局灶性脑缺血预处理大鼠星形胶质细胞GFAP表达的变化

目的观察GFAP在大鼠局灶脑缺血和局灶脑缺血预处理(IPC)中的表达水平。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,将大鼠分为正常组、MCAO组、IPC+MCAO组,按缺血时间不同各组又分为3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、7 d组,观察1 d时间点大鼠神经功能、梗死体积,观察不同时间星形胶质细胞变化及其标志物GFAP表达水平。结果 101 min IPC可使大鼠神经功能增加并减少梗死体积,MCAO和IPC+MCAO后星形胶质细胞标志物GFAP表达随缺血时间延长阳性表达增多,10 min IPC随缺血时间延长,星形胶质细胞阳性细胞数增多,在缺血1 d、3 d、7 d明显增加,与MCAO相比差异显著。结论 IPC可能通过激活星形胶质细胞产生缺血耐受作用。     

电针体穴治疗对大脑中动脉梗死模型大鼠胆碱乙酰转移酶表达的影响

目的 观察电针体穴治疗后大脑中动脉梗死模型(MCAO)大鼠胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达变化,为探讨针刺改善学习记忆能力提供理论依据.方法 将大鼠随机分为对照组(正常大鼠)、实验组(局灶性脑缺血的大鼠)、治疗组(局灶性脑缺血的大鼠+针刺),采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术观察各组大鼠ChAT的动态变化.结果 治疗组大鼠ChAT活性比实验组有显著提高( P<0.01 ) ,并已接近对照组的正常大鼠.结论 MCAO大鼠经针刺治疗后ChAT的阳性表达可能是学习记忆障碍的神经生物学基础之一.     

重复经颅磁刺激对大鼠缺血脑组织中突触素表达及运动功能康复的影响

目的探讨重复经颅磁刺激(rTMS)对脑可塑性的影响及其作用机制。方法雄性SD大鼠96只,随机分为模型组、假刺激组、急性期rTMS组和慢性期rTMS组,每组24只;采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉闭塞的脑缺血再灌注模型。分别于建模后6、13、27 d时用免疫组织化学方法检测大鼠梗死侧皮质突触素的表达,同时评价大鼠神经功能。电镜观察大鼠梗死侧皮质突触损害情况。结果与模型组比较,急性期rTMS组梗死侧皮质突触素阳性细胞数在再灌注6、13、27 d明显增多,神经功能障碍评分在再灌注6、13 d明显增高,慢性期rTMS组梗死侧皮质突触素阳性细胞数在再灌注13、27 d明显增多,神经功能障碍评分在再灌注13 d明显增高[(1 3.63±1.06)分vs(11.88±1.25)分,P<0.05,P<0.01]。电镜观察,急性期rTMS组和慢性期rTMS组梗死侧皮质突触损害程度较模型组相对较轻。结论 rTMS使脑缺血再灌注损伤后大鼠梗死侧皮质的突触素阳性细胞数目有不同程度的增加;rTMS对脑缺血再灌注损伤后大鼠的神经功能恢复有一定程度的促进作用。     

大鼠海马突触体素及胆碱乙酰转移酶的增龄变化

目的 观察不同月龄(1、3、6、12、18、24月龄)大鼠脑海马区突触体素(SYP)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达的变化,探讨其与学习记忆功能之间的关系.方法 采用免疫组织化学染色方法,观察SYP和ChAT在增龄大鼠海马中的表达水平.结果 1～6月龄SYP免疫反应阳性产物逐渐增加,6～18月龄缓慢减少,进入24月龄明显减少,与其他各组相比具有非常显著性差异(P＜0.01).ChAT免疫反应阳性神经元在1月龄时比较少,3～6月龄时最多,以后明显减少,进入24月龄后,偶见阳性细胞.结论 SYP和ChAT在大鼠海马中的表达存在随龄变化,特别是老年期表达量显著降低,可能是导致学习记忆障碍的重要机制之一.     

