非诺贝特对人肺腺癌A549细胞迁移侵袭能力的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖因子激活受体α激动剂非诺贝特对人肺癌A549细胞生长、迁移侵袭能力的影响及其可能机制。方法体外培养人肺癌A549细胞,分别用0、12.5、25、50、75、100μmol/L非诺贝特处理细胞,阴性对照组为0μmol/L非诺贝特浓度组;MTT法检测不同药物浓度作用下肺癌A549细胞的生长抑制情况;细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测非诺贝特对肺癌A549细胞迁移及侵袭运动能力的影响,RT-PCR法检测A549细胞中PPARα(Peroxisome Proliferator-Activated Receptors alpha)、MMP-2(Matrix Metalloproteinase-2)、MMP-9、Timp-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1)、Timp-2m RNA的表达情况。结果非诺贝特能够抑制A549细胞生长,呈时间-剂量关系(P0.05);细胞划痕实验及Transwell侵袭实验结果显示非诺贝特能够降低A549细胞的迁移侵袭能力;RT-PCR结果提示非诺贝特能够上调PPARα、Timp-1、Timp-2m RAN表达,下调MMP-2、MMP-9 m RNA表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论非诺贝特能够抑制肺癌A549细胞生长、迁移及侵袭能力,其机制可能与PPARα、MMPs、Timps有关。     

抗菌肽merecidin通过ERK/mTOR 信号通路对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨抗菌肽merecidin通过ERK/mTOR 信号通路对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 实验分为对照组Control、抗菌肽Merecidin干预组和雷帕霉素Rapamycin干预组。通过CCK-8 法检测A549细胞的增殖能力,通过流式细胞术检测A549细胞凋亡和周期,通过平板划痕试验和Transwell检测A549细胞的迁移和侵袭能力,通过 Western blot 法检测A549细胞中MAPK1、MEK2、mTOR、PRAS40、EIF4EBP1 磷酸化蛋白的表达量。结果 抗菌肽merecidin能够明显抑制A549的增殖能力,处理24 h后的 IC50值为10.01 μmol /L(P<0.05)。与control组比较,抗菌肽merecidin处理后促进细胞凋亡(P<0.05),阻滞细胞周期于S期(P<0.05),细胞的迁移及侵袭能力均降低(P<0.05)。同时抗菌肽merecidin可抑制p-MAPK1和p-MEK2蛋白的表达,并且降低了mTOR、PRAS40和EIF4EBP1 的磷酸化水平(P<0.05)。结论 抗菌肽merecidin可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期,该作用可能与其抑制ERK/mTOR通路有关。     

microRNA-424-5p对电离辐射的A549细胞侵袭和迁移能力的影响

目的探讨microRNA-424-5p(miR-424-5p)在辐射诱导的A549细胞侵袭和迁移中的作用。方法采用茎环RT-PCR检测辐照后A549细胞中miRNA的表达;Transwell小室实验检测A549细胞侵袭和迁移能力。结果 4GyX射线照射诱导了A549细胞中miR-424-5p的表达;过表达miR-424-5p后,与对照组相比,A549细胞侵袭和迁移能力明显增强;导入外源性miR-424-5p抑制物后进行4 GyX射线照射,A549细胞侵袭和迁移能力明显减弱。结论 4 GyX射线诱导了miR-424-5p的表达并促进了A549细胞的侵袭和迁移。本研究为未来进一步研究其分子作用机制奠定基础。     

脂多糖促进肺癌A549细胞表达HMGB1

目的 探讨脂多糖（LPS）促进肺癌A549细胞表达高迁移率族蛋白B1（HMGB1）机制及意义。方法 体外培养肺癌A549细胞,分组：A组（对照组）,B组（100 ng/ml LPS）,C组（150 ng/ml LPS）,D组（200ng/ml LPS）,培养12 h、24 h、48 h、72 h后,Western blot检测肺癌A549细胞HMGB1蛋白表达,ELISA检测细胞上清液HMGB1浓度。结果 Western blot、ELISA检测示HMGBl蛋白表达及浓度在A、B、C、D四组中逐渐增强（P〈0.05）;培养12 h、24 h、48 h、72 h有显著差异（P〈0.05）。结论 LPS促进肺癌A549细胞表达HMGB1,有时间-量效关系,为临床防治肺癌提供了新思维。     

