银染法观察大肠杆菌生物被膜变化初探

目的探讨银染法下利用普通光学显微镜观察大肠杆菌生物被膜在药物作用前后的变化。方法采用腹膜透析液-腹膜透析管系统建立大肠杆菌生物被膜,分别用扫描电镜和银染法染色后应用普通光学显微镜来观察细菌生物被膜在药物作用前后的变化情况。结果使用银染法后用普通光镜观察大肠杆菌生物被膜变化的情况与用扫描电镜观察的结果一致。结论银染法下利用普通光学显微镜可以更为便捷地观察大肠杆菌生物膜的变化情况,且实验结果稳定、可靠。     

生物被膜肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶的检测

目的探讨生物被膜菌的耐药机制,为临床合理应用抗生素提供理论依据。方法对2004年4月至2005年11月中国医科大学附属第二医院应用改进的平板培养法建立的肺炎克雷伯菌生物被膜模型,用银染法和扫描电镜观察鉴定。以亚胺培南为诱导剂诱导生物被膜菌超广谱β-内酰胺酶的产生。采用标准纸片扩散确证法检测超广谱β-内酰胺酶,等电聚焦电泳测β-内酰胺酶的等电点。结果浮游肺炎克雷伯菌(A组)超广谱β-内酰胺酶的检出率为20.0%(8/40);生物被膜肺炎克雷伯菌(B组)超广谱β-内酰胺酶的检出率为42.5%(17/40);亚胺培南诱导生物被膜肺炎克雷伯菌(C组)超广谱β-内酰胺酶的检出率为65.0%(26/40)。对A组和B组的检出率,B组和C组的检出率进行χ2检验,结果差异均有显著性(P均<0.05)。结论生物被膜的形成和产生超广谱β-内酰胺酶的协同作用是肺炎克雷伯菌耐药的主要原因之一。     

生物被膜肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶的检测

目的探讨生物被膜菌的耐药机制，为临床合理应用抗生素提供理论依据。方法对2004年4月至2005年11月中国医科大学附属第二医院应用改进的平板培养法建立的肺炎克雷伯菌生物被膜模型，用银染法和扫描电镜观察鉴定。以亚胺培南为诱导剂诱导生物被膜菌超广谱β-内酰胺酶的产生。采用标准纸片扩散确证法检测超广谱β-内酰胺酶，等电聚焦电泳测β-内酰胺酶的等电点。结果浮游肺炎克雷伯菌（A组）超广谱β-内酰胺酶的检出率为20．0％（8／40）；生物被膜肺炎克雷伯菌（B组）超广谱β-内酰胺酶的检出率为42．5％（17／40）；亚胺培南诱导生物被膜肺炎克雷伯菌（C组）超广谱β-内酰胺酶的检出率为65．0％（26／40）。对A组和B组的检出率，B组和C组的检出率进行x^2检验，结果差异均有显著性（P均〈0．05）。结论生物被膜的形成和产生超广谱β-内酰胺酶的协同作用是肺炎克雷伯菌耐药的主要原因之一。     

生物被膜克雷伯杆菌β-内酰胺酶活性的检测

近年来研究证明克雷伯杆菌易形成生物被膜 (ＢＦ) [1] ,关于生物被膜克雷伯杆菌产 β 内酰胺酶活性的研究国内外尚未见到报道。本实验检测浮游克雷伯杆菌、生物被膜克雷伯杆菌及亚胺培南诱导后生物被膜克雷伯杆菌产 β 内酰胺酶的能力 ,探讨生物被膜中克雷伯杆菌的耐药机制。材料与方法　材料 :抗菌药物 :亚胺培南 (美国默沙东公司 )。试剂 :2 5 %戊二醛、1%锇酸、枸橼酸铅等 ,均为国产分析醇。菌株 :选取产 β 内酰胺酶肺炎克雷伯杆菌 30株 (中国医科大学附属第二临床学院细菌室分离 )。培养基 :胰酶大豆肉汤 (ＴＳＢ ,法国ＢｉｏＭｅｒｉ…     

生物被膜大肠杆菌β内酰胺酶活性的检测

目的探讨生物被膜大肠杆菌的耐药机制.方法用改进的平板培养法建立大肠杆菌生物被膜模型,用扫描电镜进行鉴定.分别检测浮游大肠杆菌(A组)、生物被膜大肠杆菌(B组)及亚胺培南(C组)和头孢西丁(D组)诱导后生物被膜大肠杆菌产β内酰胺酶的活性.结果生物被膜大肠杆菌产β内酰胺酶是浮游大肠杆菌的2.16倍,经亚胺培南和头孢西丁诱导后生物被膜大肠杆菌β内酰胺酶的活性分别是生物被膜大肠杆菌的1.30倍和1.05倍.结论生物被膜大肠杆菌耐药与产生β内酰胺酶有关.     

