盐酸小檗碱通过抑制PKCα磷酸化抑制机械牵张力诱导的血管平滑肌细胞增殖和凋亡

[目的]观察机械牵张力(SS)是否通过激活PKCα诱导小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡,并探讨盐酸小檗碱(BBR)对它的作用及机制。[方法]实验共分6组：正常对照组、BBR组、PKCα抑制剂(Go6976)组、SS组、SS+BBR组、SS+Go6976组。静息培养的细胞给予BBR或Go6976预处理1 h,继而予10%强度的SS刺激15 min后收集细胞,Western blot检测PKCα和MAPK(ERK、JNK、p38)磷酸化水平。BBR或Go6976预处理1 h,牵拉时间为1 h,继续培养23 h,免疫荧光法检测细胞增殖(Ki67)和凋亡(TUNEL)。[结果] Western blot与免疫荧光结果显示,与正常对照组相比较,SS可升高PKCα和MAPK(ERK、JNK和p38)磷酸化水平(P<0.05),并增加VSMC的增殖和凋亡水平(P<0.05)。BBR可抑制PKCα和ERK、JNK、p38磷酸化水平(P<0.05),同时抑制VSMC增殖和凋亡(P<0.05);Go6976可抑制PKCα和ERK、JNK磷酸化水平(P<0.05),但对...     

盐酸小檗碱联合二甲双胍治疗2型糖尿病效果的观察

目的 探讨盐酸小檗碱(BBR)联合二甲双胍治疗T2DM患者的疗效.方法 选取2018年6月至2019年6月于杭州师范大学附属医院内分泌科治疗的T2DM患者120例,随机分为二甲双胍组(Met)和二甲双胍联合BBR组(Met+BBR),每组各60例.治疗24周后,比较两组治疗前后血糖、HbAlc、BMI、血脂、IR、胰岛...     

芦丁抑制氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的:探讨芦丁在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法:制备ox-LDL,采用贴壁法分离培养C57BL/6J小鼠的VSMC,将细胞分为对照组、芦丁组、ox-LDL组和芦丁+ox-LDL组,MTT法检测各组VSMC细胞增殖活性,Western blot检测VSMC中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达情况。结果:芦丁组与对照组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均无明显差异(P均0.05);ox-LDL组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均显著高于对照组(P均0.05);与ox-LDL组相比,芦丁+ox-LDL组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均明显降低(P均0.05)。结论:芦丁可能通过抑制ERK信号通路,抑制ox-LDL诱导的VSMC的增殖。     

小檗碱对内毒素刺激致Caco-2细胞间高通透性的保护作用

目的探讨小檗碱(BBR)对脂多糖(LPS)刺激致Caco-2细胞间高通透性的保护作用。方法体外培养肠上皮细胞Caco-2,分为四组:(1)对照组(培养基);(2)LPS组(培养基+LPS 2μg/ml);(3)BBR组(培养基+BBR 10μM);(4)BBR/LPS组(培养基+LPS 2μg/ml+BBR 10μM)。在倒置显微镜下直接观察细胞生长形态,采用荧光黄透过率检测细胞间通透性,采用Western-blot法检测细胞间紧密连接主要结构蛋白occludin、细胞膜Toll样受体-4(TLR4)表达,采用免疫荧光法检测细胞TLR4下游分子MyD88表达。结果在倒置显微镜下可见对照组和BBR组细胞连接完整,LPS组细胞间出现锯齿样断裂,但在BBR/LPS组细胞间连接毛糙,但无明显片状中断;对照组和BBR组荧光黄透过浓度分别为(683.3±98.9)μg/ml和(849.0±89.7)μg/ml)以及细胞occludin、TLR4和MyD88蛋白表达差异均无统计学意义(P0.05);与对照组比,LPS组透过荧光黄浓度(1886±176.0μg/ml)显著增加,TLR4蛋白表达增加,occludin表达减少,胞浆MyD88荧光信号增强;与LPS组比,BBR/LPS组透过荧光黄浓度(1071.0±65.9μg/ml)显著下降,TLR4蛋白表达减弱,occludin表达增加,胞浆MyD88荧光信号减弱。结论 BBR通过减弱TLR4/MyD88活性,增加occludin表达,进而减轻LPS刺激致Caco-2细胞间高通透性。     

