细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15免疫小鼠LncRNA 031520表达的研究北大核心CSCD

目的探讨长链非编码RNA031520(LncRNA 031520)分子在细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15诱导小鼠免疫保护的表达分析。方法36只雌性BALB/c小鼠分为PBS对照组、弗氏佐剂组和ZW-15免疫组,12只/组。PBS对照组、弗氏佐剂组分别皮下多点注射PBS溶液和完全/不完全弗氏佐剂100μl/只,ZW-15免疫组注射重组抗原100μl/只(10μg/只)。弗氏佐剂组和ZW-15免疫组初次免疫使用完全弗氏佐剂,加强免疫使用不完全弗氏佐剂。共免疫3次,初次免疫后的2次加强免疫间隔时间为两周。免疫小鼠经麻醉取血,分离血清。采用ELISA法检测特异IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b抗体水平。无菌取脾脏,分离淋巴细胞采用流式细胞术分选CD4^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞及B淋巴细胞群;利用qRT-PCR检测CD4^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞、B淋巴细胞及总淋巴细胞中LncRNA 031520及内参GAPDH的表达;利用流式细胞术检测脾脏CD4^(+)T淋巴细胞中IFN-γ、IL-4的表达。使用SPSS 17.0统计软件和Graphpad Prism 8.0绘图软件对实验数据进行统计分析。结果小鼠经亲肌肉重组抗原ZW-15免疫后血清特异IgG、IgG1、IgG2a及IgG2b抗体水平均升高,且均显著高于PBS组、弗氏佐剂对照组,差异均有统计学意义(P<0.001)。LncRNA 031520在ZW-15免疫组CD4^(+)T淋巴细胞、总淋巴细胞中相对表达量显著高于PBS对照组和弗氏佐剂对照组(P<0.01),在ZW-15免疫组B淋巴细胞及CD8^(+)T淋巴细胞中相对表达量与PBS对照组及弗氏佐剂对照组相比差异均无统计学意义(均P>0.05)。免疫组小鼠脾脏淋巴细胞Th1亚群标志分子IFN-γ表达量为(19.07±3.44)%,显著高于PBS对照组(8.03±2.67)%和弗氏佐剂对照组(9.37±1.25)%(P<0.05),Th2亚群标志分子IL-4表达量为(0.79±0.02)%,显著高于PBS对照组(0.44±0.13)%和弗氏佐剂对照组(0.50±0.15)%(P<0.05)。结论LncRNA 031520在细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15免疫小鼠淋巴细胞中表达上调,可能在亲肌肉抗原抵御细粒棘球蚴感染中发挥免疫保护作用。     

细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15免疫小鼠LncRNA 031520表达的研究

目的探讨长链非编码RNA031520(LncRNA 031520)分子在细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15诱导小鼠免疫保护的表达分析。方法 36只雌性BALB/c小鼠分为PBS对照组、弗氏佐剂组和ZW-15免疫组,12只/组。PBS对照组、弗氏佐剂组分别皮下多点注射PBS溶液和完全/不完全弗氏佐剂100μl/只,ZW-15免疫组注射重组抗原100μl/只(10μg/只)。弗氏佐剂组和ZW-15免疫组初次免疫使用完全弗氏佐剂,加强免疫使用不完全弗氏佐剂。共免疫3次,初次免疫后的2次加强免疫间隔时间为两周。免疫小鼠经麻醉取血,分离血清。采用ELISA法检测特异IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b抗体水平。无菌取脾脏,分离淋巴细胞采用流式细胞术分选CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞及B淋巴细胞群;利用qRT-PCR检测CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞、B淋巴细胞及总淋巴细胞中LncRNA 031520及内参GAPDH的表达;利用流式细胞术检测脾脏CD4~+T淋巴细胞中IFN-γ、IL-4的表达。使用SPSS 17.0统计软件和Graphpad Prism 8.0绘图软件对实验数据进行统计分析。结果小鼠经亲肌肉重组抗原ZW-15免疫后血清特异IgG、IgG1、IgG2a及IgG2b抗体水平均升高,且均显著高于PBS组、弗氏佐剂对照组,差异均有统计学意义(P0.001)。LncRNA 031520在ZW-15免疫组CD4~+T淋巴细胞、总淋巴细胞中相对表达量显著高于PBS对照组和弗氏佐剂对照组(P0.01),在ZW-15免疫组B淋巴细胞及CD8~+T淋巴细胞中相对表达量与PBS对照组及弗氏佐剂对照组相比差异均无统计学意义(均P0.05)。免疫组小鼠脾脏淋巴细胞Th1亚群标志分子IFN-γ表达量为(19.07±3.44)%,显著高于PBS对照组(8.03±2.67)%和弗氏佐剂对照组(9.37±1.25)%(P0.05),Th2亚群标志分子IL-4表达量为(0.79±0.02)%,显著高于PBS对照组(0.44±0.13)%和弗氏佐剂对照组(0.50±0.15)%(P0.05)。结论 LncRNA 031520在细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15免疫小鼠淋巴细胞中表达上调,可能在亲肌肉抗原抵御细粒棘球蚴感染中发挥免疫保护作用。     

