERD的食管组织学已出现炎性化趋势,但尚不足以与正常食管区别;IL-4在不同亚型GERD食管黏膜组织中的表达差异不及IL-6显著。     

多次食管酸灌注对哮喘小鼠气道TRPV1受体及炎症反应的影响

目的观察多次食管酸灌注对哮喘小鼠气道瞬时感受器电位香草酸受体-1(Transient receptor potential vanilloid-1,TRPV1)受体的影响。方法 60只雄性BALB/c小鼠随机分成6组(正常组、灌盐组、灌酸组、哮喘组、哮喘灌盐组、哮喘灌酸组),用OVA致敏和激发的方法建立哮喘模型,用食管下段盐酸灌注建立胃食管反流(gastroesophageal reflux,GER)模型,末次抗原激发后24小时处死小鼠,HE染色观察小鼠食道及肺组织病理改变;免疫组化及荧光定量PCR检测TRPV1受体蛋白及mRNA在小鼠肺组织中的表达及分布情况。结果与正常组与灌盐组比较,灌酸组、哮喘组小鼠肺部均表现出明显的炎症反应,气道上TRPV1表达上调,尤其是哮喘灌酸组表现明显,与其他组相比有显著差异性(P0.001)。结论多次食管酸灌注可明显上调哮喘小鼠TRPV1受体的表达,推测TRPV1受体的激活可能参与了胃食管反流引起哮喘发生发展的发病机制。     

肥大细胞和蛋白酶激活受体-2表达在胃食管反流病中的意义

背景:既往研究显示食管黏膜暴露于酸或胆汁引起的肥大细胞(MC)脱颗粒释放炎症介质以及蛋白酶激活受体-2(PAR-2)相关通路参与了胃食管反流病(GERD)的发病机制。人MC上可能存在PAR-2,但尚未见两者在GERD中关系的报道。目的:研究GERD患者食管黏膜上皮中的MC数量和PAR-2表达情况以及其间的相关性,明确两者在GERD发病中的意义。方法:以免疫组化方法检测30例糜烂性食管炎(EE)、32例非糜烂性反流病(NERD)以及20例正常对照者食管黏膜上皮中的MC数量和PAR-2表达。结果:EE组和NERD组类胰蛋白酶阳性MC数量和PAR-2表达强度均明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01),EE组与NERD组间差异无统计学意义。EE组和NERD组中的MC数量均与PAR-2免疫组化评分呈正相关(r=0.875,P<0.01;r=0.884,P<0.01)。结论:GERD患者食管黏膜上皮中的MC数量增多、PAR-2表达上调且两者呈正相关。推测MC表面的PAR-2活化可激活MC脱颗粒,而MC释放的类胰蛋白酶又可激活PAR-2,两者共同参与了GERD的发病机制。     

胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血及肝组织内源性大麻素系统的变化

目的研究胰岛素抵抗(IR)的慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血及肝组织内源性大麻素系统的变化。方法采用高效液相色谱-质谱联用技术检测CHC患者和CHC合并IR患者外周血内源性大麻素花生四烯酸乙醇胺(AEA)和花生四烯酰甘油(2-AG)水平,应用RT-PCR及Western印迹检测肝组织大麻素受体1(CB1R)及脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)的表达,数据行t检验。结果与CHC患者相比,CHC合并IR患者外周血AEA水平升高[(6.80±1.70)pmol/mL比(3.88±0.63)pmol/mL,t=8.053,P0.01];肝组织CB1R mRNA水平(1.7±0.4比1.0±0.2,t=4.696,P0.01)和CB1R蛋白水平(0.8±0.2比0.4±0.1,t=5.367,P0.01)增加;FAAH mRNA水平(0.5±0.1比1.0±0.3,t=4.743,P0.01)和FAAH蛋白水平(0.5±0.1比0.8±0.3,t=2.846,P0.01)下降。与胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)4的患者相比,HOMA-IR指数≥4的患者AEA水平升高[(7.53±1.85)pmol/mL比(5.56±1.40)pmol/mL(t=2.986,P0.05)];肝组织CB1 mRNA水平(2.3±0.65比1.4±0.35,t=2.986,P0.05)和CB1R蛋白水平(1.2±0.3比0.9±0.2,t=2.038,P0.05)升高,FAAH mRNA水平(0.3±0.08比0.6±0.15,t=4.076,P0.01)和FAAH蛋白水平(0.2±0.05比0.4±0.1,t=3.464,P0.05)下降。结论随着IR程度加重,CHC患者外周血AEA水平升高;肝组织CB1R表达增加而FAAH表达减少。     

