p,p'-DDE和β-BHC联合染毒对大鼠离体支持细胞脂质过氧化的影响

目的 研究p,p‘-DDE和β-BHC联合染毒对大鼠离体支持细胞脂质过氧化的影响.方法 通过离体培养SD大鼠支持细胞的四甲基偶氮唑盐(MTT)实验,确定后续实验的染毒剂量,p,p‘-DDE和β-BHC的染毒浓度均为10、30、50μmol/L,p,p‘-DDE β-BHC联合染毒浓度为10μmol/L p,p‘-DDE 10μmol/L β-BHC,30μmol/L p,p‘-DDE 30μmol/L β-BHC,50μmol/Lp,p‘-DDE 50μmol/L β-BHC,检测染毒后支持细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率、总超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量的变化.结果 50μmol/L的p,p‘-DDE、β-BHC均可使支持细胞的吸光度(A)值显著下降(P＜0.05).睾丸支持细胞LDH的漏出率随染毒浓度的增加而明显增加(P＜0.05),二者以不同浓度联合染毒时支持细胞LDH的漏出率均显著高于对应浓度的单独染毒(P＜0.05).不同浓度的p,p‘DDE、β-BHC及二者联合染毒均可使细胞内总SOD活力显著降低(P＜0.05)、MDA的含量增加(P＜0.05),且联合染毒时MDA的含量与二者单独染毒时相比均有显著增加(P＜0.05).结论 p,p‘-DDE、β-BHC单独和联合作用均可以引发睾丸支持细胞脂质过氧化,p,p‘-DDE和β-BHC对支持细胞的联合毒性作用具有一定的协同效应.     

溴氰菊酯诱导H4神经胶质瘤细胞凋亡机制研究

目的 研究溴氰菊酯(deltamethrin,DM)诱导H4神经胶质瘤细胞凋亡的神经毒作用机制.方法 将H4神经胶质瘤细胞分为对照组(给予1/1 000体积的DMSO)、DM组(给予10-5 mol/L的DM)、Ac-DEVD-CHO DM组(给予2.0 μmol/L的Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO和10-5 mol/L的DM).应用FACS420型流式细胞分析仪测定细胞凋亡率,以四肽化合物Ac-DEVD-pNa为底物检测Caspase-3活力,以免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达.结果 对照组凋亡及坏死细胞极少;DM组细胞凋亡率为(14.3±4.51)%,明显升高(P＜0.01);Ac-DEVD-CHO DM组的细胞凋亡率[(8.8±2.13)%]高于对照组而低于DM组(均P＜0.05).与对照组比较,DM组Caspase-3活力为0.304±0.025,蛋白表达为0.151±0.035,均明显增强(均P＜0.01);而Ac-DEVD-CHO DM组未见改变(P＞0.05).结论 DM对H4神经胶质瘤细胞具有细胞毒作用,使H4神经胶质瘤细胞Caspase-3活力增加,蛋白表达增加,促进细胞凋亡.     

P,P''''-DDE对睾丸支持细胞雄激素结合蛋白表达的影响

[目的]研究雄激素结合蛋白在P,P'-DDE致雄性大鼠生殖内分泌干扰过程中的作用机制。[方法]对大鼠睾丸支持细胞离体原代培养4-5 d;设溶剂(DMSO)及阴性对照,以终浓度为30、50、80、100 μmol／L的P,P'-DDE作用于支持细胞24h,计数200个细胞,计算支持细胞存活率;分别以浓度为10、30、50 μmol/LP,P’-DDE作用于支持细胞24h, 运用一步法RT-PCR检测支持细胞内雄激素结合蛋白基因mRNA水平。[结果]P,P'-DDE在50μmol／L及以下浓度作用 24 h后,支持细胞存活率>90％,而80μmol/L组仅45％;染毒24 h后,对照组及10、30、50 μmol/L的P,P’-DDE组支持细胞内雄激素结合蛋白mRNA灰度比值分别为0．3140±0．1020、0．3920±0．0949、0．5837±0．1221、0．6490±0．1718,随 p,p'-DDE所给浓度的增高而逐渐升高,且30、50 μmol/L组与对照组差异存在显著性(P<0．05),呈剂量依赖关系。[结论] p,p'-DDE作用于睾丸支持细胞后,雄激素结合蛋白基因转录水平可明显升高,从而表达增强,促进雄激素结合蛋白的生成,代偿性地维持生精过程。     

