细胞外信号调节蛋白激酶5在慢性氟中毒大鼠大脑中的免疫组织改变

目的通过检测慢性氟中毒大鼠脑组织分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导通路中细胞外调节蛋白激酶5(ERK5)在大脑不同功能分区中的表达与活性,研究慢性氟中毒脑损伤的相关机制。方法 30只SD大鼠按性别和体重随机分为3组,每组10只。对照组自由饮用自来水,含氟量低于0.5 mg/L;低氟组饮水含氟量10 mg/L;高氟组饮水含氟量50 mg/L。实验6个月,观察染氟大鼠氟斑牙情况;用氟离子电极法测量大鼠尿氟含量;通过HE染色观察大鼠皮质及海马区的变化;用免疫组化方法检测大鼠脑组织中皮质区、海马CA3区、海马CA4区中P-ERK5、ERK5的蛋白表达水平。结果染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙,尿氟含量增加(P0.05);染氟组大鼠皮质及海马CA3区、CA4神经细胞排列稍紊乱,并有轻度的空泡变性(神经元水肿),高氟组更为严重;高氟组大鼠皮质区P-ERK5蛋白水平高于其他组(P0.05),染氟组大鼠海马CA3区与正常组比较有统计学意义(P0.05),海马CA4区各组间比较均有统计学意义(P0.01);高氟组大鼠皮质区、海马CA3区、海马CA4区ERK5蛋白水平与其他组比较有统计学意义(P0.05);另外ERK5的活化水平在海马CA4区有降低的趋势(P0.05)。结论慢性氟中毒导致大鼠脑皮质区及海马CA3、CA4区P-ERK5、ERK5蛋白表达水平增加,可能与慢性氟中毒大鼠脑损伤免疫组织改变有一定关系。     

慢性氟中毒大鼠脑组织中c-Jun氨基末端激酶表达水平观察

目的 观察慢性氟中毒大鼠脑组织中c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导激酶表达变化,进一步揭示慢性氟中毒神经损伤的分子机制.方法 SD大鼠随机分为3组:对照组、低氟组、高氟组,每组24只,饮用水含氟量分别为＜0.5和5.0、50.0 mg/L,实验期为6个月.用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟及血氟,用Western blotting和免疫组织化学方法检测脑组织中JNK信号转导激酶的表达和分布,并分析血氟与活化的JNK激酶的相关关系.结果低氟组和高氟组大鼠尿氟[(2.56±0.91)、(5.73±3.14)mg/L]和血氟[(0.36±0.14)、(0.50±0.18)mg/L]均较对照组[(0.92±0.30)、(0.12±0.07)mg/L]升高(P均＜0.05).高氟组(1.74±0.69)脑组织phospho-JNK表达高于对照组(1.00±0.37)和低氟组(1.20±0.28,P均＜0.05);total-JNK蛋白表达水平3组间比较,差异无统计学意义(F=0.046,P＞0.05).phospho-JNK、total-JNK阳性表达神经元主要集中在皮质、海马和背侧丘脑,其中高氟组大鼠phospho-JNK在顶叶皮质(119.3±14.1)、枕叶皮质(112.7±5.4)、海马CA3区(100.6±8.9)、背侧丘脑(117.8±10.4)及橄榄核(112.6±5.9)中阳性表达较对照组(104.1±8.9、106.6±9.6、106.6±9.7、108.9±6.4、100.3±8.4)和低氟组(96.7±17.1、102.5±8.3、106.4±6.5、110.2±9.3、102.4±4.7、102.5±9.8)明显增高(P均＜0.05),而total-JNK在各组大鼠脑组织中阳性表达分布未见明显改变(P均＞0.05).相关分析结果发现,随大鼠血氟升高,脑组织中phospho-JNK表达呈增高趋势,二者存在正相关关系(r=0.677).结论慢性氟中毒导致脑组织中磷酸化JNK表达改变,并与机体中氟蓄积量存在相关关系,这些改变可能与慢性氟中毒导致的神经损伤有关系.     

