支气管哮喘患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系

目的探讨支气管哮喘（哮喘）患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系。方法采取病例对照研究,收集25例哮喘急性发作期患者和33例健康对照组。采外周静脉血分离血浆,提取外周血单个核细胞（PBMC）,用ELISA测定血浆中CC16、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-4（IL-4）的水平;用RT-PCR法检测PBMC转录因子T-bet和Gata-3mRNA表达水平。结果 1.哮喘组CC16及IFN-γ分别为（21.96±7.31）ng/ml,（118.73±22.59）pg/ml,明显低于对照组[分别为（64.88±25.27）ng/ml和（145.53±29.50）pg/ml,（均P〈0.01）],哮喘组IL-4（425.22±4.37）pg/ml高于对照组（69.72±10.15）pg/ml,（P〈0.01）。2.哮喘组T-betmRNA、T-bet/GATA-3表达水平（0.12±0.01,0.25±0.04）显著低于对照组（0.48±0.12,1.894±0.65）（均P〈0.01）,GATA-3mRNA表达（0.45±0.05）较对照组明显升高（0.30±0.08）（P〈0.01）。3.CC16与T-betmRNA表达水平、T-bet/GATA-3呈正相关（r分别为0.792,0.761,均P〈0.01）;与GATA-3mRNA无明显相关性（r=-0.146,P=0.551）。结论 CC16参与哮喘气道炎症反应,并以Th1/Th2细胞因子失衡为特点。     

川芎嗪对支气管哮喘患者T-bet、GATA-3及气道炎症的影响

目的 观察川芎嗪对支气管哮喘患者气道炎症的作用以及对转录因子T-bet和GATA-3表达的影响.方法 60例哮喘患者随机分成常规治疗组(A组)和川芎嗪联合治疗组(B组),每组30例.另外选取健康人30例做为正常对照组(C组).观察治疗前后的临床疗效,采用ELISA法检测干扰素γ(IFN-γ)和白介素4(IL-4)水平,采用RT-PCR法测定T-bet和GATA-3的表达.结果 治疗前A、B组的T-bet、IFN-γ水平明显低于C组,GATA-3、IL-4水平明显高于C组(P＜0.05),A、B组间没有显著差异;与治疗前比较,治疗后A、B组的T-bet、IFN-γ以及GATA-3、IL-4水平均有显著性差异(P＜0.05);治疗后B组的T-bet和IFN-γ水平均高于A组,GATA-3和IL-4水平均低于A组(P＜0.05).结论 在常规哮喘治疗的基础上,加用川芎嗪可以取得更好的疗效.川芎嗪通过纠正哮喘患者的免疫失衡来治疗哮喘,为川芎嗪对哮喘的治疗进一步提供了理论依据.     

乳球菌分泌的白介素-12对哮喘小鼠的疗效观察

目的将小鼠白介素-12基因(mIL-12)通过质粒载体pSEC导入乳酸乳球菌(NZ9000)中,观察mIL-12在细菌中的表达;通过鼻腔免疫来观察mIL-12对小鼠哮喘模型气道炎症及辅助T细胞亚群的影响。方法将mIL-12连接到pSEC载体上并将其转化到NZ9000中,用乳链菌肽(Nisin)诱导其表达IL-12蛋白质并做鉴定,将菌液离心浓缩后给小鼠滴鼻。BALB/c小鼠50只,随机分为5组,即对照组(A组);PBS组(B组);野生菌组(C组);rIL-12组(D组);工程菌组(E组)。除A组外,余各组每鼠在1、7、14 d腹腔注射卵白蛋白OVA(100μg/0.5ml),在20~26 d雾化吸入2%OVA,每天1次。B、C、E组在1、2、3、14、19、20、21 d分别给予10μl的PBS,不含质粒载体的野生乳酸菌(约5×108CFU),含IL-12的质粒载体的工程菌(约5×108CFU)。D组20、21、22天给3 ng/只重组白介素-12,第28天杀小鼠测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸粒细胞(EOS)个数及白介素-4(IL-4)、干扰素(IFN-γ)水平,肺组织HE染色切片观察病变。结果mIL-12能够在NZ9000中高效表达并释放到细胞外。A-E组BALF中EOS的数量分别为(0.51±0.23)×104cell/ml(、21.32±5.71)×104cell/ml(、22.84±6.16)×104cell/ml(、2.15±0.63)×104cell/ml、(2.62±0.73)×104cell/ml;IL-4的含量分别为68.43±9.08 pg/ml、332.13±61.36 pg/ml、324.65±57.27 pg/ml、121.25±35.55 pg/ml、114.22±15.70 pg/ml;IFN-γ的含量分别为110.28±12.19pg/ml、56.25±12.08 pg/ml、70.36±8.27 pg/ml、166.11±57.12 pg/ml、171.75±60.90 pg/ml。B和C组的EOS数I、L-4与IFN-γ含量与A组相比有统计学差异(P<0.01);D、E组与B、C组比较有统计学意义(P<0.01)。工程菌组小鼠肺组织炎症细胞浸润明显减少,气道上皮损害减轻。结论mIL-12在乳酸乳球菌中能高效表达;鼻腔应用mIL-12能减少全身应用的副作用,且经济实用并较好地调节Thl/Th2平衡,对小鼠哮喘气道炎症的保护较为理想。     

