白杨素通过调控SNHG9/miR-184对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的保护作用

目的 探讨白杨素对白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞损伤的影响及可能机制。方法 体外培养人软骨细胞,不同浓度(20、40、60μg/L)的白杨素与10 ng/ml的IL-1β共同干预软骨细胞24 h后,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测细胞中裂解的半胱氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)3蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,RT-聚合酶链反应(qPCR)检测细胞中小核仁RNA宿主基因(SNHG)9和miR-184表达。转染SNHG9过表达载体或小干扰RNA至软骨细胞后,用10 ng/ml的IL-1β干预24 h或60μg/L白杨素与10 ng/ml IL-1β共同干预24 h,上述相同方法检测细胞增殖、凋亡、Cleaved-caspase3蛋白表达及细胞培养上清中IL-8、IL-6、TNF-α水平。双荧光素酶报告基因实验验证SNHG9和miR-184靶向关系。结果 20、40、60μg/L的白杨素显著提高了IL-1β诱导的软骨细胞光密度(OD)值(P<...     

GLP-1通过miR-22/NLRP3途径减轻ox-LDL诱导的内皮细胞焦亡

目的探讨胰高血糖素样肽1(GLP-1)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)焦亡的调节作用及分子机制。方法培养HUVEC并分为对照组、ox-LDL组、不同剂量GLP-1组(10 nmol/L、100 nmol/L、1 000 nmol/L)、GLP-1+miR-22抑制物组、miR-22抑制物组、miR-22模拟物组、阴性对照(NC)抑制物组、阴性对照模拟物组。流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量PCR检测miR-22表达量,Western blot检测NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关点样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)的表达量,酶联免疫吸附法检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18的含量。结果与对照组比较,ox-LDL组细胞凋亡率和细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1的表达以及培养基中IL-1β、IL-18含量均明显增加,细胞中miR-22的表达明显减少(P0.05);与ox-LDL组比较,GLP-1组细胞凋亡率和细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1的表达以及培养基中IL-1β、IL-18含量均明显减少,细胞中miR-22的表达明显增加(P0.05);与GLP-1组比较,GLP-1+miR-22抑制物组细胞凋亡率和细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1的表达以及培养基中IL-1β、IL-18的含量均明显增加,细胞中miR-22的表达明显减少(P0.05);miR-22抑制物组细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1的表达及培养基中IL-1β、IL-18的含量明显高于阴性对照抑制物组,miR-22模拟物组细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1的表达及培养基中IL-1β、IL-18的含量明显低于阴性对照模拟物组(P0.05)。结论 GLP-1通过miR-22/NLRP3途径能够减轻ox-LDL诱导的内皮细胞焦亡。     

硫酸氨基葡萄糖对白细胞介素1β诱导人骨关节炎软骨细胞合成前列腺素E2的影响

目的探讨硫酸氨基葡萄糖(glucosamine sulfate,GS)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导体外培养的人骨关节炎软骨细胞(human osteoarthritic chondrocyte,HOC)合成前列腺素E_2 (prostaglandin E_2,PGE_2)的影响及其作用机制。方法取10例骨关节炎患者行全膝关节置换术的股骨髁和胫骨平台软骨标本,酶消化法获取软骨细胞进行体外培养。在原代或第二代的HOC培养液中加入IL-1β(5×10~(-3)μg/L)和不同浓度的GS(0.2、2和20 mmol/L)作用24 h(对照组不加IL-1β和GS),首先应用ELISA法检测GS对IL-1β诱导HOC合成PGE_2的影响,然后采用RT-PCR法和Western蛋白印迹法分别检测其对IL-1β诱导HOC表达COX-2 mRNA和蛋白的影响。结果对照组HOC培养液中PGE_2浓度为(109.46±17.48)pg/ml,IL-1β刺激后软骨细胞合成PGE_2为(3607.22±239.34)pg/ml,其差异有统计学意义(P<0.01)。0.2、2和20 mmol/L GS以浓度依赖的方式抑制IL-1β诱导HOC合成PGE_2(P<0.05),其浓度分别为(2594.23±185.18)、(1057.53±126.81)和(565.43±52.79)pg/ml;单独使用20 mmol/L GS时软骨细胞合成PGE_2为(169.94±30.03)pg/ml,与对照差异无统计学意义(P>0.05)。IL-1β刺激后,HOC表达COX-2 mRNA和蛋白上调(P<0.01),GS能以浓度依赖的方式抑制IL-1β诱导HOC表达COX-2 mRNA和蛋白上调(P<0.01)。结论GS抑制HOC在IL-1β诱导下分泌炎性介质PGE_2,其机制是下调调控它们表达的COX-2 mRNA和蛋白的表达;这可能是GS既能缓解症状和又能保护软骨的机制之一。     