骨桥蛋白在低钙和燃煤污染型氟中毒大鼠肾组织中的表达

目的 观察骨桥蛋白(OPN)在低钙和氟中毒大鼠肾组织中的表达,探讨OPN与氟中毒肾损害的关系.方法 1月龄Wistar大鼠48只,雌雄各半,体质量80～100 g.按2×2析因设计将大鼠按质量随机分为4组:对照组、高氟组、低钙组、低钙高氟组,每组12只,雌雄各半.采用合成饲料喂养,高氟组和低钙高氟组饲料中的玉米来自燃煤污染型氟中毒病区,含氟量为100 mg/kg,对照组和低钙组饲料中的玉米来自于非病区,含氟量为5 mg/kg.喂养16周后处死大鼠,观察各组大鼠牙齿变化,计算大鼠氟斑牙检出率.取大鼠肾脏,采用RT-PCR技术及免疫组化技术检测大鼠肾脏OPN蛋白和OPN mRNA表达.结果 对照组和低钙组牙齿生长良好,高氟组、低钙高氟组大鼠均出现明显的氟斑牙,氟斑牙检出率为100%.免疫组化结果表明,OPN主要定位于肾组织的肾小管上皮细胞中.对照组和低钙组肾组织OPN阳性细胞淡染、散在分布,高氟组与低钙高氟组OPN阳性细胞着色较深,广泛分布在肾小管上皮细胞中.OPN蛋白表达显示,高氟组(168.64±13.21)和低钙高氟组(169.26±8.92)高于对照组(145.78±10.26,P均<0.01)和低钙组(149.60±16.84,P均<0.01);OPN mRNA表达显示,高氟组(1.89±0.37)和低钙高氟组(1.94±0.22)高于对照组(1.32±0.26,P均<0.05)和低钙组(1.30±0.18,P均<0.05).高氟影响OPN蛋白和OPN mRNA表达(F=13.821、4.24,P均<0.05),低钙不影响OPN蛋白和OPN mRNA表达(F=2.164、0.58,P均>0.05),但高氟和低钙联合作用时,二者对OPN蛋白和OPN mRNA表达有交互作用(F=6.257、4.32,P均<0.05).结论 过量氟可促使大鼠肾组织的OPN表达增加,提示OPN与氟中毒肾损害程度密切相关,可考虑作为一种氟中毒肾损害的标志,并且,高氟与低钙同时存在时,大鼠肾损害会进一步加重,提示低钙是氟化物损害肾脏的重要环节.     

燃煤型氟中毒大鼠脑组织神经型尼古丁受体mRNA及蛋白表达水平改变

目的 观察燃煤型氟中毒大鼠学习记忆能力变化,测定大鼠脑组织神经型尼古丁受体(nAChR)mRNA和蛋白表达水平,探讨大鼠学习记忆能力改变的发生机制.方法 健康SD大鼠24只,体质量100～120 g,按体质量随机分为3组,每组8只.对照组饲以常规饲料,低氟组和高氟组以燃煤型氟中毒重病区燃煤烘烤的当地玉米为主要饲料(含氟量分别为11.30、104.20 mg/kg)来复制慢性氟中毒大鼠模型,染氟时间为6个月.染氟结束后,用Morris水迷宫方法检测大鼠行为学变化,处死动物取脑,用匀浆-氟离子选择电极法测定脑组织含氟量,实时荧光定量PCR法检测nAChR mRNA水平,蛋白印迹法测定nAChR蛋白表达水平.结果 低氟组和高氟组大鼠逃避潜伏期时间[(12.42±8.03)、(17.48±8.05)s]较对照组[(7.04±3.29)s]显著延长(P均<0.05),高氟组第7天穿过平台次数[(1.62±0.87)次]和逗留平台象限时间[(16.70±5.02)s]较对照组[(3.53±1.67)次、(23.33±5.35)s]降低(P均<0.05).低氟组和高氟组大鼠脑组织含氟量[(1.14±0.04)、(1.79±0.04)mg/kg]显著高于对照组[(0.52±0.05)mg/kg,P均<0.05],且高氟组大鼠脑组织含氟量高于低氟组(P<0.05).高氟组大鼠脑组织nAChR α3、α4、α7亚单位mRNA水平(1.51±0.20、1.45±0.06、1.63±0.08)较对照组(1.79±0.11、1.66±0.14、1.83±0.06)显著降低(P均<0.05),而低氟组(1.65±0.17、1.59±0.09、1.71±0.03)与对照组比较无明显改变(P均>0.05).低氟组和高氟组大鼠脑组织nAChR α3、α4、α7亚单位蛋白表达水平(0.58±0.13、0.16±0.03、1.41±0.38和0.56±0.23、0.08±0.02、0.51±0.16)较对照组(1.48±0.42、0.57±0.21、2.56±0.26)显著降低(P<0.05或<0.01).结论 燃煤型氟中毒大鼠学习记忆能力降低可能与脑组织nAChR蛋白表达及mRNA水平降低有关,nAChR表达改变可能是引起动物学习记忆能力降低的主要机制.

