苦豆碱的体外细胞毒性以及抗HIV-1活性实验研究

目的探讨单体化合物苦豆碱的体外细胞毒性以及抗HIV-1活性作用,为寻找新的艾滋病治疗药物提供依据。方法以TZM-bl-HIV-1_(IIIB)系统和MT-2-HIV-1_(IIIB)系统为实验模型,用不同稀释度的苦豆碱溶液分别与TZM-bl细胞、MT-2细胞共同培养。采用ATP细胞活力检测试剂检测细胞的相对活力,观察苦豆碱对TZM-bl细胞、MT-2细胞的毒性作用;用HIV-1_(IIIB)感染TZM-bl细胞和MT-2细胞,利用基于TZM-bl细胞的荧光素酶检测试剂,检测HIV病毒相对水平,观察苦豆碱抑制HIV-1活性的作用。结果在TZM-bl-HIV-1_(IIIB)系统中,苦豆碱对TZM-bl细胞的半数细胞毒性浓度(CC_(50)) 215. 183μM,苦豆碱对HIV-1_(IIIB)的半数抑制浓度(IC50)为3. 403μM,治疗指数(TI) 63. 2。在MT-2-HIV-1_(IIIB)系统中,苦豆碱对MT-2细胞的CC_(50)为802. 000μM,对HIV-1_(IIIB)的IC_(50)为47. 190μM,TI为 16. 9。结论苦豆碱毒性小,抗HIV-1活性明显,具有潜在的开发利用价值。     

芒果叶提取物体外抗HIV-1活性研究

［摘要］　目的　探讨芒果叶提取物的体外抗人类免疫缺陷病毒1（HIV-1）活性,为研究与开发传统中医药资源治疗获得性免疫缺陷综合征（AIDS）提供参考。方法　通过三磷酸腺苷(ATP)法评估干预药物对TZM-bl细胞和MT-2细胞活性的影响。构建TZM-bl-HIV-1_ⅢB、MT-2-HIV-1_ⅢB两种细胞-病毒感染模型,通过荧光素酶活性检测试剂检测病毒活性,评估干预药物的抗HIV-1活性。观察MT-2-HIV-1_ⅢB细胞系统中芒果叶提取物对细胞病变效应(CPE)的抑制情况。计算芒果叶提取物的半数毒性浓度(CC₅₀)、半数抑制浓度(IC₅₀)和选择指数(SI)。结果　在TZM-bl-HIV-1_ⅢB和MT-2-HIV-1_ⅢB两种细胞-病毒感染模型中,芒果叶提取物均显示出抗HIV-1活性,且呈现剂量依赖性。在TZM-bl-HIV-1_ⅢB模型中,芒果叶提取物的CC₅₀为（320.00±29.44）μg/ml,IC₅₀为（8.86±0.26）μg/ml,SI为36.14。在MT-2-HIV-1_ⅢB模型中,芒果叶提取物CC₅₀为（174.13±22.36）μg/ml,IC₅₀为（15.23±9.99）μg/ml,SI为11.44。结论　芒果叶提取物的体外细胞毒性小,抗HIV-1活性显著,具有潜在的开发利用价值。     

HIV-1B/C重组毒株gp160假病毒的构建及其活性检测

目的以CD4+T细胞DNA为模板,进行gp160扩增,构建艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)前病毒假病毒,通过中和试验验证其具有感染活性。方法选择高效抗反转录病毒治疗(HAART)成功的病人3例,分离外周血单核细胞(PBMC),纯化CD4+T细胞,提取DNA,以其为模板扩增gp160全长基因,并克隆到pcDNA3.1(+)表达载体上,酶切验证得到阳性克隆。将此阳性克隆和pNL4-3质粒共转染,获得HIV-1假病毒。用免疫兔血清验证假病毒的感染活性。结果成功地获得了1株假病毒。用免疫后的兔血清测定半数抑制浓度(IC50)的滴度约在1∶90~1∶270之间。病毒的加入量与细胞感染率之间存在良好的线性关系,说明该假病毒感染系统可以通过细胞感染率较好地反映出感染性病毒的含量。结论获得了具有感染活性的HIV-1B/C重组型假病毒。     