西红花苷基于Wnt/β-catenin信号通路改善阿尔茨海默病大鼠的空间记忆

目的观察西红花苷对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马突触小泡蛋白(SYP)和Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、AD模型组、西红花苷组。侧脑室注射β淀粉样蛋白(Aβ25～35)建立AD大鼠模型,西红花苷组从次日开始腹腔注射西红花苷(40 mg/kg),连续注射14 d。Morris水迷宫实验检测各组学习记忆能力,免疫组化、免疫荧光和Western印迹检测海马SYP的表达,Western印迹检测Wnt/β-catenin信号通路主要蛋白GSK3β、β-catenin、p-β-catenin蛋白的表达。结果在Morris水迷宫实验中,相比于正常对照组,AD模型组学习记忆能力明显减退,相比于AD模型组,西红花苷组学习记忆能力明显增强。免疫组化、免疫荧光和Western印迹实验中,AD模型组海马SYP的表达显著少于正常对照组(P<0.05),西红花苷组SYP的表达显著高于AD模型组(P<0.05)。在Western印迹中,与正常对照组比较,AD模型组大鼠β-catenin的表达明显减少(P<0.05),GSK3β、p-β-catenin的表达明显增加(P<0.05);与AD模型组比较,西红花苷组β-catenin的表达明显增加(P<0.05),GSK3β、p-β-catenin的表达明显减少(P<0.05)。结论西红花苷可通过激活Wnt/β-catenin信号通路,增加海马SYP的表达,改善AD大鼠空间记忆能力。     

慢性饮酒及戒断对老年大鼠学习记忆的影响

目的探讨慢性饮酒及戒断对老年大鼠学习记忆的影响及其机制。方法 36只雄性老年SD大鼠随机分为对照组、乙醇组和戒断7 d组,每组12只。对照组大鼠正常饮水饲养;乙醇组大鼠以6%(V/V)酒精作为唯一饮水来源,持续30 d,建立慢性酒精依赖大鼠模型;戒断7 d组大鼠以6%(V/V)的酒精作为唯一饮水来源,持续30 d后,恢复正常饮水7 d。Morris水迷宫实验观察各组大鼠学习记忆成绩,电生理实验检测强直性高频刺激对海马长时程增强(LTP)的影响。免疫荧光实验检测海马CA1区和前额叶皮层突触可塑性蛋白(PSD-95)表达的变化。结果乙醇组较对照组大鼠逃避平台潜伏期时间连续3个实验日均显著延长(P0.01),与乙醇组比较,戒断7 d组大鼠逃避平台潜伏期时间连续3个实验日均显著变短(P0.05);强直性高频刺激可诱导3组大鼠海马CA1区电活动呈现LTP样变化,乙醇组LTP幅值较对照组显著降低(P0.05),戒断7 d组LTP幅值较乙醇组显著升高(P0.05);在海马和前额叶皮层,乙醇组PSD-95的表达较对照组显著减少(P0.01),戒断7 d组PSD-95表达较乙醇组显著增加(P0.05)。结论慢性饮酒导致老年大鼠空间记忆能力减退,可能与酒精对海马和前额叶皮层神经元的损伤使突触可塑性降低、PSD-95表达减少有关。     

局灶性脑缺血后神经干细胞增殖及GDNF表达变化的实验研究

目的研究局灶性脑缺血后大鼠脑内神经干细胞(NSCs)增殖情况及与胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达变化的关系。方法将24只SD大鼠随机分为假手术组和模型1组、模型2组、模型3组各6只,后三组用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备局灶性脑缺血模型,分别于术后3、7、14 d处死;假手术组除不以尼龙线阻塞大脑中动脉起始部外,其他操作与模型1组相同。采用免疫组化染色法观察5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的细胞及巢蛋白(Nestin)、GDNF阳性细胞表达,BrdU/Nestin免疫荧光双标法观察NSCs变化。结果模型2组损伤侧脑室下层(SVZ)BrdU阳性细胞显著多于假手术组(P<0.05),模型3组与假手术组相似;模型2、3组皮层梗死灶周围BrdU阳性细胞均显著多于假手术组(P<0.01、0.05);模型1、2组皮层梗死灶周围Nestin阳性细胞均显著多于假手术组(P均<0.01),BrdU/Nestin免疫荧光双标显示BrdU阳性细胞几乎均为Nestin阳性;模型2、3组皮层梗死灶周围GDNF阳性细胞均显著多于假手术组(P均<0.05)。结论大鼠局灶性脑缺血后3～14 d内源性NSCs增殖加快,GDNF表达增加可能对其起促进作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡诱导因子的表达及其与神经细胞凋亡的关系