p,p'-DDE对离体培养的大鼠睾丸支持细胞内钙离子的影响

目的 研究p,p'-DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell)细胞内钙离子的影响.方法从大鼠睾丸组织中分离支持细胞并进行离体原代培养,设空白对照组、溶剂对照组和低、中、高剂量p,p'-DDE染毒组(10、30、50 μmol/L),然后以Fura-2/AM为钙探针,用细胞内双波长钙荧光系统通过测定荧光值计算细胞内钙离子浓度的变化.结果 高剂量组支持细胞中Ca2+浓度高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 p,p'-DDE可干扰支持细胞内钙离子稳态,造成钙的超负载.钙离子稳态失衡可能诱导支持细胞凋亡,最终可能导致生殖功能障碍.     

p，p＇-DDE、β-BHC对大鼠支持细胞FasL mRNA表达及NF-κB活性的影响

[目的]研究有机氯农药DDT和六六六的代谢产物（p，p＇-DDE）和β-BHC及联合染毒对离体培养大鼠支持细胞（sertoli cell）FasL mRNA表达及NF—κB活性的影响。[方法]分离大鼠睾丸支持细胞进行原代培养2d，以DMSO为溶剂对照，分别以终浓度为10、30、50μmol／L的p，p＇-DDE、β-BHC及联合染毒支持细胞24h，应用RT-PCR法研究支持细胞FasL mRNA的表达；用激光共聚焦显微镜检测NF—κB的转位激活状况。[结果]10、30、50μmol／L的p，p＇-DDE、β-BHC及其联合染毒支持细胞后，FasL mRNA表达升高，50μmol／L剂量组与对照组差异有统计学意义（P〈0．05），各组内低、中剂量组与高剂量组差异有统计学意义（P〈0．05）；NF-κB活性明显增强。[结论]支持细胞经p，p＇-DDE、β-BHC及其联合染毒后，FasL mRNA表达明显升高，NF—κB的活性随染毒剂量的增加而增强，且联合作用比单独作用更加明显。     

镉对人肝癌细胞增殖及凋亡影响

目的 研究镉对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响及其作用机制.方法 体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721分别以0、40、80、160 μmol/L的CdCl2处理0～48 h,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞相对存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,分光光度法检测半胱天冬酶Caspase-3酶活性的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(western blot)法测Caspase-3 mRNA和蛋白表达的变化.结果 随着镉处理浓度的增加,氯化镉对细胞活力的抑制作用明显增强,40、80、160 μmol/L氯化镉处理SMMC-7721细胞,其抑制率分别为33.94％、48.04％和68.54％,均明显高于0 μmol/L氯化镉处理组,差异均有统计学意义(P＜0.01);40、80、160 μmol/L镉处理组细胞的凋亡百分率分别为(25.77±4.66)％、(34.97±9.25)％和(55.14±5.67)％,与0 μmol/L镉处理组比较明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01);镉处理SMMC-7721细胞24和48 h,Caspase-3相对酶活性均随着镉浓度的增加而明显增强;40 μmol/L镉处理SMMC-7721细胞,12、24和48 h可明显上调细胞中Caspase-3基因及蛋白的表达,Caspase-3基因mRNA表达水平分别为对照组的4.1、3.7和3.9倍,Caspase-3蛋白表达分别为对照组的5.8、6.0和7.2倍.结论 镉能明显抑制人肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,Caspase-3基因在镉诱导SMMC-7721细胞凋亡过程中起着重要的作用.     