独活寄生汤对兔膝骨性关节炎关节液肿瘤坏死因子-α、白介素-6和基质金属蛋白酶-1水平的影响

目的通过观察独活寄生汤对兔膝骨性关节炎模型关节液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6和基质金属蛋白酶(MMP)-1水平的影响,探讨其治疗骨性关节炎的作用机制。方法将30只新西兰大耳兔随机分成3组,即正常组、模型组和独活寄生汤组,采用制动法复制膝骨性关节炎模型。独活寄生汤组兔予独活寄生汤灌胃,其余两组予生理盐水灌胃,连续治疗6 w后,测定各组兔膝关节液TNF-α、IL-6和MMP-1表达水平。结果治疗6 w后,独活寄生汤组与模型组比较,关节液中TNF-α、IL-6和MMP-1水平明显降低(P<0.01)。结论独活寄生汤能抑制IL-6、TNF-α、MMP-1的释放,从而延缓关节软骨的退变。     

慢性阻塞性肺疾病相关性气管支气管软化症模型建立及评价

目的 建立一种慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关性气管支气管软化症模型制备方法，并评价丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂(SB203580)的作用效果。方法 通过烟熏联合脂多糖气管滴入法制备大鼠COPD模型，分离COPD大鼠气管支气管软骨细胞、培养及传代，然后加入10 ng/ml白细胞介素(IL)-1β处理筛选的软骨细胞24 h诱导软骨细胞退变，建立COPD相关性气管支气管软化症模型。采用SB203580干预退变软骨细胞，流式凋亡和CCK8法分别检测软骨细胞凋亡、增殖活性；甲苯胺蓝染色和免疫组织化学法观察软骨细胞蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量；Western印迹检测软骨细胞caveolin-1、p38MAPK、IL-1β、基质金属蛋白酶(MMP)-13蛋白表达；荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测软骨细胞caveolin-1、p38MAPK、IL-1β、MMP-13表达水平。结果 COPD大鼠支气管软骨细胞分离鉴定成功，10 ng/ml IL-1β即能诱导构建稳定的COPD相关性气管支气管软化症细胞模型；通过CCK8法筛选确定第4代支气管软骨细胞、5μmol/L SB203580为最佳...     

白藜芦醇对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞凋亡及增殖能力的影响

目的通过体外培养兔软骨细胞,研究白藜芦醇对重组人白细胞介素-1β(rh IL-1β)诱导体外骨关节炎(OA)软骨细胞凋亡及增殖能力的影响。方法采用分阶段酶消化法体外培养兔软骨细胞,加入不同浓度白藜芦醇含药血清,1 h后,以10 ng/ml IL-1β刺激,24 h后,通过TUNEL法和Hoechst 33342荧光染色检测软骨细胞凋亡;以MTT和流式细胞仪检测细胞增殖能力。结果白藜芦醇能明显抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,呈剂量依赖性;MTT和流式细胞仪检测显示白藜芦醇能恢复OA软骨细胞的增殖能力。结论白藜芦醇可以抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,并能明显拮抗IL-1β对软骨细胞增殖的抑制。     

独活寄生汤对胶原诱导性关节炎大鼠血清中炎症因子的影响

目的探讨独活寄生汤对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠血清中白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-37(IL-37)及干扰素-γ(IFN-γ)水平的影响。方法选择雄性Wistar大鼠60只,随机选取6只大鼠设为正常组,其余54只通过注射完全弗氏佐剂构建CIA模型。选择造模成功的大鼠30只,随机分为阳性对照组、塞来昔布组(以0. 05 g/ml予塞来昔布干预)和独活寄生汤高、中、低浓度组(分别以4. 40 g/ml、2. 20 g/ml和1. 10 g/ml独活寄生汤干预)。比较各组大鼠在干预后血清中IL-17、IFN-γ、IL-10和IL-37的水平。结果与正常组比较,阳性对照组IL-17、IFN-γ水平显著升高(P 0. 05)。与阳性对照组比较,塞来昔布组和独活寄生汤中浓度组IL-10、IL-37水平升高,IL-17、IFN-γ水平降低,差异有统计学意义(P 0. 05);但阳性对照组与独活寄生汤高浓度组和低浓度组比较差异无统计学意义(P 0. 05)。结论独活寄生汤对CIA大鼠关节炎症具有明显改善作用,其抗炎作用机制可能通过降低促炎因子IL-17、IFN-γ水平和升高抑炎因子IL-10、IL-37水平来实现。     