人参皂甙Rbl对阿霉素心力衰竭大鼠心肌细胞Toll样受体的影响

目的：探讨人参皂甙Rbl （Gs-Rb1）减轻阿霉素所致的慢性心力衰竭（CHF）效应是否与抑制 Toll样受体（TLRs）有关。方法：阿霉素慢性心力衰竭（CHF）大鼠随机分为阿霉素组（15例）和Gs-Rbl组（70 mg/kg · d ,17例）,另设正常对照组（10例）。乳鼠心肌细胞亦随机分为对照组、阿霉素组（1μmol/L ）和 Gs-Rbl组（1μmol/L阿霉素＋200μmol/L Gs-Rbl）。干预完毕后,评定心脏超声, Toll样受体2和 Toll样受体4蛋白和基因。结果：（1）体内、体外研究均显示,阿霉素组TLR2蛋白和mRNA表达较对照组显著升高, Gs-Rbl组TLR2蛋白[（0.593±0.018/0.344±0.024）比（0.975±0.022/0.564±0.031）]和mRNA [（0.349±0.015/0.401±0.021）比（0.576±0.029/0.853±0.043）]表达较阿霉素组显著下降, P均＜0.01;（2）不管是体内抑或是体外研究,阿霉素组TLR4蛋白和mRNA表达较对照组显著升高, Gs-Rbl组 TLR4蛋白[（0.371±0.013/0.254±0.027）比（0.654±0.032/0.519±0.013）]和mRNA [（1.140±0.021/0.503±0.022）比（1.602±0.013/0.838±0.021）]表达较阿霉素组显著下降, P均＜0.01。结论：阿霉素可能通过TLR2和TLR4促发慢性心力衰竭进程,人参皂甙Rbl改善阿霉素慢性心力衰竭效应与抑制T L R2和T L R4有关。     

阿托伐他汀对糖基化白蛋白诱导的大鼠肾脏病变的保护作用

目的观察阿托伐他汀能否改善牛血清糖基化白蛋白（GBA）诱导的肾脏病变。方法健康雄性SD大鼠40只（体重230～250g）,采用随机数字表法分为正常对照组（给予普通饲料）、高脂组（仅给予高脂饲料）、GBA组（腹腔注射GBA40mg·kg-1·d-1,并给予高脂饲料）、GBA＋阿托伐他汀组（腹腔注射GBA40mg·kg-1·d-1,阿托伐他汀20mg·kg-1·d-1灌胃,并给予高脂饲料）,每组各10只。24周后酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测血清糖基化终末产物水平,采用实时定量聚合酶链反应（PCR）法测定大鼠肾组织糖基化终末产物受体（RAGE）mRNA表达,采用免疫组化法检测大鼠肾组织中S100（一种糖基化终末产物）、RAGE蛋白的表达,采用HE染色进行肾脏病理观察,同时测量肾小球及系膜区面积。应用t检验和方差分析进行数据分析。结果实验24周4组大鼠之间血糖、血清胆固醇和血肌酐水平差异均无统计学意义（F=1．780、2．012、2．075,均P〉0．05）。与高脂组比较,GBA组的大鼠血清糖基化终末产物水平明显升高[（72±4）比（50±5）μg／L,t=3．445,P〈0．05],肾脏中肾小球肥大,系膜区基质增生明显[肾小球面积分别为（9505±326）、（7920±518）μm2,t=2．587,P〈0．05;系膜区面积分别为（5752±316）、（1898±259）μm2,t=9．435,P〈0．05],肾脏RAGEmRNA表达明显升高（9．7±1．0比2．4±0．5,t：6．629,P〈0．05）,同时肾脏S100、RAGE蛋白表达增加。与GBA组比较,GBA＋阿托伐他汀组的大鼠血清糖基化终末产物水平明显降低[（53±3）比（72±4）μg／L,t=3．298,P〈0．05],肾脏中肾小球肥大明显好转、系膜基质增生程度减轻[肾小球面积分别为（7276±326）、（9505±326）μm2,t=4．834,P〈0．05;系膜区面积分别为（2436±316）、（5752±316）μm2,t=7．418,P〈0．05],肾脏RAGEmRNA表达水平下降（3．3±0．8比9．7±1．0,t=4．978,P〈0．05）,同时肾脏S100、RAGE蛋白表达减少。结论阿托伐他汀可通过降低血清糖基化终末产物水平、下调肾脏RAGE的表达来减轻糖基化终末产物诱导的肾脏病变。     