DNA依赖蛋白激酶抑制剂对1,4-苯醌诱导的非p53依赖的HL60细胞凋亡的影响

目的 探讨DNA依赖蛋白激酶(DNA-PK)抑制剂NU7026和渥曼青霉素(Wortmannin)对1,4-苯醌(1,4-BQ)诱导的人早幼粒白血病细胞(HL60)细胞凋亡的影响.方法 HL60细胞分为染毒组(0、5、10、25和50μmol/L1,4-BQ染毒24 h)和NU7026 、Wortmannin预处理组(10μmol/L NU7026、25μmol/L Wortmannin分别预处理1h后以0、5、10、25和50 μmol/L 1,4-BQ染毒24 h),用流式细胞仪Annexin V/PI双染法和DNA Ladder法分析检测细胞凋亡水平.将HL60细胞分为空白对照组、NU7026处理组(10 μmol/L)、Wortmannin处理组(25 μmol/L)、1,4-BQ染毒组(10 μmol/L)、NU7026+1,4-BQ组(10μmol/L NU7026预处理1h,以10 μmol/L 1,4-BQ染毒24 h),25 μmol/L Wortmannin+1,4-BQ组(25μmol/L Wortmannin预处理1h,以10 μmol/L 1,4-BQ染毒24 h),用real-time PCR法检测Bax mRNA基因表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HL60细胞的p53蛋白表达.结果 流式细胞仪Annexin V/PI双染法结果显示,NU7026+10 μmol/L 1,4-BQ处理组细胞凋亡率为17.6％±1.19％,Wortmannin+ 10μmol/L 1,4-BQ处理组细胞凋亡率为15.2％±1.22％,两组细胞凋亡率均高于10 μmol/L 1,4-BQ染毒组(6.3％±1.04％);NU7026+25tμmol/L1,4-BQ处理组细胞凋亡率为46.2％±3.55％,Wortmannin+25 μmol/L1,4-BQ处理组细胞凋亡率为26.9％±2.62％,两组细胞凋亡率均明显高于25 μmol/L 1,4-BQ染毒组(14.1％±1.54％);NU7026+50 μmol/L1,4-BQ处理组细胞凋亡率为61.8％±1.78％,明显高于50 μmol/L1,4-BQ染毒组(35.9％±4.51％),以上各组的差异均有统计学意义(P＜0.05).DNA Ladder法结果与流式细胞仪检测数据基本一致.与NU7026组和1,4-BQ染毒组比较,NU7026+1,4-BQ组Bax mRNA表达水平升高;与Wortmannin组和1,4-BQ组比较,Wortmannin+1,4-BQ组Bax mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测HL60细胞不表达p53蛋白.结论 DNA-PK抑制剂NU7026和Wortmannin促进1,4-BQ诱导的非p53依赖的HL60细胞凋亡.     

甲基汞致人肝细胞株HL-7702凋亡及相关机制

目的 研究甲基汞对体外培养的人肝细胞株HL-7702的凋亡作用及其机制.方法 实验分为阴性对照组及甲基汞受试物组,甲基汞的浓度分别为10、20、30、40、50 μmol/L.采用丫啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)染色法和流式细胞技术检测甲基汞对细胞凋亡的影响;流式细胞技术检测甲基汞对细胞线粒体膜电位的影响;免疫细胞化学方法 检测甲基汞对凋亡相关蛋白表达的影响.结果 不同浓度氯化甲基汞作用24 h均可诱导细胞凋亡,AO/EB染色法检测阴性对照组细胞凋亡率为(2.62±0.19)%,10～50μmol/L 甲基汞受试物组细胞凋亡率分别为(7.97±0.64)%、(12.66±0.76)%、(19.16±0.87)%、(18.42±0.88)%、(11.52±0.63)%,各剂量组细胞凋亡率明显高于对照组(q值分别为17.057、32.009、52.732、50.373、28.375;P＜0.05).随着作用浓度的升高细胞线粒体膜电位明显下降,阴性对照组线粒体膜电位为(10.23±3.43)mV,10～50 μmol/L 甲基汞受试物组线粒体膜电位分别为(3.25±0.66)、(3.03±0.35)、(1.68±1.26)、(1.69±1.13)、(1.77±0.88)mV,各剂量组明显低于对照组(q值分别为9.569、9.871、11.722、11.708、11.598;P＜0.05).随着甲基汞作用浓度的升高 Bax、Bel-2、CytC、Caspase-3 及AIF表达有上升的趋势,且Bax/Bcl-2值升高.阴性对照组Bax表达的积分吸光度值(IOD)为21 295.86±1969.81,10、20、30μmol/L 组Bax表达的IOD分别为42 807.87±4416.64、55 651.65±4662.72、72 708.56±910.10,各剂量组明显高于对照组(g值分别为14.191、14.320、33.917;P＜0.05);阴性对照组Bcl-2表达的IOD为12 588.33±4091.02,10、20、30μmol/L组Bel-2表达的IOD分别为20 539.16±4906.09、23 689.97±2281.42、28692.80±4655.86,各剂量组明显高于对照组(g值分别为4.322、6.035、8.754;P＜0.05);阴性对照组AIF表达的IOD为12 942.72±457.94、10、20、30、40μmol/L组AIF表达的IOD分别为16 973.57±1922.87、29 998.91±6803.58、52 467.16±1916.25、106 342.53±1273.19,20、30及40 μmol/L组明显高于对照组(q值分别为11.449、26.530、62.692;P＜0.05).结论 甲基汞可以通过线粒体通路诱导体外培养的人肝细胞株HL-7702发生凋亡.     