免疫调节剂咪喹莫特治疗哮喘作用机制的实验研究

目的 研究新型免疫调节剂咪喹莫特对支气管哮喘(简称哮喘)的治疗作用,探讨其可能的作用机制.方法 ①40只BALB/c小鼠(每组10只)和48只SD大鼠(每组12只),分为对照组、哮喘组、咪喹莫特组和地塞米松组.建立大鼠和小鼠哮喘模型,用卵清白蛋白激发前吸入0.15%咪喹莫特混悬液5 ml.末次激发后24 h观察肺组织炎症及测定气道反应性;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定肺组织白介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)、嗜酸粒细胞活化趋化因子(eotaxin)、巨噬细胞衍生趋化因子(MDC)、胸腺和活化调节趋化因子(TARC)、T-bet、GATA-3,信息转导转录激活子6(STAT6)mRNA的表达;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清中eotaxin、MDC、TARC及支气管肺泡灌洗液中IL-4和IFN-γ浓度;用Western blot法测定肺组织中T-bet、GATA-3、STAT6蛋白水平;②分离和培养致敏大鼠气管旁淋巴结细胞(PBLN),分为空白对照组,阳性对照组,地塞米松组,药物1～3组,测定不同时间点各组细胞上清中IL-4, IFN-γ蛋白和细胞IL-4,IFN-γmRNA表达;③分离和培养致敏小鼠脾脏T细胞,用流式细胞仪测定咪喹莫特刺激后不同时间点细胞内IL-4、IFN-γ水平;④培养致敏大鼠CD4+ T细胞,测定经咪喹莫特干预后T-bet、GATA-3 mRNA和蛋白的表达水平.结果 用同等剂量氯化乙酰胆碱(20、40、80、160 μg/ml)激发时平均呼气阻力哮喘组分别为(6.26±0.85)、(11.55±3.09)、(28.74±5.94)、(3710.83±197.49) cm H2O·ml-1·s-1,咪喹莫特组分别为(1.34±0.16)、(3.47±0.49)、(9.29±1.27)、(25.22±5.44)cm H2O·ml-1·s-1,两组相同剂量比较差异有统计学意义(D值分别为88.98、56.00、45.00、108.00,P均<0.01).哮喘组大鼠气道壁和肺组织中嗜酸粒细胞、淋巴细胞、管壁面积/支气管管腔内周长(WA/Pi)、支气管平滑肌面积/支气管管腔内周长(ASM/Pi)分别为(26.0±1.6)个/mm2、(45.2±3.2)个/mm2、12.0±1.4、6.7±0.6,咪喹莫特组分别为(12.40±2.91)个/mm2、(24.20±3.74)个/mm2、9.16±0.59、4.00±0.49,两组比较差异有统计学意义(D或q值分别为193.00、16.92、185.50、7.66,P均<0.01);哮喘组肺组织中T-bet mRNA和蛋白表达量为0.08±0.12、0.18±0.06,咪喹莫特组为0.48±0.08、0.48±0.17,两组比较差异有统计学意义(D值分别为120.96、177.98,P均<0.01);哮喘组肺组织中GATA-3 mRNA和蛋白表达量分别为1.56±0.28、2.25±0.74,咪喹莫特组分别为0.54±0.14、0.50±0.14,两组比较差异有统计学意义(D值分别为166.96、310.97,P均<0.01) .在空白对照组的24、48 h时PBLN细胞培养液中IL-4、IFN-γ分别为(0±0、0±0、21.35±5.16、30.64±5.2) pg/ml.