sCD163和铁蛋白在HBV相关慢加急性肝功能衰竭中的表达及其临床意义

目的：研究 HBV相关慢加急性肝功能衰竭（HBV-ACLF）患者血浆中可溶性 CD163（sCD163）和铁蛋白水平,分析其与患者病情、预后的关系。方法选择HBV-ACLF患者30例、乙型肝炎肝硬化25例、慢性乙型肝炎18例以及健康对照15例,采用ELISA方法检测血浆中 sCD163和铁蛋白水平。结果 HBV-ACLF 组血浆中 sCD163和铁蛋白水平均明显高于肝硬化组、慢性乙型肝炎组及健康对照组[sCD163：（123±43）比（76±33）、（58±19）、（35±15）ng/mL,均P＜0．05;铁蛋白：（2714±1896）比（505±722）、（833±801）、（106±58）ng/mL,均P＜0．05]。肝衰竭发展到晚期时sCD163和铁蛋白水平均较早、中期明显增高[sCD163：（162±44）比（104±40）、（108±24）ng/mL,均P＜0．05）;铁蛋白：（4154±2122）比（1746±1047）、（2416±1713）ng/mL,均P＜0．05]。HBV-ACLF死亡组中sCD163和铁蛋白水平均高于存活组[sCD163：（140±42）比（101±36）mg/mL,（t＝-2．719,P＝0．01）;铁蛋白：（3568±2007）比（1598±957）ng/mL,（t＝-3．547,P＝0．001）]。经受试者工作特征曲线（ROC）分析,sCD163、铁蛋白评估 HBV-ACLF患者3个月内死亡所对应的曲线下面积（AUC）分别为0．803、0．844。结论 sCD163和铁蛋白可作为 HBV-ACLF病情严重程度及预后评估的重要参考指标。     

长期吸入糖皮质激素对慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰Toll样受体2表达的影响

目的:评价长期吸入糖皮质激素的治疗对重度慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者诱导痰巨噬细胞Toll样受体2(TLR2)的表达是否产生影响。方法:收集2010年3月到2011年8月上海交通大学医学院附属瑞金医院呼吸科门诊就诊的有长期吸烟史的男性稳定期重度COPD患者,根据是否长期使用吸入型激素(≥500μg/d丙酸氟替卡松,疗程≥1年)分为使用吸入激素组和未使用吸入激素组。通过流式细胞检测技术测定2组患者诱导痰巨噬细胞表面和细胞内TLR2的表达,并将痰细胞抽提mRNA转录cDNA后进行实时定量PCR检测,检测TLR2和肿瘤坏死因子(TNF)αmRNA的表达情况。比较2组间的差异。结果:诱导痰巨噬细胞细胞表面TLR2的表达在规律使用吸入激素组显著低于未用吸入激素组(5.35±1.67比12.81±4.89,P=0.019)。实时定量PCR检测TLR2 mRNA、炎症介质TNF-αmRNA水平在2组患者间的差异无显著意义。而TLR2细胞内与细胞表面表达水平之间(r=0.654,P=0.017),TNF-αmRNA与TLR2细胞表面蛋白表达水平之间(r=0.716,P=0.012)均有显著相关性。结论:长期吸入糖皮质激素治疗重度COPD可能会导致呼吸道局部TLR2的表达下降,这可能是患者局部抗感染免疫降低的原因之一。     