小檗碱对2型糖尿病小鼠肠道菌群影响的相关研究

目的探究小檗碱对2型糖尿病小鼠肠道菌群的影响。方法选择6周的大鼠30只,随机分为3组,每组10只;A组(健康对照组)、B组(2型糖尿病模型组)、C组(小檗碱治疗组),B、C组为2型糖尿病模型组;建模成功后,A、B组每日生理盐水灌胃,C组每日定量小檗碱灌胃,2周后对各组的小鼠粪便利用稀释平板计数法和快速细菌鉴定法定性、定量分析。结果 A、C组菌群种类相差较小,A、C组与B组肠道菌群差异有统计学意义(P0.05)。结论小檗碱对2型糖尿病小鼠肠道菌群起到一定改善作用。     

盐酸小檗碱对糖尿病小鼠胰岛β细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨盐酸小檗碱对2型糖尿病db/db小鼠胰岛β细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:选取32只6周龄db/db雄性小鼠和32只db/m雄性小鼠,各分为2组,各选其中一组每日固定时间给予小檗碱(50 mg/kg)灌胃,另一组给予相同体积的生理盐水。连续给药3周后处死小鼠,实时荧光定量PCR和免疫组化法检测胰腺组织Ki-67、B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)、Fas和Fas配体(Fas-L)mRNA和蛋白的表达,末端转移酶标记技术(TUNEL法)检测胰腺组织β细胞凋亡数。结果:实验3周后,小檗碱干预db/db组小鼠的血糖、葡萄糖曲线下面积显著降低,胰岛素分泌显著改善(均P0.05);Bcl-2阳性表达率显著升高(P<0.01);Fas及Fas-L阳性率表达水平显著降低(P<0.01,P<0.05);β细胞凋亡率下降(P     

小檗碱通过Toll样受体4/核因子κB信号通路对小鼠病毒性心肌炎发挥保护作用

目的探讨小檗碱对病毒性心肌炎小鼠的保护作用,并研究其对Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法将40只BALB/c小鼠按数字随机法均分为正常组、模型组、小檗碱低剂量组与高剂量组。除正常组外,其余组小鼠腹腔注射嗜心性柯萨奇病毒B3,建立病毒性心肌炎模型。小檗碱低剂量组与高剂量组分别腹腔注射小檗碱50 mg/kg与100 mg/kg。苏木素-伊红染色观察心肌组织病理学变化;用酶联免疫吸附测定试剂盒检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白(cTnT)和TNF-α水平;免疫印迹法和实时荧光定量PCR分别检测心肌组织中TLR4与NF-κB的蛋白表达和mRNA表达。结果与模型组相比,小檗碱治疗组心肌组织的炎性细胞浸润与心肌细胞坏死程度显著减轻,血清CK-MB、cTnT和TNF-α水平明显降低,心肌组织TLR4与NF-κB的蛋白表达和mRNA表达显著下调。结论小檗碱可通过调控TLR4/NF-κB信号通路,从而对病毒性心肌炎小鼠的心肌组织具有保护作用。     

小檗碱抑制内质网应激炎症通路对2型糖尿病大鼠局部脑缺血再灌注损伤的探讨

目的观察小檗碱(BBR)对2型糖尿病大鼠局部脑缺血再灌注损伤半影区内质网应激相关炎症通路的影响。方法72只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,采用高脂饮食和链尿佐菌素注射建立2型糖尿病大鼠模型,数字抽签随机将糖尿病大鼠分为假手术组(Sham组)、糖尿病大鼠+BBR治疗组(BBR组)、糖尿病大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型组(MCAO组)、糖尿病大鼠MCAO+BBR治疗组(MCAO+BBR组),纳入研究每组6只。治疗组在术前48 h、24 h和术后6 h经胃灌注给予相应剂量药物。采用线拴法制备大鼠MCAO模型,进行神经缺损评分,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β的表达;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测内质网应激标志蛋白葡萄糖调控蛋白78(GRP78)的mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测内质网应激相关炎症通路蛋白GRP78、胰腺内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、核因子(NF)-κB p65表达情况。结果在脑缺血半影区,缺血2 h再灌注24 h后,MCAO组大鼠神经功能缺损评分(2.83±0.41)分,高于MCAO+BBR组大鼠(1.67±0.52)分(P<0.05),促炎因子TNF-α和IL-1β和内质网应激相关炎症通路蛋白GRP78、PERK和NF-κB p65的表达水平亦增高(P<0.05)。BBR治疗亦可降低脑缺血再灌注半影区促炎因子(TNF-α和IL-1β)和内质网应激相关炎症通路蛋白(GRP78、PERK和NF-κB p65)的表达水平。结论BBR可通过抑制内质网应激相关炎症通路降低2型糖尿病大鼠局部脑缺血再灌注损伤的炎症反应,发挥神经保护作用。     