随着培养时间的延长,药物2组24、48 h时IL-4、IFN-γ分别为(22.73±4.46)、(39.12±11.46)、(149.39±30.75)、(154.38±27.58)pg/ml,药物3组24、48 h时IL-4、IFN-γ分别为(24.48±5.72)、(39.83±11.64)、(165.82±30.36)、(158.33±30.61) pg/ml,与阳性对照组[24、48 h时IL-4、IFN-γ分别为(43.10±13.22)、(56.00±12.08)、(100.13±21.82)、(111.82±32.58) pg/ml]比较差异有统计学意义(药物2、3组24、48 h时IL-4的D值分别为9.90、8.70、8.80、8.10;药物2、3组24、48 h时IFN-γ的q值分别为4.80、6.40、3.95、4.31,P均<0.05).哮喘组小鼠BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞分别为(8.7±1.4)×106/L、(29.8±7.0)%,咪喹莫特组分别为(4.1±1.3)×106/L、(8.9±2.4)%,两组比较差异有统计学意义(q值分别为16.4、7.4,P均<0.05).哮喘组小鼠血清eotaxin、MDC和TARC水平分别为(593.11±41.26)、(170.20±19.87)、(220.66±24.64) pg/ml,咪喹莫特组分别为(501.00±76.35)、(83.69±12.53)、(163.00±34.61) pg/ml.两组比较差异有统计学意义(q值分别为3.70、9.80、4.50,P均<0.05);咪喹莫特组小鼠肺组织eotaxin、MDC和TARC mRNA表达分别为0.65±0.17、0.66±0.12、0.66±0.34,哮喘组分别为0.85±0.11、0.96±0.10、0.94±0.28、对照组为0.45±0.08、0.39±0.09、0.24±0.08.哮喘组与咪喹莫特组比较差异有统计学意义(q值分别为1.50、8.10、2.40,P均<0.05),哮喘组与对照组比较差异也有统计学意义(q值分别为3.00、15.40、5.90,P均<0.05).结论 咪喹莫特可能通过提高转录因子T-bet的mRNA和蛋白的表达和抑制转录因子GATA-3和STAT6 mRNA和蛋白表达,使失衡的Th1/Th2得以纠正,从而抑制哮喘气道炎症.     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ在哮喘气道血管重构中的作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)在哮喘小鼠气道血管重构中的作用。方法50只小鼠随机分为5组:对照组、激动组、拮抗组、激素组和哮喘组。卵白蛋白雾化吸入建立小鼠哮喘模型,观察支气管肺泡灌洗液、肺组织中炎症反应和重构情况;并以western blot技术测定肺组织中PPARγ的表达水平,比较其与重构程度的关系。结果哮喘组血管管壁厚度[(4.66±0.73)μm]和血管旁胶原纤维沉积量[(22.1±2.42)μm2/μm]较对照组[(2.87±0.46)μm(、1.73±0.73)μm2/μm]明显增加;激动组和激素组中这一变化均较哮喘组明显减轻,且两组间比较无显著性差异。血管管壁厚度与气道平滑肌厚度或气道旁胶原纤维面积(r=0.576、0.692,P<0.01)以及血管旁胶原纤维面积与气道平滑肌厚度或气道旁胶原纤维面积呈正相关(r=0.825、0.928,P<0.01)。除激素组外,核内PPARγ的表达水平与气道平滑肌厚度、气道旁胶原纤维面积和血管旁胶原纤维面积呈负相关(r=-0.73、-0.85、-0.91,P<0.01),而与血管管壁厚度无相关性。结论PPARγ激动剂通过促进PPARγ的核定位,抑制哮喘的气道炎症和气道重构。     

