CYP21A2基因复合杂合突变及多基因突变的男性无精症一例并文献复习

CYP21A2基因突变可引起21-羟化酶缺乏症,导致先天性肾上腺皮质增生症和性腺发育异常。根据CYP21A2基因突变位点不同,21-羟化酶缺乏症的临床表型存在异质性,成年患者常以生育障碍为首诊原因。CYP21A2基因突变同时合并多基因突变的复杂病例,国内外尚少见报道。报道1例CYP21A2基因c.518T>A/c.293-13A>G复合杂合突变的男性无精症病例,该患者合并DNAJB13/DNAI1/QRICH2J/FSIP2/HYDIN多基因突变,临床表型为男性不育症,经3个月糖皮质激素治疗后获得生精功能。该病例丰富了有关男性不育症的基因型,也为此类复合杂合基因突变疾病的诊治提供了临床经验。     

354例男性无精子症患者睾丸活检的病理形态学分析

目的：探讨男性不育患者睾丸活检的组织病理形态学特征及在男性不育诊治中的临床及病理意义。方法镜检观察我生殖中心2009-2012年间354例男性不育患者睾丸组织活检,分别依据睾丸生殖病理及Johnsen评分法[1]进行诊断并进行分析。结果①我中心一直以来依据睾丸生殖病理进行诊断,睾丸活检结果分析：其中202例为唯支持细胞综合征（57.06%）;56例为生精阻滞（15.8%）,其中54例阻滞在精母细胞阶段,2例阻滞在精子细胞阶段;50例为生精细胞脱落和生精细胞排列紊乱（14.12%）;30例为混合损害型（8.47%）;9例以支持细胞综合征为主伴生精阻滞（2.54%）;4例为透明变（1.13%）性;2例大部分组织透明变性,少数管腔见少数支持细胞（0.57%）;1例为附睾组织（0.28%）。②回顾性复习切片,按Johnsen评分法进行诊断分析：精子发生功能减低（8-9分）50例;精子细胞分化障碍的（6-7分）2例;初级精母细胞成熟受阻的（4-5分）54例;唯支持细胞综合征还（2分以下）209例。还有一些病例按Johnsen评分不能准确进行生精功能评定。30例切片表现为生精细胞剥落和排列紊乱、唯支持细胞综合征及透明变性,比例不定,有的生精细胞剥落和排列紊乱为主,有的以唯支持细胞综合征为主,其中有2例仅2-4管腔见生精细胞及精子。9例切片表现以支持细胞综合征为主伴生精阻滞（阻滞在精母细胞）。结论睾丸活检可直接评价睾丸的生精功能以及生精障碍的程度,对不育患者的治疗及预后判断有实用价值,加之卵胞浆内单精子注射（ICSI）技术的成熟应用,在辅助生殖技术中有助于指导无精子症患者选择适当的治疗方法。     

先天性双侧输精管缺如伴生精功能障碍一例

先天性双侧输精管缺如（congenital bilateral absence of vas deferens,CBAVD）是梗阻性无精子症的常见原因之一,睾丸生精功能一般正常,除了常见的囊性纤维化穿膜传导调节蛋白（cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR）基因突变外,黏附G蛋白耦联受体G2（adhesion G protein-coupled receptor G2,ADGRG2）基因突变以及拷贝数变异也被认为是CBAVD的发病机制。本文报告1例CBAVD伴生精功能障碍的病例,睾丸组织病理学提示唯支持细胞综合征。全外显子组测序未发现该患者CFTR、ADGRG2以及无精子症相关基因存在致病变异,拷贝数变异分析也未发现有意义的拷贝数变异。该病例的确切遗传学病因尚未可知。CBAVD与生精功能障碍并存的临床现象,提示无精子症遗传病因的复杂性。     