南蛇藤乙酸乙酯提取物诱导HepG2细胞凋亡的实验研究

目的探讨南蛇藤乙酸乙酯提取物对HepG2细胞增殖和诱导凋亡的机制。方法采用CCK-8法检测细胞增殖;使用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;采用分光光度计检测凋亡细胞胞浆caspase-3的活性变化。结果不同浓度的南蛇藤提取物能抑制HepG2细胞增殖,呈剂量效应和时间效应关系;药物作用24h时,其IC50为111.8μg/ml,作用48h时,其IC50为99.7μg/ml,作用72h时,其IC50为43.0μg/ml;药物干预24h时,HepG2细胞停滞在G0-G1期,并产生细胞凋亡亚二倍峰。在药物为15μg/ml、30μg/ml和60μg/ml时,细胞凋亡率分别为44.91%、31.95%和21.94%,与对照组比较,均有显著性差异（F=5.449,P〈0.05）;在药物浓度为30μg/ml、60μg/ml和120μg/ml并分别作用24h和48h时,Caspase-3活性逐渐增强。结论南蛇藤乙酸乙酯提取物抑制HepG2细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用可能与其增强Caspase-3活性有关。     

HIV NL4-3病毒株非感染性细胞-细胞融合模型的构建

目的 构建一种基于HIV实验室株NL4-3包膜蛋白env的非感染性、可视化细胞-细胞融合模型,用于检测HIV-1进入抑制剂的抑制活性。方法构建可同时表达HIV NL4-3 env及GFP的真核表达质粒pAAV-IRES-GFP-NL4-3,瞬时转染293T细胞,使293T细胞同时表达2种蛋白(293T/NL4-3/GFP)后,与靶细胞TZM-b1细胞共同培养,观察细胞融合情况及合胞体的形成。同时,在该模型上测试HIV进入抑制剂C34和T1144的抑制活性。结果 293T/NL4-3/GFP和TZM-b1细胞混合2 h后,可在荧光显微镜下发生明显融合;24 h后可形成大面积融合。HIV-1进入抑制剂C34、T1144能够抑制细胞融合,其半抑制浓度(IC50)分别为(72±6.24)nmol/L和(15±6.94)nmol/L。结论 成功构建了一种可在普通实验室完成的,可视化且无感染性的HIV-1进入抑制剂药物检测筛选模型。     

一例HIV-1急性感染者奠基病毒的gp160基因序列特征及其假病毒构建

目的观察急性感染期艾滋病病毒I型（HIV-1）gp160的全长基因序列及感染特征。方法从一例处于Feibig I期HIV-1感染者血浆中提取RNA,扩增gp160全长基因并测序,分析其生物学信息;将gp160全长基因与pcDNA3.1His/V5真核表达载体连接,构建Env-pcDNA3.1真核表达质粒,与骨架质粒pNL4-3.Luc.R-E-共转染293细胞,包装出假病毒。用包装的假病毒感染ghost细胞,测定感染细胞的荧光素酶活性（RLU）,鉴定假病毒的感染活性。结果成功扩增出gp160全长基因,嗜性预测为CCR5,N-糖基化位点数与标准株HXB2相同,但gp120糖基化程度更高,氨基酸变异主要集中在V1-V5区。假病毒感染试验显示,RLU值达到7log。结论获得了处于急性感染期的HIV-1gp160基因序列和高感染活性的假病毒。     

HIV-1临床毒株的分离培养及生物学表型和基因型鉴定

目的从晚期艾滋病（AIDS）病人中分离培养艾滋病病毒Ⅰ型（HIV-1）毒株,对其生物学表型和基因型进行鉴定,了解中国临床HIV-1毒株的生物学特征,以期探讨HIV-1生物学特征与疾病进展的关系。方法收集6例AIDS晚期病人的静脉全血,分离血浆和外周血单个核淋巴细胞（PBMCs）;流式细胞仪检测CD4细胞,bDNA法检测病毒载量;PBMCs共培养法分离HIV-1毒株;终点稀释法滴定分离株的感染力;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增分离株的env区;以MT-4细胞检测毒株的融合诱导性。结果6例病例中分离出3株能在PBMCs中连续稳定传代的HIV-1毒株,50%组织培养感染剂量（TCID50/ml）分别为6.3×10^3、10.2×10^3、2.51×10^3;3株毒株均为B亚型,均不能引起MT-4细胞病变。结论共分离出3株感染力相对较高、呈慢/高型复制动力学、M-嗜性、非融合诱导性的HIV-1 B亚型临床分离株。     

