miR-25-3p通过BTG2/SOD2轴促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达

目的 研究微小RNA(microRNA,miRNA)miR-25-3p对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控及机制。方法 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)灌注小鼠构建心肌纤维化模型。用miRNA表达谱芯片检测纤维化的小鼠心肌中表达水平有差异的miRNA。原代分离法获得C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞(mCF),建立AngⅡ处理mCF的心肌纤维化细胞模型。mCF转染miR-25-3p mimic后检测纤维化相关基因的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-25-3p与B细胞易位基因2(BTG2)的3′端非翻译区(3′UTR)的结合作用。放线菌素D实验验证BTG2对超氧化物歧化酶2(SOD2)稳定性的作用。结果 miR-25-3p在AngⅡ灌注诱导的小鼠心肌和AngⅡ处理的mCF中表达升高。转染miR-25-3p mimic可使mCF中的Ⅰ型胶原α1(COL1A1)、Ⅲ型胶原α1(COL3A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达显著增加。双荧光素酶报告基因实验和功能实验证实BTG2是miR-25-3p的下游靶基因,并参与介导miR-25-3p促进mCF中纤维化相关基因表达的作用。机制研究证实BTG2可通过增加SOD2 mRNA的稳定性而上调其表达。结论 miR-25-3p通过抑制BTG2的表达来下调SOD2的水平进而增强纤维化相关基因的表达,发挥促进心肌纤维化的作用。     

微小RNA-155通过靶向缺氧诱导因子1α调控心肌纤维化

目的 探讨微小RNA（miR）-155对心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts, CFs）中纤维化相关基因表达的作用及其机制。 方法 实验分为对照组、血管紧张素(Ang)Ⅱ组、Scramble组、miR-155 mimic组、AngⅡ+ Scramble组、AngⅡ+ miR-155 mimic组、AngⅡ+ HIF-1α siRNA组。AngⅡ刺激原代分离培养的小鼠CFs,模拟心肌纤维化过程中CFs活化过程,采用PCR及Western blot检测各组miR-155、1型胶原（Col 1）、3型胶原（Col 3）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-155与缺氧诱导因子（HIF）-1α 3’端非编码区（3’-UTR）的结合作用。 结果 AngⅡ刺激可显著促进小鼠CFs中纤维化相关基因的表达,同时降低miR-155的水平(P <0.05);过表达miR-155可显著降低AngⅡ诱导的小鼠CFs中纤维化相关基因的表达（P <0.05）;HIF-1α受到了miR-155的负性调控,并能同miR-155结合;miR-155 mimic和HIF-1α siRNA能一致性的降低AngⅡ诱导的小鼠CFs中纤维化相关蛋白的表达。 结论 miR-155能抑制AngⅡ诱导的CFs纤维化,进而抑制心肌纤维化;HIF-1α是miR-155的靶基因,并介导了miR-155发挥抑制AngⅡ诱导的CFs纤维化的过程。     

人参皂苷Rg3对血管紧张素Ⅱ诱导小鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 研究人参皂苷Rg3对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的小鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖与胶原合成的影响,探讨人参皂苷Rg3是否具有对抗心肌纤维化的作用。方法 用胰酶消化,差速贴壁、分离纯化CFs,用波形蛋白(Vimentin)免疫荧光法鉴定CFs;建立AngⅡ诱导的CFs增殖模型。实验分为正常对照组(无血清DMEM),模型组(AngⅡ),人参皂苷Rg3组共3组;人参皂苷Rg3预处理1 h,加入AngⅡ共同作用24 h,采用EdU试剂盒检测CFs的增殖情况;羟脯氨酸法检测细胞胶原分泌水平;Western印迹检测CFs中增殖细胞核抗原(PCNA)、胶原蛋白(Col)Ⅰ的表达情况。结果 成功提取新生大鼠原代CFs, Vimentin显著阳性;与正常对照组比较,模型组CFs增殖和胶原分泌明显增加,PCNA、ColⅠ蛋白表达水平明显升高;与模型组相比,人参皂苷Rg3组CFs增殖和胶原分泌水平较明显降低,PCNA、ColⅠ蛋白表达水平明显降低。结论 人参皂苷Rg3通过抑制AngⅡ诱导的CFs增殖和胶原蛋白合成,进而发挥抗心肌纤维化作用。     