补脾益气方药对哮喘大鼠Th1/Th2失衡的调节及机制

目的观察补脾益气方药对哮喘大鼠Th1/Th2失衡的免疫调节作用及机制。方法 SPF级雄性Wistar大鼠随机分为对照组、哮喘组、生理盐水治疗组、地塞米松组、补脾益气方药治疗组。检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞比例;采用ELASA方法检测BALF中IL-4和IFN-γ的含量;采用Western blot方法检测肺组织GATA-3和T-bet的表达。结果模型组和生理盐水治疗组与正常组比较,BALF中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的比例及IL-4含量均明显升高,IFN-γ含量显著下降;GATA-3表达增高,T-bet表达降低。经补脾益气方药与地塞米松治疗后,BALF中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的比例和IL-4含量均明显下降,IFN-γ含量显著升高;GATA-3表达下调,T-bet表达上调。上述结果均差异显著,具有统计学意义(P<0.01)。结论补脾益气方药对Th1/Th2失衡有调节作用,这种作用是通过调节GATA-3和T-bet的协调表达来实现。     

咪喹莫特治疗支气管哮喘作用机制的实验研究

目的 研究新型免疫调节剂咪喹莫特对支气管哮喘(简称哮喘)的治疗作用,探讨其可能的作用机制.方法 (1)40只BALB/c小鼠(每组10只)和48只SD大鼠(每组12只)分为对照组、哮喘组、咪喹莫特组和地塞米松组,建立大鼠和小鼠哮喘模型.用卵清白蛋白激发前吸入0.15%咪喹莫特混悬液5 ml.末次激发后24 h观察肺组织炎症及测定气道反应性;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)、嗜酸粒细胞活化趋化因子(eotaxin)、巨噬细胞衍生趋化因子(MDC)、胸腺和活化调节趋化因子(TARC)、T-bet、GATA-3、信息转导转录激活子6(STAT6)mRNA的表达;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清中eotaxin、MDC、TARC及支气管肺泡灌洗液中IL-4和IFN-γ浓度;用Western blot法测定肺组织中T-bet、GATA-3、STAT6蛋白水平;(2)分离和培养致敏大鼠气管旁淋巴结细胞(PBLN),分为空白对照组、阳性对照组、地塞米松组和药物1～3组,测定不同时间点各组细胞上清液中IL-4、IFN-γ蛋白和细胞的mRNA表达;(3)分离和培养致敏小鼠的脾脏T淋巴细胞,用流式细胞仪测定经咪喹莫特刺激后不同时间点细胞内IL-4、IFN-γ水平;(4)培养致敏大鼠CD+4T淋巴细胞,测定经咪喹莫特干预后T-bet、GATA-3 mRNA和蛋白的表达水平.结果 用同等剂量氯化乙酰胆碱(20、40、80、160μg/ml)激发时平均呼气阻力哮喘组分别为(6.26±0.85)、(11.55±3.09)、(28.74±5.94)、(3710.83±197.49)cm H20·ml-1·s-1(1 cm H20=0.098 kPa),咪喹莫特组分别为(1.34±0.16)、(3.47±0.49)、(9.29±1.27)、(25.22±5.44)cm H2O·ml-1·s-1,两组相同剂量比较差异有统计学意义(D值分别为88.98、56.00、45.00、108.00,P均＜0.01);哮喘组大鼠气道壁和肺组织中嗜酸粒细胞(EOS)、淋巴细胞、管壁面积/支气管管腔内周长(WA/Pi)、支气管平滑肌面积/支气管管腔内周长(ASM/Pi)分别为(26.0±1.6)、(45.2±3.2)个/mm2、12.0±1.4、6.7±0.6,咪喹莫特组分别为(12.4±2.9)、(24.2±3.7)个/mm2、9.2±0.6、4.0±0.5,两组比较差异有统计学意义(D和q值分别为193.00、16.92、185.50、7.66,P均＜0.01);哮喘组肺组织中T-bet mRNA和蛋白表达量分别为0.08±0.12、0.18±0.06,咪喹莫特组分别为0.48±0.08、0.48±0.17,两组比较差异有统计学意义(D值分别为120.96、177.98,P均＜0.01);哮喘组肺组织中GATA-3 mRNA和蛋白表达量分别为1.56±0.28、2.25±0.74,咪喹莫特组分别为0.54±0.14、0.50±0.14,两组比较差异有统计学意义(D值分别为166.96、310.97,P均＜0.01);空白对照组24、48 h时PBLN细胞培养液中IL-4、IFN-γ分别为(0±0、0±0、22±5、31±5) pg/ml.随着培养时间的延长,药物2组24、48 h时IL-4、IFN-γ水平分别为(23±5)、(39±11)、(149±31)、(154±28) pg/ml,药物3组24、48 h时IL-4、IFN-γ水平分别为(25±6)、(40±12)、(166±30)、(158±31) pg/ml,与阳性对照组[(43±13)、(56±12)、(100±22)、(112±33) pg/ml)]比较差异有统计学意义(药物2、3组24、48 h时IL-4的D值分别为9.90、8.79、8.80、8.10;药物2、3组24、48 h时IFN-γ的q值分别为4.80、6.40、3.95、4.31,P均＜0.05);哮喘组小鼠BALF中细胞总数及EOS分别为(8.7±1.4)×106 /L、(29.80±7.00)%,咪喹莫特组为(4.1±1.3)×106 /L、(8.90±2.40)%,两组比较差异有统计学意义(q值分别为16.40、7.40,P均＜0.05);哮喘组小鼠血清eotaxin、MDC和TARC水平分别为(593±41)、(170±20)、(221±25) pg/ml,咪喹莫特组分别为(501±76)、(84±13)、(163±35) pg/ml,两组比较差异有统计学意义(q值分别为3.70、9.80、4.50,P均＜0.05);(4)咪喹莫特组小鼠肺组织eotaxin、MDC、TARC mRNA表达分别为0.65±0.17、0.66±0.12、0.66±0.34,哮喘组分别为0.85±0.11、0.96±0.10、0.94±0.28,对照组分别为0.45±0.08、0.39±0.09、0.24±0.08,哮喘组与咪喹莫特组比较差异有统计学意义(q值分别为1.50、8.10、2.40,P均＜0.05);哮喘组与对照组比较差异有统计学意义(q值分别为3.00、15.40、5.90,P均＜0.05).结论 咪喹莫特可能通过提高转录因子T-bet mRNA\蛋白的表达和抑制转录因子GATA-3和STAT6 mRNA和蛋白表达,使失衡的Th1/Th2细胞得以纠正,从而抑制哮喘气道炎症.     