TZM-b1细胞系检测我国HIV-1病毒表型耐药性

目的 利用TZM-b1细胞系检测艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)对逆转录酶抑制剂(AZT、d4T、ddI、NVP)的药物敏感性,并用该方法检测中国抗病毒治疗失败者的表型耐药.方法 用两种实验室适应毒株SF33和ⅢB来评价TZM-b1细胞方法的敏感性;用外周血单个核细胞(PBMC)共培养法分离扩增抗病毒治疗失败者的临床毒株;用TZM-b1法检测16例临床毒株对逆转录酶抑制剂的表型耐药.结果 AZT、d4T、ddI、NVP对SF33/ⅢB毒株的抑制50%病毒复制的药物浓度(IC50)分别为0.009/0.005μmol/L、0.125/0.113μmol/L、0.495/1.905μmol/L、0.093/0.045μmol/L.16例临床分离毒株中分别有13(81.3%)株、13(81.3%)株对AZT和NVP耐药.其中7株(53.8%)显示对AZT高度耐药;对NVP耐药的均为高度耐药,其中8株IC50升高1 000倍以上.结论 TZM-b1细胞系可用来快速检测HIV-1病毒表型耐药.我国抗病毒治疗失败者的表型耐药主要表现为对AZT和NVP耐药.     

地榆皂苷Ⅱ对H_2O_2诱导H_9C_2心肌细胞株凋亡的保护机制研究

目的探讨地榆皂苷Ⅱ对H_2O_2诱导的H_9C_2心肌细胞株凋亡的作用机制。方法采用不同浓度地榆皂苷Ⅱ(分别为5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、100μg/mL)处理H_9C_2心肌细胞株,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)测定细胞活性,荧光显微镜测定活性氧(ROS)表达量,利用流式细胞技术检测细胞凋亡情况,通过蛋白免疫印迹法检测Bax、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)等凋亡相关蛋白含量和细胞磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)、卵黄状黄斑病蛋白3(Bestrophin3)表达情况及应用细胞外信号调节激酶(ERK1/2)抑制剂后表达量的变化。结果 MTT检测结果显示:地榆皂苷Ⅱ对心肌细胞株无毒副作用,可有效抑制H_2O_2对心肌细胞株的损伤。H_2O_2能明显提高凋亡相关蛋白Bax、Casepase-3及Casepase-9表达;地榆皂苷Ⅱ可减少心肌细胞株ROS产生,促进p-ERK1/2表达,并抑制Bax、Casepase-3及Casepase-9表达。应用ERK1/2抑制剂后结果发现,Bestrophin3表达量明显下降(P0.05)。结论地榆皂苷Ⅱ可有效抑制心肌细胞株凋亡,原因可能通过促进依赖于ERK1/2表达的Bestrophin3,抑制心肌细胞株凋亡。     

滇西地区25种药用植物抗疟活性研究

目的研究25种采自滇西地区药用植物的抗疟活性,为植物来源的新型抗疟药的研发天然产物奠定基础。方法依次用75%乙醇和水对25种药用植物进行回流提取,提取物经冷冻干燥后,采用β-羟高铁血红素形成抑制试验进行筛选,以IC50值评价其活性。结果在供试的25种药用植物中,苦参、滇白珠、马尾黄连等12种植物粗提物具有不同程度的β-羟高铁血红素形成抑制活性,其中苦参地上部分水提物和滇白珠提取物活性较好,IC50值分别为(1344.2±46.9)μg/ml和大于1 388.9μg/ml。具有抗疟活性的植物种类涉及10个科、12个属。结论苦参、滇白珠、马尾黄连等12种植物具有一定的抗疟活性,表明抗疟活性物质可能存在于多种植物中。     

扇贝多糖体外抗乙型肝炎病毒活性的研究

目的体外观察扇贝多糖抗乙型肝炎病毒（HBV）的作用。方法采用HepG2.2.15细胞模型进行体外培养,给予不同浓度扇贝多糖,作用9d后收集上清液,用MTT法观察扇贝多糖对HepG2.2.15细胞的抑制作用;用ELISA法测定上清液中HBsAg和HBeA含量;用荧光定量PCR检测扇贝多糖对HepG2.2.15细胞分泌HBV DNA的影响。结果扇贝多糖浓度在500μg/mL 时,对细胞无明显毒性;扇贝多糖对HBsAg、HBeAg均有抑制作用,其半数有效浓度（IC50）分别为294μg/mL 、168μg/mL,治疗指数（TI）为>17.0和>29.8;扇贝多糖对HBV DNA的复制也有一定的抑制作用。结论扇贝多糖具有一定的体外抗HBV作用。     