miR-200b通过靶向调控Ets-1对白介素-1β诱导胰岛β细胞损伤的保护作用

目的探讨miR-200b靶向Ets-1对白介素(IL)-1β诱导胰岛β细胞损伤的保护作用。结果体外培养大鼠胰岛β细胞株RINm5F,采用IL-1β诱导RINm5F细胞损伤,将RIN-m5F细胞分为对照组、损伤组(0.5 ng/ml IL-1β)、空转染组(0.5 ng/ml IL-1β+空载体)和过表达组(0.5 ng/ml IL-1β转染+miR-200b mimics),采用qRT-PCR检测转染48 h各组的miR-200b和Ets-1 mRNA水平,采用MTT法、FITC-Annexin V/PI双染流式细胞术及酶联免疫吸附法检测各组转染12、24、48及72 h的细胞存活率、凋亡率及胰岛素水平,检测各组细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、丙二醛(MDA)水平、总抗氧化能力(T-AOC)及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与对照组相比,损伤组、空转染组的miR-200b水平降低,Ets-1 mRNA水平升高,但过表达组的miR-200b水平升高,Ets-1 mRNA水平降低(P0.05)。损伤组、空转染组转染后的存活率、上清液胰岛素水平及GSH-Px、T-AOC和SOD活性低于对照组,MDA水平和凋亡率高于对照组(P0.05);过表达组的以上指标均优于对照组(P0.05),但与对照组均有统计学差异(P0.05)。结论上调miR-200b水平对IL-1β诱导胰岛β细胞损伤有保护作用,主要表现在提高细胞存活、促进胰岛素分泌及改善氧化应激,可能与其靶向作用Ets-1有关。     

透明质酸对白细胞介素-1 β诱导软骨细胞基质金属蛋白酶及其抑制因子mRNA表达的影响

目的 研究透明质酸对重组大鼠白细胞介素-1β(rrIL-β)诱导体外软骨细胞基质金属蛋酶(MMP)及其抑制因子(TIMP) mRNA表达的影响,并探讨其作用机制.方法 体外分离、培养大鼠软骨细胞成功后,加入不同浓度的透明质酸(10、20、40 μg/m1),1 h后,以10 ng/ml IL-1β刺激,培养24 h后,以反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测MMP-3,9,13及TIMP-1 mRNA的表达,通过Griess反应测定上清液中一氧化氮(NO)浓度.结果 透明质酸可明显下调IL-1β诱导下软骨细胞MMP-3,9,13 mRNA的表达,但对TIMP-1 mRNA的表达无明显影响.不同浓度透明质酸对IL-1β诱导的软骨细胞高表达NO的抑制作用呈剂量依赖性.结论 透明质酸能抑制IL-1β诱导的软骨细胞MMP-3,9,13 mRNA的表达,上调TIMP-1/MMPs的比值,其保护作用可能与其抑制软骨细胞NO产量有关.     