蛋白激酶Cα与血管平滑肌细胞表型转化

目的　建立血管平滑肌细胞 (VSMC)的收缩及合成表型 ,探讨蛋白激酶Cα(PKCα)亚型对其转化的影响。方法　用酶消化法及传代培养分别获 2种VSMC表型细胞 ,细胞特性通过免疫细胞化学及透射电镜鉴定。用竞争性逆转录聚合酶链反应 (竞争RT PCR) ,观察 2种表型细胞的PKCα表达。结果　酶消化法分离的VSMC较传代培养的VSMC显示缬蛋白(desmin)表达呈强阳性。2种表型细胞经超微结构观察分别显示典型的收缩表型及合成表型变化。PKCα表达在酶消化法分离的VSMC中明显高于传代培养的VSMC(t=3 .5 68;P <0 .0 5 )。结论　PKCα亚型在收缩表型的表达量明显高于合成表型 ,提示该亚型对维持VSMC的收缩表型起了一定作用。研究中选用竞争RT PCR方法克服了以往使用 β actin的局限性。     

小檗碱对内毒素刺激致Caco-2细胞间高通透性的保护作用*

目的 探讨小檗碱（BBR）对脂多糖（LPS）刺激致Caco-2细胞间高通透性的保护作用。方法 体外培养肠上皮细胞Caco-2,分为四组：①对照组（培养基）;②LPS组（培养基+LPS 2 μg/ml）;③BBR组（培养基+BBR 10 μM）;④BBR/LPS组（培养基+LPS 2 μg/ml+BBR 10μM）。在倒置显微镜下直接观察细胞生长形态,采用荧光黄透过率检测细胞间通透性,采用Western-blot法检测细胞间紧密连接主要结构蛋白occludin、细胞膜Toll样受体-4（TLR4）表达,采用免疫荧光法检测细胞TLR4下游分子MyD88表达。结果 在倒置显微镜下可见对照组和BBR组细胞连接完整,LPS组细胞间出现锯齿样断裂,但在BBR/LPS组细胞间连接毛糙,但无明显片状中断;对照组和BBR组荧光黄透过浓度分别为（683.3±98.9）μg/ml和（849.0±89.7）μg/ml)以及细胞occludin、TLR4和MyD88蛋白表达差异均无统计学意义（P>0.05）;与对照组比,LPS组透过荧光黄浓度（1886±176.0 μg/ml）显著增加,TLR4蛋白表达增加,occludin表达减少,胞浆MyD88荧光信号增强;与LPS组比,BBR/LPS组透过荧光黄浓度（1071.0±65.9 μg/ml）显著下降,TLR4蛋白表达减弱,occludin表达增加,胞浆MyD88荧光信号减弱。结论 BBR通过减弱TLR4/MyD88活性,增加occludin表达,进而减轻LPS刺激致Caco-2细胞间高通透性。     

