DHA玻璃体注射对ARMD大鼠模型光感受器细胞凋亡和PI3K/Akt通路的影响

目的：探讨二十二碳六烯酸(DHA)玻璃体注射对年龄相关性黄斑变性(ARMD)大鼠光感受器细胞凋亡和磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)通路的影响。

方法：大鼠随机分为空白对照组、模型组、低剂量DHA组(L-DHA组)、中剂量DHA组(M-DHA组)和高剂量DHA组(H-DHA组)。采用光损伤法建立干性ARMD大鼠模型。HE染色观察视网膜病理变化，TUNEL法检测视网膜细胞凋亡情况，透射电镜观察视网膜神经节细胞超微结构，酶联免疫吸附法测定视网膜组织TNF-α和IL-6水平，Western Blot检测视网膜组织p-PI3K、p-Akt、Bax、Bcl-2、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表达。

结果：与空白对照组比较，模型组大鼠视网膜总厚度、外核层和内核层厚度、视网膜组织p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达均降低(P<0.05)，神经节细胞层和外核层细胞凋亡指数、视网膜组织TNF-α和IL-6水平、Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05)。与模型组比较，M-DHA组和H-DHA组大鼠视网膜总厚度、外核层和内核层厚度、视网膜组织p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达均升高(P<0.05)，神经节细胞层和外核层细胞凋亡指数、视网膜组织TNF-α和IL-6水平、Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05)。

结论：DHA可能通过激活PI3K/Akt通路抑制ARMD大鼠光感受器细胞凋亡。     

Caspase-3在MNU诱导的视网膜变性大鼠中的作用

目的研究Caspase3在N甲基N亚硝脲(MNU)诱导的光感受器细胞凋亡过程中的表达并观察其与细胞凋亡的关系。方法大鼠MNU腹腔注射造模后,分别在不同时间段,利用免疫组织化学法检测视网膜中Caspase3的表达,同时用TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡。结果MNU腹腔注射后,外核层中Caspase3的表达渐增强,至2d时达高峰,此后渐下降。细胞凋亡数量的变化趋势与前者一致。结论Caspase3可能在MNU诱导的光感受器细胞凋亡中发挥主要作用,其表达量的高低与细胞凋亡的程度有密切联系。     

N-乙酰-5-羟色胺(NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响

目的 探讨N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响.方法 取健康成年Sprague-Dawley大鼠66只,采用随机数字表法随机分为正常对照组(6只)、缺血再灌注组(30只)与药物组(30只),药物组于造模前30 min腹腔注射5 mg·kg-1NAS,缺血再灌注组腹腔注射同等剂量的生理盐水,缺血再灌注组与药物组按RIRI后时间,分为6h、12 h、24 h、48 h、72 h五个亚组.采用HE染色法观察各组视网膜形态学变化,免疫组织化学染色检测各组大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达.结果 HE染色显示正常对照组大鼠视网膜结构清晰,各层细胞排列紧密;缺血再灌注组大鼠RIRI后6h、12 h视网膜各层高度水肿,24h后水肿逐渐减轻,神经节细胞逐渐减少,分布较紊乱,随着时间延长,视网膜神经节细胞大片缺失;药物组6h、12h较缺血再灌注组细胞水肿明显减轻,24h、48 h、72h组较缺血再灌注组细胞排列规整,神经节细胞数量减少减轻.缺血再灌注组视网膜活性Caspase-3阳性细胞数在灌注后6h开始表达增加,阳性细胞数为(561.15±37.19)个·mm-2,24 h达到较高水平,阳性细胞数为(1522.61±84.36)个·mm-2,随后逐渐下降,药物组视网膜各时间点活性Caspase-3阳性细胞数均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常对照组视网膜可见大量Bcl-2阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6 h Bcl-2阳性细胞开始下降,12h后继续减少,24h降至较低水平;药物组各时间点Bcl-2阳性细胞数均显著多于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常对照组大鼠视网膜几乎未见Bax阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6h神经节细胞层及内核层可见Bax阳性细胞,24h达到较高水平,48 h开始下降;药物组各时间点Bax阳性细胞均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 NAS可促进RIRI大鼠视网膜Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,降低活性Caspase-3蛋白表达,减轻细胞凋亡,具有神经保护作用.     

Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO对实验性近视眼视网膜细胞凋亡的治疗

目的研究鸡近视眼视网膜细胞凋亡的分子机制及Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO的治疗作用.方法眼睑缝合法建立鸡的近视眼模型.玻璃体内注射Ac-DEVD-CHO后按预定时间检影验光,摘眼球,测量眼球外径,并拍眼底照片,用电镜、末端脱氧核糖核苷酸连接酶介导生物素化脱氧尿苷酸末端标记(TUNEL)技术及流式细胞术检测视网膜的凋亡细胞.用免疫组化、流式细胞术和色敏比色法分析视网膜Caspase 3蛋白表达及其活性变化.结果眼睑缝合12周时缝合眼与对照眼相比屈光度加深,眼球外径增大.缝合眼中出现漆裂纹样眼底改变(发生率为45.56%),并在缝合眼视网膜内、外核层发现凋亡细胞,凋亡率高于对照眼(P<0.05),且视网膜Caspase 3蛋白及活性均增高.玻璃体内注射Ac-DEVD-CHO后,缝合眼视网膜细胞的凋亡率和Caspase 3蛋白及其活性均减少,而且Ac-DEVD-CHO抑制视网膜细胞凋亡的作用随剂量的加大而增强.结论 Caspase 3在鸡近视眼视网膜细胞的凋亡过程中发挥重要作用,Ac-DEVD-CHO通过阻断Caspase 3作用而有效抑制视网膜细胞凋亡.     

益气明目丸对视网膜色素变性大鼠视网膜Bax、Caspase-3表达的影响

目的　观察益气明目丸对视网膜色素变性大鼠视网膜中Bax、Caspase-3表达的影响。方法　24只RCS大鼠分为3组，每组8只，雌雄各半，其中，空白组:RCS（rdy+/+，p+/+）大鼠灌胃生理盐水；模型组:RCS（rdy-/-，p-/-）大鼠灌胃生理盐水；益气明目丸组:RCS（rdy-/-，p-/-）大鼠灌胃益气明目丸悬浊溶液。灌胃30 d后，HE染色观察各组视网膜各层结构，免疫组织化学染色法检测各组视网膜组织中Bax、Caspase-3的平均光密度值，Western blot法测定各组视网膜组织中Bax、Caspase-3蛋白的相对表达量。结果　HE染色结果显示，益气明目丸组大鼠视网膜厚度明显高于模型组，感光细胞核数目也较模型组增多，外丛状层、外核层、视杆视锥层较模型组结构更清晰。免疫组织化学染色检测结果显示，益气明目丸组Bax、Caspase-3平均光密度值（0.133±0.030、0.069±0.024）均较模型组(0.211±0.036、0.119±0.027)减少（均为P＜0.01）。Western blot检测结果显示，益气明目丸组Bax蛋白、Caspase-3蛋白相对表达量（0.374±0.051、0.628±0.045）均明显低于模型组(0.768±0.061、0.802±0.074)，差异均有统计学意义（均为P＜0.01）。结论　益气明目丸对视网膜色素变性大鼠视网膜的超微结构具有保护作用；益气明目丸通过抑制视网膜上Bax、Caspase-3的表达减轻视网膜感光细胞的凋亡，达到保护视细胞的目的。     

糖尿病早期大鼠视网膜神经细胞凋亡与caspase-3表达的关系

目的:观察糖尿病早期大鼠,视网膜神经细胞凋亡与caspase-3表达变化的关系。方法:健康雄性8周龄SD大鼠36只,建立糖尿病大鼠模型18只,正常对照18只。再各自分为4,8,12wk3组,每组6只大鼠。TdT介导DNA缺口末端的dUTP标记(TUNEL)法检测视网膜神经细胞的凋亡程度;免疫组织化学方法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测caspase-3mRNA表达情况。结果:正常对照组4,8,12wk大鼠均未见视网膜神经细胞凋亡。糖尿病组大鼠于建模后4wk即出现视网膜神经细胞凋亡,8wk和12wk大鼠视网膜神经凋亡程度较同期正常对照组大鼠均明显增强。神经细胞凋亡主要位于视网膜神经节细胞层及内核层。正常对照组4,8,12wk大鼠视网膜均未见caspase-3蛋白阳性表达,糖尿病组大鼠4wk即可见caspase-3蛋白阳性表达,8和12wk时表达增强。正常对照组4,8,12wk大鼠caspase-3mRNA表达RQ值分别为1.6±0.6,1.5±0.5,1.6±0.3;糖尿病组4,8,12wk大鼠caspase-3mRNA表达RQ值分别为5.7±1.2,12.6±2.3,14.3±2.1;较同期对照组均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:糖尿病早期视网膜神经细胞凋亡可能与capase-3表达增强有关。     