利用白消安致BALB/c小鼠生殖毒性建立NOA疾病模型

目的利用白消安对BALB/c雄性小鼠生殖毒性,建立不同损伤程度的NOA(non-obstructive azoospermia,NOA)动物模型。方法本研究取6~8周龄性成熟的BALB/c雄性小鼠共45只,随机分为3组:0 mg/kg组、30 mg/kg组、40 mg/kg组,每组15只。每2周观察并记录小鼠体重,睾丸和附睾湿重,睾丸体积,及生精细胞损伤程度。通过HE染色,判断生精细胞受损情况;通过免疫组化技术检测受损生精细胞停滞的减数分裂阶段,该法主要借助生精细胞减数分裂过程中的三个标记蛋白:STRA8(Stimulated by Retinoic Acid 8,STRA8)减数分裂启动标记蛋白,SCP3(Synaptonemal Complex Protein 3,SCP3)减数分裂中标记蛋白,TNP1(Transition Protein 1,TNP1)减数分裂后标记蛋白。结果注射白消安后小鼠存活良好,注射白消安2周时,生精细胞开始损伤,30 mg/kg组轻于40 mg/kg组;4周时,40 mg/kg组呈唯支持细胞样变化;6-10周时,生精功能开始恢复,30 mg/kg组恢复明显快于40 mg/kg组;40 mg/kg组STRA8、SCP3、TNP1表达在注射4周最低,第8周开始恢复到正常水平。结论白消安40 mg/kg组单次注射4周时,可建立为唯支持细胞型NOA生精障碍模型;单词注射4-8周期间,可建立损伤程度不同的NOA生精障碍模型,为睾丸组织体外培养提供稳定的研究组织。     

LncRNAs与miRNAs在非梗阻性无精症中的研究进展

非梗阻性无精症（non-obstructive azoospermia,NOA）约占男性不育的10%～15%。然而,非染色体性NOA病因复杂,发病机制尚不清楚。精子生成过程受到转录因子、基因或信号通路的调控。其中长链非编码RNAs（lncRNAs）为长度大于200个核苷酸的调控性非编码RNA,通过转录、转录后修饰和表观遗传水平等多种机制调节基本的生化和细胞过程。微小RNAs（miRNAs）通过碱基互补配对的形式与mRNA结合,促使mRNA降解或阻碍其翻译,进而抑制目的蛋白的表达,在多种生物过程中发挥作用,包括发育、分化、细胞增殖和细胞凋亡。LncRNAs与miRNAs的异常表达可导致精子正常发育过程的紊乱。深入研究NOA相关的lncRNAs与miRNAs及其作用机制,有助于探讨NOA的病因和发病机制。     

从非阻塞性无精症患者睾丸组织中分离出生殖干细胞并在体外分化成单倍体生殖细胞

非阻塞性无精症（NOA）患者能够通过胞浆内单精子注射（ICSI）或圆形精细胞卵浆内注射（ROSI）成功受孕，大多数成熟障碍（MA）或睾丸支持细胞综合征（SCOS）患者的精子在初级精母细胞阶段培养生殖细胞获得单倍体细胞而受孕。生殖干细胞（GSC）在成熟精子生成和自我更新间保持平衡，GSC自我更新生成的精子细胞移至不育男性的输精管。起源于胚胎干细胞单倍体生殖细胞在卵圆精子阶段在体外自发分化，引导生殖细胞发育、改变和生殖腺基因的改变。     

基于生物信息学途径探究卵巢癌关键预后基因

目的应用生物信息学途径探究卵巢癌关键预后基因,有助于了解卵巢癌发生发展的分子机制,为卵巢癌患者提供新的治疗靶点。方法从基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)中下载浆液性卵巢癌上皮细胞和正常卵巢上皮细胞芯片数据GSE14407、GSE18520、GSE54388和GSE66957,用R语言软件筛选差异基因并得到共同差异基因。应用clusterProfiler软件对共同差异基因进行GO功能分析及KEGG通路富集分析。使用STRING建立蛋白互作用网络并使用cytoscape选出关键基因。采用survival包、survimner包对关键基因进行预后生存分析。结果经过筛选得到305个共同差异基因,其中250个基因表达上调,55个基因表达下调。共同差异基因主要富集于染色体分离、细胞周期G1/S转变、细胞黏附、细胞间连接、磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K-AKT)信号通路、Rap1信号通路、细胞增殖调控和粘附斑激酶信号通路等。蛋白互作用网络筛选得到14个关键基因,生存分析显示UBE2C基因的高表达导致卵巢癌患者的总生存率明显降低。结论UBE2C基因的表达与卵巢癌患者的总生存率密切相关,有望成为提高卵巢癌患者预后的新的生物学靶点。     