肺结核患者外周血CD4~+T淋巴细胞凋亡与细胞因子相关性及临床意义研究

目的探讨肺结核患者外周血CD4+T淋巴细胞凋亡与血清IL-4、IL-6、TGF-β的相关性及其临床意义。方法分离结核病患者和健康者外周血单个核细胞,标记后用流式细胞仪测定CD4+T淋巴细胞凋亡率;采用酶联免疫吸附试验测定42例肺结核患者及28例健康人群血清IL-4、IL-6、TGF-β水平。结果结核病患者外周血CD4+T淋巴细胞凋亡率(15.8820±4.6500)显著高于对照组(7.9389±4.16564)(t=7.491,P<0.01),血清IL-4水平(0.6219±0.78565)较对照组(0.2120±0.07367)显著升高(t=2.732,P<0.05)。肺结核患者中涂阳组IL-6水平(0.0602±0.01833)较涂阴组(0.0905±0.05023)显著升高(t=-2.296,P<0.05),TGF-β水平复治组(0.1128±0.04704)较初治组(0.0748±0.01659)显著升高(t=-3.019,P<0.05)。外周血CD4+T淋巴细胞凋亡率与IL-4水平呈正相关(r=0.366,P<0.05);血清IL-6的含量与TGF-β的含量呈正相关(r=0.829,P<0.01)。结论结核病患者CD4+T淋巴细胞凋亡率显著增加,可能与肺结核感染免疫有关;IL-4、IL-6和TGF-β是抗结核感染免疫的重要调节因子,其血清水平可作为监测病情活动和转归的重要指标。     

冠心病外周血IL-7表达变化对机体免疫应答的影响及可能机制

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)外周血白细胞介素(IL)-7表达变化对机体免疫应答的影响及可能机制。方法选取稳定型心绞痛患者44例、不稳定型心绞痛患者78例、急性心肌梗死患者42例;另取体检的健康人群40例为正常对照组。流式细胞术检测T细胞表面黏蛋白结构域的分子(Tim)3水平,酶联免疫吸附试验检测血清IL-7水平。体外培养外周血单核细胞,重组IL-7刺激12 h后检测T细胞表面Tim3水平;通过Western印迹法检测IL-7信号通路相关分子的表达水平。结果稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组外周血Tim3阳性细胞占CD4^+T细胞的比例明显高于正常对照组,急性心肌梗死组外周血Tim3阳性细胞占CD4^+T细胞的比例明显高于稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组(P<0.05)。不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组外周血Tim3阳性细胞占CD8+T细胞的比例明显高于正常对照组,急性心肌梗死组外周血Tim3阳性细胞占CD8+T细胞的比例明显高于稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组(P<0.05)。急性心肌梗死组血清IL-7水平明显高于正常对照组(P<0.01);稳定型心绞痛组和不稳定型心绞痛组血清IL-7水平与正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);血清IL-7浓度与Tim3+CD4^+T、CD8+T细胞比例均无相关性。急性心肌梗死组重组IL-7刺激12 h的CD4^+T细胞表面Tim3表达水平较未刺激者明显升高(P<0.05)。正常对照组、急性心肌梗死组重组IL-7刺激12 h的CD8^+T细胞表面Tim3表达水平较未刺激者明显升高(P<0.05)。重组IL-7刺激后p-STAT-5蛋白相对表达量明显高于未刺激的细胞(P<0.01);重组IL-7刺激后SOCS3蛋白相对表达量明显高于未刺激的细胞(P<0.05)。结论IL-7可上调Tim3表达,在冠心病发生、发展中发挥抑制炎症应答的作用。     