消朦灵对糖尿病大鼠视网膜TNF-α及JAK/STAT信号转导通路的调控作用

目的：探讨消朦灵片对肿瘤坏死因子α（TNF-α）和Janus激酶2/信号转导与转录激活子途径5（JAK2/ STAT5）信号通路的调控作用，及防治糖尿病视网膜病变的机理。方法：实验研究。选取50 只SD雄性大鼠，随机抽取8只作为空白组。余42只以链脲佐菌素（STZ）腹腔注射诱导制作糖尿病大鼠模型；造模成功40 只，随机分成模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组10 只。模型组不予处理，低剂量组、中剂量组和高剂量组分别给予消朦灵片0.1 g/100 g、0.2 g/100 g、0.3 g/100 g进行治疗。治疗4 个月后观察各组大鼠体质量、血糖变化。通过光学显微镜及透射电子显微镜观察视网膜超微结构变化。采用Western Blot法检测TNF-α、JAK2/STAT5 蛋白表达的变化。对相关数据行重复测量资料的方差分析及单因素方差分析。结果：空白组大鼠视网膜中TNF-α、JAK/STAT有少量表达，模型组表达较多，消朦灵低剂量、中剂量、高剂量组表达依次减少，其中高剂量组表达明显下降，差异有统计学意义（F=4.61、4.23、3.28，P<0.05）。生物光学显微镜下大鼠视网膜结构，空白组结构正常；模型组各层组织排列紊乱，视网膜水肿，毛细血管扩张明显，神经节细胞数量减少，细胞核固缩，内核层空泡变性；高剂量组视网膜各层排列欠规则，轻度水肿，神经节细胞及内核层数量减少。透射电镜下空白组大鼠视网膜结构正常；模型组外节膜盘中段断裂、溶解、溃变，线粒体嵴消失，排列不规则，视锥细胞形态不规则，核中染色质分布不均匀，毛细血管基底膜增厚，管腔狭窄；高剂量组视网膜外节膜盘间隙扩大，排列欠整齐，部分线粒体肿胀变形，视锥细胞核染色欠均匀，毛细血管基底膜厚度不均匀。结论：消朦灵对糖尿病大鼠视网膜中TNF-α、JAK/STAT信号通路有显著的调控作用，能有效防止糖尿病视网膜微血管病变，延缓糖尿病视网膜病变的进程。     

重组人促红细胞生成素对眼挫伤后大鼠视网膜的保护机制

目的：探讨重组人促红细胞生成素（recombinant human erthropoietin, rhEPO）对挫伤视网膜Bcl-2和Bax的调节作用,明确重组rhEPO对挫伤视网膜的保护机制。 方法：两月龄雄性大鼠45只,5只用于正常对照组,余下40只仿Allen重击法制作视网膜挫伤模型致左眼挫伤。将模型制备成功大鼠随机分为两组：模型组和rhEPO治疗组,每组各20只大鼠,每组又分12和24h;3和7d共四个时间点,每个时间点大鼠5只。rhEPO组大鼠ip rhEPO,1次/d;模型组用同体积的生理盐水ip。各组各时段于给药给水停止后第2d取材,石蜡切片。应用免疫组织化学方法检测视网膜组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达变化。 结果：正常对照组视网膜内均有适量Bcl-2和Bax蛋白表达;模型组Bcl-2蛋白表达随时间推移逐渐下降,至3d时表达最低。除12h外,其余各组Bcl-2蛋白表达均比正常对照组低。而Bax蛋白表达逐渐上升,至3d达峰值。除12h外,其余各组Bax蛋白表达均比正常对照组高;rhEPO组Bcl-2蛋白表达均比模型组高,而Bax蛋白表达均比模型组低。 结论：Bcl-2和Bax参与了眼挫伤视网膜病变过程;rhEPO能够上调挫伤后大鼠视网膜细胞Bcl-2蛋白表达和下调Bax蛋白的表达,以抑制损伤视网膜细胞的凋亡。     

大鼠视觉发育关键期视网膜相干光断层成像变化与Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表达的相关性研究