非吞噬细胞氧化酶4在转化生长因子-β诱导A549细胞迁移中的作用

目的探讨非吞噬细胞氧化酶4(NOX4)在转化生长因子β(TGF-β)诱导A549细胞迁移中的作用。方法实验分组:TGF-β(刺激)组,空白对照组,二甲苯基碘(DPI,NOX4抑制剂)组,TGF-β+DPI组,二甲基亚砜(DMSO)(溶剂对照)组。流式细胞仪检测ROS表达;Western blot检测NOX4、snail、E-cadherin蛋白表达;划痕实验检测A549细胞迁移能力。结果经Quantity One软件定量后,TGF-β组NOX4表达为:1.80±0.07,TGF-β+DPI组为0.49±0.03(F=327.071,P<0.001);上皮间质转化相关蛋白:TGF-β组snail蛋白为9.0±0.6,TGF-β+DPI组为1.8±0.3(F=119.097,P<0.001);TGF-β组E-cadherin蛋白为0.5±0.1,TGF-β+DPI组为3.3±0.3(F=71.063,P<0.001);以上结果表明DPI可以抑制A549细胞NOX4表达且可以抑制其EMT进程。TGF-β+DPI组与TGF-β组比较,划痕愈合率降低(F=33.899,P<0.001);表明DPI可以抑制A549细胞的迁移。结论 DPI抑制NOX4的表达后,TGF-β诱导的A549细胞迁移被抑制,并且与TGF-β诱导的上皮间质转化进程有关。     

TGF-β1诱导乳腺癌细胞EMT的实验研究

目的探索利用TGF-β1诱导乳腺癌细胞MCF-7 EMT水平,并进行生物学验证。方法培养人乳腺癌细胞系MCF-7并传代,使用不同浓度的TGF-β1因子进行诱导,用MTT法检测TGF-β1对乳腺癌细胞的生长促进作用,用实时荧光定量PCR技术对上皮细胞-间质转化的标志物Vimentin表达水平进行检测,利用Transwell小室迁移试验对诱导后的迁移能力进行评估和检测。结果浓度为12.5 ng/ml的TGF-β1诱导MCF-7细胞48 h后细胞形态呈现EMT改变,提示有上皮细胞间质化发生,MTT检测结果显示TGF-β1对乳腺癌细胞MCF-7生长增殖无显著影响,对照组与实验组之间比较,差异无统计学意义(P0.05);EMT间质细胞标志物Vimentin表达上调;Transwell小室迁移试验结果显示,对照组与实验组之间比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论人乳腺癌细胞系MCF-7经浓度为12.5 ng/ml的TGF-β1因子诱导48 h后呈现EMT改变,间质化标志物Vimentin表达上调,侵袭转移能力增强。     

MiR-191靶向调控TIMP3促进肺癌细胞恶性转化进程的研究

目的探索miR-191靶向调控基质金属蛋白酶抑制剂3(TIMP3)对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭影响及相关机制,为深入了解肺癌发生发展机制及寻找新的诊断和治疗靶标提供新思路。方法 Target Scan软件预测miR-191的潜在靶基因;双荧光素酶报告实验检测miR-191对TIMP3调控作用; Western blot和实时定量聚合酶链式反应(qPCR)检测正常肺细胞CCD-19Lu和肺癌细胞A549中TIMP3、miR-191表达水平;肺癌细胞A549中转染anti-miR-191后检测TIMP3蛋白表达变化;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力; Transwell检测细胞迁移、侵袭能力; Western blot检测细胞中MMP2、JNK、p-JNK、β-actin蛋白表达水平。结果 Target Scan预测软件发现TIMP3是miR-191的潜在靶基因;双荧光素酶报告实验证实TIMP3是miR-191的靶标;正常肺细胞CCD-19Lu中miR-191表达较低,TIMP3 mRNA表达较高;肺癌细胞A549中miR-191表达较高,TIMP3 mRNA表达较低;肺癌细胞A549中转染anti-miR-191可显著增加TIMP3蛋白表达;MTT结果显示肺癌细胞增殖未受明显影响; Transwell实验结果表明anti-miR-191可抑制细胞迁移和侵袭; Western blot结果显示TIMP3下游癌蛋白MMP2、p-JNK显著下调。结论 TIMP3是miR-191的一个靶标,肺癌中高表达的miR-191可靶向抑制TIMP3激活MMP2、JNK等癌基因促使肺癌细胞发生恶性转化; miR-191/TIMP3信号轴在肺癌恶性病变过程中可能起重要作用,可成为肺癌早期诊断与靶向治疗的分子靶标。     