Abstract：

Objective To observe the learning and memory changes in coal-burning type of fluorosis rats, detect the expressions of neuronal nicotinic acetylcholine receptor(nAChR) at mRNA and protein levels in rat brains and to reveal the mechanism of changed learning and memory ability. Methods Twenty-four healthy SD rats, weighting 100 - 120 g, were randomly divided into three groups(8 in each). Control group was fed with normal diet, and low- and high-dose fluoride groups were fed with corn polluted with high fluoride (fluoride were 11.30,104.20 mg/kg, respectively) during drying processes with local burning-coal from the areas of endemic fluorosis to established rat model of chronic fluorosis. After exposed to fluoride for 6 months, behavioral changes were measured by Morris water maze. Animals were sacrificed, the brain was taken, after homogenizing the fluoride content of brain tissue was determined by fluoride ion selective electrode. The α3, α4 and α7 nAChR subunits at mRNA and protein levels were analyzed by real-time PCR and Western blotting, respectively. Results For rats in low- and high-fluoride groups, the escape latency time[(12.42 ± 8.03),(17.48 ± 8.05)s] was significantly longer than that in the control[(7.04 ± 3.29)s, all P< 0.05]. For rats in high-fluoride group, the numbers of crossing the platforms (1.62 ± 0.87) and the time of staying at the platforms[(16.70 ± 5.02)s] were significantly decreased as compared to that of control[3.53 ± 1.67, (23.33 ± 5.35)s, all P < 0.05]. The fluoride content in rat brain tissue in low- or high-fluoride groups [(1.14 ± 0.04), (1.79 ± 0.04)mg/kg] was significantly higher than that of control [ (0.52 ± 0.05) mg/kg, all P < 0.05]; in addition, the amount of fluoride in brain tissue of high-fluoride group was significantly higher than that of low-fluoride group(P < 0.05). In high-fluoride group, the mRNA expressions of α3, α4 and α7 nAChR subunits in rat brains(1.51 ± 0.20,1.45 ± 0.06,1.63 ± 0.08) were significantly lower as compared to controls (1.79 ± 0.11,1.66 ± 0.14,1.83 ± 0.06, all P< 0.05); whereas there were no significant changes in mRNA levels of these receptor subunits of the rat brains between low-fluoride group(1.65 ± 0.17,1.59 ± 0.09,1.71 ± 0.03) and controls (all P > 0.05). Furthermore, the protein levels of α3, α4 and α7 nAChR subunits in rat brains of highfluoride group(0.58 ± 0.13,0.16 ± 0.03,1.41 ± 0.38) and low-fluoride group(0.56 ± 0.23,0.08 ± 0.02,0.51 ± 0.16) were significantly lower than those of controls( 1.48 ± 0.42,0.57 ± 0.21,2.56 ± 0.26, P<0.05 or < 0.01). Conclusions Decreased ability of learning and memory in coal-burning type of fluorosis rats may be associated with declined expressions of nAChR at proteins and mRNA levels, which might be the main mechanism of the behavior change.     

补肾健脾养血活血法对亚急性衰老大鼠脑组织生物化学及海马超微结构的影响

目的 通过观察补肾健脾养血活血方对衰老大鼠脑组织神经生物化学以及海马超微结构的影响,研究该法抗脑衰老的作用机制.方法 用12.5 mg/ml D-半乳糖给大鼠颈背部皮下注射连续40 d,形成亚急性衰老模型,检测脑组织NOS、NO、GSH-Px、MAO-B,在透射电镜下观测海马CA1区超微结构的变化.结果 给药组与模型对照组比较,NO、GSH-Px显著升高（P＜0.05）,NOS、MAO-B显著降低（P＜0.05）.给药组大鼠海马CA1区细胞核、粗面内质网、线粒体、高尔基体、脂褐素体等细胞器较模型组有明显变化.结论 补肾健脾养血活血法抗脑衰老作用机制可能为通过抑制NOS活性,对机体的抗氧化系统起良性调节作用,提高GSH-Px活性,增强脑组织清除自由基的能力,抑制脑组织MAO-B活性,提高单胺类神经递质含量,增加大鼠脑组织NO含量,改善衰老大鼠海马的超微结构.     

大鼠局灶性脑缺血时脑微血管及组织中一氧化氮合酶的变化

目的探讨大鼠局灶性脑缺血时脑微血管、脑组织中一氧化氮合酶(NOS)的活性变化及其与脑损伤的关系。方法将Wistar雄性大鼠73只随机分为假手术组19只;缺血组54只,据缺血时间1、2、3、4h再分Ⅰ1、Ⅰ2、Ⅰ3、Ⅰ4组。用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型,用放射性同位素法测定脑微血管及脑组织中NOS的活性。结果局灶性脑缺血时不同部位、时间,NOS活性的变化不同。脑微血管中NOS活性在缺血4h(Ⅰ4)组为(0.104±0.035)pmol/mg蛋白,假手术组为(0.042±0.021)pmol/mg蛋白,两组比较差异有显著意义(P<0.001)。纹状体、海马的NOS活性在Ⅰ4组分别为(0.037±0.007)pmol/mg蛋白、(0.050±0.010)pmol/mg蛋白,假手术组为(0.079±0.018)pmol/mg蛋白、(0.059±0.008)pmol/mg蛋白,两组比较差异有显著意义(P<0.001,P<0.05)。结论脑微血管中NOS活性变化在局灶性脑缺血损伤中起重要作用,脑组织中NOS活性变化也参与了其病理生理过程。     