生物被膜大膜杆菌β内酰胺酶活性的检测

目的：探讨生物被膜大肠杆菌的耐药机制。方法：用改进的平板培养法建立大肠杆菌生物被膜模型，用扫描电镜进行鉴定。分别检测浮游大肠杆菌（A组），生物被膜大肠杆菌（B组）及亚胺培南（C组）和头孢西丁（D组）诱导后生物被膜大肠杆菌产β内酰胺酶的活性。结果：生物被膜大肠杆菌产β内酰胺酶是浮游大肠杆菌的2．16倍，经亚胺培南和头孢西丁诱导后生物被膜大肠杆菌β内酰胺酶的活性分别是生物被膜大肠杆菌的1．30倍和1．05倍。结论：生物被膜大肠杆菌耐药与产生β,内酰胺酶有关。     

老年膀胱造瘘患者生物被膜菌与泌尿系感染的相关性

目的探讨老年膀胱造瘘患者细菌生物被膜的形成情况及生物被膜菌的耐药机制。方法收集61例72～102岁老年膀胱造瘘患者的导管,导管拔出后运用超声震荡使导管表面生物被膜完全脱落,通过扫描电镜观察管壁细菌生物被膜形成的情况;对导管内定置细菌进行培养鉴定并采用标准纸片扩散法检测超广谱β内酰胺酶的产生情况。结果膀胱造瘘管培养的致病菌主要包括大肠埃希菌(34.4%)、铜绿假单胞菌(23.0%)、粪肠球菌(18.0%)、阴沟肠杆菌(16.4%)、表皮葡萄球菌(6.6%)、肺炎克雷白杆菌(3.3%)等,生物被膜菌超广谱β内酰胺酶的阳性率明显高于浮游菌(P<0.05)。结论生物被膜的形成和超广谱β内酰胺酶的产生是老年膀胱造瘘患者难治性尿路感染的一个主要原因。     

不同浓度黄芩苷对高毒力肺炎克雷伯菌生长及生物被膜形成能力影响的初步探讨

目的 研究黄芩苷对高毒力肺炎克雷伯菌体外生长及生物被膜形成能力的影响.方法 以编号为3的高毒力肺炎克雷伯菌临床菌株作为试验菌株,微量稀释法测定黄芩苷最低抑菌浓度(MIC);通过细菌生长曲线观察黄芩苷对高毒力肺炎克雷伯菌生长的影响;连续稀释法检测黄芩苷对高毒力肺炎克雷伯菌生物被膜内活菌计数的影响;结晶紫染色法半定量测定黄...     

通过转录组学探讨外膜蛋白相关基因在多药耐药鲍曼不动杆菌生物被膜中的异常调控

目的 通过研究转录组学探讨外膜蛋白相关基因在多药耐药鲍曼不动杆菌生物被膜生成中的作用.方法 收集筛选我院多药耐药鲍曼不动杆菌菌株.高通量测序分析鲍曼不动杆菌在不同的生长状态下基因表达的差异.结果 多药耐药鲍曼不动杆菌生物被膜状态与快速生长期相比,确实存在基因表达差异.表达差异的基因中,106个基因表达上调,92个基因表达下调.其中,外膜蛋白的相关基因在生物被膜状态是显著表达的.结论 细菌的生物被膜状态是一种独特的存在形式.在生物被膜状态下,表达差异的基因集中于菌体外膜蛋白的表达和细胞内通路的因子调控.外膜蛋白是鲍曼不动杆菌生物被膜生成过程中表达最丰富的蛋白之一,在菌体生物被膜形成和成熟过程中发挥重要作用.     

鲍曼不动杆菌临床分离株生物被膜形成能力与耐药性的研究

目的研究鲍曼不动杆菌生物被膜形成能力与耐药性之间的相关性,为生物膜耐药机制的研究提供依据。方法平板结合结晶紫染色法建立鲍曼不动杆菌生物被膜模型,定量分析66株临床分离的鲍曼不动杆菌生物被膜形成能力,采用K-B纸片法测定菌株的耐药性,概率法检验生物被膜形成能力与耐药性的相关性。结果所测66株鲍曼不动杆菌中,60株(90.9%)具有生物被膜形成能力,其中形成试验弱阳性19株(28.8%),阳性19株(28.8%),强阳性22株(33.3%),阴性6株(9.1%)。鲍曼不动杆菌对头孢吡肟、头孢他啶、头孢噻肟、亚胺培南、美洛培南、哌拉西林、复方新诺明等的耐药性随着生物被膜的形成能力增强而降低(P0.05)。结论绝大多数临床分离株鲍曼不动杆菌具有较强的生物被膜形成能力;鲍曼不动杆菌的生物被膜形成能力与耐药存在负相关性。     