基于基因表达数据库（GEO）的大鼠中暑神经损伤mRNA表达差异分析

目的 基于基因表达数据库（GEO）分析大鼠中暑神经损伤的基因表达差异，探讨lncRNA-miRNA-mRNA共表达调控网络（ceRNA网络）参与中暑神经损伤的作用。方法 通过GEO数据库检索中暑相关数据集GSE64778获得差异表达基因（differential expression genes,DEGs），结合GeneCards和CTD数据库检索中暑相关靶基因，取交集筛选获得候选靶基因。采用R语言对中暑相关候选靶基因进行GO和KEGG富集分析；进一步STRING数据库构建靶基因的交互作用网络图，并对关键基因进行相关性分析获得核心基因。通过RNAInter、miRWalk及RAID2数据库对候选靶基因的上游miRNA进行预测，再利用miRDB数据库预测与lncRNA靶向结合的miRNA，筛选并构建lncRNA-miRNA-mRNA共表达调控通路。结果 GSE64778数据集的SRA数据筛选，共获得1 178个DEGs，其中322个上调，856个下调。GeneCards数据库筛选到2 914个基因，CTD数据库筛选到2 377个基因。将GSE64778数据集差异表达排名前300的基因，与...     

恶性肺结节差异表达基因的生物信息学分析

目的 应用生物信息学方法挖掘恶性肺结节的相关基因,为恶性肺结节诊断和治疗提供靶点。方法 从GEO (Gene Expression Omnibus) 数据库中下载基因芯片数据集GSE108375和GSE27489,利用GEO2R筛选恶性肺结节的差异表达基因 (DEGs)。应用DAVID数据库进行GO和KEGG通路富集分析,利用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白质相互作用网络和关键基因模块,筛选恶性肺结节关键基因。运用UCSC和ONCOMINE数据库中的临床组织样本验证靶基因与肺癌的关系。结果 初筛出62个DEGs,富集分析发现差异基因在细胞粘附、细胞迁移、受体激活、信号转导等方面存在显著富集。共筛选出ITGB2、RAC2、CD44、PECAM1、HCK、DOCK2、WAS、MYO1F、AIF1 9个恶性肺结节靶基因,经临床肺癌组织样本验证靶基因在肺癌组织中存在显著高表达。结论 通过生物信息学筛选出9个靶基因,表明其可能是恶性肺结节发病机制、临床诊断和治疗的研究靶点。     

不同病因非梗阻性无精子症患者心理健康状况调查

目的 探索不同病因非梗阻性无精子症(NOA)患者心理健康状况。方法 采用焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)、人格问卷简式量表(EPQ) 中国版、社会支持评定量表对石家庄市某医院要求供精辅助生殖的NOA患者为研究对象进行调查,并设立生育能力正常的男性人群为对照组,对不同病因的病例组人群及对照组人群心理健康状况进行分析。结果 本研究共纳入NOA患者200例,其中先天性NOA 53例,后天获得性NOA 42例,遗传性NOA49例,不明原因56例。生育能力正常男性(对照组)50名,病例组与对照组的年龄、婚龄、BMI、文化程度、户籍属性、职业及月均收入分布差异均无统计学意义(均P>0.05)。不同类型NOA患者SAS、SDS评分均高于对照组,社会支持评定量表得分低于对照组。不同类型NOA患者及对照组人群需要心理治疗发生率差异有统计学意义(P<0.01),后天获得性NOA和不明原因性NOA患者需要心理治疗发生率分别高达79.2%、73.2%。结论 NOA患者容易出现焦虑和抑郁等精神心理问题,不同原因导致男性NOA的心理健康状况不同,后天获得性和不明原因性NOA患者的心理状况堪忧。     

基于生物信息学分析癫痫脑内星形胶质细胞炎性激活机制

目的 挖掘癫痫脑内星形胶质细胞异常炎性激活的关键信号分子,为进一步阐明神经免疫促痫机理提供生物信息学基础。方法 NCBI GEO数据库获取癫痫动物模型（GSE73878）和星形胶质细胞炎性激活细胞模型（GSE73022）基因芯片结果,GEO2R在线筛选共有差异表达基因（DEGs）,DAVID数据库进行GO功能模块和KEGG通路富集分析,STRING数据库和Cytoscape软件构建DEGs蛋白质互作网络,多算法筛选Hub基因,最后利用GEPIA数据库在易发癫痫的低级别胶质瘤患者中验证。结果 两芯片交集共获得72个DEGs,主要富集在调控免疫反应、细胞因子活力等过程,病毒感染类似信号、Toll样受体信号等通路;59个基因可构成大的蛋白互作网络,其中24个基因组成核心模块,多算法筛选结合GEIPA数据库发现Gbp3、Ifit3、Irf7、Stat1是Hub基因。结论 癫痫脑内星形胶质细胞异常炎性激活与Gbp3、Ifit3、Irf7、Stat1等基因关系密切,其可能是调控癫痫脑内神经免疫促痫过程的新靶点。     

