胶体金标法快速检测鼠疫F1抗体的现场应用

目的了解胶体金标快速检测试剂盒检测鼠疫FI抗体的现场应用。方法按鼠疫快速诊断盒(胶体金标法)的使用说明进行,并与间接血凝微量法(IHA)进行比较。结果检测了来自云南家鼠鼠疫流行区和非流行区血清共335份,检出腺鼠疫病人血清阳性32份,与IHA法结果一致。结论胶体金标鼠疫FI抗体快诊盒诊断鼠疫简便、快速、特异、敏感,便于现场鼠疫监测应用。     

金免疫层析法对两例鼠疫患者血清抗体的跟踪检测分析

目的 评价胶体金免疫层析法(GICA)对鼠疫患者血清F1抗体检测效果.方法 GICA和间接血凝(IHA)两种方法平行跟踪检测.结果 GICA检测两例鼠疫患者在发病后4～450 d血清中鼠疫F1抗体结果与IHA结果一致.结论 GICA与IHA跟踪检测鼠疫患者F1抗体结果相同,GICA也适用于鼠疫现场血清学诊断.     

青海省玉树县果青地区国营牧场藏系绵羊鼠疫血清流行病学调查

目的对玉树县果青地区国营牧场藏系绵羊(以下简称为藏羊)血清鼠疫FI抗体的检测,了解当地藏系绵羊鼠疫流行情况。方法应用鼠疫间接血凝(IHA)和鼠疫胶体金(GICA)2种方法检测该地区藏系绵羊血清和旱獭血清。结果应用IHA和GICA方法分别对所采集的755份藏羊血清进行检测,阳性血清6份,抗体滴度1∶40的5份、1∶80的l份。旱獭血清检测结果为阴性。结论该地区存在藏羊鼠疫的流行。应加强藏羊鼠疫的监测工作,尤其是在旱獭鼠疫流行地区,更应该引起重视。     

胶体金免疫层析测试条快速诊断鼠疫应用研究

目的观察胶体金免疫层析测试条快速诊断鼠疫的效果。方法用胶体金免疫层析抗体(抗原)测试条与鼠疫间接血凝试验(IHA)/反向间接血凝试验(RIHA)两种方法平行检测鼠疫的抗体(或抗原)。结果通过对实验感染动物、青海鼠疫疫源地内鼠疫患者(尸体)及染疫动物等396份样品的检测,两种方法符合率为100%。结论胶体金免疫层析法操作简单、方便、快速,适用于现场应用和鼠疫的快速诊断。     

鼠疫F1抗体三种血清学检测方法比较

目的 比较鼠疫F1抗体三种血清学检测方法的效果.方法 通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、试管法间接血凝试验(IHA)和胶体金纸上色谱试验(GICA)三种血清学检测方法检测血清中鼠疫F1抗体.结果 ELISA检测F1抗体的最高抗体滴度为1∶5120,IHA的最高抗体滴度为1∶640,GICA的最高抗体滴度为1∶1280.结论 三种血清学检测方法中酶联免疫吸附试验(ELISA)敏感性最高,胶体金纸上色谱(GICA)次之,试管法间接血凝试验(IHA)最低.     

青海省西宁及海东市藏系绵羊鼠疫血清流行病学调查

目的青海省西宁及海东市藏系绵羊血清鼠疫FI抗体检测,了解当地藏系绵羊鼠疫流行情况。方法应用鼠疫间接血凝和鼠疫胶体金2种方法对该地区藏系绵羊血清进行鼠疫Fl抗体检测。结果 IHA和GICA方法分别对所采集2301份藏羊血清进行检测,均检出鼠疫Fl抗体阳性血清3份,其中滴度1:20的1份,l:40的2份,阳性率为1.3‰。结论该地区检出鼠疫Fl抗体阳性的藏羊血清,具有通过输入藏羊而传播鼠疫的风险,应加强藏羊鼠疫的监测工作。     

金标免疫层析法与间接血凝法在鼠疫诊断中的比较

目的 了解胶体金快速检测试剂盒检测鼠疫Fl抗体的应用.方法 按鼠疫胶体金快速检测试剂盒的使用说明进行,并用间接血凝法(IHA)进行比较.结果 检测了采集于青海鼠疫疫源地内及非疫源地血清共3 079份,检出阳性血清268份,对照组血清14份,结果均为阴性,与IHA结果基本一致. 结论胶体金快速检测试剂盒诊断鼠疫简便、快速、特异、敏感,最适宜现场鼠疫检测.     