目的 了解SD大鼠视觉发育关键期内视网膜厚度的变化,探讨细胞凋亡的相关作用.方法 实验研究.选择新生SD大鼠50只,其中10只(20只眼)于生后14、18、21、24及42 d行双眼眼底相干光断层扫描(OCT),测量视网膜厚度.另10只大鼠(20只眼)分别于生后14、18、21、24及42 d各取2只大鼠(4只眼),提取视网膜组织总RNA,实时荧光定量PCR法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA表达水平.另20只大鼠(40只眼)于各对应时间点取4只(8只眼),制作眼球石蜡切片行HE染色并行视网膜厚度测量.同时取10只大鼠(20只眼)于各对应时间点取2只(4只眼)制作冰冻切片行TUNEL染色.对不同时间点的视网膜厚度,Bcl-2、Bax及Caspase-3的mRNA相对表达量进行方差分析,对两种方法所测视网膜厚度进行线性回归分析.结果 大鼠生后14、18、21、24及42 d视网膜厚度OCT测量值分别为(243.42±13.83)、(218.78±8.21)、(195.42±8.02)、(195.74±14.85)及(190.79±11.70)μm,差异有统计学意义(F=15.425,P=0.000).在大鼠生后3周内,视网膜厚度逐渐变薄,此后变化不显著.其结果与HE切片视网膜厚度测量呈线性相关(R=0.794,P=0.000).比较不同时间点大鼠视网膜组织Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA相对表达量,差异均有统计学意义(F=18.684,F=47.307,F:49.611;P=0.000).Bax和Caspase-3 mRNA表达呈增加趋势,并在生后24 d呈现峰值,生后42 d表达量明显下降.TUNEL染色结果显示生后18 d至42 d视网膜神经节细胞层、内核层和外核层均可见较多凋亡细胞,生后42 d视网膜细胞凋亡明显减少.结论 视觉发育关键期内大鼠视网膜厚度逐渐变薄.Cirrus HD-OCT可较准确测量大鼠视网膜厚度,是观察视网膜形态学变化的有效检查方法之一.视觉发育关键期内,细胞凋亡参与大鼠视网膜发育,可能影响视网膜厚度的变化.

Abstract：

Objective To observe the changes of retinal thickness during critical period plasticity in rat, and to investigate whether apoptosis participates in the structural forming of retina. Methods Experimental research. 50 normal newborn pups of SD rat were randomly selected in the experiment In vivo consecutive scanning of retinal image was taken and the retinal thickness from RPE to ILM was recorded in 10 pups (20 eyes) with spectral domain optical coherence tomography (OCT) at postnatal day 14 (P14), P18, P21, P24 and P42. Bcl-2, Bax, Caspase-3 Mrna was assessed with fluorescent quantitative real-time polymerase chain reaction after total RNA extracted from 4 retinas of 2 pups at each time point from P14 to P42. Histological measurement of retinal thickness of sections with HE staining from 4 pups (8 eyes) at each time point was compared with the results of OCT scanning. TUNEL staining was used to detect the apoptotic cells in retinal cyrosections of 2 pups (4 eyes) at the same time point The data were analyzed by One-way ANOVA and Linear Regression through SPSS 11.5 software. Results There was significant difference between the retinal thickness measured through OCT in pups from P14 to P42 (F = 15.425 ,P = 0. 001). And the values were (243. 42 ± 13. 83) μm at P14, ( 218. 78 ± 8. 21) (μm at P18, (195.42 ± 8. 02) μm at P21, (195. 74 ± 14. 85) μm at P24, (190. 79 ± 11. 70) um at P42. The retinal thickness measured through OCT decreased significantly during the first 3 weeks after birth. The results of OCT measurement had linear correlation with histology measurement ( R = 0. 794, P = 0. 000 ) . There was significant difference between Mrna expression of Bcl-2, Bax and Caspase-3 in pups from P14 to P42 ( F = 18.684, F=47. 307,F =49. 611 ;P =0.000). The relative expression of Bax and Caspase-3 peaked at P24 while Bcl-2 was much more stable. There were a lot of apoptotic cells in the ganglion cells layer, the inner nuclear layer and the outer nuclear layer during P18 to P24 by TUNEL staining. And the apoptosis alleviated at P42. Conclusions The retinal thickness decreases when the retina continues to develop during critical period plasticity. Cirrus HD-OCT can be used as an effective instrument to show the layers of retina in rat in vivo. Apoptosis participates in the course of retinal development which possibly leads to the thinning of retina.     