双酚A对大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的 研究双酚A (bisphenol A,BPA)对离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)及相关凋亡基因表达的影响.方法 将睾丸支持细胞分别暴露于0(溶剂对照)、30、50、70 μmol/L的BPA.采用MTT法检测离体培养细胞活力,采用RT-PCR的方法检测p38 MAPK、caspase-3、FasL、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α) mRNA的相对表达情况,采用western-blotting的方法检测细胞中P38 MAPK、磷酸化P38 MAPK和caspase-3酶原蛋白的表达情况.结果 与溶剂对照组相比,30 μmol/L BPA组支持细胞p38 MAPK mRNA的相对表达量升高,而50 μmol/L BPA组p38 MAPK的表达明显降低(P＜0.05);各浓度BPA染毒组caspase-3mRNA的相对表达量均较高(P＜0.05);仅50 μmol/L BPA组TNF-α mRNA的相对表达量增加(P＜0.05);50、70 μmol/LBPA组FasL mRNA的相对表达量增加(P＜0.05);各剂量BPA染毒组总P38MAPK蛋白的相对表达量无显著变化;50和70 μmol/LBPA组磷酸化P38 MAPK蛋白的相对表达量均明显升高(P＜0.05);仅70 μmol/L BPA组caspase-3酶原蛋白的相对表达量下降(P＜0.05).结论 BPA可激活离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞p38 MAPK,并诱发caspase-3活化,导致细胞凋亡,这可能是通过FasL凋亡途径介导的.     

p,p'-DDE对大鼠睾丸支持细胞细胞外信号调节激酶转导通路影响的机制研究

目的 研究p,p'-DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell)内的细胞外信号调节激酶(ERK)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路影响机制.方法从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养,分别以0、10、30、50μmol/L的p,p'-DDE染毒,用MTT比色法、SABC法和Western ...     

