眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织TLR4、MyD88表达的影响

目的探讨眼针治疗脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠脑皮层组织中Toll样受体4(TLR4)及髓样分化因子88(My D88)的作用机制。方法健康雄性SPF级Wistar雄性大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、CIRI模型组和眼针组。CIRI模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MACO)动物模型。酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β水平,Western印迹检测大鼠缺血侧脑皮层TLR4、My D88蛋白表达的变化。结果与正常组及假手术组比较,模型组大鼠血清IL-1β水平明显升高(P0.01),缺血侧脑皮层组织TLR4、My D88蛋白水平均显示高表达(P0.01);眼针组同模型组相比,血清IL-1β水平显著下降(P0.01),缺血侧脑皮层组织TLR4、My D88蛋白表达明显下调(P0.01)。结论眼针抑制脑皮层组织中TLR4、My D88的表达,降低炎症反应,可能是眼针治疗CIRI的主要作用机制之一。     

眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织FADD表达的影响

目的观察眼针对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠大脑皮层组织中FADD的表达,探讨眼针治疗脑损伤的作用机制。方法健康雄性SPF级Wistar雄性大鼠,随机分为正常组、假手术组、CIRI模型组和眼针组。CIRI模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MACO)再灌注动物模型。RT-PCR、免疫组化及Western印迹方法检测大鼠缺血侧脑皮层FADD的mRNA和蛋白表达的变化。结果与正常组及假手术组比较,模型组大鼠缺血侧脑皮层FADD mRNA和蛋白水平均显示出高表达(P<0.01),眼针组同模型组相比,FADD mRNA和蛋白表达则下调(P<0.05)。结论眼针抑制脑皮层组织中FADD的表达,可能是眼针治疗CIRI的主要作用机制之一。     

眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织IKKβ/NF-κB表达的影响

目的 观察眼针对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠脑皮层组织中IκB激酶β(IKKβ)及核因子-κB (NF-κB)表达,探讨眼针治疗脑损伤的作用机制.方法 健康雄性SPF级Wistar雄性大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、CIRI模型组和眼针组.CIRI模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MACO)再灌注动物模型.Western blot检测大鼠缺血侧脑皮层IKKβ、NF-κB蛋白表达的变化.结果 与正常组及假手术组比较,模型组大鼠缺血侧脑皮层组织IKKβ及NF-κB蛋白水平均显示出高表达(P＜0.01),眼针组同模型组相比,IKKβ及NF-κB蛋白表达则下调(P＜0.01).结论 眼针抑制脑皮层组织中IKKβ及NF-κB的表达,可能是眼针治疗CIRI的主要作用机制之一.     

TLR4对肝脏缺血再灌注损伤大鼠肝组织Th17细胞相关细胞因子表达的影响

目的 观察Toll样受体4（TLR4）对肝脏缺血再灌注大鼠肝组织Th17细胞相关因子[IL-17A、IL-23、孤核儿相关受体（RORrt）]表达的影响,并探讨其可能机制.方法 将40只健康雄性SD大鼠分为4组各10只,假手术组只分离同侧的颈总动脉和股动静脉,并进行相应插管注入相同剂量的肝素;模型组、抗TLR4组、同型抗体组均制备创伤失血性休克再灌注肝损伤模型,抗TLR4组、同型抗体组分别于再灌注前10 min经股静脉注入TLR4抗体50μg、同型对照抗体50 μg,整个过程用微量注射器缓慢注射.于12 h后处死取材.采用Western blot法检测各组肝组织TLR4蛋白,ELISA检测IL-17A、IL-23蛋白,观察IL-17A、IL-23、RORrt mRNA,并对模型组、抗TLR4组、同型抗体组IL-17A、IL-23、RORrt进行相关性分析.结果 模型组TLR4蛋白表达较假手术组相比明显升高（P＜0.01）,应用抗TLR4抗体后表达明显减少（P＜0.01）,而同型抗体组较模型组无明显差异（P＞0.05）.与假手术组比较,模型组、抗TLR4组、同型抗体组IL-17A、IL-23蛋白及mRNA表达升高,RORrt mRNA表达升高;与模型组比较,抗TLR4组IL-17A、IL-23蛋白及mRNA表达降低,RORrt mRNA表达降低（P＜0.05或0.01）.IL-23水平与IL-17A水平呈正相关,IL-23 mRNA水平与RORrt mRNA呈正相关.结论 中和TLR4可减少IL-23、IL-17A、RORrt的表达;机制可能是中和阻断TLR4可通过降低IL-23的表达,影响Th17特异性转录因子RORrt,进而降低肝脏缺血再灌注损伤大鼠肝组织Th17/IL-17A的表达.     