慢性氟中毒调控caspase途径介导大鼠脑组织神经细胞凋亡的研究

目的研究慢性氟中毒是否通过激活caspase途径介导大鼠脑组织神经细胞凋亡。方法 90只SD大鼠随机分为3组,对照组(饮用正常自来水)、染氟组(饮用含氟量50 mg/L蒸馏水)、VitE(维生素E)拮抗组(饮用含氟量50 mg/L蒸馏水,按VitE 5 mg/kg体重灌胃)。10个月后观察大鼠氟斑牙情况,尿氟和骨氟含量;流式细胞仪检测各组大鼠海马细胞和皮质细胞凋亡率;Western-blot检测各组大鼠海马细胞和皮质细胞Cleaved-caspase3、9、8及Cytosolic Cyt-c蛋白表达情况。结果染氟组及VitE拮抗组大鼠均出现不同程度的氟斑牙;尿氟与骨氟含量、细胞凋亡率显著高于对照组(P0.05),VitE拮抗组低于染氟组(P0.05);染氟组及VitE拮抗组大鼠海马细胞和皮质细胞中Cleaved-caspase3、9、8及Cytosolic Cyt-c蛋白表达显著升高,VitE拮抗组低于染氟组。结论慢性氟中毒可能通过激活caspase途径参与大鼠脑组织神经细胞凋亡过程,维生素E对这一过程具有拮抗作用。     

高氟对大鼠甲状腺功能和脑损伤的影响

目的 观察高氟对大鼠甲状腺功能和脑损伤的影响.方法 将36只成年Wistar大鼠按性别和体质量随机分为3组:对照组、高氟组、高氟+甲状腺片组,每组12只,分别饮用自来水(含氟量<5 mg/L),加入100、100 ms/L氟化钠(NaF)的自来水:喂养7个月后高氟+甲状腺片组大鼠另给予0.04%甲状腺片(1.8ml·kg~(-1)·d~(-1))灌胃3周.喂养7个月零3周时,用放射免疫法测定各组大鼠血清TT_3、TT_4;光镜下观察大鼠甲状腺和脑组织形态结构;免疫组化方法检测海马区域NMDAR2B蛋白表达.结果 与对照组[(0.97±0.15)、(84.03±12.45)nmol/L]比较,高氟组大鼠血清TT_3、TT_4明显降低[(0.24 ±0.07)、(15.16±2.08)nmoL/L,P均<0.01];高氟+甲状腺片组与对照组比较,未见明显改变[(1.02 ±0.19)、(85.63±9.55)nmoL/L,P均>0.05],与高氟组相比较,明显增高(P均<0.01).光镜下高氟组可见甲状腺部分滤泡上皮增生、排列紊乱、萎缩,滤泡腔内胶质减少,而高氟+甲状腺片组与高氟组比较,甲状腺滤泡上皮增生程度减轻;高氟组海马神经元细胞肿胀、排列紊乱,高氟+甲状腺片组海马神经元细胞较高氟组肿胀减轻、排列有序.高氟组海马CA1、CA3区NMDAR2B阳性细胞灰度值(167.05±7.31)较对照组(92.53±9.67)和高氟+甲状腺片组(101.66±12.21)明显增高(P均<0.01).结论 高氟可导致成年大鼠甲状腺功能降低、形态改变,并引起大脑病理损害;在高氟损伤基础上给予甲状腺制剂替代后,大鼠甲状腺功能和形态可基本恢复正常,脑组织损伤明显减轻.慢性氟中毒造成的甲状腺功能降低可能是高氟造成脑损伤的另一重要参与因素.     

氟中毒大鼠骨组织细胞核转录因子-kB相关基因mRNA和蛋白表达改变

目的 探讨氟对骨组织中细胞核转录因子-kB(NF-kB)相关基因mRNA和蛋白表达的影响.方法 健康SD大鼠36只,体质量100 ～ 120 g,按体质量随机分为3组,每组12只.对照组饮用自来水(含氟量＜1 ag/L),低氟组和高氟组分别饮用含5、50 mg/L氟化钠的自来水.大鼠饲养8个月,建立慢性氟中毒模型,股动脉放血处死.取大鼠股骨干骺端,光镜观察骨组织形态学改变;采用灰化-氟离子选择电极法检测骨氟;采用酶联免疫吸附法检测血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP 5b)水平;采用Real-time PCR和免疫组织化学方法检测骨组织中p50、p65、ⅠkBα mRNA和蛋白表达水平.结果 染氟大鼠股骨干骺端呈骨质硬化表现.低氟组、高氟组骨氟[(6.32±1.23)、(10.89±1.56)mg/kg]显著高于对照组[(3.06±1.01 )mg/kg,P均＜0.05],且高氟组显著高于低氟组(P＜0.05).低氟组血清TRACP 5b水平[(3.45±1.85)U/L]显著高于对照组[(1.26±0.23)U/L,P＜0.05],高氟组[(2.74±1.85)U/L]较低氟组降低(P＜0.05).低氟组p50、ⅠkBα mRNA表达水平(4.41±0.44、1.15±0.25)显著高于对照组(1.46±0.10、0.26±0.07,P均＜0.05),高氟组(0.69±0.09、0.14±0.03)较低氟组降低(P均＜0.05).低氟组p50、ⅠkBα蛋白表达水平(152.96±7.87、156.20±9.75)显著高于对照组(125.63±9.85、118.97±6.94,P均＜0.05),高氟组(120.56±9.57、114.50±7.61)较低氟组降低(P均＜ 0.05).结论 氟可致NF-kB通路相关基因表达改变,后者可能参与氟致骨骼损伤的发生机制.     