小檗碱干预Wnt通路抑制Apc(Min/+)小鼠息肉生长的研究

目的 观察小檗碱防治家族性腺瘤性息肉病(FAP)动物模型Apc(Min/+)小鼠息肉生长的疗效并探讨其可能的分子机制.方法 将16只4周龄Apc(Min/+)小鼠均分为对照组(不予处理)和小檗碱组(剂量为150 mg· kg-1·d-1).12周后处死小鼠,记录小鼠肠道息肉数量、大小及分布.免疫组织化学染色法检测小鼠肠道息肉中增殖细胞核抗原(PCNA)、β-链蛋白和细胞周期素D1的表达情况.Western印迹法检测小鼠肠道细胞周期素D1的表达情况.两组间比较行独立样本t检验.结果 小檗碱组小肠及结肠息肉总数较对照组减少66 ％(10.38±1.85比30.50±1.73,t=16.727,P＜0.01).小檗碱组息肉最大径[(1.08±0.65) mm]小于对照组[(1.54±0.62) mm,t=2.114,P=0.041].小檗碱组小鼠肠道息肉中PCNA阳性细胞比例(44.60％±2.88％)较对照组(65.80％±3.27％)减少32％(t=10.875,P＜0.01),β-链蛋白染色异常细胞比例(43.20％±1.63％)较对照组(63.00％±3.08％)减少31％(t=13.956,P＜0.01),细胞周期素D1阳性细胞比例(24.80％±3.11％)较对照组(54.40％±3.78％)减少54％(t=13.510,P＜0.01).小檗碱组肠道细胞周期素D1蛋白表达水平低于对照组.结论 小檗碱可通过干预Wnt通路抑制Apc(Min/+)小鼠肠道息肉的生长,可能成为FAP化学预防的备选药物.     

细胞内钙信号的变化调节血管平滑肌细胞增殖

目的探讨细胞内钙信号的变化对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用的影响及其对细胞内信号转导机制的变化.方法以培养的大鼠VSMC为模型,用雷尼丁(RY)刺激VSMC内贮Ca2+释放入胞浆,用3H-亮氨酸及3H-胸腺嘧啶掺入量作为反应VSMC增殖的指标,加入不同的细胞内信号转导阻断剂,观察对RY效应的影响.结果与对照组相比,RY浓度依赖性地促进细胞内游离钙浓度的增高,差异显著(P＜0.05或0.01).RY刺激组蛋白核酸合成速率明显增高,与对照组相比差异显著(P＜0.01);尼卡地平(Nicardipine),蛋白激酶C抑制剂(H7),钙调素激酶(CaM-PK)抑制剂(W7)和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂(PD98059)能明显抑制RY介导的VSMC蛋白核酸合成速率增高,与RY刺激组相比差异显著(P＜0.01).结论细胞内钙信号的变化明显促进VSMC增殖,但其效应可能通过Ca2+、PKC、MAPK来介导.钙离子拮抗剂可抑制血管平滑肌细胞增殖.     

细胞因子信号转导抑制蛋白1在小蘖碱抑制脂多糖和γ-干扰素诱导的N9小胶质细胞激活中的作用

目的探讨细胞因子信号转导抑制蛋白1(suppressor of cytokine signaling,SOCS1)在小蘖碱(berberine,BBR)抑制小胶质细胞激活中的作用。方法联合应用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和γ-干扰素(interferonγ,IFN-γ)激活N9小胶质细胞模拟神经炎症。将细胞分为对照组、模拟神经炎症组(10 ng/ml LPS+10 U/ml IFN-γ)、BBR处理组(1μmol/L BBR+LPS/IFN-γ)、SOCS1-siRNA处理组(SOCS1-siRNA+BBR+LPS/IFN-γ)和乱序-siRNA处理组(SC-siRNA+BBR+LPS/IFN-γ)。孵育24 h后,采用酶联免疫吸附法检测细胞培养液内肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达水平,采用蛋白质印迹法检测诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和核因子κB(nuclei factor-κB,NF-κB)蛋白表达水平,采用免疫细胞化学法观察细胞形态和iNOS表达。结果与对照组相比,LPS/IFN-γ可显著增高培养基内TNF-α和IL-6含量,上调iNOS和NF-κB表达水平(P均<0.05),并增大小胶质细胞体积。1μmol/L BBR可显著抑制小胶质细胞TNF-α和IL-6释放量,降低iNOS和NF-κB表达水平(P均<0.05),并改善细胞形态。SOCS1-siRNA能显著逆转BBR对小胶质细胞激活的抑制作用(P均<0.05)。结论BBR可能通过SOCS1分子介导抑制LPS和IFN-γ对小胶质细胞的激活。     