p,p’-DDE和β-六氯化苯对青春期大鼠睾丸组织波形蛋白和N-钙粘蛋白及卵泡刺激素受体mRNA和蛋白表达的影响

目的研究p,p’-DDE、β-六氯化苯(β-benzene hexachloride,β-BHC)联合染毒对青春期大鼠睾丸组织波形蛋白(Vimentin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)和卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)mRNA和蛋白表达的影响。方法将20只50日龄清洁级雄性SD大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(玉米油)组和p,p’-DDE(100 mg/kg)单独染毒组、β-BHC(100 mg/kg)单独染毒组、p,p’-DDE(100 mg/kg)+β-BHC(100 mg/kg)联合染毒组,每组5只。采用腹腔注射方式进行染毒,注射容积为10 ml/kg,隔天1次,连续进行10 d。采用Real-time PCR检测大鼠睾丸组织Vimentin、N-cadherin、FSHR mRNA的表达;采用Western Blot法检测Vimentin、N-cadherin、FSHR蛋白的表达。结果与对照组相比,β-BHC单独染毒组和p,p’-DDE+β-BHC联合染毒组大鼠睾丸组织Vimentin、FSHR mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与p,p’-DDE+β-BHC联合染毒组相比,p,p’-DDE和β-BHC单独染毒组大鼠睾丸组织Vimentin mRNA的表达水平均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,p,p’-DDE和β-BHC单独和联合染毒组大鼠睾丸组织Vimentin、N-cadherin、FSHR蛋白的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。而p,p’-DDE和β-BHC单独和联合染毒组大鼠睾丸组织Vimentin、N-cadherin、FSHR mRNA和蛋白的表达水平间比较,差异均无统计学意义。结论 p,p’-DDE、β-BHC暴露可降低青春期大鼠睾丸组织中Vimentin、N-cadherin、FSHR的表达水平。     

PCB153对INS-1细胞毒性作用及机制

目的 探讨2,2＇,4,4＇,5,5＇-六氯联苯(PCB153)对体外培养胰岛β细胞株(INS-1)细胞毒性作用及机制.方法 PCB153设3个剂量组(1、3、6μmol/L),二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照组,染毒INS-1细胞24 h后,检测细胞存活率、凋亡、活性氧(ROS)水平、Caspase 3和Caspase 12等凋亡相关基因表达水平.结果 3、6 μmol/L PCB153剂量组细胞存活率分别为(80.9±8.7)％和(42.2±4.3)％,与对照组比较均有下降(P＜0.05);3μmol/L PCB153剂量组ROS为(9.2±0.4)、凋亡率为(30.7±3.4)％,6μmol/L PCB153剂量组ROS为(13.7±1.6)、凋亡率为(40.4±1.3)％,与对照组比较,ROS水平和细胞凋亡率均增加(P＜0.05);与对照组比较,3 μmol/L PCB153剂量组Caspase 3及3、6μmol/L PCB153剂量组Caspase 12基因表达水平均有增加(P＜0.05).结论 PCB153可诱导INS-1细胞凋亡,氧化应激和内质网信号通路可能参与PCB153对INS-1细胞的毒性作用.     

米非司酮调控乳腺癌细胞凋亡的研究

目的:研究米非司酮促进乳腺癌T47D细胞凋亡的作用。方法:根据米非司酮的处理浓度分为0.25μmol/L组、2.5μmol/L组、25μmol/L组和50μmol/L组,各组分别加入相应浓度米非司酮处理人乳腺癌T47D细胞2d后,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法检测细胞凋亡,在荧光显微镜下观察绿色荧光细胞数量和荧光强度,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化吡啶法在流式细胞仪上检测凋亡细胞百分率。结果:25μmol/L组和50μmol/L组与对照组比较,阳性绿色荧光细胞的数量更多,荧光强度更强;25μmol/L组和50μmol/L组的凋亡细胞百分比(分别为16.1±3.5%和17.2±3.8%)高于对照组(5.1±2.3%),差异有统计学意义(分别为P=0.010和P=0.009);0.25μmol/L组和2.5μmol/L组的凋亡细胞百分比与对照组比较差异无统计学意义(分别为P=0.818和P=0.884)。结论:米非司酮能够促进乳腺癌T47D细胞的凋亡,且随着米非司酮剂量的升高,凋亡细胞数量增加。     