罗格列酮对支气管哮喘急性发作期患者T淋巴细胞转录因子T-bet/GATA-3表达的调控

目的 探讨罗格列酮对支气管哮喘（简称哮喘）急性发作期患者T淋巴细胞转录因子T-bet与转录因子GATA-3表达的调控、对Th1／Th2细胞因子的影响及与地塞米松（DXM）作用机制的异同。方法 哮喘急性发作期患者（A组）10例及健康自愿者（B组）10名。分离、纯化、培养外周血T淋巴细胞，根据实验要求将两组分为3、24h组，再根据不同的干预分为：未干预对照组（A1组、B1组）、罗格列酮干预组（A2组、B2组）及DXM干预组（A3组、B3组）；用酶联免疫吸附（ELISA）法检测T淋巴细胞培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）及白细胞介素4（IL-4）的水平，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测T淋巴细胞T-bet mRNA、GATA-3 mRNA的表达水平。结果 A组3、24hT淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IFN-γ／IL-4和T淋巴细胞的T-bet mRNA、T-bet mRNA／GATA-3 mRNA水平分别为357±31、783±47、5．5±1．0、8．4±1．5、18．7±3．7、11．9±2．9、1．20±0．11、0．290±0．020．与B组3、24h（659±41、1394±120、11．5±3．0、17．4±4．0、29．0±4．0、18．9±4．0、3．82±0．81、0．870±0．090）比较差异有统计学意义（t值分别为18．59、5．95、14．87、6．25、6．06、4．63、10．23、18．67，P均〈0．05），A组3、24h IL-4、GATA-3 mRNA水平分别为65±6、96±9、16．4±4．2、41±6，与B组3、24h（57±5、83±7、7．8±2．2、23±4）比较差异有统计学意义（t值分别为3．19、3．90、5．77、7．76，P均〈0．05）；A、B组T淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-4、IFN-γ／IL-4在3h水平分别为357±31、65±6、5．5±1．0、659±41、57±5、11．5±3．0，与24h（783±47、96±9、8．4±1．5、1394±120、83±7、17．4±4．0）水平比较差异有统计学意义（t值分别为23．8、9．48、5．03、18．21、9．01、3．53，P均〈0．05）：A、B组T淋巴细胞T-bet mRNA和T-bet mRNA／GATA-3 mRNA在3h时分别为18．7±3．7、1．20±0．11、29.0±4．0、3.82±0．81，与24h（11．9±2．9．0．290±0．020、18．9±4．0、0．870±0．090）水平比较差异有统计学意义（t值分别为4．62、5．66、29．67、11．5，P均〈0．05），但A、B组GATA-3 mRNA在3h（16．4±4．2．7．8±2．2）的水平，分别低于24h（41±6、23±4）水平（t值分别为10．70、10．11，P均〈0．05）；A组T淋巴细胞T-bet mRNA表达与T淋巴细胞培养上清液中IFN-γ呈正相关r=0．581，P〈0.05），与IL-4呈负相关（r=-0．493，P〈0．05）；A组GATA-3 mRNA表达与IFN-γ呈负相关（r=-0.501，P〈0．05），与IL-4呈正相关（r=0．579，P〈0．05）；A组T—bet mRNA／GATA-3 mRNA比值与IFN-γ/IL4比值呈正相关（r=0．696，P〈0．05）。结论 罗格列酮通过影响哮喘急性发作期患者T淋巴细胞T-bet和GATA-3的表达，从而调控IFN-γ和IL-4的平衡。     