不同免疫状态慢性HBV感染患者的T淋巴细胞及NKG2D表达差异研究

目的探讨慢性HBV感染者在不同免疫状态下的T淋巴细胞及自然杀伤细胞G2D(NKG2D)表达差异。方法根据免疫状态的不同将80例慢性HBV感染患者分为免疫耐受组(28例)、免疫清除组(30例)、低(非)复制组(22例),另选取30名健康体检者作为对照组。对4组研究对象进行外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、NKG2D细胞频率及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素水平检测。结果4组研究对象的CD3^+T淋巴细胞百分比,差异均无统计学意义(P>0.05)。免疫清除组的CD4^+T淋巴细胞、CD4^+/CD8^+、NK细胞百分比分别为(30.14±5.36)%、(1.10±0.33)%、(9.67±4.31)%,均显著低于另外三组,CD8^+T淋巴细胞、NKG2D+/NK细胞百分比分别为(33.56±5.37)%、(12.96±3.42)%,均显著高于另外三组(P<0.05)。免疫耐受组和低(非)复制组的NKG2D^+/NK细胞百分比分别为(3.46±1.15)%和(3.55±1.07)%均显著低于对照组,免疫清除组的NKG2D+/NK细胞百分比显著高于对照组(P<0.05)。免疫清除组的TNF-α、γ干扰素水平分别为(69.62±16.46)ng/L和(69.85±12.30)ng/L,均显著高于免疫耐受组、低(非)复制组及对照组(P<0.05)。免疫耐受组、低(非)复制组及对照组的TNF-α、γ干扰素水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论慢性HBV感染患者在不同免疫状态下,外周血淋巴细胞及NKG2D细胞表达有明显差异,临床可通过测定HBV感染者外周血T淋巴细胞、NKG2D细胞水平来评估患者的免疫状态,指导临床治疗。     

白细胞介素33在肝细胞癌患者中的表达及其对CD8+T淋巴细胞功能的调节作用

目的观察肝细胞癌(HCC)患者外周血白细胞介素33(IL-33)的变化,探讨IL-33对HCC患者CD8⁺T淋巴细胞的调节作用和可能机制。方法选择2019年4月—2020年1月陕西省人民医院收治的44例HCC患者和20例健康对照者为研究对象。采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞(PBMC),酶联免疫吸附试验检测血浆IL-33及其受体肿瘤抑制素2(ST2)的水平,实时定量PCR法检测PBMC中IL-33和ST2 mRNA相对表达量。纯化CD8⁺T淋巴细胞,使用重组IL-33刺激培养,CCK-8法检测细胞增殖,酶联斑点吸附试验检测穿孔素和颗粒酶B分泌,流式细胞术检测程序性死亡受体-1(PD-1)、淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)表达,比较IL-33刺激前后细胞增殖、毒性分子分泌、免疫检查点分子的变化。CD8⁺T淋巴细胞与HepG2细胞共培养,通过检测乳酸脱氢酶表达计算CD8⁺T淋巴细胞诱导HepG2细胞死亡比例,比较IL-33刺激前后CD8⁺T淋巴细胞杀伤功能的变化。计量资料两组间比较采用t检验或配对t检验,相关性分析采用Pearson分析法。结果HCC组血浆IL-33水平低于对照组[(269.80±63.08)pg/mL vs(339.50±64.43)pg/mL,t=4.072,P<0.001],HCC组PBMC中IL-33 mRNA相对表达量低于对照组(1.07±0.14 vs 2.45±0.87,t=10.250,P<0.001)。血浆ST2水平和PBMC中ST2 mRNA相对表达量在HCC组和对照组之间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。CD8⁺T淋巴细胞比例与血浆IL-33、ST2水平均无明显相关性(P值均>0.05)。HCC组CD8⁺T淋巴细胞分泌穿孔素、颗粒酶B的水平均低于对照组(P值均<0.05),而HCC组CD8⁺T淋巴细胞中PD-1、LAG-3、CTLA-4阳性细胞比例均高于对照组(P值均<0.05)。重组IL-33刺激对两组CD8⁺T淋巴细胞增殖和免疫检查点分子表达均无显著影响(P值均>0.05),但可促进穿孔素、颗粒酶B的分泌(P值均<0.05)。HCC组CD8⁺T淋巴细胞杀伤活性较对照组降低(P<0.05),重组IL-33刺激可提升CD8⁺T淋巴细胞杀伤功能,主要表现为诱导HepG2细胞死亡比例升高(P<0.05),IFNγ和TNFα分泌水平增加(P值均<0.05)。结论HCC患者血浆IL-33水平降低。IL-33可通过促进穿孔素和颗粒酶B的分泌增强HCC患者CD8⁺T淋巴细胞杀伤活性,为HCC治疗提供新的靶点。     