云南省洱源县鼠疫阳性线索实验室检测分析

目的了解云南省洱源县三营镇永乐村驻地是否处于鼠疫流行期,为做好鼠疫防控工作提供依据。方法2014年5月采用现场调查和实验室检测相结合的方法开展鼠疫调查工作,采用间接血凝试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析(GICA)方法对采集的样本进行鼠疫F1抗原和F1抗体的实验室检测,对死鼠脏器进行鼠疫菌分离培养。结果 3份死鼠脏器未分离出鼠疫菌,F1抗原检测均阴性;128份犬血清、3份鼠血清进行F1抗体检测,IHA均阴性、ELISA阳性3份、GICA阳性5份,两种方法均阳性2份。结论洱源县可能存在鼠疫F1抗体阳性犬,需进一步加强该地区的鼠疫监测工作。     

胶体金层析试纸条应用于1起人间肺鼠疫诊断

2004年9-10月,青海省玉树藏族自治州囊谦县发生1起人间肺鼠疫的爆发流行。在此起鼠疫疫情的实验诊断中,除应用常规的间接血凝试验(IHA)和反相间接血凝试验(RIHA)进行血清学诊断外,还结合应用免疫胶体金层析(GICA)技术,对被检材料进行平行检测,现将结果报道如下。1材料与方法1.1检测标本:5例肺鼠疫患者尸体脏器(包括心、肝、脾、肺、骨髓)及7例现患     

胶体金免疫层析法检测鼠疫F1抗体技术的应用及效果评价

目的研究鼠疫胶体金免疫层析法(GICA)快速检测鼠疫F1抗体技术在鼠疫血清学诊断、监测及流行病学调查中的应用及效果评价。方法应用GICA、双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)和间接血球凝集试验(IHA)对比检测190份啮齿动物血清和11份鼠疫免疫血清中鼠疫F1抗体。结果190份动物血清IHA检测结果均为阴性:GICA检测出1份阳性血清,滴度1:10;DAgS-ELISA检测出3份阳性血清,滴度1:4( ) 2份和1:16( )1份。3种方法检测11份鼠疫免疫血清均为9份阳性,但GICA敏感性低于IHA和DAgS-ELISA (GICA与IHA:t=3．257,P<0．05;GICA与ELISA:t=3．625,P<0．01;IHA与ELISA:t=1.437,P>0．05)。201份血清检测结果,GICA与IHA总符合率99．50％,与DAgS-ELISA总符合率99．00％,3种方法检测结果差异无统计学意义(x2=0．5,P>0．05)。结论GICA检测鼠疫F1抗体敏感特异、简便快速,与DAgS-ELISA同样为鼠疫血清学快速诊断和鼠疫监测中有应用价值的检测技术。     

ELISA双抗原夹心法检测鼠疫FI抗体的效果评价

目的比较ELISA双抗原夹心法与IHA法检测人血清中鼠疫FI抗体的最低检出限,符合率以及检测ELISA的特异性,以确定ELISA检测技术能否在鼠疫监测、诊断和流行病学调查中得到应用。方法分别用ELISA双抗原夹心法和IHA（间接血凝法）检测血清298份和鼠疫阳性诊断血清1份。结果ELISA双抗原夹心法检出4份阳性血清,IHA也检出4份阳性血清,2种方法阳性检出率无差别,符合率为75％,最低检出限均为1：160。结论ELISA特异性强,阳性检出率与IHA相当,结果容易判定,可以在鼠疫病例诊断及鼠疫监测中作为常规方法推广使用。     