Toll样受体4在大鼠心肌缺血再灌注损伤中表达的实验研究

目的 观察心肌缺血再灌注早期Toll样受体4 mRNA(TLR4 mRNA)及蛋白表达,探讨TLR4在心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠随机分为2组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组),每组36只,建立大鼠心肌缺血再灌注模型,按照不同的再灌注时间(0、0.5、1、24和8 h)处死动物.光镜和电镜观察心肌组织形态及超微结构改变.免疫组化检测心肌TLR4蛋白表达情况.实时定量逆转录聚合酶链反应定量心肌TLR4 mRNA表达水平.酶联免疫吸附试验测定心肌中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果 (1)Sham组心肌组织形态及超微结构改变不明显;IR组心肌损伤较重,缺血心肌恢复血液灌注8 h内,其病理学变化未见显著改善.(2)Sham组与IR组TLR4蛋白都有阳性表达,IR组TLR4表达增加,且以再灌注1 h最为明显(19.62±3.84,P＜0.01).(3)与Sham组比较,IR组心肌,TLR4 mRNA表达水平均出现不同程度上调,以再灌注1 h达到峰值[(4.03±0.85)×10-2,P＜0.01],而Sham组各时间点未见明显改变.(4)IR组心肌TNF-α水平高于各对应时间点Sham组(P均＜0.05),且心肌TLR4 mRNA表达与TNF-α呈正相关(r=0.728,P＜0.01).结论 心肌缺血再灌注早期,心肌TLR4表达迅速上调,TLR4的激活可能通过促进TNF-α等炎性因子的产生分泌增多来介导心肌缺血再灌注损伤.     

眼针对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织脑源性神经因子表达的影响

目的 探讨眼针治疗急性脑缺血再灌注损伤的机制.方法 应用线栓法复制急性脑缺血再灌注损伤大鼠模型,采用眼针治疗,于再灌注后3h进行神经功能缺损评分,采用免疫组化、Western印迹、实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)方法测定脑组织脑源性神经因子(BDNF)蛋白及mRNA表达的变化.结果 与模型组比较,眼针组大鼠神经功能缺损评分明显下降,脑组织BDNF蛋白及mRNA表达明显上调(P＜0.05).结论 眼针具有明显改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用;其机制与上调脑组织BDNF表达有关.     

胸腺素β4对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响

目的：观察胸腺素β4对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响,并探讨其作用机制。方法将72只SD大鼠随机分为假手术组、对照组、胸腺素β4组各24只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血再灌注模型,再灌注24 h后,采用干湿重法测定缺血脑组织含水量,通过检测伊文蓝渗透到缺血侧脑组织的含量观察血脑屏障的通透性,应用RT-PCR法检测缺血脑组织紧密连接蛋白5（ Claudin-5）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9） mRNA表达。结果脑缺血再灌注损伤24 h后,与假手术组比较,对照组缺血侧脑含水量、伊文蓝含量、MMP-9 mRNA表达明显增加,Claudin-5 mRNA表达显著减少（ P均＜0．01）;与对照组比较,胸腺素β4组缺血侧脑组织含水量、缺血侧伊文蓝含量、MMP-9 mRNA明显降低,Claudin-5 mRNA表达明显升高（P均＜0．01）。结论胸腺素β4对大鼠脑缺血再灌注损伤后的血脑屏障具有保护作用,其作用机制可能是通过促进Claudin-5 mRNA表达和抑制MMP-9 mRNA表达实现的。     