沉默CDKN2B-AS1调控miR-98-5p、STAT3对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的]探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA 1(CDKN2B-AS1)是否通过靶向miR-98-5p影响高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。 [方法]将HUVEC分为对照组(含5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养)、模型组(含33.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养)、模型＋si-NC组、模型＋si-CDKN2B-AS1组、模型＋miR-NC组、模型＋miR-98-5p模拟物组、模型＋si-CDKN2B-AS1＋anti-miR-NC组、模型＋si-CDKN2B-AS1＋anti-miR-98-5p组。运用实时定量聚合酶链反应检测HUVEC的CDKN2B-AS1、miR-98-5p表达;Western blot检测信号转导及转录激活因子3(STAT3)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD、LDH、MDA水平。双荧光素酶报告实验分析miR-98-5p与CDKN2B-AS1、STAT3的靶向结合。 [结果]高糖使HUVEC中CDKN2B-AS1、STAT3表达、凋亡率、LDH、MDA水平升高,miR-98-5p表达、SOD水平降低(P＜0.05)。沉默CDKN2B-AS1或过表达miR-98-5p后,高糖诱导的HUVEC中CDKN2B-AS1、STAT3表达、凋亡率、LDH、MDA水平降低,miR-98-5p表达、SOD水平升高(P＜0.05)。双荧光素酶报告实验显示,CDKN2B-AS1靶向miR-98-5p,miR-98-5p靶向STAT3。抑制miR-98-5p逆转了沉默CDKN2B-AS1对高糖诱导的HUVEC凋亡、氧化应激、STAT3蛋白表达的抑制作用。 [结论]沉默CDKN2B-AS1通过调节miR-98-5p/STAT3轴抑制高糖诱导的HUVEC氧化应激和凋亡,CDKN2B-AS1可作为糖尿病相关血管并发症的候选治疗靶标。     

京尼平通过miR-499调节缺血缺氧诱导心肌细胞线粒体途径凋亡

目的研究京尼平对缺血缺氧诱导心肌细胞线粒体途径凋亡的调节作用及其分子机制。方法培养H9c2细胞并进行分组处理,对照组用不含药物的DMEM在常氧条件下培养,缺氧组用不含药物的DMEM在缺氧条件下培养,低、中、高剂量京尼平组在缺氧条件下分别用含有2.5μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L京尼平的DMEM处理,NC抑制物组在常氧条件下转染NC抑制物,NC抑制物+缺氧组在缺氧条件下转染NC抑制物,NC抑制物+缺氧+京尼平组在缺氧条件下转染NC抑制物并用含有10.0μmol/L京尼平的DMEM处理,miR-499抑制物+缺氧+京尼平组在缺氧条件下转染miR-499抑制物并用含有10.0μmol/L京尼平的DMEM处理。比较组间心肌酶含量、细胞凋亡率、凋亡基因及miR-499表达的差异。结果京尼平组能够以剂量依赖性的方式降低细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量及细胞凋亡率和细胞中Bax、Caspase-3表达,增加细胞中Bcl-xL及miR-499的表达;转染miR-499的抑制物能够逆转10.0μmol/L京尼平降低细胞培养基中LDH、CK、CK-MB含量及细胞凋亡率、细胞中Bax、Caspase-3表达和增加细胞中Bcl-xL表达的效应。结论京尼平通过miR-499调节缺血缺氧诱导心肌细胞线粒体途径凋亡。     

独活寄生汤联合体外冲击波对膝骨关节炎患者IL-1β和SOD及MMP-3表达的影响

目的探讨独活寄生汤联合体外冲击波治疗对膝骨关节炎患者白细胞介素1β(IL-1β)、超氧化物歧化酶(SOD)和基质金属蛋白酶3(MMP-3)表达的影响。方法收集2013-09~2016-03该院门诊就诊的膝骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)患者300例(300膝),按患者意愿随机分为三组,中药组100例予口服独活寄生汤治疗,冲击波组100例予体外冲击波治疗,联合组100例予独活寄生汤联合体外冲击波治疗。在治疗前和治疗2周、4周、6周、12周、24周后抽取患膝关节液,检测膝关节液中IL-1β、SOD和MMP-3表达情况。结果 (1)组内治疗前和治疗后IL-1β、SOD和MMP-3表达的比较:各组患者治疗2周、4周、6周、12周、24周后与治疗前相比,差异均有统计学意义(P0.05),认为三组均能下调KOA患者膝关节液中IL-1β和MMP-3表达,上调SOD表达。(2)组间各时间点IL-1β、SOD和MMP-3比较:治疗前各组两两比较差异均无统计学意义(P0.05);治疗2周、4周、6周、12周、24周后,中药组与冲击波组比较差异无统计学意义(P0.05),联合组与中药组、冲击波比较差异有统计学意义(P0.05),认为中药组和冲击波组下调膝关节液中IL-1β、MMP-3表达和上调SOD表达效果相当,联合组效果优于中药组和冲击波组。结论独活寄生汤联合体外冲击波治疗KOA具有下调膝关节液中IL-β和MMP-3表达,上调SOD表达的作用。     