IL-1β和瘦素在胚胎着床中对ICAM-1和MMP9的影响

目的:建立体外胚胎和子宫内膜共培养体系,观察不同浓度的IL-1β和瘦素(leptin)对ICAM-1、MMP9的影响,进而探讨IL-1β和leptin对胚胎早期着床的调节作用。方法:采用免疫细胞化学法检测子宫内膜中ICAM-1和MMP9的表达;采用ELISA方法分别检测经IL-1β、leptin和IL-1ra干预共培养模型后培养液中ICAM-1和MMP9的表达。结果:免疫组化结果显示,ICAM-1主要在腺体细胞中表达,基质细胞仅有少量的表达,而MMP9在子宫内膜基质细胞和腺体细胞中均有表达;ELISA结果显示,与对照组相比,ICAM-1分别经10 ng/ml的IL-1β,100 ng/ml的leptin干预后表达上调(P<0.05),而经0.1ng/ml、1ng/ml的IL-1β,1 ng/ml、10 ng/ml的leptin,0.25μg/ml、2.5μg/ml、25μg/ml的IL-1ra干预后表达无明显变化(P>0.05);MMP9分别经1 ng/ml、10 ng/ml的IL-1β,1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml的leptin干预后表达上调(P<0.05),而经0.1 ng/ml的IL-1β,0.25μg/ml、2.5μg/ml、25μg/ml的IL-1ra干预后表达无明显变化(P>0.05)。结论:一定量的IL-1β和leptin可以增加共培养模型中ICAM-1和MMP9的表达。     

不同温度下紫杉醇对人肺癌A549细胞抑制效应

目的研究不同温度下紫杉醇对人肺癌A549细胞的增殖抑制效应及对血管内皮生长因子mRNA（VEGF mRNA）表达的影响.方法采用不同的温度（37,39,41,43和45℃）及不同剂量的紫杉醇（6.25,12.5,25,50,100和200ng/ml）,并采用组内分组设计,共30个组.应用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法测定热疗、化疗及热化疗联合对A549细胞的抑制率;以β-actin基因为参照,应用半定量RT-PCR技术检测不同剂量紫杉醇及其与加热联合对A549细胞VEGF mRNA表达的影响.结果 43℃组细胞抑制率与不同温度同剂量组间细胞抑制率比较,除与41℃50ng/ml和45℃100ng/ml组对比差异无统计学意义外（P〉0.05）,其余各组差异均有统计学意义（P〈0.05）;39℃加热组各个剂量平均抑制率均低于37℃组,200ng/ml剂量组间的差异有统计学意义（P〈0.01）;43℃加热40min后的0,6.25,12.5,25ng/ml剂量组的VEGF mRNA表达水平均低于37℃,0和6.25ng/ml组差异有统计学意义（P〈0.01）.结论 39℃加热40min可能会降低紫杉醇对A549细胞的抑制效应;43℃加热40min可以增加A549细胞对紫杉醇的敏感性;紫杉醇可以降低A549细胞VEGF mRNA的表达;43℃加热40min可以增加低剂量紫杉醇对VEGF mRNA表达的抑制效应.     

白藜芦醇对卵巢癌细胞CXCR4/CXCL12信号轴的影响

目的探讨白藜芦醇对卵巢癌细胞株A2780细胞增殖、迁移、侵袭及CXCR4/CXCL12信号轴的影响。方法分别采用0μmol·L~(-1)、20μmol·L~(-1)、40μmol·L~(-1)、80μmol·L-1白藜芦醇处理卵巢癌A2780细胞,应用噻唑蓝比色法(MTT)检测白藜芦醇处理后卵巢癌A2780细胞增殖情况,采用Transwell实验检测白藜芦醇对卵巢癌A2780细胞侵袭、迁移能力的影响。应用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)及Western blot检测卵巢癌A2780细胞趋化因子受体4 (CXCR4)、基质细胞衍生因子1(CXCL12)、血管内皮生长因子(VEGF) mRNA及蛋白表达水平。设置二甲基亚砜(DMSO)对照组、100 ng·ml-1CXCL12处理组、20μmol·L~(-1)白藜芦醇处理组、20μmol·L~(-1)白藜芦醇+100 ng·ml-1CXCL12处理组,检测A2780细胞迁移、侵袭能力。结果 MTT结果显示,20μmol·L~(-1)、40μmol·L-1、80μmol·L~(-1)白藜芦醇可抑制A2780细胞增殖,且具有剂量依赖性(P<0. 05),白藜芦醇可明显抑制A2780细胞迁移、侵袭能力,且呈一定剂量依赖性(P<0. 05);白藜芦醇可下调A2780细胞CXCR4、CXCL12、VEGF mRNA及蛋白表达; 100 ng·ml-1CXCL12可明显促进A2780细胞迁移、侵袭能力,同时加入40μmol·L-1白藜芦醇后,其促进A2780细胞迁移、侵袭能力被抑制。结论白藜芦醇可通过靶向抑制CXCR4/CXCL12信号轴,抑制卵巢癌细胞株A2780细胞迁移及侵袭。     