褪黑素对大鼠糖尿病视网膜病变的影响

目的： 探讨褪黑素对大鼠糖尿病视网膜病变的影响及其机制。

方法： 选用健康雄性SD大鼠40只,随机分为4组,正常对照组、糖尿病组、低剂量褪黑素组和高剂量褪黑素组,HE染色观察视网膜结构改变,电镜观察视网膜神经节细胞超微结构变化,黄嘌呤氧化酶法检测视网膜组织中超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平,Western Blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)及P53的蛋白表达水平。

结果： HE染色结果显示,正常对照组大鼠视网膜组织结构清晰,糖尿病组大鼠视网膜组织层次欠清晰,神经纤维层水肿,低剂量褪黑素组视网膜细胞分层基本分明,层间细胞排列较整齐,内外核层排列稍紊乱,高剂量褪黑素组大鼠视网膜组织结构较低剂量褪黑素组进一步改善; 电镜观察结果显示,与糖尿病组比较,褪黑素组大鼠视网膜神经节细胞形态均不同程度改善; 黄嘌呤氧化酶法检测结果显示,褪黑素组大鼠视网膜组织中SOD水平高于糖尿病组,MDA水平低于糖尿病组(均P<0.05); Western Blot结果显示,低、高剂量褪黑素组与糖尿病组比较,Bcl-2蛋白表达逐渐升高,Bax、P53蛋白表达明显降低(均P<0.05)。

结论：褪黑素可改善糖尿病大鼠视网膜形态变化,对糖尿病视网膜病变有一定抑制作用。     

Colivelin对视神经保护作用的初步研究

目的初步探讨Colivelin对大鼠外伤性视神经损伤后的神经保护作用和机理,及其保护效果是否具有剂量依赖性。方法 40只健康2月龄Wistar大鼠,随机分为模型组、安慰剂组及Colivelin低剂量组(10-6 μmol·L-1 Colivelin)、Colivelin中剂量组(10-4μmol·L-1Colivelin)、Colivelin高剂量组(10-2 μmol·L-1 Colivelin),每组8只。40只大鼠均做单侧视神经损伤模型,模型组另一侧未做任何处理的8眼为空白对照组。应用无创血管夹建立大鼠视神经夹伤模型,造模后30 min Colivelin治疗组玻璃体内分别注射不同浓度Colivelin 5 μL,安慰剂组注射5μLPBS缓冲液,模型组和空白对照组不给予任何治疗。注药后7d,通过视网膜切片技术,进行HE染色观察视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的形态及数目,TUNEL染色法检测RGC的凋亡以及免疫组织化学法检测视网膜中caspase-3的表达。结果 HE染色可见空白对照组视网膜各层细胞排列整齐密集,模型组、安慰剂组、Colivelin治疗组均可见部分RGC核固缩,但随着Colivelin注射浓度的增加,RGC发生核固缩的数量减少。RGC计数:空白对照组每400倍光镜视野下RGC数量为25.750±1.264,模型组为8.236±1.239,安慰剂组为8.514±1.222,Colivelin低剂量组为14.500±1.021,Colivelin中剂量组为16.250±1.319,Colivelin高剂量组为18.097±1.323,除模型组与安慰剂组之间差异无统计学意义(P>0.05)外,其他各组之间差异均有统计学意义(均为P<0.05)。TUNEL染色:模型组和安慰剂组注药后7 d TUNEL染色可见大量凋亡细胞,Colivelin治疗组凋亡细胞数量随Colivelin注射浓度的增加依次递减。RGC细胞凋亡率:模型组为(60.928±2.961)%,安慰剂组为(61.446±2.755)%,Colivelin低剂量组为(58.432±2.835)%,Colivelin中剂量组为(51.948±2.802)%,Colivelin高剂量组为(47.656±2.331)%。Caspase-3表达:模型组、安慰剂组及Colivelin低剂量组、中剂量组、高剂量组均可见caspase-3表达。平均光密度值显示,模型组和安慰剂组相比caspase-3表达无明显差异(分别为0.482±0.012和0.486±0.012),均高于Colivelin治疗组(均为P<0.05),并且Colivelin低剂量组、中剂量组、高剂量组组间差异亦均有统计学意义(分别为0.411±0.017、0.326±0.018、0.234±0.016;均为P<0.05)。结论 Colivelin能有效增加视神经损伤后RGC的数量,抑制其凋亡,减少caspase-3表达,且这一作用呈剂量依赖性。     