米诺环素对慢性脑低灌注大鼠海马神经元β位点剪切酶1和β淀粉样蛋白表达的影响

目的观察不同剂量米诺环素对慢性脑低灌注大鼠海马神经元β位点剪切酶1(BACE1)和β淀粉样蛋白(Aβ)表达的影响。方法选择SD大鼠144只,随机分为假手术组、对照组、慢性脑低灌注组(模型组)、米诺环素低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组24只。采用双侧颈总动脉永久结扎建立大鼠慢性脑低灌注模型,低、中、高剂量组在慢性脑低灌注模型的基础上分别给予5mg/(kg·d)、50mg/(kg·d)、500mg/(kg·d)的米诺环素连续灌胃。观察时间点分别为造模后1、2、3个月,采用免疫组织化学法检测海马CA1区神经元BACE1和Aβ表达。结果模型组1、2、3个月BACE1和Aβ表达较假手术组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组明显增加(P<0.05)。高剂量组2、3个月BACE1表达较低剂量组明显降低[(1.40±1.77)个/视野vs(10.50±4.83)个/视野,(1.25±1.24)个/视野vs(12.35±2.57)个/视野,P<0.05],3个月BACE1表达较中剂量组明显降低[(1.25±1.24)个/视野vs(12.00±1.02)个/视野,P<0.05]。结论米诺环素能抑制慢性脑低灌注大鼠海马神经元BACE-1和Aβ表达,高剂量米诺环素对BACE-1抑制作用明显。     

燃煤污染型氟中毒大鼠肾组织中PURA基因及其蛋白的表达

目的 探讨PURA基因及其蛋白在燃煤污染型氟中毒大鼠肾组织中的表达情况.方法 SD大鼠36只,体质量80-100 g.将大鼠按体质量随机分对照组、加氟组、高氟组,每组12只,雌雄各半.对照组、加氟组和高氟组大鼠分别饲以含氟量为1.5、25.0、60.0 ms/ks的饲料.4个月后,采用RT-PCR技术及免疫组化技术检测大鼠肾组织PURA基因及其蛋白表达水平.结果 加氟组和高氟组大鼠肾组织PIJRA mRNA[(2.74±1.06)、(4.29±2.11)]及蛋白表达[(28 827.91±4801.94)、(61 146.96±4997.55)]均高于对照组[(1.13±0.87)、(7131.95±1524.54),P均<0.05)],高氟组大鼠肾组织PURA mRNA及蛋白表达高于低氟组(P均<0.05).结论 高氟可以导致大鼠肾组织PURA mRNA及蛋白表达水平增强.     

氟、砷及其联合染毒对大鼠海马和大脑皮质组织Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的 探讨氟、砷及其联合染毒对大鼠海马和大脑皮质组织Bcl-2和Bax凋亡蛋白表达的影响.方法 将初断乳SPF级雄性SD大鼠按体质量随机分为对照组、氟处理组、砷处理组和氟砷联合组,每组10只.氟处理组大鼠饮用120 mg/L氟化钠(NaF)水溶液,砷处理组大鼠饮用70 mg/L亚砷酸钠(NaAsO2)水溶液,氟砷联合组大鼠饮用含120mg/L NaF和70 mg/L NaAsO2的水溶液,对照组大鼠饮用蒸馏水.3个月后采用免疫组织化学和Western blot法检测大鼠海马和大脑皮质组织Bcl-2和Bax凋亡蛋白的表达.结果 ①免疫组织化学法检测结果:大鼠海马和大脑皮质组织细胞质中Bcl-2和Bax凋亡蛋白呈现为棕黄色颗粒物;与对照组和氟、砷处理组比较,氟砷联合组大鼠海马和大脑皮质Bcl-2阳性神经元细胞数较少;与对照组比较,氟、砷处理组和氟砷联合组大鼠海马和大脑皮质Bax阳性神经元细胞数较多,尤其以氟砷联合组的阳性细胞数最多.②Western blot法检测结果:对照组、氟处理组、砷处理组、氟砷联合组大鼠海马组织Bcl-2、Bax蛋白表达分别为0.84±0.22、0.76±0.10、0.75±0.24、0.28±0.05和0.44±0.19、0.81±0.14、1.22±0.45、1.45±0.26,其中氟砷联合组Bcl-2表达明显低于其他3组(P均＜0.05),而氟、砷处理组和氟砷联合组Bax表达均明显高于对照组(P均＜ 0.05),且砷处理组和氟砷联合组Bax表达高于氟处理组;上述4组大鼠大脑皮质Bcl-2、Bax蛋白表达分别为0.51±0.18、0.50±0.12、0.49±0.19、0.33±0.19和0.39±0.18、0.79±0.30、0.79±0.35、0.80±0.18,其中氟、砷处理组和氟砷联合组大鼠Bax蛋白表达明显高于对照组(P均＜0.05).氟、砷处理组和氟砷联合组大鼠海马和大脑皮质组织Bcl-2/Bax表达比值(0.96±0.28、0.72±0.45、0.33±0.05和0.69±0.37、0.57±0.10、0.37±0.18)均明显低于对照组(1.91±1.32、1.44±0.29,P均＜0.05),尤以氟砷联合组最明显.结论 在一定染毒剂量下,氟和砷均促进大鼠海马及大脑皮质组织Bax蛋白的表达,降低海马及大脑皮质组织的Bcl-2/Bax表达比值.氟和砷对大鼠海马组织Bcl-2蛋白表达和大脑皮质组织Bcl-2/Bax蛋白表达比值的影响存在协同作用.     