浙贝母碱对肺癌A549/DDP细胞多药耐药的逆转作用观察及机制探讨

目的观察浙贝母碱对肺癌A549/DDP细胞多药耐药的逆转作用,并探讨其可能的机制。方法将对数生长期的细胞随机分成2组,对照组分别加入不同浓度的DDP,实验组在对照组基础上再加入400μg/mL的浙贝母碱;采用MTT法测算细胞增殖抑制率,计算两组细胞DDP的半数抑制浓度(IC50)及浙贝母碱的逆转倍数。将对数生长期的细胞分为3组,空白对照组不加任何药物,对照组加入DDP,实验组在对照组基础上再加入400μg/mL的浙贝母碱;药物作用48 h后,采用流式细胞术测算细胞凋亡率,用细胞免疫荧光法检测细胞中的人肺耐药蛋白(LRP)。结果实验组DDP的IC50为4.15μg/mL,对照组为15.46μg/mL,浙贝母碱的逆转耐药倍数为3.73。培养48 h后,空白对照组细胞凋亡率为2.56%±0.44%、LRP蛋白阳性细胞为(9.8±1.92)个/HP,对照组分别为为13.5%±1.42%、(9.2±1.9)个/HP,实验组为38.16%±2.25%、(5.8±1.3)个/HP;实验组与对照组、空白对照组比较,P均<0.05。结论浙贝母碱可逆转肺癌A549/DDP细胞株的多药耐药,其作用机制可能与其促进耐药细胞凋亡、下调LRP蛋白表达有关。     

亚砷酸钠对体外培养人淋巴细胞金属硫蛋白基因亚型表达的影响

目的 探讨不同剂量亚砷酸钠对体外培养人淋巴细胞金属硫蛋白(MT)基因表达的影响及MT表达与细胞存活率的相互关系.方法 无菌抽取健康人血液,分离出淋巴细胞,分别用0(对照)、2、5、10、15、30、60μmol/L亚砷酸钠作用于淋巴细胞,于24、48、72 h后,以四噻唑蓝比色法测定细胞存活率;染毒72 h后采用RT-PCR法检测MT-1、MT-2基因表达情况.结果 2、5μmol/L染毒组细胞存活率[(115.50±11.80)%、(130.49±8.28)%]高于对照组[(100.00±0.00)%,P均<0.05];10、15、30、60μmol/L染毒组细胞存活率[(78.12±9.33)%、(71.62±10.82)%、(52.06±3.05)%、(40.98±5.41)%]随染毒剂量增高而逐渐降低,与对照组及2、5μmol/L组比较差异有统计学意义(P均<0.05).不同剂量亚砷酸钠作用72 h,对照组及2、5、10、15、30、60μmol/L染毒组MT-1基因表达(0.925±0.123、1.082±0.504、1.103±0.170、0.927±0.056、0.730±0.307、0.604±0.173、0.540±0.075)组间比较差异无统计学意义(P均>0.05);2、5 μmol/L染毒组(1.503±0.212、1.557±0.377)与对照组(0.762±0.112)比较MT-2表达上调(P均<0.05),且较其他各组表达增加(P均<0.05),而10、15、30、60μmoL/L染毒组MT-2表达(0.814±0.139、0.679±0.201、0.607±0.229、0.533±0.102)呈下降趋势,但组间比较差异无统计学意义(P均>0.05).MT-1、MT-2表达水平与细胞存活率之间存在正相关关系(r值分别为0.955、0.909,P均<0.05).结论 10 μmol/L以上剂量的砷可能对淋巴细胞MT表达有抑制作用,而低剂量(2、5μmol/L)砷可能刺激淋巴细胞的MT-2表达上调,提高细胞MT水平,起到保护细胞、提高细胞存活率的作用.     