纳米氧化锌诱导人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549发生炎性凋亡的研究

目的用纳米氧化锌(ZnO-NPs)刺激体外培养的人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549),探讨其是否发生炎性凋亡。方法用10μg/ml和20μg/ml的ZnO-NPs分别刺激A549细胞8和24h,以磷酸盐缓冲液(PBS)为对照,用乳酸脱氢酶(LDH)活力测定试剂盒和白介素-1β(IL-1β)ELISA试剂盒分别检测细胞培养上清液中的LDH酶活力和IL-1β含量,用半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(caspase-1)活性测定试剂盒检测细胞caspase-1的活性。结果纳米氧化锌作用于A549细胞8h,染毒组和对照组LDH酶活力差异无显著性,与对照组比较,20μg/ml ZnO-NPs染毒组caspase-1活性和IL-1β含量均升高(P<0.05)。ZnO-NPs作用于A549细胞24h时,染毒组和对照组caspase-1活性差异无显著性。染毒组IL-1β含量和LDH酶活力均显著高于对照组(P<0.05)。结论纳米氧化锌(20μg/ml)刺激A549细胞早期caspase-1活性升高,继之IL-1β含量和LDH酶活力升高,可能发生了炎性凋亡。     

Wnt信号通路在ALDH1A1影响胃癌细胞生物学行为中作用

目的探讨乙醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)基因表达对胃癌细胞的生物学行为影响及机制。方法通过脂质体将shRNA-ALDH1A1载体转染到胃癌MKN-45细胞,48 h后,采用RT-PCR及蛋白印迹(WB)法检测转染后MKN-45细胞中ALDH1A1蛋白及mRNA表达;四唑盐(MTT)法检测细胞活力;Transwell法检测胃癌细胞迁移及侵袭能力;WB检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9及Wnt/β-catenin信号通路表达情况。结果shRNA-ALDH1A1转染组M KN-45细胞中ALDH1A1蛋白及mRNA表达量[分别为(0.09±0.01)、(0.08±0.01)]明显低于对照组[分别为(0.89±0.09)、(0.48±0.05)];shRNA-ALDH1A1组M KN-45细胞活力(0.40±0.04)低于对照组(0.73±0.07),细胞迁移、侵袭数目[分别为(39.78±3.24)、(42.53±4.25)个/视野]少于对照组[分别为(98.86±9.03)、(90.52±9.14)个/视野];shRNA-ALDH1A1组MKN-45细胞中MMP2、MMP9、Wnt1、Wnt5a及β-catenin表达水平[分别为(0.10±0.01)、(0.10±0.01)、(0.28±0.03)、(0.12±0.01)、(0.19±0.02)]明显低于对照组[分别为(0.49±0.04)、(0.95±0.09)、(1.29±0.12)、(0.52±0.04)、(0.56±0.05)],差异均具有统计学意义(P0.01)。结论 ALDH1A1基因沉默可明显降低胃癌细胞MKN-45活力、抑制细胞迁移、侵袭能力,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