ILT3在冠心病患者外周血单核细胞的表达及意义

目的探讨冠心病患者外周血单个核细胞(PBMC)中免疫球蛋白样转录子(ILT)3的表达与临床意义。方法依据临床资料将100例冠心病患者分为稳定型心绞痛(SAP)组45例,急性冠状动脉综合征(ACS)组55例。用流式细胞术(FACS)检测PBMC中ILT3的表达百分比,分离培养各组外周血树突细胞脐周血分离的CD4^+T淋巴细胞混合培养(MLR),用FACS法检测CD4^+CD25^+T百分比和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测混合液中的白细胞介素(IL)-10、干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-β细胞因子含量。结果SAP组与ACS组PBMC中ILT3阳性百分比分别为〔(80.13±2.10)%、(1.83±0.91)%〕,差异有统计学意义(P<0.01)。SAP组CD4^+CD25^+T淋巴细胞百分比〔(89.2±2.3)%〕,较ACS组〔(39.5±5.3)%〕显著升高(P<0.01)。MLR上清液中SAP组较ACS组IL-10浓度明显升高,IFN-γ和TNF-β浓度明显降低,有统计学意义(P<0.01)。结论SAP患者的PBMC中ILT3表达明显升高,能诱导CD4+T淋巴细胞的CD4+CD25+T亚型表达增加,ILT3可能参与维持冠状动脉斑块稳定的免疫抑制。     

滤泡辅助性T细胞在实验性免疫性不育小鼠中的表达

目的检测滤泡辅助性T细胞在实验性免疫性不育小鼠中的表达,探讨滤泡辅助性T(T follicular helper,Tfh)细胞在免疫性不育发病中的作用。方法用同种小鼠精子及完全福氏佐剂免疫BALB/c雄性小鼠获得免疫性不育动物模型,同时设立正常对照组给予生理盐水。流式细胞仪检测免疫性不育小鼠和正常对照小鼠脾脏淋巴细胞中CD4^+CXCR5^+ICOS^+T(Tfh)细胞和CD3^-CD19^+B细胞表达水平,并进行相关性分析。结果人工免疫后的雄性小鼠血清抗精子抗体均为阳性,正常对照小鼠均为阴性。流式分析结果显示,免疫性不育小鼠脾脏淋巴细胞中Tfh细胞和B细胞[分别为(4.15±1.03)%和(8.05±1.97)%]表达水平显著高于对照组[分别为(1.05±0.25)%和(2.81±0.473)%]小鼠(P<0.0001),Tfh细胞与B细胞比例呈显著正相关(r=0.58,P<0.05)。结论滤泡辅助性T细胞和B细胞的增加与免疫性不育的发生有关。     

沙利度胺对系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨沙利度胺(Thd)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的免疫凋节作用.方法 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测Thd对SLE患者外周血T淋巴细胞增殖的影响,用流式细胞术检测T淋巴细胞早期凋亡及CD3~+CD28~+和CD8~+CD152~+的表达,用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测T淋巴细胞白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-a mRNA的表达,采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 在体外,500 μg/ml Thd组CD3~+CD28~+表达为(48±9)%显著低于对照组(57±9)%(P<0.05)、500μg/ml Thd组T淋巴细胞凋亡率为(36±8)%显著高于对照组(23±5)%(P<0.05);100、300、500μg/ml Thd组A_(570nm)值分别为:0.39±0.05、0.34±0.04、0.30±0.03较对照组(0.51±0.07)均有明显下降(P<0.05);100、500 μg/ml Thd组CD8~+CD152~+表达分别为(5.0±0.6)%、(7.8±0.7)%,明显高于对照组(4.2±0.6)%(P<0.05);500μg/ml Thd能抑制IL-6 mRNA的表达,各剂量组均抑制IL-10、TNF-a mRNA表达.结论 Thd可能通过抑制T淋巴细胞增殖、CD28的表达、IL-6、IL-10、TNF-a mRNA的表达和促进T淋巴细胞凋亡、CD152表达来下调SLE患者的免疫反应.     

骨髓源性间充质干细胞联合来氟米特对小鼠T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨骨髓源性间充质干细胞(BMSCs)在体外联合来氟米特(LEF)对小鼠T淋巴细胞的免疫调节作用.方法 直接贴壁筛选法分离培养小鼠BMSCs,流式细胞分析(FCM)鉴定BMSCs的纯度.用EZ-SepTMm Mouse 1X分离异体BALB/c小鼠的脾淋巴细胞,在刀豆球蛋白A(ConA)诱导的同时,先经LEF处理,洗去LEF后,脾淋巴细胞再和BMSCs共培养.分组:A组:脾淋巴细胞;B组:脾淋巴细胞+BMSCs;C组:LEF处理的脾淋巴细胞;D组:LEF处理的脾淋巴细胞+BMSCs.用四甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测各组T淋巴细胞的增殖情况,流式细胞术分析各组T淋巴细胞的活化及凋亡情况,定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组T淋巴细胞的白细胞介素(IL)-2、IL-10基因水平.结果 在体外,BM-SCs处理组(B组)T淋巴细胞的A570 nm值为0.578±0.042,LEF处理组(C组)A570 nm值为0.5024±0.040,两组A570 nm值均显著低于对照组(A组)A570 nm值为0.778±0.035(P<0.01).BMSCs联合LEF组(D组)A570 nm值为0.218±0.033,显著低于BMSCs处理组及LEF处理组(P<0.01). BMSCs联合LEF对CD3+CD69+、CD3+CD28+表达、IL-2基因表达均无明显影响.BMSCs单独或联合LEF组T淋巴细胞凋亡率分别为(2.29±0.32)%、(4.22±0.98)%,较A组T淋巴细胞凋亡率(8.08±1.20)%均明显下降.BMSCs处理组和LEF处理组T淋巴细胞IL-10基因相对表达分别为:0.098±0.039、0.054±0.022明显低于A组(IL-10基因相对表达为1.000)(P<0.01),MSCs联合LEF组IL-10基因相对表达为:0.023±0.015,显著低于BMSCs处理组及LEF处理组(P<0.01).结论 BMSCs联合LEF对小鼠T淋巴细胞有一定程度的协同免疫调节作用.     