头颈癌核心基因筛选及其预后分析

目的 利用生物信息学方法,筛选与头颈癌发生发展相关的差异表达基因,并进行相关的预后分析,寻找头颈癌新的诊断标志物以及治疗靶点。方法 在GEO数据库中下载头颈癌相关数据集GSE83519,利用GEO2R分析其差异表达基因,并对其进行功能注释及通路富集分析。通过STRING网站与Cytohubba软件筛选核心基因。利用UALCAN在线网站筛选预后相关基因,并使用cBioPortal在线工具对预后相关基因在头颈癌中的基因突变进行分析。 结果 GEO2R分析结果显示,GSE83519筛选出371个差异表达基因,其中含240个上调基因和131个下调基因。功能富集分析结果表明,差异表达基因主要与对氧含量的反应,凋亡信号通路的负调控等有关。 通路富集分析表明差异表达基因主要涉及癌症通路,细胞凋亡通路等。Cytohubba软件筛选出25个核心基因,这些基因参与了结直肠癌,乳腺癌,食管癌等多个癌症的发生发展,其中CASP8、CXCL12、MMP9等基因已被证实与头颈癌发生风险相关。通过UALCAN网站发现四个核心基因IL6、CD28、HDAC1、ESR1与头颈癌的预后相关。cBioPortal分析结果显示,四个预后相关基因在头颈癌的发生发展中均存在基因突变。结论 本研究筛选出了四个与头颈癌预后相关的基因,这些基因在头颈癌中存在基因突变的现象,有望成为临床诊断及治疗的新靶点。     

头颈部鳞状细胞癌差异表达基因的生物信息学分析

目的:采用生物信息学技术挖掘头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)差异表达基因(DEGs)和信号通路,为HNSCC的治疗寻找新的治疗靶点。方法:从基因表达综合(GEO)数据库下载基因芯片数据集GSE6631,利用GEO2R筛选DEGs。采用注释、可视化和整合发现数据库(DAVID)对DEGs进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析;通过蛋白质相互作用的String数据库和Cytoscape软件构建DEGs对应的蛋白质相互作用网络,并从网络中筛选出核心基因。利用基因表达谱分析(GEPIA)网络服务器在线分析关键基因(Hub基因),制作箱线图比较核心基因在HNSCC肿瘤和正常组织的表达量及错误发现率(FDR),验证具有显著表达的核心基因。结果:共筛选出150个表达差异明显的基因,其中包括85个上调基因,65个下调基因。以P<0.05为筛选条件,上调基因富集到52个生物学过程及7条富集通路;下调基因富集到37个生物学过程及3条富集通路。所有DEGs共有49个生物学过程呈显著性富集(t=-0.033,P<0.05,FDR<0.05),6条富集通路呈显著性(FDR<0.05)。共计63个DEGs及322条互作关系的蛋白质相互作用网络,并选出degree值排名前10的DEGs作为核心表达基因,其在HNSCC组织中均为高表达。结论:采用生物信息学方法能有效分析HNSCC与正常组织DEGs,筛选出的10个DEGs,均为HNSCC发病过程中具有显著意义的生物标记物。     

基于基因测序和GEO数据挖掘探讨结核性溃疡的发病机制

 目的 通过生物信息学途径,挖掘结核性溃疡发生发展过程中的关键基因,为结核性溃疡的研究提供新思路。方法 选择课题组前期基因测序的数据集及基因表达综合数据库(GEO)下载的数据集GSE83456,利用R软件筛选出共同的差异表达基因,再对共同的差异基因进行基因本体论(GO)以及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。利用STRING及Cytoscape软件构建蛋白质与蛋白质相互作用(PPI)网络并进行可视性,使用cytoHubba插件进一步筛选出关键基因,用基因组富集分析(GSEA)进行验证。选取2021年7月—2022年3月某院住院的60例结核性溃疡患者及同期60例健康体检人员,利用逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)对血清中的关键基因进行验证。结果 筛选出共同的差异表达基因19个,主要富集在抗病毒免疫反应、单核细胞趋化性调节、干扰素-β等功能以及NOD样受体信号通路、感染性疾病等方面。分析PPI后筛选出GBP1作为关键基因,GSEA证实GBP1与结核性溃疡高度相关。qRT-PCR证实GBP1在结核性溃疡患者的血清中高表达,并在治疗2周后明显下降(均P＜0.001)。结论 GBP1可能成为结核性溃疡诊断的生物学标志物以及治疗的潜在靶点。     

