普罗布考对巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶9的抑制作用

通过观察普罗布考对THP 1细胞基质金属蛋白酶 9表达的影响 ,初步探讨普罗布考稳定斑块的分子机制。运用逆转录聚合酶链反应、免疫印迹、明胶酶图等方法 ,检测氧化型低密度脂蛋白诱导后的人单核细胞 巨噬细胞系THP 1细胞基质金属蛋白酶 9mRNA表达、蛋白分泌和酶活性。实验发现 ,在氧化型低密度脂蛋白 (80mg L)刺激下 ,THP 1细胞基质金属蛋白酶 9的表达和酶活性明显增强 ;予普罗布考 2 0、4 0、6 0 μmol L处理 ,均能在对细胞活性无影响的前提下 ,显著抑制基质金属蛋白酶 9的蛋白分泌量及明胶降解活性 ,且这种作用呈浓度依赖性增强 ,其中 6 0 μmol L的普罗布考抑制基质金属蛋白酶 9的蛋白分泌和明胶降解活性分别达 74 .0 %± 2 .4 %和 4 8.0 %±5 .1% (P <0 .0 5 )。实验结果说明 ,普罗布考能有效抑制巨噬细胞的基质金属蛋白酶 9的蛋白分泌及其活性 ,这一作用可能是其抗动脉粥样硬化和稳定斑块的重要机制之一。     

罗格列酮对急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的影响

目的 探讨过氧化体增殖物激活型受体γ在调节急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达基质金属蛋白酶9、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1中的作用.方法 用不同浓度罗格列酮干预急性冠状动脉综合征患者和对照者单核细胞源性巨噬细胞,然后测定各组上清液中基质金属蛋白酶9、组织型基质金属蛋白酶抑制剂l浓度及单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1 mRNA的表达.结果 干预后,急性冠状动脉综合征组及对照组过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达上调,表达强度与罗格列酮浓度呈正变关系;基质金属蛋白酶9表达下调,在急性冠状动脉综合征组其下调程度与罗格列酮浓度呈反变关系;组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达无明显变化.结论 罗格列酮干预可上调单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达,下调基质金属蛋白酶9表达,在急性冠状动脉综合征组尤其明显,对组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达无明显影响;可能存在稳定动脉粥样斑块的作用.     

脂蛋白(a)免疫复合物对U937细胞基质金属蛋白酶1及其抑制物的作用

目的探讨脂蛋白(a)免疫复合物对U937细胞基质金属蛋白酶1及其抑制物组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA表达的影响。方法分别采用不同浓度的天然脂蛋白(a)、氧化型脂蛋白(a)及其免疫复合物作用U937细胞,通过半定量RT-PCR分析U937细胞中基质金属蛋白酶1和组织金属蛋白酶抑制剂1基因表达的变化。结果正常U937细胞低表达基质金属蛋白酶1(0.076±0.012),而高表达组织金属蛋白酶抑制剂1(0.973±0.031)。等量的天然脂蛋白(a)、氧化型脂蛋白(a),及其免疫复合物作用后,基质金属蛋白酶1mRNA表达量分别为0.361±0.016,0.330±0.019,0.106±0.006和0.089±0.008;组织金属蛋白酶抑制剂1表达量分别为0.229±0.017,0.360±0.018,0.157±0.025和0.967±0.031。天然脂蛋白(a)对细胞基质金属蛋白酶1和组织金属蛋白酶抑制剂1mR-NA表达没有影响。氧化型脂蛋白(a)引起基质金属蛋白酶1轻度表达,但显著地下调组织金属蛋白酶抑制剂1的表达;而天然、氧化型脂蛋白(a)免疫复合物均非常显著地增加基质金属蛋白酶1和降低组织金属蛋白酶抑制剂1的mRNA表达(P<0.001),且较氧化型脂蛋白(a)对基质金属蛋白酶1的作用更为显著(P<0.001),并呈剂量效应关系。结论脂蛋白(a)免疫复合物增强U937细胞基质金属蛋白酶1mRNA表达,下调其抑制物组织金属蛋白酶抑制剂1的表达。     