IL-12单克隆抗体对克罗恩病模型小鼠Th1/Th2免疫平衡的调节作用

目的研究白细胞介素-12(IL-12)单克隆抗体对克罗恩病模型小鼠辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)免疫平衡的调节作用。方法选择BALB/c健康小鼠30只,将30只小鼠分为正常对照组(10只)和实验小鼠(20只),实验组小鼠做克罗恩病模型,建模成功后将实验组小鼠分为克罗恩病组和IL-12单克隆抗体组各10只,IL-12单抗组小鼠腹腔注射IL-12单抗(25 mg/kg),正常对照组和克罗恩病组小鼠腹腔注射0.2 ml的生理盐水。处理4周后,对三组小鼠疾病活动程度、结肠重量、结肠长度进行评价,使用酶联免疫吸附试验法检测三组小鼠结肠组织中Th1型细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-8和Th2型细胞因子IL-4、IL-10及IL-12、IL-23表达水平。结果克罗恩病组小鼠疾病活动程度评分、结肠组织中Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-12、IL-23分别为(4.12±0.23)分、(563.49±21.36)ng/ml、(120.69±6.69)ng/L、(43.73±3.58)ng/ml、(179.68±4.26)ng/ml、(148.69±6.58)ng/L、(762.58±26.58)pg/ml高于IL-12单克隆抗体组(1.62±0.17)分、(472.59±15.64)ng/ml、(106.25±3.27)ng/L、(37.62±2.16)ng/ml、(163.57±3.12)ng/ml、(98.67±5.12)ng/L、(412.68±16.98)pg/ml)和对照组,而结肠重量/长度为(42.36±3.16)mg/cm大于IL-12单克隆抗体组(33.59±2.07)mg/cm)和对照组小鼠;结肠组织中Th2型细胞因子IL-4、IL-10为(55.27±1.62)pg/ml、(90.27±3.68)pg/ml低于IL-12单克隆抗体组(61.27±2.21)pg/ml、(98.67±1.68)pg/ml)和对照组(P<0.05)。结论IL-12单克隆抗体通过改善Th1型细胞因子、Th2型细胞因子的异常表达,对Th1/Th2免疫平衡进行调节,进而抑制克罗恩病的炎症反应,起到治疗的效果。     

缺氧对肺癌细胞中lncRNA H19的表达及耐药机制的研究

目的 探索缺氧对非小细胞肺癌细胞株A549和H1650中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA) H19表达的影响,并与顺铂耐药的关系。方法 在常氧和缺氧条件下对肺癌细胞A549和H1650采用qPCR检测lncRNA H19、HIF1-α、MRP1和HO-1 mRNA的表达;采用Western blot检测HIF1-α、MRP1、HO-1和P-gp的表达;并进行肿瘤细胞迁移和侵袭实验;采用Annexin V-APC和流式细胞仪检测顺铂诱导的细胞凋亡率。结果 在缺氧条件下非小细胞肺癌细胞株A549和H1650中lncRNA H19、HIF1-α、HO-1、MDR相关蛋白1和P-gp的表达水平升高。肿瘤细胞的侵袭和迁移能力增强,顺铂诱导的细胞凋亡减少。结论 缺氧增加非小细胞肺癌细胞株A549和H1650中lncRNA H19的表达水平,顺铂诱导的细胞凋亡减少,对顺铂产生耐药性。     

RGD-TAT-KDRsiRNA慢病毒载体构建及抗肿瘤活性

目的 构建精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(RGD)介导的穿膜肽(TAT)-血管内皮细胞生长因子受体(KDR) siRNA融合基因慢病毒载体,探讨其对人肺癌A549细胞的抑制效果.方法 设计合成编码RGD的2条寡核苷酸链,克隆到pGC/TAT-KDR siRNA载体的TAT下游,构建TAT-RGD-KDR siRNA融合基因载体;慢病毒包装并感染A549细胞;通过Western blot和real-time PCR检测A549细胞KDR基因表达水平;通过噻唑蓝法、双色法流式细胞仪和Transwell侵袭实验检测KDR基因沉默对A549细胞凋亡和侵袭力的影响.结果 测序和Blast比对证实重组载体中的RGD序列与设计一致;TAT-RGD-KDR siRNA融合基因慢病毒载体转染A540细胞KDRmRNA和蛋白表达水平分别为(22.7±3.9)％和(19.3±2.7)％,明显低于TAT-KDR siRNA融合基因慢病毒载体转染组,差异有统计学意义(P＜0.01);该载体具有较强的抑制A549细胞增殖、促进细胞凋亡和抑制细胞体外侵袭力的作用.结论 TAT-RGD-KDR siRNA融合基因慢病毒载体通过抑制细胞KDR mRNA和蛋白表达,抑制A549细胞增殖和侵袭、促进细胞凋亡.     