蒙药嘎日迪乌日勒对脑缺血再灌注损伤的保护作用及对一氧化氮、一氧化氮合酶、脑源性神经营养因子、血管内皮生长因子的影响

目的探讨蒙药嘎日迪乌日勒对脑缺血再灌注损伤的保护作用及对一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、脑源性神经营养因子(BDNF)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法 SD大鼠分为假手术组、模型组、阳性组、嘎日迪乌日勒低、高剂量组,每组20只,10只用于脑梗死面积百分比测定,10只用于脑匀浆中NO、神经型一氧化氮合酶(n NOS)、VEGF及BDNF含量测定。嘎日迪乌日勒低、高剂量组分别给予灌胃嘎日迪乌日勒0.18、0.36 g/kg,阳性组给予金纳多片0.16 g/kg,1次/d,连续给药7 d。再灌注24 h后处死大鼠,取脑,进行TTC染色计算脑梗死面积,HE染色观察脑组织病理改变;制备10%的脑组织匀浆,检测NO、n NOS、VEGF及BDNF含量。结果与假手术组比较,其他组脑梗死面积明显升高(P0.05);与模型组比较,阳性组、嘎日迪乌日勒高、低剂量组脑梗死面积明显降低(P0.05)。HE染色,给药组正常脑组织结构消失,椎体细胞体积缩小,部分椎体细胞脱失、坏死、组织稀疏,间质水肿,与梗死区边界模糊。与假手术组比较,模型组、嘎日迪乌日勒低、高剂量组NO、n NOS、BDNF、VEGF均明显升高(P0.05);阳性组NO、n NOS、VEGF明显升高(P0.05)。与模型组比较,阳性组、嘎日迪乌日勒低、高剂量组NO、n NOS明显降低,嘎日迪乌日勒低剂量组BDNF明显升高、VEGF明显降低(P0.05)。结论嘎日迪乌日勒对脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其机制可能与调节脑组织中NO、n NOS、BDNF、VEGF的含量有关。     

慢性氟中毒大鼠脑组织细胞外调节蛋白激酶表达及大鼠学习记忆能力的变化

目的 观察慢性氟中毒大鼠脑组织中分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导系统细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)的表达与活性,及其与学习记忆能力改变之间的关系,从而进一步探讨氟中毒神经系统损害的发病机制.方法 72只SD大鼠按性别和体质量随机分为3组.每组24只.对照组:自由饮用自来水,含氟量低于0.5 mg/L;低剂量染氟组:饮水含氟量为5.0 mg/L;高剂量染氟组:饮水含氟量为50.0 mg/L.实验6个月后.取大鼠脑组织,用蛋白印迹方法检测细胞外ERK1/2的蛋白表达与活性;用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)方法测定ERK1/2的mRNA水平;用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力改变.结果 对照组、低、高剂量染氟组的ERK1/2蛋白水平分别为0.94±0.10、1.25±0.02、1.95±0.07,任意两组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);对照组、低、高剂量染氟组的phospho-ERK1/2蛋白水平分别为0.73±0.08、0.77±0.07、1.28±0.11,任意两组间比较,差异有统计学意义(P＜0.05);低、高剂量染氟组的ERK1/2活化率[(68.4±3.8)%、(64.1±3.2)%]低于对照组[(82.3±10.7)%],组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);在第2、3、5、6天,低剂量染氟组的大鼠逃避潜伏期[(46.0±8.0)、(24.0±2.7)、(8.9±5.3)、(7.4±4.1)s]长于对照组[(39.3±6.9)、(19.1±9.1)、(8.3±3.4)、(4.8±2.7)s],组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05),高剂量染氟组的大鼠逃避潜伏期[(36.9±16.8)、(37.7±12.9)、(19.7±7.6)、(12.2±5.7)s]也长于对照组(P＜0.05),第3、5、6天,高剂量染氟组的大鼠逃避潜伏期长于低剂量染氟组(P＜0.05);低剂量组、高剂量染氟组的大鼠第1次穿越平台位置时间[(1.17±0.75),(4.18±1.10)s]长干对照组[(5.89±0.56)s],组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05),低、高剂量染氟组的大鼠在原平台所在象限逗留时间[(17.05±4.25)、(18.20±4.57)s]短于对照组[(25.37±5.65)s],组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);大鼠脑组织中ERK1/2的活化率与空间探索实验第1次到达平台区域时间呈正相关(r=0.364,P＜0.05).与第6天定向航行实验找到平台时间呈正相关(r=0.497,P＜0.05).结论 慢性氟中毒导致大鼠脑组织中ERK1/2蛋白表达水平及活性改变,与慢性氟中毒大鼠学习记忆能力的降低有一定关系.     