原发性胆汁性肝硬化患者雌激素受体α基因多态性对细胞因子漂移的影响

目的 探讨雌激素受体(ER)α基因多态性对女性原发性胆汁淤积性肝硬化(PBC)患者T淋巴细胞亚群细胞因子漂移的影响.方法 以未经治疗的60例女性PBC患者为研究组,性别、年龄匹配的健康体检者52名为对照组进行研究.采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测ER α基因1号内含子PvuⅡ和Xba Ⅰ酶切位点的多态性.流式细胞仪定量检测外周血CD4+、CD8+、CD4+CD25+、CD4+CD28-T淋巴细胞.RT-PCR方法检测外周血单个核细胞肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)-2、干扰素(IFN)v、IL-4、IL-6、IL-10 mRNA的表达.基因型和等位基因频率采用直接基因计数法计算,并进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验与Chi-square x2检验;两组间计量资料采用t或t'检验.结果 女性PBC患者的ER α基因PvuⅡ酶切基因亚型中Pp的阳性率明显高于正常对照组,pp基因亚型的阳性率则明显低于对照组(x2=7.2880,P＜0.05).Xba Ⅰ基因型以及各等位基因频率在女性PBC组与对照组的差异无统计学意义.PBC患者的ppxx基因型的阳性率低于正常对照组,但两组间差异无统计学意义(x2=6.5382,P＞0.05).相对于对照组的33.81%±3.87%,PBC患者T淋巴细胞中CD4+T淋巴细胞比例增高为45.31%±5.26%(t=7.86,P＜0.01),CD8+T淋巴细胞比例由对照组的31.83%±1.73%降低为27.78%±1.43%(t=8.24,P＜0.01).与对照组相比,PBC患者CD4+CD25+T淋巴细胞比例明显降低; CD4+CD28-T淋巴细胞比例则明显升高.PBC患者外周血单个核细胞TNF α、IL-2和IFN γ mRNA表达水平分别为0.59±0.19、0.71±0.29、0.67±0.21,明显高于对照组的0.22±0.13、0.31±0.14、0.27±0.13(t值分别为6.93,5.07,7.01,P值均＜0.01);IL-6 mRNA表达水平为0.45±0.21,高于对照组的0.34±0.16(t=1.84,P＜0.05); IL-4和IL-10 mRNA表达水平组间差异无统计学意义.结论 PvuⅡ基因的Pp基因型是女性PBC的遗传易感基因型,p等位基因是易感基因.PBC患者外`周血以Th1细胞亚群及其细胞因子占优势.ER α基因多态性可作为遗传易感背景影响PBC患者体内T淋巴细胞亚群的偏移及其相关细胞因子的表达.     

HIV/AIDS患者血清IL-18浓度变化与辅助受体CCR5/CXCR4表达的关系研究

目的 研究人类免疫缺陷病毒／获得性免疫缺陷综合征（HIV／AIDS）患者血清白细胞介质（IL）-18浓度的变化，及其与病毒载量、CD4^＋T细胞表面辅助受体CCR5／CXCR4表达的相关性。方法 应用酶联免疫吸附试验（ELISA）对42例HIV／AIDS患者及12例正常对照者的血清IL-18浓度进行定量检测，分析其变化，并对其变化与病毒载量的相关性进行分析。应用流式细胞仪检测全部HIV／AIDS患者CD4^＋ T细胞表面辅助受体CCR5／CXCR4的表达情况，并分析其与病毒载量及血清IL-18浓度变化之间的相关性。结果 42例HIV／AIDS患者血清平均IL-18浓度显著高于正常对照组（P〈0．01），且按美国疾病控制与预防中心（CDC）1993年标准，CDCC期显著高于A期（P〈0．01）。所有患者血清IL-18浓度变化与HIV病毒载量之间呈正相关（P〈0．05），与辅助受体CX-CR4的表达也呈正相关（P〈0．01）。HIV病毒载量与辅助受体CXCR4的表达具有正相关性（P〈0．05）。结论 HIV／AIDS患者体内持续增长的IL-18加剧了其免疫功能的紊乱和低下，IL-18可能与疾病本身的致病机制有关。     