烹调油烟中细颗粒物PM2.5对A-549细胞存活率和IL-10水平的影响

探讨烹调油烟中大气细颗粒物PM2.5(FPCOF)对人肺癌上皮细胞(A-549细胞)抗炎因子IL-10分泌的影响。分别用不同浓度的FPCOF对细胞进行染毒,于12 h、24 h和36 h后用MTT法测细胞存活率;用酶联免疫吸附法测染毒24 h和36 h的细胞上清中IL-10的浓度。结果 :(1)FPCOF作用于A-549细胞24 h和36 h后,细胞存活率随染毒浓度升高而降低,100μg/ml PM2.5+10 mmol/L NAC组存活率高于100μg/ml PM2.5染毒组。(2)FPCOF对A-549细胞作用24 h后,对抗炎因子IL-10的影响不明显;作用36 h后均可见IL-10水平增高,100μg/ml PM2.5+10mmol/L NAC组IL-10浓度低于100μg/ml PM2.5染毒组。提示FPCOF促进A-549细胞中抗炎因子IL-10分泌,其表达要迟于FPCOF对细胞增殖的抑制作用,抗氧化剂NAC对A-549细胞有一定的保护作用。     

秦皮甲素对人肺癌细胞A549凋亡影响

目的探讨秦皮甲素对肺癌细胞A549增殖、凋亡的影响及机制。方法人肺癌细胞A549分为对照组、阳性对照组(5-Fu 0.77 mmol/L)、秦皮甲素0.4、0.8、1.6 mmol/L组,四甲基偶氮噻唑蓝比色法检测肺癌细胞A549的增殖率,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化,免疫印迹法检测Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达改变。结果秦皮甲素可抑制人肺癌细胞A549的增殖,IC50为0.4 mmol/L;降低线粒体膜电位并诱导凋亡;与对照组比较,人肺癌细胞A549经秦皮甲素1.6 mmol/L组处理后,S期细胞比例[(20.35±0.26)%]升高,G2/M期细胞比例[(25.46±0.17)%]降低;与对照组比较,秦皮甲素1.6 mmol/L组细胞凋亡率(29.15%)明显升高,Bax和Caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达受到抑制,呈剂量-效应关系。结论秦皮甲素可以通过线粒体途径诱导人肺癌细胞A549凋亡。     

β-淀粉样蛋白1-42、磷脂酶A2与颈部动脉粥样硬化的相关性研究

目的探讨β-淀粉样蛋白1-42、磷脂酶A2与颈部动脉粥样硬化的相关性。方法回顾性分析我院自2015.05-2017.12符合入选标准的颈部动脉粥样硬化患者128人及健康体检的正常人100人的Aβ1-42、磷脂酶A2检查结果输入数据库,统计对比临床数据的差异性。结果 Aβ1-42在动脉粥样硬化患者中的表达(164.87±24.13 pg/ml)较正常人(99.94±9.12 pg/ml)增加(P0.05),但与动脉粥样硬化程度无关(P0.05)。Lp-PLA2在动脉粥样硬化患者中的表达(218.07±34.93 ng/ml)较正常人(102.70±26.67 ng/ml)增加(P0.05),且随着动脉粥样硬化程度的加重(轻度186.15±12.86 ng/ml,中度231.37±15.08 ng/ml,重度282.40±14.33 ng/ml)而表达增加(P0.05)。结论 Aβ1-42与动脉粥样硬化相关,但不随着动脉粥样硬化程度加重而表达增加。Lp-PLA2与动脉粥样硬化相关,且随着动脉粥样硬化程度的加重而表达增加。     