放射免疫沉淀试验检测鼠疫FI抗体的研究——Ⅰ.特异性与敏感性

试验证明,用放射免疫沉淀试验(RIP)检测鼠疫抗体时,将被试血清与相应的阴性对照血清的结合比定为≥3作为反应标准是适宜的;用RIP检测假结核,小肠结肠炎菌等抗血清30份,这些抗血清在1:10到1:100的各种稀释度中与~(125)I-鼠疫FI抗原均无交叉反应,从非鼠疫疫区收集的2196份哺乳动物血清,亦未发现阳性反应,说明该法特异性强。由于RIP是用分离剂沉淀鼠疫抗原-抗体复合物,故能检出不完全抗体,检出率不仅高于常规的间接血球凝集试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA),且滴度往往高十几倍、几十倍,乃至几百倍。所以用RIP检测潜在性鼠疫疫源地、考核灭源效果以及在科研中用于检测微量鼠疫抗体具有重要意义。加之该法自动化程度高,测试信息以数字显示,因而指标客观,容易分析,适于大规模现场调查。     

广东省雷州市鼠疫疫源地人群血清流行病学调查及分析

目的了解广东省鼠疫疫源地健康人群鼠疫FI机体的分布水平、及其产生和维持机制。方法采集雷州市鼠疫疫源地2个乡镇农民的血样121份作为调查组和非历史疫区的农民血样200份作为对照组．进行常规鼠疫间接血凝试验。结果通过对鼠疫疫源地人群的121份血清的俭洲、共检出鼠疫FI抗体阳性血清12份，阳性率为9．91％％。鼠疫非疫区健康人群血清200份，结果均为阴性一结论存鼠疫疫源地50岁以上健康人群中存在着一定比例FI抗体阳性者，是鼠疫菌苗被动免疫产生．还是50年前隐性鼠疫感染等因素，有待进一步调查和研究．但排除阳性人群居住区域有动物鼠疫现疫流行的存在。     

3 种免疫诊断试剂检测人群血清中日本血吸虫抗体的效果比较

目的  评价斑点免疫金渗滤法（DIGFA）、胶体染料法（DDIA）和间接血凝试验（IHA）三种方法在我县不同流行程度、不同流行类型地区中检测人群血清中血吸虫抗体的效果。方法  按照整群抽样的方法,分别在洲滩型传播控制地区的群心村、山丘型传播控制地区的金塔村和传播阻断地区的郎坑村各随机抽取150人作为检测对象,分别用DIGFA、DDIA和IHA检测待检对象血清中血吸虫抗体,并对检测结果进行统计分析。结果   DIGFA、DDIA和IHA 对传播阻断村人群血清均未检出血吸虫抗体;对山丘型传播控制村人群血清血吸虫抗体检测阳性率分别为13.3%（20/150）、2.0%（3/150）和12.0%(18/150);而三种方法组合检测的阳性率提高至19.33%（29/150）,用DIGFA和IHA组合检测的阳性率提高至17.33%(26/150)。对洲滩型传播控制村人群血清血吸虫抗体检测阳性率,DIGFA、DDIA和IHA分别为26.7%（40/150）、9.3%（14/150）和24.7%（37/150）;而三种方法组合检测的阳性率提高至36.0%（54/150）,用DIGFA和IHA组合检测的阳性率提高至34.0%(51/150)。结论  由于铜陵县疫情已达到传播控制,人群感染率和感染度逐年下降,采用多种方法组合检测,可以提高人群血吸虫抗体的检出率。     

检测鼠疫抗体胶体金免疫层析试纸条的研制

目的建立快速、简易的检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析法(G ICA)。方法(1)采用胶体金颗粒标记纯化F1抗原,并将标记物喷于玻璃纤维;同时将纯化F1抗原喷线固定于硝酸纤维素膜上,用于F1抗体的捕捉;按常规组装成检测鼠疫抗体免疫层析试纸条。(2)采用该试纸条与血凝法对同一份兔抗F1抗体进行检测,以评价该试纸条的敏感性。(3)采用该试纸条对44株非鼠疫菌的免疫鼠血清进行检测,以评价该试纸条的特异性。(4)采用该试纸条、血凝法及ELISA对607份血清标本进行检测,以评价该试纸条对现场材料的检测效果。结果(1)该试纸条可在15 m in之内完成检测;(2)在敏感性上,该试纸条对同一份免疫兔血清的检测较血凝法高一个滴度;(3)对被试的44株所选菌株的免疫鼠血清的检测均为阴性;(4)在对607份血清标本的检测中,免疫层析试纸条、血凝及ELISA三种方法的符合率中度,而免疫层析试纸条的敏感性分别比血凝与ELISA高111%和90%。结论以纯化的鼠疫F1抗原为基础建立的G ICA检测鼠疫F1抗体的方法特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有较大的推广应用价值。     