黄芪多糖对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨黄芪多糖对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法 SD雄性大鼠50只,随机分为五组(n=10):假手术组、模型组、尼莫地平组(2 mg/kg)和黄芪多糖低、高剂量组(10,30 mg/kg)。采用Pulsinelli四动脉阻断法造成全脑缺血再灌注损伤模型(CIR)。黄芪多糖组每日腹腔注射黄芪多糖,连续7 d。测定脑组织中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)以及丙二醛(MDA)的变化。结果黄芪多糖可使大鼠脑缺血再灌注脑组织中NO含量降低、NOS活力降低、LDH活性显著降低以及MDA含量明显减少(P0.01),SOD活性显著增强(P0.01)。结论黄芪多糖对大鼠全脑缺血再灌注损伤有明显保护作用。     

甲状腺激素对大鼠小脑,海马,嗅脑神经元型一氧化氮合酶基因表达的调节

目的　观察 15日龄大鼠小脑 ,海马 ,嗅脑一氧化氮 (NO)含量 ,一氧化氮合酶 (NOS)活性的变化及甲状腺激素对上述部位神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)基因表达的调节。方法　采用丙基硫氧嘧啶 (PTU)给孕母鼠灌胃造成仔鼠甲减动物模型 ;采用NO ,NOS生化测定法及nNOSmRNA半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法。结果　无论正常组还是甲减组 ,NO含量 ,NOS活性及nNOSmRNA转录均以小脑为最高 ,嗅脑次之 ,海马最低 (P <0 .0 5 ) ;正常组NO含量 ,NOS活性nNOSmRNA转录均高于甲减组 (P <0 .0 1)。结论　提示甲状腺激素对nNOS基因表达有上调作用 ,NO信号系统可能参与大鼠小脑 ,海马 ,嗅脑等区甲状腺激素缺乏所造成的脑损害过程。     

Hh信号通路对氟中毒大鼠软骨损害的影响

目的探讨Hedgehog(Hh)信号通路对氟中毒大鼠软骨损害的影响。方法选健康大鼠60只,依据随机数表法分为对照组(自来水)、低氟组(10 mg/L氟化钠溶液)、高氟组(50 mg/L氟化钠溶液),记录不同染氟强度下大鼠软骨细胞活性与凋亡率,比较3组软骨细胞中音速刺猬蛋白(Shh)、印度刺猬蛋白(Ihh)、跨膜蛋白(Smo)、跨膜蛋白受体(Ptch1)、核转录因子蛋白(Gli1、Gli2、Gli3 mRNA)及蛋白表达水平。结果对照组、低氟组、高氟组大鼠软骨细胞活性分别为(100.00±0.00)%、(116.48±10.27)%、(76.25±11.38)%,细胞凋亡率分别为(4.15±0.78)%、(3.02±0.71)%、(9.58±1.14)%。对照组、低氟组、高氟组大鼠软骨细胞Shh、Ihh、Smo、Gli1、Gli2 mRNA表达及Shh、Ihh、Smo、Ptch1、Gli1、Gli2蛋白表达水平依次升高,Gli3 mRNA表达水平逐渐降低(P0.05),Ptch1 mRNA表达、Gli3蛋白表达在低氟组有所降低,在高氟组略有升高,但差异无统计学意义(P0.05)。结论氟中毒主要通过Hh信号通路损伤大鼠软骨细胞活性和凋亡,Shh、Ihh、Smo、Ptch1、Gli1、Gli2、Gli3等均参与软骨损伤的活动过程。     