生物信息学分析缺血性脑卒中的差异表达基因

目的 基于生物信息学,对缺血性脑卒中（IS）相关差异表达基因（DEGs）进行分子层面的分析,深入分析IS的发病机制和关键基因。方法 从GEO数据库下载与IS相关的生物基因芯片,基于P值及 log |FC|值对GEO原始数据进行筛选,确定DEGs。对DEGs进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,了解 DEGs介导的生物过程与代谢通路。利用String在线平台,构建 DEGs的蛋白相互作用（PPI）网络。利用cytoscape的cytoHubba软件,找出IS的关键基因。结果 本研究共筛选出110个DEGs。功能和通路富集结果显示,上述基因参与MAPK、NF - kappa B、TNF等多种细胞因子和趋化因子的信号转导通路;共同介导炎症以及免疫应答、细胞凋亡等相关生物过程。PPI网络显示,这些基因之间具有相互作用关系。JUN、CXCL2和TNF为IS病理过程中的关键基因。结论 本研究结果揭示,IS的发生发展与炎症密切相关。针对关键基因进行靶向治疗,如JUN、CXCL2和TNF,或许对临床防治IS具有重要的发展意义。     

Pre- and post-initiation modulating effects of green tea ingestion on rat hepatocarcinogenesis

The purpose of this study was to investigate the effects of green tea ingestion on hepatocarcinogenesis before and after its initiation. Male Sprague-Dawley rats were fed an AIN76A diet with or without green tea. Initiation was induced by a single dose (200 mg/kg) of diethylnitrosamine at week 4 and 0.02% (w/w) 2-acetylaminofluorene was supplied in the diets. The control group had free access to water for 13 weeks (CTR13). Tea infusion was provided from the beginning of the experiment for 13 weeks (PRE13) or from the post-initiation stage until week 13 (POST13). Three other groups (CTR24, PRE24 and POST24) were added to examine the longer-term effects (24 weeks) with the same experimental design. The percentage area of liver sections that were positive for hepatic placental glutathione S-transferase (GST-P), which was used as a marker of preneoplastic lesions, was smaller in PRE13 (20.2 ± 5.0%, mean ± SD) and POST13 (26.0 ± 4.8%) than in CTR13 (33.2 ± 5.8%, p<0.05). Over the longer period, the GST-P lesions were significantly smaller for both PRE24 and POST24 (21.6 ± 8.5% and 22.2 ± 4.0%, respectively) than for CTR24 (28.6 ± 5.1%, p<0.05), but there was no significant difference between PRE24 and POST24. The liver content of thiobarbituric acid reactive substances was significantly lower in the tea groups than in the controls (p<0.05). However, no significant differences were observed among groups of GST activity. The results show that tea consumption exhibits a stronger short-term initiation-inhibiting ability in liver carcinogenesis, but over a longer period, the preventive effects of green tea ingestion do not differ in post- and pre-initiation.     

通过基因表达谱芯片检测寻找德国小蠊抗药性的相关基因

目的通过比较德国小蠊野外抗性品系与敏感品系的基因表达差异,以筛选出抗性相关基因。方法根据NCBI数据库公布的德国小蠊所有已知序列信息,设计、合成oligo探针并点制基因芯片,利用该芯片对野外抗性品系与敏感品系德国小蠊进行表达谱检测,筛选与抗性相关的差异表达基因,并用实时定量RT-PCR进行确认。结果共筛选出差异表达基因5个,其中上调（ratio≥2）基因3个,分别为CYP6K1、alpha—amylase mRNA和aspartic protease precursor;下调（ratio≤0．5）基因2个,即allergen Blag 6．0101 mRNA和allergen Bla g 8 mRNA。结论通过自制的德国小蠊基因芯片能够筛选出差异表达基因,其中CYP6KI可能与抗性密切相关。