鼠疫快速诊断技术及其应用研究

目的寻找和确定引起特异性不足的因素,实施科学的对策加以解决,真正实现鼠疫的快速诊断技术并以此为基础构建新一代的检测技术。方法(1)研制高质量的鼠疫F1抗原的单克隆抗体,考虑到位点问题要求尽可能多的、针对不同位点的高效价瘤株,构建稳定的“抗体源;”(2)利用获得的高效瘤株通过纯系小鼠生产抗体或用无蛋白细胞培基生产抗体;(3)对抗体进行纯化并使其达到“免疫纯水平”并建立提取、纯化工艺,最终建立稳定的低成本的无交叉“抗体源;”(4)纯化抗原至“免疫纯水平”或“电泳纯水平”,建立提取、纯化工艺,最终建立稳定低成本的无交叉“抗原源;”(5)对新一代快速检测技术进行实验室和现场评价,对特异性即实验的准确性做出评价。结果(1)确定了影响鼠疫免疫学诊断技术特别是间接红细胞凝集试验(IHA及R IHA)特异性不足的两大因素:a.技术落后,试验中采用的载体不适导致了相当数量的假性凝集;b.技术方法中使用的抗原、抗体严重不纯,尤其是制备抗体时免疫动物“自身抗体”的掺入是造成交叉反应更重要的因素;(2)研制并开发出分泌抗鼠疫F1单克隆抗体(F1-M cAb)的杂交瘤株164株,并从其中筛选出针对不同位点的高效瘤株6株,经活性鉴定及配对试验形成了4个组合,具高效价和高活性;(3)使用制备电泳技术将鼠疫F1抗原提纯至电泳纯水平;(4)将鼠疫F1-M cAb提纯至免疫纯水平;(5)引进、消化了具有先进水平的胶体金标免疫层析技术;(6)使用电泳纯的鼠疫F1抗原及免疫纯的鼠疫F1-M cAb构建了能自人和动物血液中直接检测鼠疫特异抗体的金标免疫层析技术(G ICA)和能自人和动物脏器或穿剌物中直接检测鼠疫F1抗原或鼠疫病原的反向金标免疫层析技术(RG ICA);(7)由于采用了纯化的抗原、抗体,提高了标记效果,其敏感性超过IHA和R IHA,阳性检出率在排除了假阳性和交叉反应后依然高出血凝约5%左右;(8)上述两项技术实验室内经44株非鼠疫菌抗血清和90株非鼠疫菌交叉测定、中和试验以及蛋白印迹鉴定(W estern b lotting)均证实反应特异,基本消除了传统技术存在的非特异反应;(9)经4省(区)不同宿主动物3 168份(其中血清材料2 265份,脏器材料903份)现场标本验证,与实验室取得了一致的结论。结论胶体金免疫层析测试条较好地解决了特异性之难题,有效地避免了其它病原微生物导致的以及酸、碱和嗜异性凝集素、低温条件等造成的假性凝集,同时也有效地消除了由于抗原、抗体不纯,特别是实验动物自然感染其它病原产生的“自身抗体”导致的交叉反应,该技术操作简便,特别适合现场和边远地区应用,对比传统技术该法不需专业性操作,不需仪器设备,因而乡村医生可自行进行操作并做出诊断。     

我国一些地区羊衣原体血清流行病学调查分析

羊衣原体是由专性细胞内寄生的流产嗜衣原体引起的一种人兽共患传染病,危害严重。为了解近年我国一些地区羊衣原体的流行情况,特以间接血凝试验(IHA)对采自全国8个省(区)的羊血清样本进行检测,阳性率达46.09%(342/742)。其中湖北省、安徽省、山东省、新疆省、吉林省、四川省、宁夏省和甘肃省分别为60%(12/20)、42.86%(51/119)、52.75%(48/91)、40.13%(122/304)、51.91%(68/131)、30.56%(11/36)、67.74%(21/31)和90%(9/10),显示羊衣原体在我国流行严重。与以往资料相比较,感染率在全国呈逐年增加趋势。绵羊、山羊的抗体阳性率分别为47.27%(268/576)和42.28%(74/175),表明前者感染率要高于后者。