吡格列酮对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠肝组织蛋白酪氨酸磷酸酶-1B及胰岛素受体底物-2表达的影响

目的 观察毗格列酮对高脂饮食诱导的IR大鼠肝组织蛋白酪氨酸磷酸酶-1B（PTP-1B）及胰岛素受体底物-2（IRS-2）表达的影响。方法40只SD大鼠随机分为高脂饮食（HF）组30只和正常对照（Nc）组10只,其中HF组又分为高脂对照（HFN）亚组和毗格列酮（HFP）亚组,每组各15只。喂养12周后,HFP亚组给予吡格列酮灌胃2周,并测定大鼠体重、FPG、Fins、TG、TC、IS。应用免疫组化、免疫印迹、免疫沉淀技术检测肝组织PTP-1B及IRS-2的表达。结果免疫组化：HFN亚组PTP-1B表达较NC组增高（P〈0．01）,HFP亚组较HFN亚组降低（P〈0．01）;免疫印迹：HFN、HFP亚组PTP-1B表达均高于NC组（P〈0．01或P〈0．05）,且HFP亚组低于HFN亚组（P〈0．01）;免疫沉淀：HFN亚组IRS-2磷酸化程度较NC组降低（P〈0．01）,HFP亚组较HFN亚组增高（P〈0．05）。结论吡格列酮能够改善IR,其作用机制可能与抑制PTP-1B表达,从而使胰岛素信号转导分子IRS-2表达增强有关。     

兔右房快速起搏后交感神经重构的动态变化

目的:动态观察快速起搏右房后心房肌神经生长因子(NGF)和酪氨酸羟化酶(TH)的动态表达,从分子水平揭示心房颤动(房颤)交感神经动态重构的规律。方法:从快速起搏后的兔右心房和左心房取材,通过免疫组化并结合计算机图像处理技术对心肌中NGF蛋白表达及交感神经支配进行研究。结果:与假手术组比较,快速起搏后4h,NGF蛋白的表达在右心房[(412.75±7.49)μm2/mm2∶(563.87±15.53)μm2/mm2]和左心房[(275.87±16.74)μm2/mm2∶(449.75±17.58)μm2/mm2]心肌中明显增加(P0.05);TH阳性神经纤维平均密度[右心房(72.00±8.02)μm2/mm2∶(83.87±7.18)μm2/mm2,左心房(58.00±10.65)μm2/mm2∶(70.50±6.65)μm2/mm2,P0.05]均显著增加;且右心房和左心房中交感神经支配与NGF蛋白的表达呈正相关(r=0.53,P0.05)。快速起搏后12h,兔心房中NGF蛋白的表达[右心房(869.50±17.28)μm2/mm2,左心房(830.75±11.73)μm2/mm2]与TH阳性神经纤维平均密度[右心房(120.87±8.57)μm2/mm2,左心房(100.25±10.25)μm2/mm2]均明显高于假手术组及快速起搏后4h组(P0.05~0.01),且二者呈正相关(r=0.69,P0.05)。快速起搏后24h,NGF蛋白表达[右心房(1115.7±92.35)μm2/mm2,左心房(949.12±43.20)μm2/mm2]及TH阳性神经纤维平均密度[右心房(158.12±11.28)μm2/mm2,左心房(121.12±14.71)μm2/mm2]均明显高于快速起搏后4h、12h(P0.01~0.001)。结论:快速起搏后心肌中神经生长因子蛋白呈动态表达,并与交感神经支配相关,提示神经生长因子可能在心肌局部发挥神经营养作用,进而参与交感神经的重构。     