芪苈强心胶囊通过抑制血管紧张素Ⅱ改善压力超负荷致小鼠心肌肥厚

目的探讨探讨芪苈强心胶囊是否通过抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)表达改善压力超负荷下小鼠心肌肥厚。方法小鼠行升主动脉缩窄手术(TAC)建立心肌肥厚模型,8-10周龄野生型雄性小鼠(WT)和雄性血管紧张素原基因敲除小鼠(ATG-/-)随机分为假手术组、生理盐水组、芪苈强心胶囊三组,TAC组小鼠给予生理盐水或1.0mg/(kg.d)药物灌胃处理。术后2周行心超及血流动力学检查,同时分析心肌组织学指标以及肥厚相关基因表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆和心肌组织AngⅡ浓度,,蛋白印迹法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)及血管紧张素Ⅱ-1型(AT1)受体表达。结果 WT和ATG-/-小鼠TAC后2周,主动脉血压及左室收缩末期压显著升高,芪苈强心胶囊对其均无影响。WT小鼠中,此药显著抑制TAC介导AngⅡ的升高(P<0.05),抑制TAC介导的左室前壁,左室后壁增厚以及心肌细胞横截面积(CSA)和纤维化面积增大,同时抑制肥厚相关基因、AT1受体和p-ERK表达上调(P<0.05),;ATG-/-小鼠中,在AngⅡ缺失的情况下,TAC两组间左室前后壁、CSA、纤维化面积以及肥厚相关基因、AT1受体和p-ERK...     

miR-374促进急性心肌梗死诱导心肌纤维化的机制

目的研究微小RNA(miR)-374通过调控白细胞介素(IL)-10对急性心肌梗死(AMI)诱导心肌纤维化的影响。方法采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测AMI患者和健康对照组血清中miR-374的表达水平。构建AMI小鼠模型,随机分为假手术组(n=6)、AMI组(n=12)、AMI+miR-374组(n=12,AMI小鼠心肌注射miR-374)。采用qRT-PCR检测假手术组和AMI组心肌组织中miR-374的表达水平及各组Ⅰ型胶原(COL1)A1和Ⅲ型胶原(COL3)A1 mRNA表达水平。检测各组心脏功能,记录左室射血分数(LVEF)、左室长轴缩短分数(FS)、左室舒张末期内径(LVDd)和左室收缩末期内径(LVDs)。比色法检测各组半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3和Caspase8活性。Massontrichrome染色检测各组心肌纤维化程度。miR靶基因数据库预测IL-10为miR-374的潜在靶基因并采用荧光素酶报告基因法验证。采用qRT-PCR检测转染miR-374 mimics对IL-10 mRNA表达的影响。采用Western印迹检测AMI组和AMI+miR-374组心肌组织中IL-10、P65和P50蛋白表达。结果AMI患者血清中miR-374的表达水平明显高于健康对照组(P<0.001)。AMI组心肌组织中miR-374表达水平明显高于假手术组(P<0.001)。相比AMI组,AMI+miR-374组LVEF和FS明显降低、LVDd和LVDs明显升高、Caspase3和Caspase8活性明显升高、COL1A1和COL3A1 mRNA表达水平明显升高、心肌纤维化程度增加(P<0.05、P<0.01、P<0.001)。miR-374可靶向调控IL-10并抑制其mRNA表达。相比AMI组,AMI+miR-374组心肌组织中IL-10蛋白表达明显降低,而P65和P50蛋白磷酸化明显增加(P<0.05)。结论miR-374可能通过抑制IL-10的表达显著促进心肌梗死诱导心肌纤维化的发展。     

环状RNA circ0036167与融合肉瘤蛋白结合发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用

[目的]研究环状RNA circ＿0036167对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用及可能机制。[方法]对心衰患者及器官捐献者心肌组织进行Masson三色染色以检测心肌胶原水平。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circ＿0036167及其宿主MYO9A在心衰心肌中的表达。通过放线菌素D和RNase R处理实验鉴定人心肌细胞AC16中circ＿0036167的RNA稳定性。利用重组circ＿0036167腺病毒感染C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞(mCF),在RNA和蛋白水平检测纤维化相关基因COL1A1、COL3A1和ACTA2的表达。利用EdU染色和Transwell细胞迁移实验鉴定circ＿0036167对mCF增殖和迁移能力的影响。基于生物信息学预测和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验验证circ＿0036167与融合肉瘤蛋白(FUS)的结合作用。检测敲低mCF中FUS表达对circ＿0036167调控心肌纤维化相关基因表达的影响。[结果] Masson三色染色显示心衰心肌发生明显的纤维化(P<0.001)。RT-qPCR结果显示circ＿0036167在心衰心肌...     