多房棘球蚴感染对小鼠肝脾淋巴细胞及其亚群的影响

目的探讨多房棘球蚴感染对C57BL/6小鼠肝和脾淋巴细胞及其亚群的影响。方法 32只C57BL/6小鼠随机分为4组,每组8只,对照组、低数量组(50个原头节/鼠)、中数量组(500个原头节/鼠)、高数量组(2 000个原头节/鼠),实验组取200μl含不同数量多房棘球蚴原头节的混悬液,采用门静脉注射法建立多房棘球蚴感染小鼠模型,对照组注射等量生理盐水。感染后4周,每组各取4只小鼠,取肝脏组织,常规Masson染色,观察病理变化。剩余4只小鼠取肝脏和脾脏,制备肝、脾细胞悬液,流式细胞术检测肝、脾CD3^+T细胞、B细胞、NK细胞、NKT细胞、CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、CD4^+CD69^+T细胞、CD8^+CD69^+T细胞绝对数以及初始型CD4^+T (CD4^+Tn)细胞、效应记忆性CD4^+T (CD4^+Tem)细胞、初始型CD8^+T (CD8^+Tn)细胞、效应记忆性CD8^+T(CD8^+Tem)细胞和中心记忆性CD8^+T(CD8^+Tcm)细胞比例的变化。检测数据采用Flow-Jo软件分析,并做流式图。采用Graphad Prism 7.0软件进行作图和统计学分析。结果感染后4周,对照组小鼠肝无明显变化,低、中数量组小鼠肝组织出现急性炎症反应减弱,部分病灶炎性反应逐渐转变为纤维化修复,形成小肉芽肿结节,呈点状或灶状坏死。高数量组小鼠肝内出现小囊泡,可见生发层结构,周围大量炎性细胞浸润。小鼠肝CD3^+T细胞绝对数高、中、低数量组和对照组分别为(4.10±0.04)×10^5、(3.81±0.14)×10^5、(3.02±0.12)×10^5、(2.98±0.03)×10^5,高数量组高于其他3组(P<0.05或0.01)。小鼠脾CD3^+T细胞绝对数高、中、低数量组和对照组分别为(16.01±0.40)×10^5、(11.03±1.21)×10^5、(10.10±1.01)×10^5、(9.71±0.90)×10^5,高数量组高于其他3组(P<0.01)。小鼠肝CD4^+T、CD8^+T细胞和脾B细胞、CD8^+T绝对数高数量组高于其他3组(P<0.05或0.01)。小鼠肝CD4^+CD69^+T细胞绝对数高、中、低数量组和对照组分别为(3.23±0.10)×10^4、(1.98±0.11)×10^4、(1.51±0.26)×10^4、(1.19±0.21)×10^4,高数量组高于其他组(P<0.05)。小鼠脾CD4^+CD69^+T细胞绝对数高、中、低数量组和对照组分别为(10.10±0.41)×10^4、(8.91±0.80)×10^4、(8.20±0.41)×10^4、(6.81±0.50)×10^4,高数量组高于对照组(P<0.01)。肝、脾CD8^+CD69^+T细胞绝对数高数量组高于其他3组(P<0.05或0.01)。小鼠肝CD4^+Tn细胞比例高、中、低数量组和对照组分别为(15.52±1.51)%、(19.3±2.09)%、(20.66±1.28)%、(23.62±2.84)%,对照组高于其他组(P<0.05或0.01)。肝、脾CD8^+Tn细胞比例对照组高于其他组(P<0.05或0.01)。肝、脾CD8^+Tcm细胞比例高数量组高于对照组(P<0.05)。结论高数量多房棘球蚴感染C57BL/6小鼠,肝区域以CD4^+T细胞和CD8^+T细胞募集为主,而脾以B细胞和CD8^+T细胞募集为主。     