Ceramide, a target for antiretroviral therapy

Studies of ceramide metabolism and function in a wide range of biological processes have revealed a role for this lipid in regulating key cellular responses. Our research on the role of sphingolipids in HIV entry has led to the hypothesis that modulation of ceramide levels in target cells affects their susceptibility to HIV infection by rearranging HIV receptors. Cellular ceramide levels were modulated by application of pharmacological agents such as N-(4-hydroxyphenyl)retinamide (4-HPR, fenretinide), by treatment with sphingomyelinase (Smase), or by exogenous addition of long-chain ceramide, and determined after metabolic incorporation of [3H]sphingosine. Infectivity assays were performed by using a HeLa-derived indicator cell line, TZM-bl, CD4+ lymphocytes, and monocytes. We observed a dose-dependent inhibition by 4-HPR of infection of TZM-bl cells by a broad range of HIV-1 isolates at low micromolar concentrations with an IC50 of <1 microM for most isolates tested. Nearly complete inhibition was seen at 5 microM, a dose that enhanced ceramide levels by 50-100%, yet was nontoxic to the cells. Treating cells with other pharmacological agents that enhanced ceramide levels, with Smase, or exogenous addition of long-chain ceramide also resulted in inhibition of HIV-1 infection. Enhancing ceramide levels in CD4+ lymphocytes and in monocyte-derived macrophages with 4-HPR or Smase significantly reduced infectivity without toxicity. The minimal toxicity of normal cells exposed to 4-HPR should make the drug exceedingly suitable as an anti-HIV therapeutic.     

蟾蜍灵联合顺铂对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨蟾蜍灵联合顺铂对舌鳞状细胞癌（以下简称舌鳞癌）Tca8113细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法 培养人舌鳞癌Tca8113细胞株,取对数期细胞分为对照组、蟾蜍灵组、顺铂组、联合组。对照组加入RPMI 1640培养基;蟾蜍灵组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的蟾蜍灵;顺铂组分别加入2.5、5、10、20、40μg/m L的顺铂;联合组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的蟾蜍灵后按浓度对应加入2.5、5、10、20、40μg/m L的顺铂;MTT法检测各组细胞增殖抑制率,计算抑制细胞增殖50%的药物浓度（IC50）及联合指数（CI）。根据蟾蜍灵与顺铂48 h时的IC50选择三个药物组相应浓度亚组,即蟾蜍灵40 nmol/L组（蟾蜍灵亚组）,顺铂10μg/m L组（顺铂亚组）,蟾蜍灵40 nmol/L、顺铂10μg/m L组（联合亚组）,流式细胞术分析各亚组细胞凋亡情况,Western-Blot法检测各亚组Bax、Bcl-2、Caspase-3、细胞外调节蛋白激酶（Erk）及其磷酸化细胞外调节蛋白激酶状态（P-Erk）的表达。结果 与对照组相比,蟾蜍灵组、顺铂组、联合组细胞增殖受到抑制,且联合组增殖抑制率高于蟾蜍灵组与顺铂组,并呈时间-剂量依赖关系（P均〈0.05）。联合组联合指数（CI）均小于1。联合亚组细胞凋亡率高于蟾蜍灵亚组与顺铂亚组,三组与对照组相比,P均〈0.05。蟾蜍灵亚组、顺铂亚组、联合亚组Bax、Caspase-3蛋白表达高于对照组,其中联合亚组高于蟾蜍灵亚组和顺铂亚组;三个药物亚组P-Erk蛋白表达均低于对照组,其中联合亚组低于蟾蜍灵亚组和顺铂亚组;联合亚组Bcl-2表达低于对照组及蟾蜍灵亚组和顺铂亚组（P均〈0.05）。结论 蟾蜍灵与顺铂单用或联合应用均可抑制Tca8113细胞增殖,促进其凋亡,联用效果更强;其作用机制可能与调节细胞凋亡相关蛋白表达、抑制Erk信号通路有关。     

Evaluation of antioxidant,in vitro cytotoxicity of micropropagated and naturally grown plants of Leptadenia reticulata (Retz.) Wight & Arn.-an endangered medicinal plant

ObjectiveTo evaluate the antioxidant and anti proliferative potential of different solvent extract of micropropagated and naturally grown plants of Leptadenia reticulata against various cancer cell lines.MethodsIn this study different extract were tested for cytotoxicity against human breast adenocarcinoma cell line MCF-7, human colon adenocarcinoma grade II cell line HT-29 and non cancer skeletal muscle cell line L6 through 3-(4, 5–dimethyl thiazol–2–yl)–5–diphenyl tetrazolium bromide assay. The total antioxidant potential was estimated by three different antioxidant model diphenylpicrylhydrazyl free radical scavenging activity, H₂O₂ scavenging activity and FeCl₃ reducing activity.ResultsThe ethyl acetate extract of both naturally grown plant and tissue cultured plant exhibited significant cytotoxicity with IC₅₀ values of 21 µg/mL, 26 µg/mL and 22 µg/mL; 20 µg/mL, 30 µg/mL and 18 µg/mL respectively against three cell lines. The diphenylpicrylhydrazyl free radical scavenging activity was found to be highest with IC₅₀ value of 267.13 µg/mL in ethyl acetate extract. The methanolic extract exhibited moderate antioxidant activity with IC₅₀ value of 510.15 µg/mL. A highly positive correlation was observed between the antioxidant potential and cytotoxic activity of the plant.ConclusionsThe strong cytotoxicity of ethyl acetate extract revealed anti carcinogenic potential of the plant which supports its traditional use as medicine. The present investigation is new to literature till date and will provide better scientific basis for future pharmacological, in vivo studies and novel source of pure bioactive compounds having anti cancer properties in this plant.     