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠PKCδ、PKCθ和PKCε表达的影响

目的探讨化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠蛋白激酶(PK)Cδ、PKCθ和PKCε表达的影响及其神经保护机制。方法以改进后的Zea-Longa线栓法制造局部梗死性脑缺血再灌注模型。随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组,中药高剂量组、中剂量组、低剂量组,以Longa评分法进行神经功能评分,免疫组化法观察PKCδ、PKCθ和PKCε的分布及表达。Western印迹法评测其在各组大鼠缺血侧脑组织中的表达量。结果免疫组化结果显示:与假手术组相比,模型组PKCδ、PKCθ表达升高,PKCε表达降低(P<0.05),与模型组相比,各用药组PKCδ、PKCθ均降低,PKCε表达升高(P<0.05),其中以中药高剂量组及尼莫地平组较为明显(P<0.05)。Western印迹法显示:与假手术组相比,模型组PKCδ、PKCθ表达升高,PKCε表达降低(P<0.05),与模型组相比,各用药组PKCδ、PKCθ均降低,PKCε表达升高(P<0.05),其中以中药高剂量组及尼莫地平组较为明显(P<0.05)。结论化浊解毒活血通络方可能通过降低PKCδ、PKCθ的表达、上调PKCε的表达,降低CIRI的程度。     

小檗碱对快速心房起搏兔心房肌场电位时程及兴奋传导速度的影响

目的应用微电极阵(MEA)技术研究小檗碱对快速心房起搏(RAP)兔心房肌场电位时程(fAPD)及兴奋传导速度(ECV)的影响,探讨其抗心房颤动(简称房颤)的作用机制。方法新西兰兔40只,随机分成5组,对照组(n=8),起搏组(n=8),起搏+小檗碱A组(5μmol/L,n=8),起搏+小檗碱B组(10μmol/L,n=8),起搏+小檗碱C组(20μmol/L,n=8)。RAP 24h后,对照组于相应时间,迅速开胸取出心脏,分别灌流改良台氏液或含5、10、20μmol/L小檗碱的改良台氏液行Langendroff灌流,用柔性电极贴附右房,分别记录各组fAPD和ECV的变化。结果相较对照组,起搏组心房肌fAPD缩短,传导速度减慢(P0.05)。相较起搏组,小檗碱A、B、C组心房肌fAPD逐渐延长,ECV逐渐加快(P0.05)。结论在RAP兔模型中,小檗碱不仅能有效延长心房肌fAPD,还能加快ECV,显示出可能具有较好的抗房颤作用。     

小檗碱对兔缺血再灌注心肌损伤的保护作用

目的探讨小檗碱对家兔心肌缺血再灌注细胞的保护作用及其作用机制。方法取35只新西兰大白兔随机分为假手术组、模型组及小檗碱小、中、大剂量组,后四组在体制作心肌缺血再灌注损伤模型;小檗碱小、中、大剂量组分别予小檗碱3、6、12 mg/kg干预7 d。检测各组血清天冬氨酸氨基转换酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CK-MB)及乳酸脱氢酶(LDH)水平,心肌组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;流氏细胞仪检测心肌细胞凋亡率和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果与模型组比较,小檗碱小、中、大剂量组血清LDH、CK-MB、AST水平及心肌组织MDA含量明显降低,SOD和GSH-Px活性明显升高,心肌细胞凋亡率及Bax指数明显降低,Bcl-2指数明显升高(P均<0.05),且呈剂量依赖性。结论小檗碱对家兔心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。     