Silver staining of Pneumocystis carinii in the rat's lung

The backscattered electron imaging mode of the scanning electron microscope was used to study the ontogenetic acquisition of argyrophilia in Pneumocystis carinii in rats. Silver staining continually increased from the late trophozoite to the mature cyst stage. The silver uptake began with a fine outline at the surface of the bodies of the late trophozoites; their cellular extensions, however, did not stain. The oblate precyst forms acquired the silver in heterogeneous patches. On spherical cysts the silver staining became more uniform and intense with at least one dense spot. The spherical and collapsed cysts also had short silver staining projections that may represent microvilli. Collapsed forms were paler than spherical ones and appear to be cysts that have undergone partial or complete release of sporozoites. These cell surface observations confirm and amplify previous transmission electron microscopical and histochemical studies indicating that silver staining correlates with the acquisition of the cell pellicle.     

Musca domestica cecropin协同头孢曲松钠抗鼠伤寒沙门氏菌及生物被膜作用研究

目的 研究家蝇抗菌肽cecropin (Musca domestica cecropin, MDC) 和头孢曲松钠的协同抗鼠伤寒沙门氏菌作用及抗生物被膜作用。方法 采用微量肉汤稀释法、棋盘法、结晶紫染色等方法研究2种药的协同抗菌效果和抗生物被膜作用;用荧光染色、流式细胞术(FCM)、扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)观察联合用药的抗菌机制。结果 棋盘法计算FIC指数为0.218,结果表明MDC与头孢曲松钠之间存在协同抗菌作用;96孔板法联合结晶紫染色等结果显示联合用药对鼠伤寒沙门氏菌初始生物被膜具有抑制作用,并且能协同破坏成熟生物被膜;采用荧光染色与流式细胞术考察细胞膜的完整性,同浓度下MDC组对细胞膜的破坏为47%,头孢曲松钠组为30%,联合组能破坏89%的细胞膜。扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察到联合用药组中细菌细胞壁破损,细胞膜不完整,胞质内容物坏死溶解导致细胞肿胀破裂,药效强于单独用药组。 体外联合使用抗菌肽MDC与头孢曲松钠具有协同抗鼠伤寒沙门氏菌及生物被膜的作用。     

生物膜清洗剂与多酶清洗剂对内镜生物膜清除效果的对比研究

目的探索生物膜清洗剂与2种多酶清洗剂在内镜生物膜清除效果上的差异。方法建立铜绿假单胞菌内镜生物膜模型,对照组采用灭菌水浸泡,实验组分别采用1号多酶清洗剂、2号多酶清洗剂及生物膜清洗剂进行浸泡。在室温下分别作用5、10、15 min后,以细菌活菌计数法及扫描电镜法评价不同清洗剂对内镜生物膜模型的清洗效果。各组间活菌计数比较采用方差分析。结果作用5、10、15 min后,测定的生物膜菌落计数(CFU/cm2)空白对照组为7.92±0.21,1号多酶清洗剂组分别为5.31±0.10、5.04±0.08、4.90±0.16,2号多酶清洗剂组分别为5.53±0.30、5.39±0.21、5.03±0.42,生物膜清洗剂组分别为3.53±0.30、3.01±0.07、2.82±0.26。在相同作用时间下,两种多酶清洗剂组的菌落计数比较差异无统计学意义(P>0.05),生物膜清洗剂组菌落计数少于两种多酶清洗剂组(P<0.05)。且随着浸泡时间增加,生物膜清洗剂组菌落计数逐渐减少(P<0.05)。作用15 min后,扫描电镜下见生物膜清洗剂组清洗后的生物膜及细菌残留最少。结论两种多酶清洗剂的清洗效果相当,生物膜清洗剂较多酶清洗剂对内镜生物膜的清除效果更好,可明显提高内镜清洗质量。     

Biofilm formation of the pathogens of fatal bacterial granuloma after trauma: potential mechanism underlying the failure of traditional antibiotic treatments