银杏叶提取物对局灶性脑缺血大鼠脑组织炎症信号TLR4表达的影响

目的 观察银杏叶提取物对局灶性脑缺血(FCI)大鼠脑组织Toll样受体4基因(TLR4)、蛋白表达的作用.方法 参照Longa等方法制造FCI大鼠模型,将60只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、和银杏叶提取物组,分别采用RT-PCR法及免疫组化法检测缺血灶周围脑组织TLR4基因、蛋白表达水平.结果 模型组TLR4基因相对表达均明显高于假手术组(P＜0.01) ;银杏叶提取物组TLR4相对表达量明显低于模型组(P＜0.01) ;TLR4蛋白表达类似于基因相对表达.结论 模型组大鼠缺血灶周围脑组织TLR4基因高表达,银杏叶提取物对TLR4表达有抑制作用,这可能是其抗炎作用的机制之一.     

黄体酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织神经生长因子表达的影响

目的 观察黄体酮对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后缺血区皮层神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)在mRNA与蛋白质水平表达的影响,探讨黄体酮在脑缺血-再灌注损伤中的脑保护作用机制. 方法 采用SD雄性大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型.将96只大鼠随机分为4组:假手术组、缺血再灌注组、溶剂组和黄体酮组各24只.应用Real time-PCR和Western blot技术分别对缺血区皮层NGF和BDNF mRNA与蛋白表达情况进行测定. 结果 在缺血区皮层,缺血2h再灌注6h后,缺血再灌注组NGF和BDNF的mRNA及蛋白质表达达高峰,再灌注24 h后,回复到假手术组水平;缺血2h再灌注12 h后,黄体酮组NGF和BDNF mRNA及蛋白表达达高峰,再灌注24 h后,表达仍高(P＜0.05). 结论 黄体酮可以使脑缺血-再灌注损伤后NGF和BDNF的mRNA表达上调,促进脑内NGF和BDNF蛋白的合成,从而发挥脑保护作用.     

fibulin-5在缺血再灌注大鼠脑组织中的表达

目的 探讨缺血再灌注大鼠缺血脑组织fibulin-5的表达规律.方法 96只雄性SD大鼠分为正常组、假手术组、中脑动脉闭塞(MCAO)模型6、24、48和72 h组.线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,激光共聚焦定位fibulin-5在脑组织内的表达,Western印迹检测缺血后fibu-lin-5蛋白表达变化,实时定量PCR测定fibulin-5 mRNA表达规律.结果 ①fibulin-5主要在内皮细胞间表达,偶可在实质细胞或内皮细胞胞质内表达;②大鼠缺血侧脑组织fibulin-5蛋白表达从再灌注6h开始升高(1.26 ±0.46,P＜0.05),再灌注24 h达到高峰(1.78±0.48),72 h(0.89±0.27)时有所降低,但仍高于假手术组(0.30±0.14,P＜0.05),fibulin-5 mRNA表达规律与蛋白表达有同样的趋势.结论 缺血再灌注大鼠缺血脑组织内fibulin-5表达水平明显升高,有可能对脑损伤后血管稳定起到保护作用.     

眼针对急性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织ICAM-1表达的影响

目的观察眼针对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织细胞间黏附因子(ICAM-1)表达的影响。方法 64只SD大鼠随机分为4组:正常组(未处理)、假手术组(同模型组,仅鱼线插入深度1 cm)、模型组(应用线栓法复制脑缺血再灌注损伤大鼠模型,鱼线插入深度1.8～2 cm)和眼针组(模型成功后取肝区、上焦区、下焦区、肾区进行眼针治疗20 min,每日2次),每组16只。于再灌注后3 h进行神经功能缺损评分,采用免疫组化、Western印迹、实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)方法测定脑组织ICAM-1蛋白及mRNA表达的变化。结果眼针治疗后可使大鼠神经功能缺损评分明显下降,并显著降低脑组织ICAM-1蛋白及mRNA表达(P<0.01)。结论眼针具有明显地改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用;其机制与下调脑组织ICAM-1表达有关。     