盐酸小檗碱对胰岛素抵抗HepG2细胞α7烟碱型乙酰胆碱受体及相关因子影响的研究

目的探讨盐酸小檗碱作用α7烟碱型乙酰胆碱受体(nAchR)与改善氓的分子机制。方法建立IR HepG2细胞模型,用盐酸小檗碱(BBR)、烟碱(NIC)干预,并设正常对照(NC)组和模型组。用现代分子生物学检测细胞培养液葡萄糖消耗量、乙酰胆碱酯酶(AchE)、乙酰胆碱(Ach)、白介素-6(Ⅱ-6)、核因子-κB(NF-κB p65)、IκB激酶βSer181(ⅡKKβSer181)、α7nAchR、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、葡萄糖转运因子4(GluT4)等相关指标,用荧光标记方法检测细胞摄取葡萄糖的荧光强度。结果葡糖糖消耗量NC组、HepG2细胞模型组、BBR组和NIC组依次为(25.33±0.77)mmol/L、(11.95±1.94)mmol/L、(16.85±0.33)mmol/L和(16.27±1.09)mmol/L。细胞内2-NBDG(荧光标记葡萄糖)荧光强度增强,NC组、HepG2细胞模型组、BBR组和NIC组依次为(118.17±14.30)、(92.33±9.35)、(120.50±26.26)和(127.67±16.07)。BBR能抑制细胞AchE活性,抑制率为53%,NIC对AchE活性无影响。BBR和NIC能激活α7nAchR,抑制IKKβSer181和NF-κBp65的表达,降低炎性细胞因子IL-6,上调PI3K、GluT4,与HepG2细胞模型组比较,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 BBR可能通过抑制AchE活性以激活α7nAchR,从而抑制IKKβSer181、NFκB p65和炎症因子IL-6的表达,促进PI3K、GluT4上调,发挥其改善IR、降低葡萄糖的作用。NIC虽不能抑制AchE活性,但它是特异性激动剂,可直接激活α7nAchR。     

小檗碱对2型糖尿病地鼠脂肪组织肝X受体通路表达的影响

目的观察小檗碱对T2DM地鼠脂肪组织肝X受体(LXR)及其靶基因表达的影响。方法以高脂饮食结合小剂量STZ的方法建立IR及T2DM地鼠模型。成模后随机分成正常对照(Con)组、IR组、T2DM组、小檗碱治疗(BBR)组,治疗9周。结果与T2DM组相比,BBR组FPG[(13.10±0.93)vs(6.19±0.84)mmol/L]、OGTT 2hPG[(15.49±1.31)vs(8.83±1.28)mmol/L]、HOMA-IR[(14.80±2.10)vs(7.40±1.40)]降低(P0.05);RT-PCR结果提示,LXRα[(-5.56±-1.23)vs(3.29±0.68)]、LXRβ[(3.09±0.45)vs(-5.49±-0.95)]基因表达上调,并伴随着LXR靶基因表达的改变(P0.05);Western blot结果提示,LXRα[(0.11±0.03)vs(0.68±0.12)]、LXRβ[(0.13±0.03)vs(0.70±0.14)]蛋白表达上调(P0.05)。结论 LXR及其靶基因参与小檗碱治疗T2DM地鼠脂诱性脂肪组织IR的分子机制。     

小檗碱对小鼠非酒精性脂肪性肝病程序性坏死的影响及其与AMPK/STAT6通路的关系

目的:评价小檗碱对小鼠非酒精性脂肪性肝病程序性坏死的影响及其与腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/转录活化因子6(STAT6)通路的关系。方法:将25只8周龄雄性C57BL/6N小鼠分为对照组、脂肪肝组、小檗碱治疗组(200 mg·kg -1·d -1)、AMPK抑制剂Compound C治疗组(0...     

微小RNA let-7c通过抑制血小板源性生长因子受体表达促进小鼠血管平滑肌细胞衰老

目的 探讨微小RNA(miRNA)let-7c参与小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)衰老的机制。方法 选择C57BL/6J小鼠40只，将小鼠分为对照组、老年组各20只，通过qPCR技术检测小鼠血清及主动脉血管中let-7c miRNA表达水平。从C57BL/6J小鼠主动脉中提取并原代培养VSMC。通过博来霉素体外诱导细胞衰老模型。使用Lipo2000脂质体转染法过表达或抑制细胞let-7c miRNA表达。将VSMC分为阴性对照(NC)组、博来霉素组、博来霉素+let-7c过表达组、博来霉素+let-7c抑制组，通过衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色评估组织或细胞衰老水平。将VSMC分为控制组、血小板衍生生长因子(PDGF)组、PDGF+let-7c过表达组，采用Western blot检测各组细胞蛋白表达。将VSMC分为空白组、let-7c过表达组、突变组、突变+let-7c过表达组，使用双荧光素酶报告基因验证let-7c靶点。结果 老年组小鼠主动脉和血清中let-7c miRNA相对表达水平显著高于对照组(6.37±0.81 vs 1.00±0.00,P<0.05;5....