血管内皮生长因子受体抑制剂对小鼠支气管哮喘模型气道炎症和气道重塑的影响

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)受体抑制剂对变应性气道炎症和气道重塑的影响,阐明VEGF与支气管哮喘(简称哮喘)以及气道重塑的关系。方法BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、VEGF受体抑制剂治疗组(C组),每组各10只。用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清中VEGF进行定量分析;用免疫组化法检测VEGF在小鼠肺组织内的表达水平。采用医学图像分析软件测定支气管管壁厚度(WAt/P i)、支气管平滑肌厚度(WAm/P i)、支气管平滑肌细胞计数(N/P i)及肺组织切片中的血管计数、血管壁平滑肌厚度、血管壁平滑肌细胞计数。结果BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞比值B组分别为(142±63)×107/L、98.0±46.9,A组分别为(30±14)×107/L、0.7±1.1,C组分别为(41±17)×107/L、4.9±3.5,A组和C组BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞比值分别与B组比较差异有统计学意义(P均<0.01)。B组BALF中上清液和血清中VEGF水平分别为(55±26)pg/m l、(72±26)pg/m l,A组分别为(37±9)pg/m l、(49±18)pg/m l,C组分别为(34±3)pg/m l、(43±19)pg/m l,A组与B组、C组与B组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。免疫组化结果显示,B组大部分支气管平滑肌、黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞和血管周围VEGF均呈阳性表达,而A组和C组几乎没有VEGF的表达。图像分析显示,B组WAt/P i、WAm/P i、N/P i分别为(17±5)μm2/μm、(6.3±2.2)μm2/μm、(0.050±0.020)个/μm,A组分别为(8±3)μm2/μm、(3.2±0.8)μm2/μm、(0.027±0.017)个/μm,A组与B组比较差异有统计学意义(P分别<0.01、0.05)。B组和A组血管计数分别为(19±3)个、(10±5)个,A组与B组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。经抑制剂治疗后C组WAm/P i、血管计数分别为(4.5±1.3)μm2/μm、(11±3)个,C组与B组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论VEGF在小鼠哮喘模型气道及肺内过度表达,并参与了哮喘的发病和气道重塑过程。VEGF受体抑制剂可明显改善哮喘小鼠的变应性气道炎症和气道重塑的病理生理过程。     

哮喘和慢性阻塞性肺疾病患者肺灌洗液Th亚群及B7分子的差异

目的探讨哮喘和慢性阻塞性肺疾病(COPD)及正常对照者支气管肺泡灌洗液(BALF)中淋巴细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)水平和肺泡巨噬细胞(AM)表达C80(B7-1)、CD86(B7-2)共刺激分子百分率有何不同及其意义.方法分别对16名健康自愿者、16例过敏性哮喘患者和16例COPD患者进行了支气管肺泡灌洗(BAL),获取淋巴细胞和AM,用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELASA)测定了经植物血凝素(PHA)刺激培养的淋巴细胞上清液中IFN-γ和IL-4水平;用生物素-抗生物素复合物(ABC)夹心法测定了经脂多糖(LPS)剌激培养的AM膜表面表达CD80和CD86阳性率,并将正常对照组中已经LPS剌激的和未经LPS刺激的AM膜表面表达CD80与CD86阳性率进行对照.结果在反映Th2的IL-4水平,哮喘组为(331±150)ng/L,与正常对照组(106±42)ng/L及COPD组(49±20)ng/L比较,差异均有显著性(P均<0.01);COPD组IL-4水平与正常对照组比较,差异有显著性(P<0.01);在反映Th1的IFN-γ水平,COPD组(342±122)ng/L与正常对照组(188±67)ng/L及哮喘组(77±32)ng/L比较,差异也均有显著性(P均<0.01);哮喘组IFN-γ水平与正常对照组比较,差异有显著性(P<0.01).AM表达CD86阳性率哮喘组为(22±8)%,与正常对照组(12±6)%及COPD组(11±6)%比较,差异均有显著性(P均<0.01);COPD组与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05);正常对照组中未经LPS刺激的与已经LPS刺激的AM在表达B7百分率上差异无显著性(P>0.05).三组48例受检者IL-4水平与经LPS刺激的AM表达CD86阳性率呈显著正相关(r=0.61,P<0.05).结论哮喘和COPD患者肺内淋巴细胞在细胞因子分泌谱上存在截然相反的格局,前者存在向Th2而后者存在向Th1极化的调控,其差异可能与抗原提呈细胞提供的共刺激信号不同有关,CD86在哮喘向Th2极化中可能起重要调控作用,这提示哮喘与COPD在肺局部细胞免疫学上无论从抗原提呈方式还是T细胞分泌谱上都是本质不同的两种疾病.     

支气管哮喘患者Th2细胞过度分化与转录因子T-bet和GATA-3的调控作用

目的　探讨支气管哮喘 (简称哮喘 )患者是否存在Th2细胞过度分化以及转录因子T bet和GATA 3的调控作用。方法　将 32例哮喘患者 (A组 )和 2 0名健康对照者 (B组 )纳入研究。A组中儿童型 (A1组 )和成人型 (A2 组 )分别为 12、2 0例 ,变应原皮试阳性 (AⅠ 组 )和阴性 (AⅡ 组 )者分别为 18、14例。采用酶联免疫吸附测定 (ELISA)法检测哮喘患者外周血淋巴细胞培养上清液中白细胞介素 4 (IL 4 )和γ干扰素 (INF γ)浓度 ,用直接免疫荧光标记法测定淋巴细胞中CCR3 和CCR5 阳性细胞率 ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和流式细胞术 (FCM)测定淋巴细胞中T bet、GATA 3mRNA表达水平。结果　A组和B组患者淋巴细胞培养上清液中IL 4、INF γ浓度分别为 (118± 2 5 ) μg/L、(75± 12 ) μg/L、(6 5 1± 85 ) μg/L、(1179± 332 ) μg/L ,A、B两组比较差异均有显著性 (P均 <0 0 0 1) ;A1组和A2 组淋巴细胞培养上清液中IL 4浓度分别为 (12 1± 2 5 ) μg/L、(118± 2 5 ) μg/L ;INF γ浓度分别为 (6 39±132 ) μg/L、(6 6 1± 84 ) μg/L ,A1和A2 组分别与B组比较差异均有显著性 (P均 <0 0 1) ,但A1组与A2 组间比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。AⅠ 组与AⅡ 组IL 4浓度分别为 (12 6± 2 3) μg/L、(10 7± 2 6     