神经调节蛋白1通过ERK1-2通路减轻心肌细胞缺氧复氧损伤

目的探究神经调节蛋白1(NRG-1)通过细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路减轻心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤的作用。方法培养心肌H9c2细胞株,随机分为常规条件下用不含药物DMEM处理的对照组、H/R条件下用不含药物DMEM处理的H/R组、H/R条件下用含NRG-1 DMEM处理的NRG-1组、H/R条件下用含NRG-1及ERK1/2抑制剂PD98059处理的NRG-1+PD组。检测细胞增殖活力、凋亡率及细胞中的凋亡基因、炎症指标、ERK1/2。结果 H/R组细胞的OD_(490)水平明显低于对照组,细胞凋亡率、细胞中cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3、核因子κB(NF-κB)、ERK1/2的表达水平及培养基中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、γ干扰素(IFN-γ)的含量明显高于对照组;NRG-1组细胞的OD_(490)水平及细胞中ERK1/2的表达水平明显高于H/R组,细胞凋亡率、细胞中cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3、NF-κB的表达水平及培养基中TNF-α、IL-1β、IFN-γ的含量明显低于H/R组;NRG-1+PD组细胞的OD_(490)水平及细胞中ERK1/2的表达水平明显低于NRG-1组,细胞凋亡率、细胞中cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3、NF-κB的表达水平及培养基中TNF-α、IL-1β、IFN-γ的含量明显高于NRG-1组。结论 NRG-1通过激活ERK1/2通路减轻心肌细胞H/R损伤。     

骨髓间充质干细胞对多柔比星致心肌细胞凋亡的影响及机制

目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对多柔比星(DOX)致心肌细胞凋亡的影响,并探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)、Caspase-9在其中的作用。方法取原代培养的大鼠心肌细胞,设3组。A组用含2μmol/L DOX的DMEM-F12培养基(含10%胎牛血清)处理4 h后,更换为正常培养基;B组用含2μmol/L DOX的DMEM-F12培养基(含10%胎牛血清)处理4 h后,更换为正常培养基,并插入接种有MSCs的Millicell装置,共培养48 h;C组用含2μmol/L DOX的DMEM-F12培养基(含10%胎牛血清)处理4 h后,更换为含50 nmol/L TGF-β1受体特异性抑制剂LY364947的DMEM-F12培养基(含10%胎牛血清),并插入接种有MSCs的Millicell装置,共培养48 h。用ELISA法检测各组心肌细胞培养液上清液中的TGF-β1,用流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染法检测各组心肌细胞凋亡率,Western blot法检测各组心肌细胞Caspase-9蛋白表达。结果实验结束时心肌细胞凋亡率和Caspase-9表达量A组>B组>C组,P均<0.05。心肌细胞培养液上清液TGF-β1水平B组高于A、C组,P均<0.05;A、C组心肌细胞培养液上清液TGF-β1水平差异无统计学意义。结论 MSCs共培养可抑制DOX引起的心肌细胞凋亡,其机制可能与Caspase-9有关。MSCs旁分泌的细胞因子TGF-β1对DOX诱导的心肌细胞凋亡起促进作用。     

SIRT2对白细胞介素-1β诱导的兔关节软骨细胞凋亡的影响

目的明确沉默信息调节因子(SIRT) 2对白细胞介素(IL)-1β诱导的关节软骨细胞凋亡的影响。方法分离培养兔关节软骨细胞,以IL-1β处理细胞,Realtime PCR和Western印迹方法检测SIRT2表达。关节软骨细胞感染SIRT2过表达慢病毒,检测IL-1β诱导后细胞中SIRT2表达。MTT检测细胞增殖,流式细胞术测定凋亡,Western印迹方法分别测定线粒体和胞质中细胞色素(Cytochrome) C蛋白水平。结果 IL-1β处理细胞后的兔关节软骨细胞中SIRT2表达水平降低,感染SIRT2过表达慢病毒能够提高细胞中SIRT2的表达水平。IL-1β处理后的兔关节软骨细胞增殖活性降低,细胞凋亡增多,细胞线粒体中Cytochrome C蛋白水平降低,胞质中Cytochrome C蛋白水平升高。过表达SIRT2的关节软骨细胞经IL-1β诱导后,细胞增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞线粒体中Cytochrome C蛋白水平升高,胞质中Cytochrome C蛋白水平降低,与单纯经IL-1β诱导的细胞比较,差异有统计学意义(P0. 05)。结论过表达SIRT2减少IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡,提高细胞增殖活性,作用机制与抑制线粒体释放Cytochrome C有关。     