目的观察大鼠脑缺血再灌注(I/R)后凋亡诱导因子(AIF)的表达,探讨I/R脑区AIF变化与神经细胞凋亡的关系。方法应用线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,TTC染色观察梗死灶的形成,应用原位末端标记(TUNEL)和免疫组化技术分别观察大鼠假手术组、MCAO90min再灌注0、3、6、12、24、48、72h时额顶叶皮层缺血脑区AIF表达及神经细胞凋亡程度的变化。结果脑I/R24h,TTC染色见明显的梗死灶形成。除缺血90min凋亡细胞数量与假手术组比较无统计学意义外,其余各指标与假手术组相比均有统计学意义(P<0.01),除6与12h以及24与48hAIF含量的差异无统计学意义,24与48h凋亡细胞数量的差异无统计学意义外,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论I/R可诱导AIF阳性细胞表达增加,并引起神经细胞凋亡。     

大鼠学习记忆时CA3区突触素免疫阳性产物的变化及突触出芽表达

目的探讨学习记忆的形成、遗忘与突触可塑性的关系。方法用水迷宫训练大鼠21d建立空间辨别性学习记忆模型，随即停止训练，应用免疫组化方法和图像分析技术，检测3、7、14d突触素在大鼠海马CA3区表达的变化。结果对照组大鼠海马CA3区突触素的表达弱，免疫反应产物呈点状颗粒，沿辐射层长轴分布，多形层也有散在分布。模型组大鼠突触素染色明显比对照组深，密集的小颗粒呈带状沿辐射层排列，底部可见一些大的阳性颗粒。随着停止训练的时间延长，突触素的表达逐渐减弱。结论空间学习记忆导致海马CA3区辐射层新突触的形成，而随着空间学习记忆的遗忘，又致新形成突触的消退或突起的出芽又逐渐消失。     

老年抑郁模型大鼠神经可塑性变化及温胆汤的干预机制

目的探讨老年抑郁模型大鼠神经可塑性变化及温胆汤的干预机制。方法以孤养结合慢性不可预见性应激老年抑郁模型大鼠为研究对象,在实验第7、14、21天检测各组大鼠海马突触结构的体视学变化以及神经元再生情况。结果在抑郁形成过程中,随着时间的增加,21 d时,与空白组比较,模型组大鼠突触活性区长度、突触后致密物质厚度以及NeuN/BrdU、β-tubulinⅢ/BrdU双标阳性细胞数均明显减少,突触间隙宽度增加明显(P<0.01)。随着温胆汤治疗时间的增加,上述各指标的趋势均得到抑制(P<0.05)。结论老年抑郁症患者中存在海马神经突触结构损伤、神经元再生减少等可塑性变化,温胆汤可通过逆转上述变化而发挥其抗抑郁的效应。     

活脑康对缺血大鼠脑组织P38蛋白表达影响的实验研究

目的探讨缺血大鼠脑组织P38的变化及中药活脑康的保护作用.方法应用免疫组化方法,测定正常对照组(A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)、活脑康治疗组(D组)、脑心通组(E组)P38的表达.结果与A组、B组比较,C组、D组、E组P38表达增多(P＜0.001),与C组比较,D组、E组表达明显增多(P＜0.001或P＜0.05).结论活脑康可上调突触素P38的表达,具有促进突触再建和增强、完善再建突触效能的作用.     

Expression and significance of angiostatin,vascular endothelial growth factor and matrix metalloproteinase-9 in brain tissue of diabetic rats with ischemia reperfusion