The pathogen of a new type of disease - fatal bacterial granuloma after trauma (FBGT) - was found to be Propionibacterium acnes (P. acnes). Although in vitro studies showed that the pathogenic P. acnes are sensitive to conventional antibiotics, treatments of FBGT patients with these antibiotics were ineffective. The underlying mechanisms were not clear. Since P. acnes are able to form biofilm on orthopaedic biomaterials in vitro, and pathogenic P. acnes of acnes vulgaris was known to form biofilm in vivo, we hypothesize that the pathogens of FBGT are also able to form biofilm during the pathogenesis, which may be 1 of the reasons for antibiotics tolerance of FBGT. Biofilm forming capacity of the pathogens of FBGT were examined with XTT reduction method, as well as with scanning electron microscope. The effect of long-term subminimal inhibitory concentration (MIC) lincomycin on the biofilm forming ability of the pathogens was also tested. Our results show that both the type strain (NCTC737) and the pathogenic P. acnes of FBGT can form biofilm in vitro. These data demonstrated the biofilm formation of the FBGT pathogens in vitro, and its acceleration by lincomycin, which may be 1 of the major mechanisms for the failure of antibiotic treatment.     

The assay of beta-lactamase activity in Pseudomonas aeruginosa biofilm]

OBJECTIVE: To analyze the resistance mechanism of Pseudomonas aeruginosa biofilm bacteria. METHODS: An in vitro model of Pseudomonas aeruginosa bacterial biofilm was established in silicon disk with modified flat-board method and a rapid staining procedure of AgNO3 was used to verify it. Biofilm was observed under scanning electron microscopy. The test was carried out in three groups. Group A was planktonic bacteria of Pseudomonas aeruginosa, group B biofilm bacteria of Pseudomonas aeruginosa and group C biofilm bacteria induced by imipenem. The activity of beta-lactamase was quantitated with a spectrophotometric assay method and beta-lactamase quantitation was determined by using Bio-Rad protein assay. RESULTS: The activity and protein content of beta-lactamase in group B was higher than that in group A by 4.67 and 2.09 times. The activity of group C was 21.86 times as much as that in group A and 4.68 times as much as that in group B. The quantitation in group C was 6.28 times as much as that in group A and 3.00 times as much as that in group B. The activity and quantitation of the three groups were different significantly from each other (P < 0.01). CONCLUSION: The production of beta-lactamase in Pseudomonas aeruginosa biofilm bacteria is one of the main reasons of its resistance.     

蛋白多糖在脱细胞猪肺动脉带瓣管道中抗钙化的作用

目的:证实去除细胞外基质蛋白多糖对提高脱细胞猪肺动脉带瓣管道抗钙化性能的作用,为研制组织工程化肺动脉带瓣管道做准备。方法:实验分为3组,即A组:为新鲜猪肺动脉带瓣管道组织,B组:用胰蛋白酶+Triton X-100处理的脱细胞猪肺动脉带瓣管道组织和C组:在B组处理的基础上再经透明质酸酶消化,去除细胞外蛋白多糖基质成分的猪肺动脉带瓣管道组织,每组4份(n=4)。方法:实验室:将3组样本分别进行HE染色后,用光镜和扫描电镜观察肺动脉管壁及瓣膜组织的变化。采用盐酸胍抽提结合阿利新蓝染色法测定蛋白多糖的含量。同时将3组样本包埋于大鼠皮下,于6周后取出标本进行Van Kosaa银染色法(钙盐染色)和原子吸收分光光度计法分别定性、定量分析组织的钙化程度。结果:光镜和电镜检查结果显示,猪肺动脉管壁和瓣膜组织的细胞可以较完整的去除,纤维网架结构可以完整保持。蛋白多糖含量的测定显示,与A、B组相比,C组细胞外基质蛋白多糖的含量显著下降(P<0.05)。大鼠皮下包埋实验显示,与A、B两组相比,C组的钙化反应更少,管壁组织钙的含量显著下降(P<0.05)。结论:采用胰蛋白酶+Triton X-100脱细胞方法可以达到去除细胞的目的。通过大鼠皮下包埋实验证明,采用透明质酸酶消化减少细胞外基质蛋白多糖的含量可以进一步减少脱细胞组织的钙化反应,为组织工程肺动脉带瓣管道的构建提供较为理想的脱细胞基质材料。     

Scanning Transmission Electron Microscopy at High Resolution

We have shown that a scanning transmission electron microscope with a high brightness field emission source is capable of obtaining better than 3 A resolution using 30 to 40 keV electrons. Elastic dark field images of single atoms of uranium and mercury are shown which demonstrate this fact as determined by a modified Rayleigh criterion. Point-to-point micrograph resolution between 2.5 and 3.0 A is found in dark field images of micro-crystallites of uranium and thorium compounds. Furthermore, adequate contrast is available to observe single atoms as light as silver.