雷米普利对慢性心力衰竭大鼠心肌组织中盐皮质激素受体的影响

目的探讨雷米普利对慢性心力衰竭大鼠心肌组织中盐皮质激素受体(MR)表达及心肌纤维化的影响。方法选择SD大鼠39只,选用慢性心力衰竭造模成功SD大鼠26只,随机分为慢性心力衰竭组(心衰组,13只)、雷米普利治疗组(治疗组,13只),另设假手术大鼠为对照组(13只)。雷米普利治疗4周时,用心肌Masson染色法测定大鼠心肌胶原密度,放射性免疫法测定大鼠心肌组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)含量,实时荧光定量PCR、免疫印迹检测心肌MR表达。结果与对照组比较,心衰组大鼠心肌组织中AngⅡ、ALD显著升高,MR mRNA和蛋白表达显著上调,心肌胶原密度显著增加(P<0.01);与心衰组比较,治疗组大鼠心肌组织中AngⅡ、ALD显著降低.MR mRNA和蛋白表达显著下调,心肌胶原密度显著降低(P<0.01)。结论雷米普利不仅降低慢性心力衰竭大鼠心肌组织中AngⅡ、ALD含量,还可能通过下调心肌MR的表达来抑制心肌纤维化。     

金莲花总黄酮下调miR-215-5p抑制PI3K/AKT信号通路影响AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和迁移

目的 探讨金莲花总黄酮对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖、迁移的影响和潜在机制。方法 不同浓度(0.2、0.4、0.8 mmol/L)的金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导CFs。细胞计数试剂盒检测细胞活力确定金莲花总黄酮使用浓度。Transwell实验、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞迁移、miR-215-5p表达水平。Western印迹检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。将miR-215-5p模拟物、抑制物分别转染CFs,检测上调或下调miR-215-5p对AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移的影响。结果 金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导的CFs后,细胞活力、迁移能力、miR-215-5p、磷酸化(p)-PI3K和p-AKT蛋白表达显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著升高(P<0.05)。下调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达能够显著降低金莲花总黄酮对AngⅡ诱导的CF...     

磷酸肌酸钠对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及机制研究

目的：观察磷酸肌酸钠对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的乳鼠心肌成纤维细胞(CF)增殖和胶原合成的影响,并初步探索磷酸肌酸钠抗心肌纤维化的作用机制。
　　方法：将20只Wistar乳鼠取出心脏,体外原代、传代培养CF。实验分4组（每组n=3）,对照组：无血清的DMEM培养液培养CF;AngⅡ组：含AngⅡ1×10-6mol/L的无血清DMEM培养液;磷酸肌酸钠组：含磷酸肌酸钠10 mmol/L的无血清DMEM培养液;AngⅡ+磷酸肌酸钠组：含磷酸肌酸钠10 mmol/L 加AngⅡ1×10-6mol/L的无血清DMEM培养液。采用流式细胞术测定细胞周期分布,Van Gieson（VG）氏染色法测定胶原含量,免疫细胞化学法检测磷酸化细胞外信号调节激酶（pERK1/2）蛋白的表达水平。
　　结果：与对照组相比,AngⅡ组CF的S期细胞百分率明显增加,G0/G1期、G2/M期细胞百分率降低,胶原含量增加, pERK1/2蛋白表达增高,差异均有统计学意义（P均<0.01)。与对照组比较,磷酸肌酸钠组CF细胞周期、胶原含量和pERK1/2蛋白表达,差异均无统计学意义（P均>0.05)。与对照组比较,AngⅡ+磷酸肌酸钠组pERK1/2蛋白表达升高,差异有统计学意义（P<0.01),CF细胞周期和胶原含量差异均无统计学意义（P均>0.05)。与AngⅡ组比较,AngⅡ+磷酸肌酸钠组G0/G1期、G2/M期细胞百分率升高,S期百分率降低,胶原含量减少,pERK1/2蛋白表达降低,差异均有统计学意义（P均<0.01)。
　　结论：磷酸肌酸钠可部分抑制AngⅡ诱导的CF增殖和胶原合成增加,其机制可能与抑制ERK1/2过度激活有关。这提示磷酸肌酸钠可以明显改善AngⅡ诱导的心肌纤维化。     

低声压级水平次声对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响及机制研究

目的:观察次声对心肌梗死后大鼠心肌纤维化的影响及相关机制研究。方法:将30只SD大鼠随机分为3组,即假手术组、心肌梗死组及次声治疗组,每组10只。采用低声压级水平次声对心肌梗死大鼠治疗1周(2次/d,0.5 h/次),观察心肌胶原和血浆NO和血管紧张素-Ⅱ(AngⅡ)及大鼠心功能的变化。结果:与心肌梗死组大鼠比较(未治疗组),次声治疗组大鼠心肌胶原表达明显减少,血浆NO含量显著增加(P0.01),血浆AngⅡ含量显著降低(P0.01),心功能明显改善(P0.01)。结论:低声压级水平次声治疗能够明显减轻心肌梗死后大鼠心肌纤维化,其作用可能与血浆NO及AngⅡ含量变化有关。