急性冠状动脉综合征患者巨噬细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ及炎症相关因子的变化

目的 探讨急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ核因子κB、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的变化及其间的关系.方法 选取急性冠状动脉综合征患者48例、稳定型心绞痛患者22例为研究对象,抽取外周动脉血20 mL,分离单个核细胞,加巨噬细胞集落刺激因子培养得单核细胞源性巨噬细胞;用CD40配体刺激后,酶联免疫吸附法测定上清液中基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1浓度,逆转录聚合酶链反应检测过氧化体增殖物激活型受体γ、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1 mRNA表达,免疫组织化学法检测核因子κ亚单位P65表达.结果 急性冠状动脉综合征组过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA表达低于稳定型心绞痛组(0.24±0.04比0.39±0.06,P<0.001),核因子κ P65表达高于稳定型心绞痛组(0.42±0.06比0.27±0.02,P<0.001),基质金属蛋白酶9在上清液中的浓度及其mRNA表达明显高于稳定型心绞痛组(231.11±51.47μg/L比126.02±13.26μg/L和0.674±0.11比0.24±0.05,P<0.001),组织型基质金属蛋白酶抑制剂1在上清液中的浓度及其mRNA表达强度高于稳定型心绞痛组(139.80±31.54μg/L比112.25±12.68μg/L和0.42±0.09比0.33±0.06,P<0.05).过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA表达与核因子κ P65和基质金属蛋白酶9的表达强度呈负相关(P<0.001),与组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达强度不相关(P>0.05);核因子κ P65与基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达强度呈正相关(P<0.001).结论 急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达下调,核因子κ活性增强,基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达上调;过氧化体增殖物激活型受体γ可能通过调节核因子κ活性而调节基质金属蛋白酶9基因转录;但组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达可能不受过氧化体增殖物激活型受体γ调节.     

冠心病患者外周血单个核细胞基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1及磷酸化c-Jun蛋白表达改变与冠状动脉病变特征的相关性

目的 结合冠状动脉造影结果 ,探讨冠心病患者外周血单个核细胞基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1和磷酸化c-Jun蛋白表达水平改变与冠状动脉病变特征的关系.方法 40例经冠状动脉造影确诊的冠心病患者分为急性冠状动脉综合征组(n=24)和稳定型心绞痛组(n=16).另选取同期经冠状动脉造影证实无冠状动脉病变患者15例为对照组.采用免疫印迹法分别检测外周血单个核细胞基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1和磷酸化c-Jun蛋白表达水平,计算基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1比值,并结合Gensini冠状动脉病变积分标准评价其与冠状动脉管腔病变程度的线性关系及其在反映冠状动脉粥样硬化斑块稳定性中的作用.结果 ①急性冠状动脉综合征组基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1、磷酸化c-Jun蛋白表达水平及基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1比值较稳定型心绞痛组和对照组明显增高(均P<0.001).②基质金属蛋白酶9、磷酸化c-Jun及基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1比值与Gensini冠状动脉病变积分呈正相关(r分别为0.433、0.476和0.457,均P<0.01);组织型金属蛋白酶抑制剂1蛋白表达水平与Gensini冠状动脉病变积分无相关性.③磷酸化c-Jun与基质金属蛋白酶9蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.839,P<0.001).结论 ①急性冠状动脉综合征患者基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1蛋白表达水平较稳定型心绞痛患者明显增高,其比例严重失调,反映了急性冠状动脉综合征患者冠状动脉管腔病变程度更为复杂且血管壁具有更多易损斑块;②核转录因子c-Jun活化可能参与了动脉粥样硬化中基质金属蛋白酶9表达的调控.     