三甲基氯化锡诱导PC12细胞凋亡的机制

目的 在体外条件下,研究三甲基氯化锡(trimethyltin chloride,TMT)对PC12细胞增殖、细胞凋亡及细胞氧化损伤的作用,并探讨TMT对NF-kB表达的影响.方法 (1)不同浓度TMT(0、0.3125、0.6250、1.2500、2.500、5.000、10.000、20.000 μmol/L)处理PC12细胞24、48 h,噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率;(2)1.25、2.50、5.00、10.00 μmol/L TMT分别染毒PC12细胞12、24h后,流式细胞仪检测检测细胞凋亡率;(3)1.25、2.50、5.00、10.00 μmol/L剂量的TMT染毒PC12细胞6h后,测定活性氯(ROS)和谷胱甘肽(GSH)含量的变化;(4)1.25、2.50、5.00、10.00 μmol/L剂量的TMT染毒PC12细胞12h后免疫印迹法(Western blot)检测核蛋白NF-kB的水平.结果 与溶剂对照组比较,染毒24 h,2.5000、5.0000、10.0000、20.0000 μmol/L TMT剂量组细胞存活率明显下降;染毒48 h,1.2500、2.5000、5.0000、10.0000、20.0000 μmol/L剂量组细胞存活率明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).1.25、2.50、5.00、10.00 μmol/L TMT染毒细胞12h,凋亡率分别为15.30％±0.75％、18.90％±0.61％、22.00％±0.60％、36.50％±0.66％,染毒24 h凋亡率分别为28.60％±0.40％、43.54％±2.00％、65.73％±0.71％、74.67％±0.40％,明显高于对照组[12 h:(12.80％±1.00％)、24 h:(16.83％±0.25％)],差异均有统计学意义(P＜0.05).1.25、2.50、5.00、10.00 μmol/L剂量组的ROS荧光强度值分别为对照组的1.42、1.71、1.78、1.89倍,差异有统计学意义(P＜0.05).2.50、5.00、10.00 μmol/L组GSH含量分别为(0.17±0.0)、(0.20±0.04)、(0.07±0.03)μmol/μg pro,明显低于对照组(0.30±0.01) μmol/L pro,差异有统计学意义(P＜0.05).2.50、5.00、10.00 μmol/L剂量组NF-kB p65表达的蛋白条带灰度值明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在本实验条件下,TMT对PC12细胞具有明显抑制增殖和诱导凋亡的作用,其作用可能与氧化应激以及NF-kB信号通路的激活有关.     

邻苯二甲酸二乙基己酯和镉对大鼠睾丸

研究邻苯二甲酸二乙基己酯[BF](DEHP)及镉(Cd)对大鼠睾丸巨噬细胞(TM)[BFQB]分泌细胞因子IL-1β的影响? 方法 利用贴壁法提取大鼠睾丸巨噬细胞?以0.1%二甲基亚砜(DMSO)为对照组,用50 μg/ml脂多糖(LPS)作为激活剂,以1 μmol/L?10 μmol/L?100 μmol/L的DEHP或CdCl2单独及各自半量联合处理,作用24 h后用ELISA法检测上清液中细胞因子IL-1β的含量;用CCK8法测定各浓度DEHP或CdCl2单独处理对细胞活性的影响? 结果 LPS可明显促进巨噬细胞分泌细胞因子IL -1β;0.5 μmol/L DEHP+0.5 mol/L Cd和5 μmol/L DEHP+5 μmol/L Cd联合染毒可显著抑制细胞分泌功能,但IL-1β分泌量仍明显高于对照组,并介于两单独作用组之间;50 μmol/L DEHP+50 μmol/L Cd的联合处理可非常显著抑制细胞分泌功能,与对照组相比差异无统计学意义?随着剂量增加,DEHP或Cd单独作用都能抑制细胞分泌功能和细胞活性,但对两者抑制程度存在较大差异? 结论 DEHP和Cd联合处理抑制大鼠TM分泌IL-1β表现出一定交互作用,对细胞活性的抑制可部分解释DEHP和Cd对细胞分泌功能的抑制效应?     