雷公藤多甙联合异甘草酸镁治疗自身免疫性肝炎患者外周血淋巴细胞PD-1和PD-L1变化

目的 探讨应用雷公藤多甙联合异甘草酸镁治疗的自身免疫性肝炎(AIH)患者外周血淋巴细胞程序性死亡因子-1(PD-1)和PD-1配体(PD-L1)表达的变化。方法 将76例AIH患者随机分为对照组38例和观察组38例,分别给予异甘草酸镁口服治疗或异甘草酸镁联合雷公藤多甙口服治疗,两组均治疗24周。使用CyFlow Counter流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞PD-1/PD-L1表达,包括PD-L1⁺/CD4⁺、PD-L1⁺/CD8⁺、PD-1⁺/CD4⁺和PD-1⁺/CD8⁺表达百分比,采用ELISA法检测血清γ-干扰素(IFN-γ)。结果 在治疗结束时,观察组血清谷丙转氨酶(ALT)水平为(48.9±9.7)U/L,显著低于对照组【(77.5±11.2)U/L,P<0.05】,血清谷草转氨酶(AST)水平为(45.5±7.3)U/L,显著低于对照组【(81.3±9.5)U/L,P<0.05】,血清碱性磷酸酶(ALP)水平为(65.5±2.3)U/L,显著低于对照组【(91.3±5.8)U/L,P<0.05】;外周血淋巴细胞PD-L1⁺/CD4⁺百分比为(15.4±4.5)%,显著低于对照组【(19.3±5.8)%,P<0.05】,外周血PD-L1⁺/CD8⁺为(6.5±2.7)%,显著低于对照组【(9.2±3.0)%,P<0.05】,外周血PD-1⁺/CD4⁺为(7.4±2.6)%,显著低于对照组【(12.5±3.1)%,P<0.05】,外周血PD-1⁺/CD8⁺为(7.5±1.7)%,显著低于对照组【(10.1±1.2)%,P<0.05】;血清GLO水平为(13.4±1.5)g/L,显著低于对照组【(18.3±1.8)g/L,P<0.05】,血清IgG水平为(10.9±2.4)mg/mL,显著低于对照组【(13.6±2.9)mg/mL,P<0.05】,血清IFN-γ水平为(13.0±2.4)ng/mL,显著低于对照组【(18.1±2.8)ng/mL,P<0.05】。结论 应用雷公藤多甙联合异甘草酸镁治疗AIH患者近期疗效较好,可能与改善了外周血T细胞PD-1和PD-L1表达有关,值得进一步研究。     

结核分枝杆菌Ag85B-ESAT-6融合蛋白重组耻垢分枝杆菌对小鼠的免疫原性研究

目的 评价表达Mtb Ag85B-ESAT-6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌（Ag85B-ESAT-6-rM.s）在小鼠中的免疫原性。 方法 6周龄BALB/c小鼠经背部皮下注射1×10⁶ CFU（colony-forming unit,菌落形成单位）的Ag85B-ESAT-6-rM.s,同时设M.s免疫组（10只）、BCG免疫组（10只）、Ag85B-ESAT-6融合蛋白免疫组（10只）和生理盐水组（10只）。接种免疫后1～6周,尾静脉采血,检测小鼠外周血CD4⁺和CD8⁺ T细胞所占百分比;免疫后6周,MTS［3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt］法检测小鼠脾淋巴细胞增殖和酶联免疫斑点检测（enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT）检测脾淋巴细胞分泌γ干扰素（interferon γ,IFN-γ）、白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）和白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）等细胞因子的水平。 结果 Ag85B-ESAT-6-rM.s免疫小鼠后能够明显刺激小鼠外周血CD4⁺和CD8⁺ T细胞的产生,其所占百分比［（59.6±1.5）%］明显高于BCG免疫组［(48.8±2.3)%］（t=12.252,P<0.05）和原始M.s免疫组［(45.7±1.6)%］（t=20.166,P<0.05）。Ag85B-ESAT-6-rM.s免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖指数（3.23±0.31）与BCG免疫刺激的增殖指数（2.95±0.36）相当（t=1.864,P>0.05）,但其诱生IFN-γ的能力［斑点形成细胞(spot forming cells,SFC) ］［(167.5±36.6)SFC/10.6］明显高于BCG［(98.5±26.9)SFC/10⁶ ］（t=4.804,P<0.05）。 结论 Ag85B-ESAT-6融合蛋白在耻垢分枝杆菌中的表达能够明显提高M.s的免疫原性,并能够刺激小鼠机体产生有利于抗Mtb感染的免疫反应,作为TB新型候选疫苗具有一定的研究前景。     