活化淋巴细胞诱导人血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶表达

为探讨活化的淋巴细胞直接接触对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶表达的影响 ,用乙酸肉豆蔻佛波醇活化并经 1%多聚甲醛固定的人外周血淋巴细胞 ,与培养的人类胚胎血管平滑肌细胞共同孵育 ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定细胞培养上清液中基质金属蛋白酶的活性。结果发现 ,基础状态下的体外培养人血管平滑肌细胞合成基质金属蛋白酶 2的酶原形式 ,有少量基质金属蛋白酶 2的活性形式存在。经佛波醇活化淋巴细胞组上清液中可检测到基质金属蛋白酶 1、基质金属蛋白酶 3和基质金属蛋白酶 9活性 ,并且基质金属蛋白酶 2活性形式较对照组增加 198%± 2 7% (P <0 .0 1) ,未经佛波醇活化的淋巴细胞不影响血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶的合成和分泌。以上结果提示 ,活化固定的淋巴细胞可以通过细胞直接接触诱导血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶表达增加及活化 ,在动脉粥样硬化的斑块破裂过程中可能起重要作用     

氟伐他汀对内脏脂肪素诱导的内皮细胞MMP-1、TIMP-1和ICAM-1表达的影响

目的观察氟伐他汀对内脏脂肪素诱导的人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶1、组织型金属蛋白酶抑制剂1、细胞间黏附分子1表达的影响,探讨他汀类药物降脂外抗动脉粥样硬化的作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,以不同浓度氟伐他汀和内脏脂肪素共同孵育24 h,用逆转录聚合酶链反应法检测基质金属蛋白酶1、组织型金属蛋白酶抑制剂1和细胞间黏附分子1的表达。结果与正常对照组比较,内脏脂肪素组基质金属蛋白酶1和细胞间黏附分子1的表达显著升高,组织型金属蛋白酶抑制剂1的表达量下降。氟伐他汀干预后,基质金属蛋白酶1和细胞间黏附分子1的表达较内脏脂肪素组显著降低,组织型金属蛋白酶抑制剂1的表达增加。结论氟伐他汀可能通过抑制内脏脂肪素的活性,影响血管内皮细胞基质金属蛋白酶1、组织型金属蛋白酶抑制剂1和细胞间黏附分子1的表达,由此稳定血管内皮环境,抑制内皮细胞炎症反应,起到抗动脉粥样硬化的作用。     

氧化型低密度脂蛋白对人血单核细胞基质金属蛋白酶表达及活性的影响

探讨氧化修饰低密度脂蛋白对人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶的表达及其活性的影响。采用体外培养人单核细胞源巨噬细胞，分别应用逆转录聚合酶链式反应和蛋白印迹检测基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9基因和蛋白表达，酶谱法检测基质金属蛋白酶活性。结果发现，不同浓度(10、20、40mg/L)氧化修饰低密度脂蛋白对人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9基因表达的影响均明显高于相应浓度低密度脂蛋白组；基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9蛋白表达也明显高于相应浓度低密度脂蛋白组；基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的活性明显高于相应剂量低密度脂蛋白组，又随剂量增加而增高。提示氧化修饰低密度脂蛋白可刺激人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9基因及蛋白的表达，增强其活性，因而有可能促进动脉粥样硬化斑块内基质降解，形成易损斑块，而易损斑块破裂可引起急性冠状动脉事件。     

基质金属蛋白酶抑制剂对动脉粥样硬化形成的影响

基质金属蛋白酶是一种酶活性Zn2+依赖性肽链内切酶家族,它们能溶解结缔组织和细胞外基质的多种成分,并能使一些正常和病理性组织发生重构,从而导致了动脉粥样硬化的形成。基质金属蛋白酶抑制剂作为基质金属蛋白酶的特异抑制剂,能够抑制基质金属蛋白酶及其前体的活性。基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶抑制剂的平衡破坏对于动脉粥样硬化形成起了重要作用。     

血管紧张素Ⅱ在高糖诱导大鼠系膜细胞MMP-9和TIMP-1 mRNA表达中的作用

高糖刺激大鼠系膜细胞血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）的产生，高糖组和ATⅡ组系膜细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA表达降低，基质金属蛋白酶组织抑制物1（TIMP-1）mRNA表达增加，MMP-9／TIMP-1 mRNA比值下降，ATⅡ受体阻断剂Saralasin能逆转上述改变。     