硒蛋白对铅损伤大鼠学习记忆能力影响的研究

目的探讨硒蛋白对铅损伤大鼠学习记忆能力的影响。方法 SD大鼠50只随机分为5组,分别为正常对照组、铅损伤模型组、铅损伤硒蛋白低、中、高剂量组,每组10只,除正常对照组外其它组自由饮用浓度为1g/L的醋酸铅溶液造模4周,后铅损伤硒蛋白干预组按0.1 mg/kg·d、0.2 mg/kg·d、0.4 mg/kg·d剂量进行灌胃,正常对照组和铅损伤模型组灌胃等容蒸馏水,每天一次连续4周。采用Morris水迷宫实验测试大鼠学习记忆能力。水迷宫实验结束后大鼠断头取脑利用化学比色法试剂盒检测脑组织中的胆碱酯酶(CHE)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)含量。结果与正常对照组对比,铅损伤模型组大鼠逃避潜伏期、运动距离长,滞留时间、穿越平台次数减少,SOD、CHE、GSH-Px活性降低,MDA、NO水平增高(P0.05);与铅损伤模型组大鼠对比,硒蛋白低、中、高剂量组逃避潜伏期、运动距离缩短,滞留时间、穿越平台次数增加,SOD、CHE、GSH-Px活性增高,MDA、NO水平降低(P0.05)。结论硒蛋白能够降低铅损伤大鼠脑中的NO、MDA含量,提高CHE、SOD、GSH-Px的活力,提高大鼠定位航行和空间探索能力,从而改善了铅损伤大鼠的学习记忆能力。     

免疫球蛋白结合蛋白在氟中毒大鼠骨组织中的表达研究

目的 观察内质网应激标志性分子免疫球蛋白结合蛋白(BiP)在氟中毒大鼠股骨组织的表达,探讨内质网应激在氟骨症发病机制中的可能作用。方法 60只Wistar大鼠,按体质量随机分成4组,每组15只。对照组饲以常规饲料（含钙量为0.79％）,低钙组饲以自制低钙饲料（含钙量为0.063％）,饮用自来水(氟化钠水平＜1 mg/L);高氟组和低钙高氟组分别饲以常规饲料、自制低钙饲料,饮用自来水中加氟(氟化钠水平为221 mg/L)。实验期间动物自由进食、进水,每周测体质量1次。实验周期为12周。通过免疫组化和RT-PCR技术分析BiP在股骨组织中基因和蛋白水平的表达变化。结果 高氟组、低钙组、低钙高氟组大鼠股骨矿物质水平[(0.131±0019)、(0.097±0.011)、(0.083±0.007) g/cm]均低于对照组[(0.159±0.029)g/cm,P均＜0.05];低钙组、低钙高氟组的骨密度[(0.243±0.018)、(0.223±0.022)g/cm2]均低于对照组[(0.296±0.046)g/cm2,P 均＜0.05]。免疫组化技术检测到低钙组和低钙高氟两组大鼠股骨内抗BiP阳性染色的成骨细胞较对照组显著增加,而且低钙高氟组明显比低钙组的阳性成骨细胞多。RT-PCR分析显示出低钙加氟组大鼠骨组织的骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平(1.36±0.20、1.31±0.11)高于对照组(0.82±0.16、0.85±0.15,P均＜ 0.05);与加氟组(0.97±0.29)比较,低钙加氟组(1.36±0.20)大鼠骨组织的OPN表达明显提高(P＜0.05);低钙组和低钙高氟组BiP基因表达(1.38±0.24、1.35±0.12)高于对照组（1.14±0.06.P均＜0.05）。结论 投氟或联合低钙饮食刺激了大鼠股骨BiP基因和蛋白的表达,说明高氟或低钙高氟条件下大鼠骨组织出现不同程度的内质网应激。     

黄芩茎叶总黄酮对阿尔茨海默病大鼠海马神经元Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对大鼠海马注射淀粉样蛋白Aβ25~35所致神经元Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法 40只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、SSTF 50 mg/kg、100 mg/kg组,每组10只。模型组、SSTF组大鼠于灌胃第8天双侧海马注射Aβ10μg,对照组大鼠海马注射生理盐水,大鼠于灌胃20 d后处死。采用TUNEL法观察大鼠海马神经元凋亡;免疫组化、Western印迹检测海马组织中Bax、Bcl-2的表达,采用光密度值(IOD)表示实验结果。结果模型组大鼠海马细胞凋亡IOD较对照组明显升高(P0.01),50、100 mg/kg给药组IOD较模型组明显降低(P0.01);免疫组化及Western印迹结果显示模型组Bax表达较对照组明显升高(P0.01),SSTF 50、100 mg/kg组Bax表达较模型组明显降低(P0.01);模型组Bcl-2较对照组明显降低(P0.01),SSTF 50、100 mg/kg组Bcl-2表达较模型组明显升高(P0.01)。结论大鼠海马注射Aβ25~35可引起海马神经元凋亡,其机制可能与Aβ上调凋亡基因Bax表达、降低抗凋亡基因Bcl-2表达有关。SSTF可减轻Aβ引起的神经元凋亡,其机制可能与其调控Bax、Bcl-2表达有关。