γ干扰素质粒基因转染对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响

目的观察气道内γ干扰素(IFNγ)基因转染对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道炎症的影响。方法健康6周龄SPF级C57BL/6小鼠40只,按随机数字表法分为4组。正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、模型空质粒干预组(C组)、模型IFNγ质粒干预组(D组),每组10只。B组、C组及D组以0.1%卵白蛋白(OVA)0.1ml腹腔注射致敏,以1%的OVA50μl滴鼻激发建立哮喘模型;A组用等量生理盐水分别代替0.1%的OVA0.1ml和1%OVA50μl;C组和D组分别经鼻滴入空质粒pcDNA3.1()和Lipofentamine2000混合液50μl或重组IFNγ质粒和Lipofentamine2000混合液50μl。观察各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞成分、白细胞介素4(IL4)、IL5、IFNγ和肺组织病理学变化。结果B组小鼠BALF中炎性细胞总数、嗜酸粒细胞(EOS)、中性粒细胞和淋巴细胞计数分别为(0.102±0.020)×109/L、(0.0193±0.0047)×109/L、(0.0107±0.0039)×109/L、(0.0255±0.0042)×109/L,A组分别为(0.082±0.012)×109/L、(0.0041±0.0009)×109/L、(0.0051±0.0016)×109/L、(0.0201±0.0019)×109/L,A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.05);D组小鼠BALF中炎性细胞总数、EOS、中性粒细胞和淋巴细胞计数分别为(0.086±0.016)×109/L、(0.0116±0.0031)×109/L、(0.0062±0.0018)×109/L、(0.0182±0.0041)×109/L,与B组比较差异有统计学意义(P<0.05)。B组小鼠BALF中IL4、IL5、IFNγ水平分别为[(39.2±5.1)pg/ml、(83.7±4.7)pg/ml、(15.7±2.7)pg/ml],A组小鼠分别为[(13.3±1.9)pg/ml、(12.1±2.3)pg/ml、(31.8±7.9)pg/ml],A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.05);D组小鼠BALF中IL4、IL5、IFNγ水平分别为[(16.4±3.2)pg/ml、(26.3±3.4)pg/ml、(65.4±10.4)pg/ml],与B组比较差异有统计学意义(P<0.05)。A组小鼠气道无明显炎症变化,B和C组小鼠小支气管、血管黏膜下和周围肺组织有明显的炎症细胞浸润,血管壁明显水肿;D组小鼠气道炎症明显减轻。结论气道内转染干扰素质粒能有效改善哮喘小鼠细胞因子IL4、IL5和IFNγ异常,同时对EOS、中性粒细胞数和淋巴细胞肺内募集、肺组织炎症改变有一定抑制作用。     

鼠白细胞介素12质粒对小鼠支气管哮喘模型气道炎症及细胞因子的影响

目的　研究鼠白细胞介素 12 (IL 12 )基因表达 (mIL 12 )质粒对小鼠支气管哮喘 (简称哮喘 )模型气道炎症及细胞因子的影响 ,并分析其作用机制。方法　卵白蛋白 (OVA)致敏建立小鼠哮喘模型。BALB/c小鼠 4 1只 ,分为 6组。即哮喘模型组 (A组 ) 8只 :OVA致敏 +OVA气雾攻击 ;模型对照组 (B组 ) 6只 :用生理盐水代替 1%OVA溶液雾化 ,余处理同A组 ;mIL 12质粒预防组 (C组 ) 8只 :实验第 1、3、5天各肌肉注射mIL 12质粒 10 0 μg ;mIL 12质粒治疗组 (D组 ) 8只 :实验第 14、16、18天各肌肉注射mIL 12质粒 10 0 μg ;空质粒预防组 (E组 ) 5只 :实验第 1、3、5天各肌肉注射空质粒 10 0 μg ;空质粒治疗组 (F组 ) 6只 :实验第 14、16、18天各肌肉注射空质粒 10 0 μg。测定所有小鼠支气管 肺泡灌洗液 (BALF)中的嗜酸粒细胞 (EOS)个数和IL 4、IL 5、γ干扰素 (IFN γ)水平。结果B组小鼠EOS个数和IL 4、IL 5、IFN γ浓度分别为 (0 0 1± 0 0 3)× 10 8/L、(2 4± 4 ) pg/ml、(33± 6 ) pg/ml、(72 5± 5 9) pg/ml,C组为 (0 0 6± 0 0 4 )× 10 8/L、(43± 13) pg/ml、(6 3± 10 )pg/ml、(6 2 6± 6 0 ) pg/ml,D组为 (0 11± 0 12 )× 10 8/L、(38± 14 )pg/ml、(6 6± 14 ) pg/ml、(6 6 1± 4 0 ) pg/ml,与A     