过氧化体增殖物激活型受体γ配体抑制巨噬—泡沫细胞炎性介质和基质金属蛋白酶2的分泌

目的在证实泡沫细胞有过氧化体增殖物激活型受体γ表达的基础上,探讨其配体对巨噬细胞、泡沫细胞炎性介质和基质金属蛋白酶分泌的影响。方法体外诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,给予氧化型低密度脂蛋白进一步诱导其转变为泡沫细胞,应用逆转录聚合酶链反应检测过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达;过氧化体增殖物激活型受体γ配体吡格列酮干预后用Western blot检测巨噬细胞CD40蛋白的表达;用酶联免疫吸附测定法测定泡沫细胞培养上清液中白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶2和9的浓度,Gelatin Zymog-raphy测定基质金属蛋白酶活性。结果巨噬细胞转化为泡沫细胞后其过氧化体增殖物激活型受体γ基因表达无显著变化。吡格列酮可显著抑制巨噬细胞CD40的表达,呈剂量依赖性;显著抑制泡沫细胞白细胞介素6、肿瘤坏死因子α和基质金属蛋白酶9的分泌(P<0.05),抑制基质金属蛋白酶9的活性,对基质金属蛋白酶2的分泌和活性无影响。结论巨噬细胞、泡沫细胞中过氧化体增殖物激活型受体γ基因表达无变化。过氧化体增殖物激活型受体γ配体从多个环节抑制致动脉粥样硬化炎性因子的分泌,减少基质金属蛋白酶的释放并抑制其活性,对防治动脉粥样硬化有利。     

巨噬细胞集落刺激因子对RAW264.7细胞基质金属蛋白酶9分泌的影响

目的探讨巨噬细胞集落刺激因子致动脉粥样硬化作用是否与其影响基质金属蛋白酶表达和活性有关。方法应用酶谱法观察巨噬细胞集落刺激因子对体外培养的RAW264.7细胞基质金属蛋白酶9活性的影响;逆转录聚合酶链反应检测巨噬细胞集落刺激因子对体外培养的RAW264.7细胞基质金属蛋白酶9 mRNA表达的影响。结果与对照组相比,不同浓度(100、250和500μg/L)巨噬细胞集落刺激因子能增强RAW264.7细胞基质金属蛋白酶9的活性,并呈一定的剂量依赖性;同时,250μg/L巨噬细胞集落刺激因子可增强RAW264.7细胞基质金属蛋白酶9 mRNA表达。结论巨噬细胞集落刺激因子可诱导RAW264.7细胞基质金属蛋白酶9的表达,并可能通过这一机制影响动脉粥样硬化斑块的稳定性。     

MMPs／TIMPs、TGF—β1细胞外基质与糖尿病肾病

转化生长因子β1可刺激系膜细胞外基质(ECM)蛋白的合成，抑制基质金属蛋白酶的酶解活性，并增加其抑制剂组织型金属蛋白酶抑制剂的活性，从而促进ECM的沉积，在糖尿病肾病的发生发展中具有重要作用。     

基质金属蛋白酶及其抑制剂在心肌疾病中的研究进展

心肌疾病常伴随着心肌细胞外基质成分的改变,细胞外基质合成或降解失衡是心肌疾病发病过程中重要的环节。细胞外基质的合成与降解主要与位于其间的基质金属蛋白酶及其特异性组织抑制剂的活性有关。基质金属蛋白酶可以分解细胞外基质,从而改变组织的形态结构。基质金属蛋白酶与特异性组织抑制剂之间的动态平衡与心肌疾病发病过程中心肌重构和心衰进展有重要关系。     

粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子对人内皮细胞基质金属蛋白酶分泌及活性的影响

为探讨粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子对人内皮细胞基质金属蛋白酶分泌及活性的影响，体外培养人脐静脉内皮细胞，分别应用蛋白印迹法和酶谱法检测基质金属蛋白酶2的含量和活性。结果发现，与对照组相比，不同浓度(5、25和50μg/L)粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子可使人内皮细胞基质金属蛋白酶2的蛋白表达和活性增强，且随粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子剂量增加而增强。提示粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子可通过刺激人内皮细胞基质金属蛋白酶2蛋白的表达，并增强其活性，促进内皮细胞对细胞外基质的降解，从而易于动脉粥样硬化斑块内炎性细胞的渗入，内皮细胞的迁移及新血管的形成，从而对斑块的稳定性产生影响。     