小胶质细胞介导的炎症反应在衣霉素所致的小鼠视网膜损伤中的作用

目的　探讨小胶质细胞介导的炎症反应在衣霉素所致的小鼠视网膜损伤中的作用。方法　取50只C57/BL6J小鼠,随机分为5组,每组10只;DMSO组给予小鼠玻璃体内注射DMSO溶液1 μL;衣霉素低剂量组给予小鼠玻璃体内注射50 mg?L^-1衣霉素1 μL,衣霉素中剂量组注射100 mg?L^-1衣霉素1 μL,衣霉素高剂量组注射150 mg?L^-1衣霉素1 μL;对照组给予相同条件下喂养。采取小鼠玻璃体内注药建模后,分别进行OCT检查及HE染色观察小鼠视网膜组织形态改变;进行闪光视网膜电图检测评估视网膜视功能;免疫荧光染色及Western blot检测视网膜中Iba1及IL-6的表达情况。结果　与对照组相比,衣霉素低剂量组视网膜各层结构紊乱,视网膜外层呈波浪状改变,并出现细胞核排列紊乱;衣霉素中剂量组及高剂量组视网膜各层结构紊乱更加明显,并出现神经上皮与色素上皮的浅层脱离,IS/OS层及外丛状层消失。造模后第7天,闪光视网膜电图结果显示:对照组与DMSO组a波及b波振幅无差异;与对照组相比,衣霉素低剂量组、中剂量组及高剂量组a波、b波振幅下降,且呈剂量依赖性,其中a波振幅下降更为明显,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与对照组相比,衣霉素低剂量组、中剂量组及高剂量组视网膜内核层及外核层中Iba1表达量明显增多,且呈剂量依赖性（均为P<0.05）;IL-6视网膜中呈现与Iba1相似的表达。结论　小胶质细胞参与衣霉素所致的小鼠视网膜损伤过程,并产生相关炎症因子引起视网膜功能及结构改变。     

不同剂量N-乙酰-5-羟色胺（NAS）对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜细胞凋亡的影响

目的　探讨不同剂量N-乙酰-5-羟色胺（N-acetylserotonin,NAS）对视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI）大鼠视网膜细胞凋亡的影响。方法　成年SD大鼠随机分为正常对照组、RIRI 组和 NAS 组。采用高眼压法建立RIRI大鼠模型。NAS组按照给药剂量的不同分为NAS低剂量组（5 mg·kg^-1）、NAS中剂量组（10 mg·kg^-1）和NAS高剂量组（20 mg·kg^-1）,造模前后30 min腹腔注射NAS。HE染色法观察各组大鼠视网膜形态学的改变,免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜中活性Caspase-3的表达,TUNEL法检测各组视网膜细胞凋亡的变化。结果　HE染色结果显示,NAS中剂量组大鼠视网膜各层细胞排列最整齐,视网膜内层厚度［（53.24±1.68）μm］显著薄于RIRI组［（60.54±2.52）μm］及NAS低剂量组［（56.78±1.78）μm］（均为P<0.01）,NAS中剂量组视网膜神经节细胞数［（1113.65±74.40）个·mm^-2］显著多于RIRI组［（719.89±83.67）个·mm^-2］及NAS低剂量组［（882.09±55.62）个·mm^-2］（均为P<0.01）。免疫组织化学结果示,视网膜中活性Caspase-3阳性细胞数RIRI组［（246.08±19.23） 个·mm^-2］及NAS低、中、高剂量组［（196.95±19.83）个·mm^-2、（142.77±18.25）个·mm^-2、（133.10±15.19）个·mm^-2］均显著多于正常对照组［（95.37±10.93）个·mm^-2］（均为P<0.01）;NAS中剂量组视网膜中活性Caspase-3阳性细胞数量显著少于RIRI组及NAS低剂量组（均为P<0.01）。TUNEL检测结果显示,TUNEL阳性细胞数RIRI组［（225.45±18.93）个·mm^-2］及NAS低、中、高剂量组［（175.06±17.69）个·mm^-2、（108.85±13.41）个·mm^-2、（100.37±13.53）个·mm^-2］均多于正常对照组［（81.98±11.29）个·mm^-2］（均为P<0.01）;NAS中剂量组视网膜TUNEL阳性细胞数显著少于RIRI组及NAS低剂量组（均为P<0.01）。结论　腹腔注射NAS治疗可减轻RIRI大鼠视网膜细胞凋亡,具有神经保护作用,中剂量NAS治疗方案最佳。     