Objective: To discuss the expression and significance of angiostatin, vascular endothelial growth factor and matrix metalloproteinase-9 in the brain tissue of diabetic rats with ischemia reperfusion. Methods: A total of 60 male Wistar rats were randomly divided into the normal group, sham group, diabetic cerebral infarction group and single cerebral infarction group according to the random number table, with 15 rats in each group. The high sucrose diet and intraperitoneal injection of streptozotocin were performed for the modeling of diabetic rats, while the thread-occlusion method was employed to build the model of cerebral ischemia reperfusion. The immunohistochemical staining was performed to detect the expression of angiostatin, vascular endothelial growth factor(VEGF) and matrix metalloproteinase-9(MMP-9) in the brain tissue. Results: The expression of angiostatin after the reperfusion in the brain tissue of rats in the single cerebral infarction group and diabetic cerebral infarction group was increased 6 h after the reperfusion, reached to the peak on 1 d and then decreased gradually. The expression of angiostatin in the diabetic cerebral infarction group 6 h, 1 d, 3 d and 7 d after the reperfusion was significantly higher than that in the single cerebral infarction group(P0.05). VEGF began to be increased 1 h after the reperfusion in the single cerebral infarction group and diabetic cerebral infarction group, reached to the peak at 6 h and then decreased gradually. The expression of VEGF in the diabetic cerebral infarction group at each time point after the reperfusion was significantly lower than that in the single cerebral infarction group(P0.05). MMP-9 began to be be increased 1 h after the reperfusion in the single cerebral infarction group and diabetic cerebral infarction group, reached to the peak on 1 d and then decreased gradually. The expression of MMP-9 in the diabetic cerebral infarction group at each time point after the reperfusion was significantly higher than that in the single cerebral infarction group(P0.05). Conclusions: The high glucose environment in which the diabetic cerebral infarction is occurred is to induce the formation of MMP-9 at first and then activate and increase the expression of angiostatin. Afterwards, the expression of VEGF is inhibited, resulting in the poor angiogenesis after cerebral infarction, which thus makes the injury of brain tissue after cerebral infarction even worse than the non-diabetes mellitus.     

丁苯酞对局灶性脑梗死大鼠脑水肿、血脑屏障通透性和皮质RhoA表达的影响

目的 探讨丁苯酞对局灶性脑梗死大鼠脑水肿、血脑屏障通透性和皮质RhoA表达水平的影响.方法 雄性Sprague-Dawley大鼠220只,按随机数字表法分为假手术组、脑缺血组和丁苯酞组（40 mg/kg,1次/d,灌胃）.采用光化学法建立大鼠局灶性脑梗死模型.分别于模型制作后3、12、24、72和144 h时,采用干湿重法和伊文思蓝渗出法检测脑组织含水量和血脑屏障通透性.在模型制作后24 h,采用免疫组化染色和蛋白质印迹法检测梗死周围皮质RhoA蛋白表达水平.结果 与假手术组比较,脑缺血组和丁苯酞组脑组织含水量（除6h时间点外）和血脑屏障通透性均显著性增高（P均＜0.05）.免疫组化染色和蛋白质印迹分析提示,脑缺血组和丁苯酞组梗死周围皮质RhoA表达显著上调.与脑缺血组比较,丁苯酞组各时间点脑组织含水量和血脑屏障通透性均显著性降低（P均＜0.05）,RhoA表达水平也显著性降低（P＜0.05）.结论 丁苯酞可减轻局灶性脑梗死大鼠脑水肿,抑制血脑屏障的破坏,下调RhoA表达.     

刺五加总黄酮对脑缺血大鼠脑组织P38及GAP-43蛋白表达影响的实验研究

目的探讨脑缺血大鼠脑组织P38、GAP-43的变化及刺五加总黄酮的保护作用。方法制作大鼠脑缺血模型，应用免疫组化方法，测定正常对照组、治疗组、正常组P38、GAP-43表达的影响。结果P38和GAP-43的表达水平随再灌注延长而不断上升；在各时间点，治疗组P38和GAP-43的表达水平均高于对照组（P〈0．01）。结论刺五加总黄酮可上调突触素P38、生长相关蛋白GAP-43的表达，具有促进突触再建和增强、完善再建突触效能的作用。     

依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Caspase—3蛋白表达的影响

目的在大鼠脑缺血再灌注损伤发生后,用自由基清除剂依达拉奉对其进行治疗,监测再灌注不同时间点脑组织Cas-pase-3蛋白表达情况。研究依达拉奉对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法制作短暂、局灶性脑缺血再灌注模型。分为正常组及假手术组(对照组)、脑缺血再灌注对照组(缺血组)、依达拉奉治疗组(治疗组),分别于缺血1h后进行再灌注。治疗组于再灌注后30min腹腔内及皮下各注射依达拉奉1次(按依达拉奉3mg/kg),30min后重复一次。设再灌注后2h、6h、12h、24h、48h不同时间点,各时间点以0.4%戊巴比妥钠深度麻醉后快速断头法将大鼠处死,以4%多聚甲醛灌注固定后取脑,行免疫组化检测各时间点脑组织Caspase-3表达阳性细胞数。结果缺血组再灌注后2h在大脑额叶和顶叶皮质和海马即可见到Caspase-3蛋白表达的阳性细胞,12h达高峰,24h后开始下降。治疗组各时间点Caspase-3表达水平较对照组明显降低(P<0.01)。结论依达拉奉可抑制Caspase-3的表达,对缺血再灌注损害的脑组织有明显的保护作用。     