抗纤复方含药血清对HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶基因表达的影响

目的：探讨抗纤复方含药血清对肝星形细胞(HSC)LI90细胞(HSC-LI90)Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶基因表达的影响。方法：以0．5、2．0、4．0g/kg等不同剂量抗纤复方灌胃，制备大鼠的含药血清，作用HSC-LI90细胞48小时，应用Nonhon印迹杂交的方法，检测Ⅰ型、Ⅳ前胶原、基质金属蛋白酶—2及膜型基质金属蛋白酶基因的表达，并用酶图法检测基质金属蛋白酶—2的活性。结果：抗纤复方含药血清能抑制HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原、增加模型基质金属蛋白酶基因表达，对基质金属蛋白酶—2基因表达及活性无影响。结论：抗纤复方能下调Ⅰ型、Ⅳ型胶原的合成，增加模型基质金属蛋白酶基因的表达。     

基质金属蛋白酶与高血压肾纤维化研究进展

基质金属蛋白酶是降解细胞外基质的主要蛋白水解酶,在肾脏纤维化疾病中,其表达及活性明显增强,这种情况同样存在于高血压肾脏损伤过程中。基质金属蛋白酶的蛋白水解活性受金属蛋白酶组织型抑制剂的抑制,高血压过程中多种因素调节这两种酶系的水平,最终共同影响细胞外基质的代谢,引起肾纤维化的加重。     

白藜芦醇对动脉粥样硬化兔心肌纤维化和基质金属蛋白酶2、组织型基质金属蛋白酶抑制剂2表达的影响

目的 观察白藜芦醇对动脉粥样硬化兔心肌间质胶原纤维变化和基质金属蛋白酶2及组织型基质金属蛋白酶抑制剂2表达水平的影响.方法 33只新西兰白兔随机分为对照组、模型组和白藜芦醇干预组.观察心肌间质胶原纤维的变化,测量心肌间质胶原容积分数.逆转录聚合酶链反应检测心肌组织基质金属蛋白酶2及组织型基质金属蛋白酶抑制剂2 mRNA水平.结果 与对照组相比,模型组胶原纤维明显增多、增粗、排列紊乱,呈不规则网状或粗块状沉积于心肌间质,胶原容积分数和基质金属蛋白酶2表达增多,组织型基质金属蛋白酶抑制剂2表达减少(P<0.01).白藜芦醇干预能显著减少上述指标的改变.结论 动脉粥样硬化进程中,存在着心肌纤维化、基质金属蛋白酶2表达增多和组织型基质金属蛋白酶抑制剂2表达减少等现象,白藜芦醇能减轻基质金属蛋白酶2/组织型基质金属蛋白酶抑制剂2表达的失衡,改善心肌纤维化.     

氧化型低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2和9表达的影响

为探讨氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化的作用是否与基质金属蛋白酶表达活性改变有关,应用Northern blot、Dot blot、Westorn blott和明胶酶图分析方法观察氧化型低密度脂蛋白对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶－2和9的影响。结果显示,10mg/L氧化型低密度脂蛋白作用于血管平滑骨细胞24h,可明显增强基质金属蛋白酶－2和9mRNA的表达、蛋白分泌和酶的活性,高浓度的氧化型低密度脂蛋白对基质金属蛋白酶－2和9表达的影响不同,氧化型低密度脂蛋白浓度为50mg／L时,基质金属蛋白酶－9表达活性仍然高于对照细胞,但于10mg／L氧化型低密度脂蛋白的作用强度无显著差别;相同条件下,基质金属蛋白酶－2的基因表达和蛋白分泌明显降低。以上结果提示,氧化型低密度脂蛋白可诱导血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶－2和9的表达,并可促进细胞外基质降解。     

MMPs/TIMPs、TGF-β1、细胞外基质与糖尿病肾病

转化生长因子 β1 可刺激系膜细胞外基质 (ECM)蛋白的合成 ,抑制基质金属蛋白酶的酶解活性 ,并增加其抑制剂组织型金属蛋白酶抑制剂的活性 ,从而促进ECM的沉积 ,在糖尿病肾病的发生发展中具有重要作用