p,p'-DDE对青春前期大鼠睾丸组织氧化应激及凋亡的影响

目的 研究p,p'-DDE对青春前期大鼠睾丸组织氧化应激及凋亡的影响.方法 将健康清洁级22日龄雄性SD大鼠25只按体重随机分为5组,分别为对照组(玉米油)、低(20 ms/kg)、中(60 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量P,p'-DDE染毒组和VitE干预组(100mg/kg p,p'-DDE+100mg/kg Vit E),每组5只.采用腹腔注射方式进行染毒,注射容积为10ml/kg,每隔1 d染毒1次,共10 d.染毒结束后,处死动物,取睾丸称重,并计算睾丸脏器系数;将睾丸制备组织切片和组织匀浆,分光光度计法测定大鼠睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,采用TUNEL法检测睾丸组织的细胞凋亡情况.结果 各组动物染毒前体重及染毒期间体重变化无差异.大鼠睾丸重量及其脏器系数间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,高、中、低剂量p,p'-DDE染毒组SOD活力降低,中、高剂量p,p'-DDE染毒组MDA含量升高,高剂量p,p'-DDE染毒组GSH-Px活力下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).与高剂量p,p'-DDE染毒组比较,Vit E干预组SOD活力升高,差异有统计学意义(P＜0.05).Vit E干预组和高剂量p,p'-DDE染毒组MDA含量和GSH-Px活力间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).高、中、低剂量p,p'-DDE染毒组和对照组均有睾丸细胞凋亡情况发生,对照组中凋亡细胞稀少;随着p,p'-DDE染毒剂量的升高,凋亡细胞数也逐渐增多,以精原细胞和精母细胞为主,伴有支持细胞.与对照组比较,高、中、低剂量P,p'-DDE染毒组的细胞凋亡指数均升高,差异有统计学意义(P＜0.05);Vit E干预组的细胞凋亡指数低于高剂量p,p'-DDE染毒组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 p,p'-DDE可通过引发睾丸组织氧化应激而诱导细胞凋亡.     

多氯联苯、苯并(a)芘及其联合作用对人胚肺细胞热休克蛋白70表达的影响

目的 研究多氯联苯1254(Aroclor 1254)、苯并(a)芘(BaP)及其联合作用下人胚肺(HEL)二倍体细胞热休克蛋白70(HSP70)的表达规律及其可能的意义.方法 培养HEL细胞,作如下处理:Aroclor 1254处理组:细胞接受不同剂量Aroclor 1254(6.25、12.50、25.00、50.00 μmol/L)处理24 h;Aroclor 1254 BaP联合作用组:细胞先按Aroclor 1254处理组方案预处理,24 h后37℃恢复1 h,再以50 μmol/L BaP染毒2 h;同时设立苯并(a)芘(50 μmol/L,染毒2 h)和DMSO(10 mL/L)分别作为阳性对照组和溶剂对照组.利用免疫印迹方法(Western-blot)检测HEL细胞中HSP70、β-actin的表达水平,采用灰度比(HSP70/β-actin)定量分析.结果 Aroclor 1254处理组,不同浓度多氯联苯1254(6.25、12.50、25.00、50.00 μmol/L)处理后,灰度比分别为0.98±0.05、0.97±0.09、0.99±0.06、0.95±0.08,与溶剂对照组(0.99±0.05)及阳性对照组(1.01±0.06)相比无明显变化(P＞0.05);联合作用组,灰度比随多氯联苯1254浓度的增加而逐渐下调,分别为0.89±0.03、0.83±0.02、0.81±0.05、0.72±0.03,与溶剂对照组及阳性对照组相比均明显下调(P＜0.05).结论 HSP70表达下降可能与多氯联苯1254增强BaP代谢活化产物的遗传毒性作用有关.     