白细胞介素-1β,-1Rα对胚胎-内膜共培养体系分泌基质金属蛋白酶-9/细胞间黏附分子-1的影响

目的 探讨白细胞介素(IL)-1β,-1Rα在胚胎-内膜共培养体系中的作用.方法 选取昆明种雌性小白鼠30只(6～8周龄),雄性15只(12～16周龄)进行实验.30只雌鼠成功妊娠后,收集雌鼠8细胞期胚胎并进行子宫内膜腺上皮细胞原代培养.共培养成功7份原代子宫内膜细胞,每份细胞分别接种35孔(n=35×7).5孔细胞培养液中不做任何处理(对照组,n=5×7),其余30孔根据上皮细胞培养液中所含IL-1β浓度不同以及IL-1β+IL-1Rα比例不同共分为6组,分别为1 ng/mL IL1β组,10 ng/mL IL-1β组和100 ng/mL IL 1β组,以及1 ng/mL IL-1β+10 μg/mL IL-1Rα组,10 ng/mL IL 1β+10 μg/mL IL-1Rα组,100 ng/mL IL-1β+10 μg/mL IL-1Rα组(每组样本量:n=5×7).将发育正常的8细胞胚胎随机置人含以上不同培养液的细胞孔内,每孔6枚胚胎,培养48 h后收集培养上清液,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测培养液中分泌蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-9/细胞间黏附分子(ICAM)-1的表达水平.结果 1 ng/mL IL-1β组与10 ng/mL IL-1β组,可显著促进共培养体系MMP-9/ICAM-1的表达,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);而1 ng/mL IL-1β组与10 ng/mL IL-1β组,以及100 ng/mL IL-1β组分别与对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).10 ng/mL IL-1β+ 10 μg/mL IL 1Rα组MMP-9/ICAM-1水平显著低于对照组(P＜0.05);而1 ng/mL IL-1β+ 10 μg/mL IL-1Rα组,100 ng/mLIL-1β+10 μg/mL IL 1Rα组分别与对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);1 ng/mL IL-1β+ 10 μg/mLIL-1Rα组与100 ng/mL IL-1β+10 μg/mL 1L-1Rα组比较,差异亦无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-1β/IL-1Rα的适当比例,可以调控胚胎着床.     

萝藦果壳多糖诱导人肺癌A549细胞凋亡的研究

目的 探究萝藦果壳多糖（MJP-1’）诱导人肺癌A549细胞凋亡的作用。方法 采用CCK8法检测萝藦果壳多糖对A549细胞活力的影响;采用比色法检测A549细胞内乳酸脱氢酶的释放量变化情况;通过TUNEL实验探究萝藦果壳多糖对A549细胞凋亡的影响;通过JC - 1荧光探针探究萝藦果壳多糖对A549细胞线粒体膜电位的影响;通过蛋白质分子印迹法探究萝藦果壳多糖作用后A549细胞凋亡相关蛋白表达的变化。结果 CCK8法显示萝藦果壳多糖抑制A549细胞的增殖,并呈剂量依赖趋势（125 μg/ml组:t = 3.092,P = 0.015;250 μg/ml组:t = 3.929,P = 0.004;500 μg/ml组:t = 5.626,P＜0.001;1 000 μg/ml组:t = 7.512,P＜0.001;2 000 μg/ml组:t = 9.677,P＜0.001;4 000 μg/ml组:t = 12.290,P＜0.001;8 000 μg/ml组:t = 16.000,P＜0.001）;比色法显示A549细胞乳酸脱氢酶释放量增加（2 mg/ml组:t = 8.233,P = 0.001;4 mg/ml组:t = 12.640,P＜0.001;8 mg/ml组:t = 27.530,P＜0.001）;TUNEL实验显示萝藦果壳多糖可促进A549细胞凋亡（2 mg/ml组:t = 7.803,P＜0.001;4 mg/ml组:t = 12.460,P＜0.001;8 mg/ml组:t = 39.340,P＜0.001）;JC - 1探针实验结果显示萝藦果壳多糖导致A549细胞线粒体膜电位降低（2 mg/ml组:t = 24.120,P＜0.001;4 mg/ml组:t = 28.530,P＜0.001;8 mg/ml组:t = 31.600,P＜0.001）;蛋白质分子印迹法结果显示萝藦果壳多糖可以下调Bcl - 2蛋白表达（2 mg/ml组:t = 3.790,P = 0.019;4 mg/ml组:t = 6.598,P = 0.003;8 mg/ml组:t = 12.840,P＜0.001）,并使Bax、cleaved - caspase - 3蛋白表达增加（Bax组:2 mg/ml组:t = 17.280,P＜0.001;4 mg/ml组:t = 36.040,P＜0.001;8 mg/ml组:t = 22.520,P＜0.001;cleaved - caspase - 3组:2 mg/ml组:t = 6.487,P = 0.003;4 mg/ml组:t = 9.326,P＜0.001;8 mg/ml组:t = 22.380,P＜0.001）。结论 本研究发现萝藦果壳多糖可以诱导人肺癌A549细胞凋亡,为进一步开发利用萝藦果壳多糖奠定了基础。