微小RNA-126模拟物对肿瘤坏死因子α诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探究微小RNA(miR)-126模拟物在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,随机进行如下处理:无特殊处理(对照组);加100μg/L TNF-α(TNF-α组);转染Lipofectamine 2000+100μg/L TNF-α(miR-126阴性组);转染miR-126模拟物+100μg/L TNF-α(miR-126模拟物组),每组设置6个重复样品。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-126表达情况;MTT法检测细胞增殖活性;酶联免疫吸附试验法检测细胞中白细胞介素(IL)6、IL-1β水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫印迹法检测细胞中内皮细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达;双荧光霉素活性实验检测miR-126、HMGB1间的靶向关系。结果与对照组相比,TNF-α组、miR-126阴性组miR-126表达降低,细胞增殖率降低,IL-6、IL-1β水平升高,细胞凋亡率升高,VCAM-1、ICAM-1、HMGB1蛋白表达升高(均P0.05);与TNF-α组、miR-126阴性组相比,miR-126模拟组miR-126表达升高,细胞增殖率升高,IL-6、IL-1β水平降低,细胞凋亡率降低,VCAM-1、ICAM-1、HMGB1蛋白表达降低(均P0.05)。与miR-126阴性组+HMGB1 3’非编码区(UTR)-携带野生型(Wt)组相比,miR-126模拟物+HMGB1 3’UTR-Wt组荧光素酶活性降低(0.43±0.05比1.06±0.15,P0.05)。结论 miR-126模拟物可能通过降低炎症反应缓解TNF-α诱导的细胞损伤,实现对血管内皮细胞损伤的保护。     

通心络干预的心肌微血管内皮细胞条件培养液对大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨受损的心肌微血管内皮细胞对大鼠心肌细胞凋亡的影响及通心络的干预作用。方法:制备3种心肌微血管内皮细胞条件培养液:正常心肌微血管内皮细胞(RCMECs)条件培养液,同型半胱氨酸(Hcy)诱导损伤的RCMECs条件培养液和通心络干预的RCMECs条件培养液。将大鼠胚胎H9c2心肌细胞分为4组:(1)正常对照组:弃去原培养基,换为无血清细胞培养基(DMEM);(2)N-CM组:弃去原培养基,换为正常RCMECs条件培养液;(3)H-CM组:弃去原培养基,换为Hcy诱导损伤的RCMECs条件培养液;(4)T-CM组:弃去原培养基,换为通心络干预的RCMECs条件培养液。JC-1试剂检测细胞线粒体膜电位(MMP);流式细胞仪检测细胞活性氧簇(ROS)水平;活细胞成像系统动态观察各组心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞色素-C(Cyt-C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞白血病淋巴瘤-2相关x蛋白(Bax)和B细胞白血病/淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白表达。结果:与正常对照组的心肌细胞比较,N-CM组心肌细胞MMP、ROS、Cyt-C蛋白表达及凋亡无明显变化(P0.05);与N-CM组比较,H-CM组心肌细胞MMP降低,ROS生成增加,凋亡增加,Cyt-C、Caspase-3和Bax蛋白表达上调(P均0.01),Bcl-2蛋白表达下调(P0.01);与H-CM组比较,T-CM组细胞MMP升高,ROS生成减少,凋亡减少,Cyt-C、Caspase-3和Bax蛋白表达下调(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达上调(P0.01)。结论:损伤的心肌微血管内皮细胞条件培养液可诱导心肌细胞凋亡,通心络可抑制该过程。     