硫辛酸烟酸二联体对蓝光致大鼠视网膜损伤的防治作用

目的:探讨硫辛酸烟酸二联体(N2L)对蓝光致SD大鼠视网膜损伤的防治作用及最佳药物剂量,探寻其可能存在的保护机制。方法:选取150-200 g的SPF级雄性SD大鼠36只,随机分为正常对照组、蓝光损伤组、N2L低剂量组(1.0 mg/kg)、N2L中剂量组(2.5 mg/kg)、N2L高剂量组(5.0 mg/kg)及生理盐水组,每组各6只。正常对照组12 h明暗循环饲养,其余组每日接受9 h日常光照,3 h波长455 nm、强度3000±50 lx蓝光照射及12 h黑夜来建立损伤模型,持续14 d。同时每日腹腔注射1 mL对应剂量的药物。14 d后,所有组常规12 h明暗循环再饲养5 d,采用视网膜电图检查。过量麻醉法处死大鼠制备标本,HE染色,在光学显微镜下观察外核层厚度;CheKine^TM超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒检测SOD活性;Western Blot检测大鼠视网膜Caspase-3、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、Bcl-2和Bax蛋白表达量。结果:蓝光损伤组暗视ERG 3.0、10.0 (cd·s)/m^2<...     

半胱氨酸蛋白酶3、bax和bcl-xl在N-甲基-N亚硝酸脲诱导的大鼠视网膜损伤后的表达

目的 观察N-甲基-N亚硝酸脲（MNU）诱导的大鼠视网膜损伤过程中凋亡相关分子半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、bcl-2相关X蛋白（bax）和B细胞淋巴瘤/白血病-xl（bcl-xl）在视网膜中的时空表达,探讨其在MNU诱导的视网膜损伤中的作用。方法 将鼠龄50 d的30只SPF级雌性SD大鼠随机分为MNU模型组（24只大鼠）和正常对照组（6只大鼠）。模型组按40 mg/kg的剂量腹腔注射MNU建立MNU模型;正常对照组大鼠腹腔注射生理盐水5ml/kg。模型组大鼠根据MNU注射后不同处死时间再分为1、3、7、10 d组,每小组各6只大鼠。正常对照组大鼠注射后3 d处死。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组视网膜中caspase-3、bax和bcl-xl的基因表达情况;免疫荧光技术检测其在视网膜中的表达以及分布的变化,并用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导dUTP 缺口末段标记（TUNEL）法检测视网膜细胞凋亡的变化。结果经病理学检测确定造模成功。RT-PCR检测结果表明,［与正常对照组相比（caspase-3和bax的相对吸光度（RA）值为62.45±7.65、46.53±4.41］,MNU模型1 d 组caspase-3（83.23±8.11,P=0.009）和bax（72.73±9.46,P=0.004）的表达均增强,3 d 组二者表达水平均最高 （caspase-3 RA =140.48±18.40,P=0.000;bax- RA=102.36±13.97,P=0.001）,10 d 组caspase-3的表达水平（RA =47.32±5.37,P=0.027）低于对照组,而10 d bax的表达 （RA=48.27±4.40,P=0.997）基本恢复至对照组水平;bcl-xl在4个造模组中的表达水平（1 d RA =63.29±4.29,P=0.000;3d RA =79.83±5.58,P=0.000;7 d RA=70.19±4.42,P=0.000;10 d RA =66.05±4.97,P=0.000）均高于正常对照组（RA =45.98±3.06）,3 d 组的表达水平最高。MNU诱导后1、3、7 d 组的bax/bcl-xl比值（1 d为1.15±0.14,P=0.143;3 d为1.28±0.16,P=0.001;7 d为1.17±0.08,P=0.079）大于对照组（1.01±0.09）,其中3 d组的比值最大,但10 d 组bax / bcl-xl比值（0.73±0.07,P=0.001）小于对照组。免疫荧光检测结果显示,caspase-3、bax和bcl-xl的表达变化分别与其RT-PCR检测结果一致;正常对照组在视网膜各层均未发现凋亡细胞,MNU 1 d 组的外核层可检测到大量凋亡细胞核［凋亡率（AI）为34.96±3.44,P=0.000］,3 d 组的外核层检测的凋亡细胞最多（AI=76.97±5.83,P=0.000）,10 d 组未检测到凋亡细胞。结论 MNU诱导的视网膜光感受器细胞凋亡可能是通过上调caspase-3及引起bax/bcl-xl表达失衡并明显倾向促进细胞凋亡造成的。     