微卡对致敏小鼠气道炎症和Th1/Th2比例变化的影响

目的　观察母牛分支杆菌菌苗 (微卡 )对致敏小鼠抗原攻击后气道炎症、Th1和Th2细胞因子的比例变化 ,评估微卡防治哮喘的药理作用。方法　小鼠分 9组 ,每组 7～ 1 0只。采用皮肤划痕、气管滴入、肌肉注射三种给药途径单次给药 ,观察比较微卡菌苗对致敏小鼠吸入抗原后支气管肺泡灌洗液 (BALF)中炎症细胞 ,γ干扰素 (IFN γ)和白细胞介素 4(IL 4)水平变化的影响和作用强度。结果　经皮肤划痕 (2 .2 5μg)、气管内滴入 (2 .2 5μg)、肌肉注射 (2 2 .5μg)后BALF中炎症细胞总数分别为 (6± 6)× 1 0 8/L、(7± 6)× 1 0 8/L、(8± 5)× 1 0 8/ml,与模型组 (1 5± 8)× 1 0 8/L比较 (P <0 .0 5) ;嗜酸细胞 :皮肤划痕组 (2 2 5μg)为 0 7± 0 5、气管内滴入 (2 2 5μg)为 1 6± 1 9、肌肉注射 (7 5μg)为 2 6±1 3、肌肉注射组 (2 2 .5μg)为 1 .40± 1 .2 0 ,与模型组 (4.90± 4 .60 )比较 (P <0 .0 5或 <0 .0 1 ) ;皮肤划痕组 (2 .2 5μg)BALF中IFN γ水平为 (2 89± 57)pg/ml、气管滴入组 (2 .2 5μg)为 (335± 57)pg/ml、肌肉注射组 (2 2 .5μg)为 (31 3± 49)pg/ml,与模型组 (2 1 6± 42 )pg/ml比较 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ;皮肤划痕组(2 .2 5μg) BALF中IL 4水平为 (63± 1 9)pg/ml、气管滴入组     

白细胞介素12重组腺病毒气道内应用对哮喘豚鼠治疗作用的研究

目的　探讨激发前气道内应用白细胞介素 12 (IL 12 )重组腺病毒对过敏性气道高反应的调节作用。方法　以C5 7BL/ 6小鼠经鸡卵蛋白 (OVA)免疫建立哮喘模型 ,实验分 6组 ,每组 6只。激发前气管内单次使用IL 12重组腺病毒 (10 8pfu/mouse) ,观察抗原激发后反应的变化。结果　 (1)小鼠气道内应用IL 12重组腺病毒在肺内可有效表达 ,48h血浆及肺泡灌洗液IL 12分别为 (5 40± 6 0 )U/ml和 (470 0± 80 0 )U/ml,对照病毒和PBS组未检出 ,两组比较差异有显著性 (P <0 0 1)。 (2 )在抗原激发阶段使用IL 12重组腺病毒 ,可明显抑制肺内IL 4[(3 5± 2 0 )ng/ml∶85 0± 2 5 0 )ng/ml]和IL 5[(6 5± 4 5 )ng/ml∶(5 4 0± 14 0 )ng/ml];γ干扰素 (IFN γ)的产生增加 [(6 90 0± 32 0 )ng/ml∶(12 5±3 2 )ng/ml];并明显抑制气道高反应性 [(36 0± 30 )cmH2 O∶(810± 5 0 )cmH2 O];抑制外周血 [(0 7±0 1) %∶(9 2± 0 5 ) % ]及肺泡灌洗液 [(3 5± 0 7)∶(2 1 6± 4 7)× 10 4 /ml]中的嗜酸细胞的水平 ;与对照组比较 (t分别 =7 97、7 92、5 1 6、18 9、9 33、47 1,P均 <0 0 1) ;但与总IgE[(6 5± 9) μg/ml∶(6 7± 10 )μg/ml]及抗原特异性IgE[(32± 8)∶(33± 8)U/ml]比较无明显影响 (P均 >0 0 5 )。