亚低温对脑复苏大鼠神经细胞凋亡和线粒体损伤的影响

目的探究亚低温通过冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)介导的抗凋亡信号转导通路对心肺复苏(CPR)大鼠脑神经细胞凋亡和线粒体的影响。方法将45只大鼠分为假手术组、常温组和亚低温组(每组15只)。通过模拟窒息后心脏骤停,模拟CPR模型。亚低温组大鼠在建模后使食管内温度维持在(33.0±1.0)℃。6 h后收集尾静脉血样本和脑组织。检测和比较各组炎性因子水平、脑组织损伤、神经元凋亡、线粒体形态、线粒体损伤标志蛋白和CIRP的表达量。结果 3组大鼠炎性因子水平、脑组织中线粒体损伤和凋亡标志蛋白表达量以及CIRP mRNA和蛋白表达量比较有显著差异(P0.05)。常温组脑组织损伤程度、凋亡指数、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、线粒体损伤程度、细胞色素C(Cyt C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-9、Caspase-3蛋白表达量显著高于假手术组(P0.05)。与常温组比较,亚低温组大鼠凋亡指数(16.17±1.82 vs 38.29±3.79)、IL-1β[(39.71±5.09)pg/ml vs(74.24±8.25)pg/ml]、IL-6[(52.47±7.30)pg/ml vs(88.36±10.12)pg/ml]、Cyt C(0.32±0.03 vs 0.87±0.08)、Caspase-9(0.51±0.05 vs 0.92±0.09)、Caspase-3(0.46±0.05 vs 1.05±0.10)显著降低(P0.05),CIRP mRNA(1.58±0.14 vs 0.30±0.04)和CIRP蛋白(0.87±0.08 vs 0.12±0.01)表达量显著增高(P0.05)。结论亚低温可能通过调控CIRP的表达缓解线粒体损伤,抑制脑神经元凋亡,保护CPR后脑组织损伤。     

miR-497-5p靶向沉默核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出

目的观察miR-497-5p对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1(NLRP1)靶向调控及其对细胞胆固醇流出的影响。方法生物信息学与荧光素酶报告基因验证miR-497-5p与NLRP1靶向结合。人源THP-1单核细胞经佛波酯及氧化低密度脂蛋白处理后成为泡沫细胞。使用miR-497-5p mimic和miR-497-5p inhibitor处理细胞。实时荧光定量PCR和Western blot检测NLRP1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达情况。酶联免疫吸附法测定细胞培养液白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18含量。液体闪烁计数仪检测泡沫细胞胆固醇流出水平。高效液相色谱法检测泡沫细胞内脂质含量。结果 miR-497-5p mimic能够显著性降低野生型NLRP1 3′UTR报告基因的荧光素酶活性。与对照组相比,miR-497-5p mimic组NLRP1、ASC、Caspase-1的mRNA及蛋白表达水平明显下调,IL-1β和IL-18分泌明显减少。miR-497-5p mimic较对照组显著促进细胞胆固醇流出,减少细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量。结论 miR-497-5p可能通过靶向调控NLRP1,抑制巨噬细胞源性泡沫细胞炎症反应并促进胆固醇流出。     

左乙拉西坦对白细胞介素-1β诱导的PC12细胞损伤的抑制作用

目的探讨左乙拉西坦对白细胞介素(IL)-1β诱导的PC12细胞损伤的抑制作用。方法将PC12细胞随机分为正常对照组,IL-1β组(10 ng/ml IL-1β),左乙拉西坦低、中、高浓度组(10,30,100μmol/L左乙拉西坦+10 ng/ml IL-1β),并培养48 h。MTT法检测各组细胞活力,流式双染检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6含量,比色法检测一氧化氮(NO)含量,RT-PCR和Western印迹分别检测髓样分化蛋白88/核因子-κB(MyD88/NF-κB)信号通路相关蛋白mRNA及蛋白表达量。结果 10,30,100μmol/L左乙拉西坦能显著提高PC12细胞活力(P<0.01),3μmol/L左乙拉西坦显著对PC12细胞活力无影响,300μmol/L的左乙拉西坦降低PC12细胞活力(P<0.01)。与正常对照组比较,IL-1β组细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率、TNF-α、IL-6及NO含量显著提高(P<0.01),MyD88及p-NF-κB p65表达量显著上调(P<0.01)。与IL-1β组比较,左乙拉西坦低、中、高浓度组细胞活力显著提高(P<0.01),细胞凋亡率、TNF-α、IL-6及NO含量显著降低(P<0.01),MyD88 mRNA、p-NF-κB p65蛋白及mRNA表达量显著下调(P<0.01),左乙拉西坦中、高浓度组MyD88蛋白表达量显著下调(P<0.01)。结论左乙拉西坦可能通过抑制MyD88/NF-κB信号通路抵抗IL-1β诱导的PC12细胞炎症反应。