N-乙酰半胱胺酸对大鼠挫伤性视网膜病变的保护作用

目的:研究凋亡相关基因Bcl-2/Bax在大鼠挫伤性视网膜病变中的表达,以及N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)对其表达的影响。方法:自由落体法制作视网膜挫伤模型。将SD大鼠随机分为正常组6只、模型组24只及治疗组24只。每组按挫伤后不同时间段分为1,3,7,14d,每个观察时段6只大鼠。HE染色光镜观察视网膜组织学变化,应用SABC免疫组织化学法检测大鼠视网膜挫伤后视网膜组织Bcl-2/Bax蛋白表达的变化。结果:挫伤性视网膜病变的损害主要集中在神经纤维层。挫伤后视网膜组织水肿,细胞紊乱,胞浆空泡样变,视网膜组织变薄,细胞丢失。NAC治疗组视网膜水肿程度有所改善,细胞紊乱,胞浆空泡样变,细胞丢失有所恢复。正常组及NAC治疗组视网膜组织Bax均未见表达,Bcl-2低表达。视网膜挫伤后1d时Bax表达开始增多,3d强阳性表达,7d表达有所减少,14d时表达进一步减少。Bcl-2低表达,未见明显变化。NAC治疗组各观察指标变化趋势基本与视网膜挫伤组相似,但表达明显减弱,两组相比较,于挫伤后1,3d和7d时差异有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2在各时段的表达均较模型组有所增强,两组相比较,于挫伤后1,3d和7d时差异有统计学意义(P<0.01)。结论:在大鼠挫伤性视网膜病变中,NAC能够改善视网膜组织病理学损害并通过调节Bcl-2/Bax蛋白表达而抑制细胞凋亡,对视网膜挫伤具有保护作用。     

复方中药散结明目片对兔玻璃体积血所致增生性玻璃体视网膜病变的作用

目的:探讨复方中药散结明目片对玻璃体积血兔玻璃体及视网膜匀浆中IL-6含量、积血吸收及增殖膜形成的抑制作用。方法:兔自体血造成玻璃体积血模型,设空白组、模型组、和血明目片组、散结明目片高、中、低剂量组,6wk后B超观察积血及增殖膜情况,用ELISA法检测各组玻璃体及视网膜中IL-6含量。结果:B超示散结明目片高、中剂量组积血消散明显优于低剂量组及和血明目片组,未形成增殖膜。散结明目片各剂量组及和血明目片组兔玻璃体及视网膜匀浆中IL-6含量较空白组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),较模型组含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。散结明目片高、中剂量组IL-6含量明显低于低剂量组及和血明目片组,差异有统计学意义(P<0.05),与和血明目片组及模型组相比,散结明目片高、中剂量组对机化条索及增殖膜有不同程度的抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:复方中药散结明目片能促进积血吸收,抑制机化条索及增殖膜的形成。     

蛴螬提取物对兔脉络膜新生血管VEGF和bFGF表达的影响

目的:评价蛴螬提取物对有色家兔脉络膜新生血管(cho-roidal neovascularization,CNV)血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的抑制作用。方法:有色家兔40只,实验组32只,空白对照组8只。实验组兔通过倍频Nd:YAG激光(波长为532nm)眼底光凝方式建立CNV模型。光凝后立即随机分为4组,每组8只(16眼),分别为实验对照组、维生素E治疗组、驻景丸加减方治疗组、蛴螬提取物治疗组。激光光凝后7,14,21,28d各组兔均行眼底照相观察、荧光素眼底血管造影(FFA)和光学相干断层扫描(OCT)检查。分别于光凝后14、28d两次处死,每次随机选取动物4只(8眼),检查完后空气注射处死动物摘取眼球后节行组织病理学检查,行VEGF和bFGF免疫组织化学分析,并行透射电镜观察,以评估蛴螬提取物对CNV的抑制效果。结果:光凝后14d,实验组CNV的生成率分别为47.9%、41.7%、43.3%和28.6%,经χ2检验,CNV生成率治疗组较对照组均降低(P<0.05),且蛴螬提取物组最低,与另外3组比较有统计学意义(P<0.05)。光凝后28d,光凝区纤维血管组织增生(FVP)厚度治疗组较对照组显著变薄(P<0.05)。且视网膜脉络膜巩膜切片新生血管定量分析及组织学切片,透射电镜观察结果显示实验治疗组CNV的生成与对照组相比均减少,差异有统计学意义(P<0.05);且蛴螬提取物治疗组表达低于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:蛴螬提取物可以抑制实验性CNV中VEGF和bFGF的表达,从而可以抑制实验性CNV的形成。