羟基红花黄色素A对大鼠局灶性脑缺血再灌注NMDAR_1蛋白表达的影响

目的　探讨羟基红花黄色素A(hydrosafflowyellowA ,HSYA)对大鼠局灶性脑缺血的保护作用及其机制。方法采用大鼠大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ,观察HSYA对MCAO 2h ,再灌注 0、1、3、6、9、12、2 4及 72h ,1、2周时脑组织病理和NMDAR1 蛋白表达的变化。结果　HE染色显示缺血 2h再灌注 0～ 1h即可见神经细胞变性 ,细胞周围水肿 ,再灌注 3～ 6h可见软化灶。再灌注 12～ 2 4h ,软化灶扩大。治疗组可明显减轻缺血性损伤 ,神经细胞变性和坏死明显减轻。免疫组织化学染色可见NMDAR1 蛋白在正常大鼠大脑皮质锥体样细胞上呈散在阳性表达。缺血再灌注 0～ 1hNMDAR1 蛋白表达即明显增高 ,3h左右达高峰 ,然后逐渐下降 ,2 4～ 72h表达明显低于正常 ,1～ 2周时表达开始恢复 ,但仍偏低。与同时间点对照组比较 ,HSYA可明显降低早期 (12h以内 )NMDAR1 蛋白的表达 ,上调后期 (2 4h以后 )NMDAR1 蛋白的表达。结论　HSYA对缺血再灌注脑组织具有保护作用 ,其对NMDAR1 蛋白表达的双向调节作用可能为其脑保护作用的重要机制     

大鼠大脑皮质梗死后同侧丘脑组织蛋白酶B表达的动态变化

目的 探讨大鼠大脑皮质梗死后同侧丘脑腹后外侧核(ventroposterior nucleus of the thalamus, VPN) 组织蛋白酶B(cathepsin B, CathB)的表达变化.方法 成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组和模型组,后者进一步分为术后1周组、2周组、3周组、4周组和8周组.电凝法闭塞大脑中动脉皮质支制作大脑皮质梗死模型.采用免疫组织化学染色和免疫荧光检测各时间点丘脑VPN CathB蛋白表达和细胞定位.结果 大脑皮质梗死后丘脑VPN CathB表达水平逐渐增高,4周时达高峰,8周时下降,但仍然高于对照组(P均<0.05);可见CathB从溶酶体释放到细胞质.此外,在大脑皮质梗死后3周时,活化星形胶质细胞CathB表达水平也显著增高.结论 大脑皮质梗死后1~8周期间,丘脑VPN CathB维持较高的表达水平,提示其可能在大脑皮质梗死后继发丘脑变性中起着一定的作用.     

电针干预高血压大鼠脑缺血血管内皮生长因子和促血管生成素1表达的研究

目的观察电针对易脑卒中型肾血管性高血压大鼠(RHRSP)脑缺血再灌注血管内皮生长因子(VEGF)、促血管生成素1(Ang 1)表达及血管新生的影响。方法用环形银夹钳夹SD大鼠的双侧肾动脉,制成RHRSP 120只,随机分为4组:空白组(12只),假手术组(12只)、模型组(48只)和电针组(48只),后2组大鼠再用线栓法制成一侧大脑中动脉闭塞模型,电针组给予"百会"、"大椎"穴位电针治疗,1次/d,14天。免疫组织化学法和光镜等技术观察脑缺血2 h后,再灌注1、7、14、28天大鼠脑内缺血区VEGF、Ang 1表达及缺血区微血管密度(MVD)的变化。结果与空白组和假手术组比较,模型组大鼠7、14、28天梗死灶周围VEGF和Ang 1的表达明显增强(P0.05);与模型组比较,电针组大鼠7、14、28天VEGF和Ang 1的表达均明显增强(P0.05),脑缺血14、28天缺血区及周围MVD明显增加(P0.05)。结论电针对RHRSP脑缺血再灌注损伤的保护作用,可能与增强梗死灶周围VEGF和Ang 1的表达,促进缺血区的血管新生有关。