橄榄苦苷对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡及JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的研究橄榄苦苷对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡及c-Jun氨基末端激酶(JNK)/促分裂素原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组(0.5 mg/kg)及橄榄苦苷高、低剂量组(40、20 mg/kg),每组14只。连续灌胃给药14 d,末次给药结束后采用线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,进行2 h缺血后再灌注24 h,测定神经症状评分、脑梗死面积、脑组织含水量、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关的x蛋白(Bax)mRNA表达及磷酸化的JNK(p-JNK)、磷酸化的p38 MAPK(p-p38)蛋白表达等指标。结果与模型组比较,橄榄苦苷高、低剂量组大鼠神经症状评分、脑梗死面积及橄榄苦苷高剂量组脑组织含水量均显著降低(P<0.05);与模型组比较,橄榄苦苷高、低剂量组大鼠Caspase-3、Bax mRNA及p-JNK、p-p38蛋白表达均明显降低(P<0.05),而Bcl-2 mRNA表达明显增加(P<0.05)。结论橄榄苦苷对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,该作用与抑制JNK/p38 MAPK信号通路的活化进而减少神经元凋亡有关。     

眼针对脑缺血再灌注损伤大鼠血清ICAM含量的影响

目的观察眼针对脑缺血再灌注损伤大鼠血清细胞间黏附因子(ICAM)含量的影响,探讨眼针对脑缺血再灌注损伤治疗的作用机制。方法应用线栓法复制脑缺血再灌注大鼠模型,采用眼针治疗,于再灌注后3 h2、4 h、72 h进行神经功能缺损评分,采用ELISA方法测定大鼠血清ICAM含量的变化。结果与模型组比较,眼针组大鼠神经功能缺损程度评分明显下降,大鼠血清ICAM含量比模型组降低(P<0.01)。结论眼针具有明显改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用,其机制与降低机体血清ICAM含量有关。     

眼针对腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠水通道蛋白3表达的影响

目的:研究眼针对腹泻型肠易激综合征(D-IBS)模型大鼠结肠血管活性肠肽(VIP)和水通道蛋白3(AQP3)表达的影响,探讨眼针对D-IBS模型大鼠结肠水液代谢的调控作用和机制.方法:SPF级Wistar大鼠30只,随机分为对照组、D-IBS模型组和眼针组,每组10只.采用慢性应激结合束缚方法建立D-IBS大鼠模型.采...     

快速眼动睡眠剥夺引起大鼠皮质PERK活化及药物干预

目的观察不同时间快速眼动睡眠剥夺引起大鼠皮质PERK活化和磷酸化elF2α蛋白表达的变化以及依达拉奉干预的作用。方法将60只Sprague-Dawle大鼠随机分为正常对照组(5只),环境对照组(5只)和睡眠剥夺组(50只)。其中睡眠剥夺组又分为模型组,生理盐水组和依达拉奉组3个亚组。采用改良多平台睡眠剥夺法建立大鼠快速眼动睡眠剥夺模型,通过Western blot技术观察快速眼动睡眠剥夺后大鼠额叶PERK活化和磷酸化elF2α蛋白表达的变化规律,并考察依达拉奉对这些指标的影响。结果与正常对照组和环境对照组比较,不同时间快速眼动睡眠剥夺后大鼠皮质激活了磷酸化的PERK和磷酸化elF2α蛋白表达,表达水平显示了先升后降的变化规律。依达拉奉干预后两指标明显下降(P<0.01)。结论睡眠剥夺启动了内质网应激反应过程中未折叠蛋白应答通路之一,依达拉奉可能是通过减轻内质网应激而起到脑保护作用。     

针刺对大脑中动脉闭塞大鼠神经功能恢复和缺血灶髓鞘再生的影响

目的:从神经功能恢复和髓鞘形态学变化的角度探讨针刺对受损脑髓鞘的保护作用.方法:89只成年雄性SD大鼠随机分为正常组(n=5)、假手术组(n=21)、模型组(n=21)、早期针刺组(n=21)、晚期针刺组(n=21).用线栓法制作大脑中动脉闭塞模型,分别于缺血后不同时间点进行针刺,应用神经功能缺损评分法、Pal-Weigert髓鞘染色法观察神经功能和缺血灶髓鞘形态学改变.结果:模型组在术后2.5 h神经功能缺损评分显著增高(P＜0.05),随着时间推移,神经功能缺损评分有所下降,内囊有明显的髓鞘脱失且恢复缓慢.与模型组相比,针刺组各个时间点大鼠神经功能缺损评分下降速度较快,3 d时下降显著(P＜0.05);髓鞘脱失程度显著减轻.与晚期针刺组比较,早期针刺组神经功能缺损评分下降速度较快(P＜0.05),且第1天时内囊髓鞘脱失似乎更轻.结论:早期针刺有利于脑缺血后髓鞘再生和神经功能恢复.     