肝细胞癌患者肝动脉化疗栓塞术后外周血长链非编码RNA TINCR水平与Th1/Th2平衡及预后的相关性分析

目的探讨分析外周血长链非编码RNA(lncRNA)TINCR表达水平与肝细胞癌(HCC)患者行肝动脉化疗栓塞术(TACE)术后辅助性T淋巴细胞1(Th1)/Th2平衡及预后的相关性。方法回顾性选取2015年3月—2017年3月在湖北省武汉市金银潭医院行TACE治疗的HCC患者85例,并随机抽取在本院体检的健康志愿者30例作为对照组。检测HCC患者TACE完成后7 d及对照组外周血lncRNA TINCR表达情况、Th1/Th2细胞因子表达情况。计量资料组间比较采用t检验,计数资料组间比较采用χ2检验,等级资料组间比较采用Kruskal-Wallis H检验。lncRNA TINCR相对表达量与Th1/Th2细胞因子的相关性采用Spearman相关性分析。lncRNA TINCR相对表达量对生存情况的影响采用Kaplan-Meier生存曲线分析,生存曲线比较采用log-rank检验。结果HCC组患者外周血lncRN TINCR相对表达量(1.784±0.429)高于对照组(0.926±0.263),差异有统计学意义(t=10.277,P<0.05)。lncRNA TINCR相对表达与HCC患者血管侵犯、肿瘤大小、肿瘤分期及血清AFP水平有关(t值分别为3.958、4.499、3.361、4.949,P值分别为<0.001、<0.001、0.001、<0.001)。HCC组患者血清IFNγ、IL-2水平明显低于对照组[(13.48±5.20)pg/ml vs(27.49±7.21)pg/ml、(21.89±6.45)pg/ml vs(32.05±7.89)pg/ml,t值分别为11.408、6.986,P值均<0.05],而IL-4、IL-10水平明显高于对照组[(13.73±3.35)pg/ml vs(9.36±2.73)pg/ml、(12.75±2.74)pg/ml vs(8.93±2.16)pg/ml,t值分别为6.426、6.909,P值均<0.05]。HCC患者外周血lncRNA TINCR相对表达量与血清IFNγ、IL-2水平呈负相关(r值分别为-3.164、-3.270,P值均<0.001),与患者血清IL-4、IL-10呈正相关(r值分别为2.963、3.044,P值分别为0.007、<0.001)。以lncRNA TINCR相对表达量≥1.700作为高表达,85例HCC患者中lncRNA TINCR高表达患者47例,低表达患者38例。log-rank检验结果显示,lncRNA TINCR低表达患者生存情况明显优于高表达患者(χ2=4.182,P<0.05)。结论HCC患者行TACE后外周血lncRNA TINCR表达明显高于健康人群,lncRNA TINCR表达与患者病理特征及Th1/Th2免疫平衡有密切联系,可作为患者生存预后的潜在预测指标之一。     

MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠肝脏表达IL-9免疫细胞的变化

目的研究MHV-3病毒感染所致的暴发性肝炎小鼠肝脏T淋巴细胞亚群胞内细胞因子IL-9表达的变化,以探讨IL-9在该疾病模型中的作用。方法利用MHV-3病毒诱导Balb/cJ小鼠暴发性肝炎模型,采用流式细胞术检测肝脏分泌IL-9的淋巴细胞亚群比例的变化。结果随着MHV-3感染时间的延长,肝脏分泌IL-9的CD4＋T细胞比例由感染前的1.87±1.36%于48小时升高到4.77±0.42%,差异显著（P〈0.05）;而分泌IL-9的CD4-CD8（-DN）T细胞比例则于感染后72小时达峰值7.83±3.30%,显著高于感染前（3.57±1.82,P〈0.05）和24小时时（3.60±0.85,P〈0.05）。结论随着感染时间延长,肝脏分泌IL-9的CD4＋T和CD4-CD8（-DN）T淋巴细胞显著升高,说明IL-9可能参与了MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠免疫诱导的肝脏损伤发病过程。     

肝癌患者CD8^＋T淋巴细胞穿孔素表达和脱颗粒特点

目的观察肝癌患者外周血CD8^＋T淋巴细胞穿孔紊表达和脱颗粒特点及与临床分期的相关性。方法采集52例肝癌患者、20例健康人的外周血，用流式细胞仪分析CD8^＋T淋巴细胞穿孔素表达百分比；以抗CD3单抗刺激后CD107a表达量代表CD8^＋T淋巴细胞脱颗粒的数量。结果肝癌患者外周血CD8^＋T淋巴细胞穿孔素表达量（32．3％±17．4％）与健康对照（31．8％±14．1％）差异无统计学意义（P〉0．05）。但是抗CD3单抗刺激5h后CD8^＋T淋巴细胞CD107a表达量（6．8％±4．2％）低于健康对照（15．0％±4．3％），差异有统计学意义（P〈0．01）。结论肝癌患者CD8^＋T淋巴细胞脱颗粒能力明显下降。