Ad-HSV-TK/GCV自杀基因系统对人卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨腺病毒介导的单纯疱疹病毒腺苷激酶（HSV-TK）/丙氧鸟苷（GCV）自杀基因系统对人卵巢癌细胞SKOV-3增殖、凋亡的影响.方法 以人卵巢癌细胞SKOV-3为实验组,人成纤维细胞株MRC-5为对照组,两组分别取对数生长期,调整细胞浓度为1×107/mL.采用Ad-hTERT-HSV-TK分别转染两组细胞48 h,然后分别给予不同浓度的GCV（0.1、1、5、10、20、50、100、200 μg/mL）作用48 h.采用MTT法检测各组OD值,计算并比较两组细胞增殖率、凋亡率.结果 5、10、20、50、100、200 μg/mL GCV作用下实验组细胞增殖率较对照组降低（P＜0.05）,实验组GCV 10、100 μ/mL作用下细胞凋亡率高于对照组（P＜0.05）.结论 腺病毒介导HSV-TK基因转入人卵巢癌SKOV-3细胞并获稳定表达,Ad-HSV-TK/GCV自杀基因系统能明显抑制卵巢癌细胞增殖,促进卵巢癌细胞凋亡.     

Antioxidant and antipyretic properties of methanolic extract of Amaranthus spinosus leaves

ObjectiveMethanolic extract of Amaranthus spinosus (A. spinosus) leaves was screened for antioxidant and antipyretic activities.MethodsAntioxidant activity was measured by 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazile (DPPH) free radical scavenging, superoxide anion radical scavenging, hydroxyl free radical scavenging, nitric oxide radical scavenging, 2,2 '-azinobis-3-ethylbenzothiazole-6-sulfonic acid (ABTS) radical scavenging assays and total phenolic content was also determined. Antipyretic activity of methanolic extract of A. spinosus was measured by yeast induced pyrexia method at concentration of 200 and 400 mg/kg using paracetamol as standard drug.ResultsMethanolic extract of A. spinosus showed potent antioxidant activity. The IC 50 value was (87.50 ±3.52) μg/mL, (98.80±1.40) μg/mL, (106.25±0.20) μg/mL, (88.70±0.62) μg/mL and (147.50±2.61) μg/mL for DPPH, superoxide, hydroxyl, nitric oxide and ABTS radical scavenging activities. Methanolic extract of A. spinosus showed significant (P <0.01) antipyretic activity.     

Biological characterization and chemokine receptor usage of HIV type 1 isolates prevalent in Brazil

The human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1), the etiological agent of the acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), shows a variety of biological properties, which may constitute an obstacle to development of effective vaccines or antiretroviral therapy. To characterize Brazilian strains of HIV-1, we studied 24 viruses isolated from blood samples of HIV-1-positive patients from different regions of the country. To examine the cell tropism and the virus ability to form syncytia, primary macrophages and the CD4+ T cell line MT-2 were infected with these viruses. We found that 22 isolates replicated well in macrophages (macrophage-tropic isolates), 2 infected only MT-2 cells (T cell line tropic variants), while 6 of them grew in both cells. We found 8 syncytium-inducing (SI) and 16 non-SI (NSI) isolates. Continuous cultures of 18 isolates were established in the CCR5+/CXCR4+ cell line PM-1, and SI/NSI features of these viruses were confirmed by cell fusion assay with uninfected CD4+ T cell lines (PM-1, MT-2, H9, and SUP-T1). The coreceptor usage of 18 isolates was investigated by infecting U87 cells transfected with CD4 and chemokine receptors, and we found that 11 isolates infected only CCR5+ cells, 3 only CXCR4+ cells, whereas 4 used both coreceptors. We also observed that X4 isolates were more sensitive to neutralization by dextran sulfate than R5 or R5X4 viruses. Our findings show that the Brazilian isolates are phenotypically similar to those prevalent in other regions, which could mean that therapeutic strategies based on HIV-1 phenotypic properties would be efficient in Brazil, as in other countries.