Effect of acupuncture on inflammatory cytokines expression of spastic cerebral palsy rats

Objective:To To investigate the effect of acupuncture on the tumor necrosis factor- α(TNF-α),interleukin-6(IL-6),C-reactive protein(CRP),nitric oxide synthase(NOS) content and muscular tension of spasticity cerebral palsy rat model.Methods:The rats with spastic cerebral palsy were randomly divided into the control group,model group and acupuncture group.After successful modeling,the muscular tension and the content of TNF- α,IL-6,CRP.NOS were measured.Results:The serum TNF- α,IL—6,CRP,NOS content were significantly decreased in the acupuncture group(P0.05).The low and high shear viscosity of whole blood of the acupuncture group were significantly lower than the control group and the model group(P0.05).The erythrocyte electrophoresis indexes in the acupuncture group were significantly lower than that in the model group and the control group(P0.05).Acupuncture significantly reduced the muscular tension of spastic cerebral palsy rat and increased the active extent in the paralytie extremity(P0.05),but it could not be restored to normal level.Compared with the control group,the difference had significant(P0.05).Conclusions:Acupuncture treatment can inhibit the release of inflammatory cells after brain injury,then reduce immune injury,relieve muscle spasms and reduce muscular tension.     

针刺耳穴对全脑缺血大鼠学习记忆能力和海马脑源性神经营养因子表达的影响

目的探讨针刺耳穴对全脑缺血大鼠的治疗机制。方法选择45只SD大鼠,随机分为对照组、模型组和针刺组,每组15只;模型组和针刺组大鼠用改良的4血管阻塞法建立血管性痴呆(VaD)大鼠模型,针刺组造模后针刺"肾"、"心"耳穴4周;对照组只做手术,但不阻断血管。用Morris水迷宫检测3组大鼠学习记忆能力,免疫组织化学SABC法检测海马神经元脑源性神经营养因子(BDNF)阳性表达。结果模型组大鼠学习记忆能力较对照组明显减退(P<0.05,P<0.01),海马神经元BDNF阳性表达较对照组明显增多(P<0.05);针刺组大鼠学习记忆能力较模型组明显提高(P<0.05),海马神经元BDNF阳性表达较模型组和对照组均明显增多(P<0.05,P<0.01)。结论针刺耳穴改善全脑缺血大鼠学习记忆能力,其机制可能与针刺上调VaD大鼠海马神经元BDNF的表达有关。     

血管内皮生长因子在动脉粥样硬化缺血性脑卒中模型大鼠脑组织中的表达

目的探讨动脉粥样硬化基础上缺血性脑卒中模型大鼠脑组织中血管内皮生长因子表达规律及意义。方法大鼠被随机分为对照组和模型组,后者制备动脉粥样硬化大鼠模型,然后再被分为动脉粥样硬化模型假手术组、动脉粥样硬化模型持续缺血0.5、6、12、24 h组,运用逆转录聚合酶链式反应技术检测血管内皮生长因子mR-NA表达及免疫组织化学法检测血管内皮生长因子蛋白表达及变化。结果各动脉粥样硬化模型组与对照组比较血管内皮生长因子表达有明显升高(P<0.05),各持续缺血组与假手术组比较血管内皮生长因子基因及蛋白表达均有明显升高(P<0.05),并随时间发生规律性变化,其中血管内皮生长因子的基因及其蛋白产物在持续缺血6 h组均达到峰值。结论机体长期存在动脉粥样硬化基础病变对缺血性脑卒中脑组织血管内皮生长因子基因及其蛋白产物的表达有正向调控作用,缺血后可随时间变化。本实验结果可为动脉粥样硬化基础上缺血性脑卒中的发生、发展、治疗及预后估计提供一定的理论基础。