糖尿病大鼠肺组织血管紧张素Ⅱ1型受体表达及其对转化生长因子β1的影响

目的 探讨糖尿病（DM）大鼠肺组织血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）的变化及其对转化生子因子β1（TGF-β1）表达的影响.方法 高糖高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素（STZ）鼠尾静脉注射建立DM大鼠模型20只,随机数字表法分为DM组10只和氯沙坦干预组（LST组）10只,LST组予以氯沙坦30 mg·kg＾-1·d＾-1灌胃12周,设正常对照组（NC组）10只.免疫组织化学检测各组大鼠肺组织AT1R表达,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blotting检测比较各组肺组织AT1R、TGF-β1表达.采用单因素方差分析比较组间差异,两两比较采用LSD检验,组间比较采用单因素方差分析.结果 与NC组相比,DM组大鼠肺组织AT1R、TGF-β1表达显著升高（AT1R mRNA：0.04±0.03比0.29±0.15,t=5.252; AT1R蛋白：0.62±0.05比0.77±0.05,t=6.736;TGF-β1 mRNA：0.10±0.05比0.73±0.16,t=12.377;TGF-β1蛋白：0.47±0.05比0.70±0.05,t=10.66;均P＜0.05）,LST组大鼠肺组织AT1R、TGF-β1表达显著低于DM组（AT1R mRNA：0.292±0.148比0.068±0.024,t=4.741;AT1R蛋白：0.77±0.05比0.63 ±0.04,t=7.396;TGF-β1 mRNA：0.74±0.16比0.19±0.09,t=9.563;TGF-β1蛋白：0.702±0.047比0.439±0.018,t=16.601;均P＜0.05）.结论 DM大鼠肺组织可能存在局部肾素-血管紧张素系统组分的激活,促进了TGF-β1表达的增加,可能参与了肺细胞外基质的改变.     

Chemerin过表达致3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗减少

目的 应用重组慢病毒构建3T3-L1脂肪细胞chemerin过表达模型并进一步探讨其对糖代谢的影响及可能机制.方法 构建鼠chemerin过表达重组慢病毒,并设对照慢病毒,感染3T3-L1细胞,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）法检测转染后chemerin表达水平;应用胰岛素、3-异丁基1-甲基黄嘌呤、地塞米松诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,油红O染色鉴定;诱导分化第8天加入慢病毒重组体,继续培养5d,葡萄糖氧化酶法检测各组葡萄糖消耗;RT-PCR法检测各组胰岛素受体底物1（IRS1）、胰岛素受体底物2（IRS2）、蛋白激酶B1 （Akt1）、叉头状转录因子O1 （FoxO1）基因表达水平;Western-blotting检测chemerin、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（pAkt）、FoxO1、磷酸化叉头状转录因子O1 （pFoxO1）蛋白水平.两组数据比较应用t检验.结果 Chemerin过表达慢病毒感染3T3-L1细胞72 h后细胞中可见红色荧光,RT-PCR结果显示：过表达组与空载对照组相比chemerin基因表达明显增加（分别为3.04±0.19比1.01±0.11,t=15.65,P＜0.05）;chemerin过表达组葡萄糖消耗减少[分别为（3.30± 1.44）比（6.07±1.15） mmol/L,t=-0.35,P＜0.05];RT-PCR结果显示：IRS1、IRS2基因水平无明显变化（均P＞0.05）,Akt1基因表达下降（分别为0.76±0.08比1.07±0.15,t=-3.11,P＜0.05）,FoxO1基因表达上调（分别为1.53±0.30与1.03±0.21,t=2.34,P＜0.05）.Western-blotting结果显示：Chemerin过表达后chemerin蛋白水平增加（相对表达量分别为1.08±0.06比0.72±0.03,t=-10.12;P＜0.05）;Akt、pAkt蛋白水平均降低（分别为0.74±0.21比1.23±0.20,0.58±0.17比0.92±0.07;t=2.81、3.17,均P＜0.05）,FoxO1蛋白水平升高（分别为1.04±0.09比0.76±0.14,t=-2.91,P＜0.05）、pFoxO1蛋白水平降低（分别为0.61±0.13比0.89±0.10,t=2.93,P＜0.05）.结论 Chemerin可能通过下调Akt1 mRNA使3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗减少.