程序性坏死在铝致神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y死亡中的作用

目的 探讨程序性坏死是否存在于铝诱导的神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的死亡途径中.方法 培养SH-SY5Y细胞,并用4 mmol/L AlCl<,3>·6H<,2>O染毒制作铝致神经细胞死亡模型,按加入Nec-1剂量不同分别设对照组(0 μmol/L)和30、60、90 μmol/L组,检测SH-SY5Y细胞的活力、线粒体膜电位、活性氧含量及细胞的凋亡率和坏死率等.结果研究表明,加入Nec-1可以显著改善染铝后的细胞坏死样形态学改变.流式细胞仪检测结果表明,加入不同剂量的Nec-1(30、60、90μmol/L)后其细胞活力分别为0.58±0.03、0.68±0.04、1.03±0.17,与对照组(0.28±0.05)相比,差异有统计学意义(t值分别为3.25、3.36、4.56,P值均<0.05).Annexin V-PI双染法测定结果显示,不同剂量Nec-1(30、60、90 μmol/L)作用后坏死率分别为10.40%±0.64%、5.43%±0.68%、6.28%±0.35%,与对照组(16.46%±0.54%)相比,差异有统计学意义(t值分别为3.62、7.32、6.96,P值均<0.05),可以明显降低SH-SY5Y细胞的坏死率,但其作用后SH-SY5Y细胞凋亡率分别为7.66%±0.53%、5.68%±0.41%、4.13%±0.41%,与对照组(8.68%±0.36%)相比,差异无统计学意义(F=6.33,P=0.11).加入不同剂量Nec-1(30、60、90μmol/L)后,其线粒体膜电位分别为49.42±5.96、84.79±6.86,95.51±7.01,60、90 μmol/L剂量组与对照组(67.54±6.36)相比,差异有统计学意义(t值分别为3.21、4.01,P值均<0.05).但加入不同剂量的Nec-1(30、60、90 μmol/L)后其活性氧含量分别为52.79±2.36、54.68±1.91、59.23±2.96,对照组为54,07±3.32,各组间差异无统计学意义(F=5.26,P=0.19).结论 用程序性坏死的特异阻断剂Nec-1可以有效阻断铝致SH-SY5Y细胞的死亡通路,提示程序性坏死是导致铝神经毒性的原因之一.程序性坏死在铝致SH-SY5Y细胞的死亡中发挥了重要作用.     

芹黄素对肾癌A498细胞凋亡及HIF-1α/NF-κB信号通路的影响

目的探讨芹黄素对肾癌A498细胞凋亡及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法体外培养人肾癌A498细胞, 分为不同浓度芹黄素(10、20、40 μmol/L)组、芹黄素(40 μmol/L)+HIF-1α激动剂二甲基二酰氨基乙酸(DMOG)组、HIF-1α抑制剂利非西呱(YC-1)组、对照组。采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖, Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡, Western blot实验检测凋亡蛋白及HIF-1α/NF-κB通路蛋白表达。结果芹黄素显著抑制A498细胞增殖, 且抑制作用呈浓度依赖性(P<0.001)。与对照组比较, 10、20、40 μmol/L芹黄素组和YC-1组A498细胞凋亡率[(4.35±1.04)% vs (10.06±1.13)%、(18.52±2.58)%、(32.17±2.63)%、(26.94±2.41)%]、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达量均显著升高, B淋巴细胞瘤2(Bcl-...     

左旋多巴诱导PC12细胞凋亡实验在治疗帕金森病效果减退(剂末现象)机制探讨中的意义

目的通过进行左旋多巴诱导PC12细胞凋亡实验探讨左旋多巴治疗帕金森病效果减退(剂末现象)的机制。方法选取大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞为多巴胺(DA)神经元细胞模型,给予左旋多巴处理,应用流式细胞术以及DNA凝胶电泳图像分析技术观察左旋多巴对PC12细胞凋亡的影响。结果 DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示,对照组、50μmol/L组、100μmol/L组、150μmol/L组和200μmol/L组细胞DNA片段化比例分别为(2.55±0.24)%、(7.49±0.41)%、(13.41±1.62)%、(25.26±3.29)%和(40.01±5.18)%,方差分析检验,5组间比较差异有统计学意义(F=167.67,P﹤0.05),进一步经q检验(Newman-Keals法),5组间分别两两比较差异有统计学意义(P﹤0.05)。流式细胞术检测结果显示,对照组、50μmol/L组、100μmol/L组、150μmol/L组和200μmol/L组细胞凋亡率分别为(2.31±0.25)%、(8.14±0.41)%、(12.39±0.47)%、(24.29±0.38)%和(39.12±1.12)%,方差分析检验,5组间比较差异有统计学意义(F=3476.49,P﹤0.05),进一步经q检验(Newman-Keals法),5组间分别两两比较差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论左旋多巴可诱导PC12细胞凋亡,该机制可能参与左旋多巴治疗帕金森病剂末现象的病理过程。